Производные 1,4-бензодиазепина, обладающие селективной анксиолитической активностью

 

Изобретение относится к новым производным 1,4-бензодиазепина общей формулы I, где R¹-бром, R²-CH₃O, NHNH₂, R³-H, галоген, обладающим селективной анксиолитической активностью с преимущественно активирующим компонентом. Вышеуказанные соединения в широком диапазоне доз обладают выраженным анксиолитическим действием, которое не сопровождается побочными седативным и миорелаксантным эффектами. Они имеют низкую токсичность и могут найти применения в психиатрической практике, а также для профилактики эмоционально-стрессовых расстройств в качестве дневных транквилизаторов. 3 ил., 13 табл.

Изобретение относится к новым производным 1,4- бензодиазепина общей формулы, где R¹ - бром R²-CH₃O, NHNH₂; R³ -H, галоген.

Широко известны анксиолитические средства - производные 1,4- бензодиазепин-2-она, такие как феназепам (А.В.Богадский, С.А.Андронати, Н.Я.Головенко. Транквилизаторы. Киев: Наукова Думка, 1980, с.257-260), альпрозалам (ксанкс) (Регистр лекарственных средств России. М.: ИНФАРМХИМ, 1993, с.502), гидазепам (Регистр лекарственных средств России. М.: ИНФАРМХИМ, 1993, с. 309). Однако феназепам и ксанкс наряду с мощным основным транквилизирующим действием обладают целым рядом серьезных побочных эффектов, таких как сонливость, головокружение, нарушение зрения, головная боль, амнезия и другие (А.В.Богадский, С.А.Андронати, Н.Я.Головенко. Транквилизаторы. Киев: Наукова Думка, 1980, с.257-260; K.Aranko, M.J.Mattila, D.Bordignon. Acta Pharmacol. Toxicol. , 1985, v.56, N5, p. 364-372). Гидазепам, обладая более селективным транквилизирующим действием, также не лишен побочных эффектов, свойственных другим представителям этого ряда в активном диапазоне доз ( Т.А.Воронина. Гидазепам. Киев: Наукова Думка, 1992, с.63-75).

Кроме того, в условиях клиники было показано, что транквилизирующий эффект сопровождается развитием активирующего или седативного компонентов. При этом если для феназепама характерно развитие анксиолитического действия прежде всего с седативным компонентом, то в спектре анксиолитического действия гидазепама представлен также и активирующий компонент (Ю.А.Александровский, М. В. Поюровский и Г.Г.Незнамов. Неврозы и перекисное окисление липидов. М.: Наука, 1991, с.79-82; Г.Г.Незнамов, С.И.Лыгалов, В.К.Бочкарев и соавт. Гидазепам. Киев: Наукова Думка, 1992, с. 137).Возможность подобного разделения анксиолитического эффекта бензодиазепинов была недавно продемонстрирована и в условиях эксперимента (Ю.А.Бледнев, М.М.Козловская, М.Маула и др. Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии. Под ред. В.Е.Новикова. Смоленск, 1994, с. 13-15). Более того, последние клинические исследования показали, что меньшая выраженность седативного компонента в структуре индивидуальных реакций на бензодиазепиновые транквилизаторы является прогностически позитивным признаком для эффективной терапии этими препаратами ([Г. Г. Незнамов, С. А. Сюняков, Е.С.Телешова, Н.В.Колотилинская, Т.П.Сафарова. Транквилизаторы: индивидуальная чувствительность и терапевтическая эффективность. Тезисы докл. II Российского Национального Конгресса "Человек и лекарство", М., 10-15 апреля 1995 г., с. 100). Такими свойствами обладают заявляемые соединения.

1-Метоксикарбонилметил-7-бром-5-фенил и 5-/о-хлор/фенил- 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-ОН-4-оксиды получают действием на соответствующие незамещенные в положении 1 1,2-дигидро-3Н-1,4- бензодиазепин-2-оны метилбромацетата в присутствии метилата натрия с последующим окислением образующихся 1-метоксикарбонилметил-производных перекисью водорода в среде уксусной кислоты.

1-Гидразинокарбонилметил- 1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-он-4-оксиды получают взаимодействием соответствующих 1-метоксикарбонилметил-1,2-дигидро- 3Н-1,4-бензодиазепин-2-он-4-оксидов с гидразин-гидратом.

Пример 1. 1-Метоксикарбонилметил-7-бром-5-фенил-1,2-дигидро-ЗН- 1,4-бензидиазепин-2-он-4-оксид (la).

К 116,2 (0,3 моль) 1-метоксикарбонилметил-7-бром-5-фенил-1,2- дигидро-3H-1,4-бензодиазепин-2-она прибавляют 300 мл уксусной кислоты и 200 мл 33% перекиси водорода. Реакционную смесь нагревают при перемешивании до 60^oC и продолжают перемешивание при этой температуре до исчезновения исходного продукта в течение 8 часов. Контроль хода реакции проводят с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках Silufol UV 254 (элюент ацетон:гексан:хлороформ 1:2:2). Затем реакционную смесь охлаждают, выливают на лед или в холодную воду (1 л), разбавляют холодной водой в два раза при перемешивании, осадок отфильтровывают, промывают холодной водой и кристаллизуют их из этилового спирта с углем. Получают 104,5 г (88,4 %) 1- метоксикарбонилметил-7-бром-5-фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин- 2-он-4-оксида с t_пл=150-152^oC.

Найдено, %: С - 53,8; H - 3,7; N - 7,0; C₁₈H₁₅BrN₂O₄.

Вычислено, % : С - 53,6; H - 3,7; N - 6,9.

ИК спектр (CHCl₃): С=O 1675, 1740 см^-1, C=N 1595 N--->O 1225 см^-1 С - O - С 1080 см^-1 и др.

УФ спектр: 200 lg∈ 4.30), 239 lg∈ 4.43), 308 lg∈ 3.96) нм Масс-спектр, m/z: [М] ⁺ 402, [M-O]⁺ 386, [M-Br]⁺ 323, [M-CH₂COOCH₃-О]⁺ 313 и др.

Пример 2. 1-Метоксикарбонилметил-7-бром-5- /o-хлор/фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-он-4-оксид (16).

К 42,7 г (0,1 моль) 1-метоксикарбонилметил-7-бром-5- /o-хлор/фенил-1,2-дигидро-3Н-1,4-бензодиазепин-2-она прибавляют 100 мл уксусной кислоты и 80 мл 33% перекиси водорода. При перемешивании нагревают реакционную массу до 80^oC и продолжают перемешивание при этой температуре до исчезновения в реакционной смеси исходного бензодиазепина в течение 6 часов, контролируя это с помощью тонкослойной хроматографии на пластинках Silufol UV 254, элюент: гексан:хлороформ 1:2:2. Охлажденную реакционную смесь выливают при перемешивании в 1 л холодной воды, затем добавляют еще 0,5 л холодной воды, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и кристаллизуют из этилового спирта с углем. Получают 39,5 (90%) 1-метоксикарбонилметил-7-бром-/о-хлор/фенил-1,2-дигидро-3H- 1,4-бензодиазепин-2-он-4-оксида с t_пл.=235-236^oC.

Найдено, %: C - 49,5: H - 3,4; N - 6,5; C₁₈H₁₄BrClN₂O₄.

Вычислено %: C - 49,4: H - 3,2: N - 6,4.

ИК спектр (CHCl₃): C-O 1685, 1750 см^-1, C=N 1585 см^-1, N--->O 1220 см^-1, C-O-C 1080 см^-1 и др.

УФ спектр: 200 lg∈ 4.49), 242 lg∈ 4.45), 296 lg∈ 4.04) нм Масс-спектр, m/z: [M]⁺ 436, [M-O]⁺ 420, [M-Cl]⁺ 401 и др.

Пример 3. 1-Гидразинокарбонилметил-7-бром-5-фенил-1,2-дигидро-1H- 1,4-бензодиазепин-2-он(1в).

К раствору 40,3 г (0,1 моль) 1-метоксикарбонилметил-7-бром-5-фенил-1,2-дигидро-3H-1,4-дигидро-2-он- 4-оксида в 200 мл изопропилового спирта прибавляют 50 мл гидразингидрата и перемешивают при 50^oC в течение 6 часов. Выпавший осадок гидразида отфильтровывают и кристаллизуют из изопропилового спирта. Получают 30,3 г (90%) 1-гидразинкарбонилметил-7-бром-5-фенил-1,2-дигидро-3H- 1,4-бензодиазепин-2-он-4-оксида с t_пл.=266-268^oC.

Найдено, %: C - 50,6; H - 3,7; N - 14,0; C₁₇H₁₅ BrN₄O₃; Вычислено, %: C - 50,6; H - 3,8; N - 13,9.

ИК спектр (таблетки KBr): N-H 3210, 3385 см^-1; C=O 1660, 1680 см^-1, C=N 1570 см^-1; N--->O 1230 см^-1.

УФ спектр: 200 lg∈ 4.54), 239 lg∈ 4.49), 308 lg∈ 4.01) нм.

Масс-спектр m/z: [M]⁺ 402, [M-O]⁺ 386, [M-NHNH₂-O]⁺ 327, [M-CH₂CONHNH₂]⁺ 313 и др.

Пример 4. 1-Гидразинокарбонилметил-7-бром-5-/о-хлор/фенил-1,2- дигидро-3H-1,4-бензодиазепин-2-он-4-оксид (1 г).

Растворяют в 250 мл изопропилового спирта 43,8 г (0,1 моль) 1-метоксикарбонилметил-7- бром-5-/о-хлор/фенил-1,2-дигидро-3H-1,2-бензоди-азепин-2-он-4-оксида при нагревании до 30^oC, прибавляют 45 мл гидразин-гидрата и перемешивают при температуре в течение 10 часов. Реакционную массу охлаждают, добавляют 400 мл холодной воды, отфильтровывают выпавший осадок и перекристаллизовывают из изопропилового спирта. Получают 40,7 г (90%)1-гидразинокарбонилметил-7-бром-5-/о-хлор/фенил-1,2-дигидро- 3H-бензодиазепин-2-он-4-оксида с t_пл= 255-258^oC.

Найдено, % : С - 46,8; H - 3,3; N - 12,9; C₁₇H₁₄BrClN₄O₃.

Вычислено, % : С - 46,6; H - 3,2; N - 12,8.

ИК спектр (таблетки KBr): NH 3235, 3400 см^-1, С=O 1666, 1685 см^-1, C=N 1570 см^-1, N--->O 1225 см^-1.

УФ спектр: 200 lg∈ 4.52), 243 lg∈ 4.45), 296 lg∈ 4.03) нм.

Масс-спектр, m/z: [M]⁺ 436, [M-О]⁺- 420, [M-Cl]⁺ 401, [M-NHNH₂-O]⁺- 389, [M-CONHNH₂-O]⁺ 363 и др.

Результаты фармакологического изучения заявляемых соединений.

Для демонстрации анксиолитического действия новых соединений был использован метод измерения двигательной активности в тесте "открытое поле", который позволяет не только оценить силу анксиолитического эффекта, но и степень его селективности (С.Б.Середенин, А.А.Ведерников, Бюлл.Эксп.Биол. Мед. , 1979, т.88, N7, с.38; S.B.Seredenin, Yu.A.Blednov, B.A.Badyshtov et al. Drug Dependence and Emotional Behavior. Neurophysiological and Neurochemical Approaches, Ed. By A.V.Valdman, Consult.Bureau, New York and London, 1987, p.49-77 ). Сутью данного подхода является сравнительный анализ поведенческих эффектов изучаемых соединений у мышей двух инбредных линий Balb/c и C 57 B 1/6, которые характеризуются различными генетически детерминированными типами эмоционально-стрессовой реакции (ЭСР). О наличии анксиолитического действия судили по выявлению активирующего эффекта на двигательную активность у животных с "пассивным" типом ЭСР (линия Balb/c). Показателем седативных свойств исследуемых соединений служило выявление их ингибирующего действия на двигательную активность мышей с "активным" типом ЭСР (линия C 57 B 1/6). Селективность анксиолитического эффекта оценивали по степени совпадения диапазонов доз, оказывавших либо активирующее, либо ингибирующее действие у животных разных линий. Ранее подобный подход был с успехом применен для оценки степени селективности анксиолитического действия таких ныне известных препаратов, как феназепам (С.Б.Середенин, А.А.Ведерников, Бюлл. Эксп. Биол.Мед., 1979, т.88, N7, с.38; S.B.Seredenin, Yu.A.BIednov, B.A.Badyshtov et al. Drug Dependence and Emotional Behavior. Neurophysiological and Neurochemical Approaches, Ed. By A.V.VaIdman, Consult.Bureau, New York and London, 1987, p.49-77), мексидол (С.Б.Середенин, Ю.А.Бледнов, М.Л.Гордей и соавт. Хим.-Фарм. Журнал, 1987, N2, с.134; T.A.Voronina, S.B.Seredenin, Ann. lst. Super.Sanita, 1988, v.24, N3, p. 461-466)и гидазепам (С.Б.Середенин, Ю. А. Бледнов, А.Д.Дурнев и соавт. Гидазепам. Киев: Наукова Думка, 1992, с.92; S.B.Seredenin, Yu.A.BIednov, Phys.Chem.Biol.&Med., 1993, v., N1, p. 53-60).

В работе были использованы мыши - самцы линий Balb/c и C 57 B 1/6 весом 20-22 г (питомник "Столбовая"). Животных содержали в условиях лабораторного вивария в клетках по 10 особей в каждой, в течение не менее двух недель до начала эксперимента, на стандартной диете, при свободном доступе к воде, при 12-часовом световом режиме (свет с 8.00 до 20.00). Все эксперименты проводили в период времени с 9.00 до 13.00. Все соединения вводили внутрибрюшинно в виде их водной суспензии после предварительного тщательного растирания субстанций с несколькими каплями Tween-80 за 30 мин до начала эксперимента из расчета 0,1 мл раствора на 10 г веса животного. Через 30 минут после введения препаратов животное выдерживали в темноте в течение 1 минуты и затем помещали в один из периферических квадратов "открытого поля", которое представляет из себя белую круглую арену диаметром 1 метр с белыми бортами высотой 50 см. Арена равномерно освещена 4-мя лампами по 75 Вт каждая, расположенными на высоте 1 м над поверхностью поля. Все пространство арены равномерно разделено 4-мя концентрическими окружностями, которые в свою очередь разбиты радиусами на сектора так, что периферическая окружность состоит из 16 одинаковых криволинейных квадратов. Наблюдение за животным производили в течение 3 минут, раздельно фиксировали число пересеченных квадратов на периферии и в центральных областях, а также число стоек. Суммарное число пересеченных квадратов вместе с числом стоек обозначали как общую активность. Статистическую обработку полученных результатов проводили используя t-критерий Стьюдента.

В табл. 1 представлены данные, демонстрирующие влияние соединения Ia на поведение мышей Balb/c. Показано, что в очень широком и, в целом, необычном для бензодиазепиновых производных диапазоне доз от 1.0 мг/кг до 25,0 мг/кг это соединение повышало двигательную активность животных данной линии. И только в дозе 30,0 мг/кг значения двигательной активности опытных животных не отличались от контрольных показателей. У мышей C 57 B 1/6 лишь начиная с дозы 20,0 мг/кг и выше наблюдали статистически достоверное снижение двигательной активности (табл.2).

Результаты, представленные в табл. 3, свидетельствуют о том, что активация поведения животных Balb/c после введения соединения 16 достигала статистически значимых величин лишь в дозе 3,0 мг/кг, тогда как уже в дозе 5,0 мг/кг наблюдали снижение уровня двигательной активности ниже контрольных показателей. Поведение животных линии C 57 B 1/6 оставалось практически неизменным при использовании этого соединения в дозах 1,5 мг/кг и 3,0 мг/кг (табл. 4). Наблюдали лишь небольшое снижение величины периферической и вертикальной двигательной активности в дозе 1,5 мг/кг.

Соединение Iв, испытанное в диапазоне доз от 0,5 мг/кг до 15,0 мг/кг, в дозах 1,0 мг/кг, 2,0 мг/кг, 5,0 мг/кг и 10,0 мг/кг повышало периферическую и общую двигательную активность мышей линии Balb/c, тогда как в дозе 15,0 мг/кг уровень двигательной активности опытных животных не отличался от контрольной группы (табл. 5). У животных линии C 57 B 1/6 не наблюдали изменения поведения в диапазоне доз от 5,0 до 15,0 мг/кг. Лишь в дозе 20,0 мг/кг соединение 1в статистически достоверно снижало все виды двигательной активности мышей данной линии (табл. 6).

Данные, представленные в табл.7, показывают, что соединение 1 г повышает уровень двигательной активности мышей линии Balb/c в дозах 0,5 мг/кг и 1,0 мг/кг. В тоже время ингибирующий двигательную активность эффект этого соединения у мышей линии C 57 B 1/6 наблюдали уже в дозе от 1,5 мг/кг (табл.8).

Использованный в качестве препарата сравнения альпразолам (ксанакс) заметно активировал поведение мышей Balb/c в диапазоне доз от 0,05 мг/кг до 1,0 мг/кг, тогда как в дозе 2,0 мг/кг двигательная активность животных данной линии была ниже контрольных показателей (табл. 9). Однако у мышей C 57 B 1/6 статистически значимое снижение уровня двигательной активности наблюдали, уже начиная с дозы 0,25 мг/кг (табл. 10).

Оценивая результаты проведенного скрининга с позиции использованного нами фармакогенетического подхода, основные принципы которого были изложены во введении к данному разделу, можно заключить, что наиболее интересными и перспективными с точки зрения анксиоселективности их фармакологического действия, являются соединения Iа и Iв. Действительно, оба эти препарата характеризовались диапазоном доз, активировавших поведение мышей линии Balb/c в тесте ОП, которые значительно превосходили аналогичный диапазон для гидазепама (С.Б.Середенин, Ю.А.Бледнов, А.Д.Дурнев и соавт. Гидазепам. Киев: Наукова Думка, 1992, с.92) и альпрозолама (Ю.А.Бледнов, М.М.Козловская, М. Маула и др. Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии. Под ред. В.Е.Новикова. Смоленск, 1994, с.13-15).В то же время для обоих соединений было характерно снижение их седативной активности относительно препаратов сравнения, что проявлялось в увеличении дозировок, ингибировавших поведение мышей линии C 57 B 1/6 в тесте ОП. Исходя из ранее сформулированных принципов, можно предположить, что оба отобранных соединения обладают более выраженной степенью анксиселективности, чем ранее изученный гидазепам, а также альпразолам. Однако необходимо отметить заметное превосходство по данному показателю соединения Iа в сравнении с соединением Iв. Поэтому для дальнейшего более углубленного изучения транквилизирующего действия, а также оценки возможных побочных эффектов, было отобрано соединение Iа, обладавшее наиболее выраженным активирующим компонентом анксиолитического действия в первой серии экспериментов.

Изучение анксиолитического действия отобранного соединения проводилось в опытах на беспородных крысах-самцах весом 180-200 г в условиях общепринятой для этой цели методики столкновения питьевого и оборонительного рефлексов при действии внезапного болевого раздражителя как экстремального фактора (Т. А. Воронина, Ю.И.Вихляев, Т.Л.Гарибова, Л.Н.Неробкова и др. Феназепам. Киев: Наукова Думка, 1982, с. 89,93,146). Эксперимент начинали с тренировки крыс с целью выработки у них чувства жажды и навыка взятия воды из поилки в экспериментальной камере. Для этого животных содержали на сухом корме в течение 24 часов и затем помещали в камеру, где они получали воду в течение 5 минут. Через сутки после тренировки крысе через 5 сек после начала питья наносили электрическое раздражение пропусканием тока (0,5 А) через поилку. Таким образом, столкновением двух рефлексов питьевого и оборонительного создавалась экстремальная ситуация, при которой страх получения болевого раздражения удерживал животное от взятия воды. В дальнейшем в течение 5 мин регистрировали количество взятий воды из поилки, которые наблюдали несмотря на получение при этом каждый раз электроболевого раздражения.

Контрольные животные в создаваемой ситуации делали в среднем от 8 до 14 попыток наказуемых взятий воды из поилки (табл. 11). Соединение Iа в широком диапазоне испытанных доз от 1 мг/кг до 20 мг/кг (в/бр) обладает отчетливым действием в создаваемой ситуации, устраняя чувство страха при действии болевого раздражителя, что обычно интерпретируется как анксиолитический эффект. Это выражается в увеличении в 2-4 раза по сравнению с контролем числа наказуемых взятий воды из поилки. При этом общая двигательная активность животных в экспериментальной камере заметно не изменялась. Таким образом, на основании проведенных экспериментов можно заключить, что соединение Iа обладает выраженным анксиолитическим действием в широком диапазоне доз без сопутствующих признаков седации или миорелаксации.

Анксиолитическую активность отобранного соединения Iа изучали также в тесте "приподнятого крестообразного лабиринта" (ПКС), который позволяет выявлять как анксиолитическую, так и анксиогенную активность различных фармакологических средств у крыс (S.Pellow, P.Chopin, S.E.File et al., J. Neurosci. Metohods, 1985, v. 14, p. 149-167) и мышей (J.Rateud, F.Darche, F. Piot et al., Brain Res.,1991, v.548, p.315-317]. Выполненный из плексиглаза лабиринт имеет форму креста с двумя открытыми (длина - 22 см, ширина - 5 см), двумя закрытыми (длина - 22 см, ширина - 5 см, высота стенок - 15 см) рукавами и центральной площадкой (5х5 см). Кроме того, лабиринт приподнят на высоту 25 см. В работе были использованы мыши-самцы линии Balb/c весом 20-22 г (питомник "Столбовая"). Животных содержали в условиях лабораторного вивария в клетках по 10 особей в каждой, в течение не менее двух недель до начала эксперимента, на стандартной диете, при свободном доступе к воде, при 12-часовом световом режиме (свет с 8.00 до 20.00). Все эксперименты проводили в период времени с 9.00 до 13.00. Все соединения вводили внутрибрюшинно в виде их водной суспензии после предварительного тщательного растирания субстанций с несколькими каплями Tween-80 за 30 мин до начала эксперимента из расчета 0,1 мл раствора на 10 г веса животного. Через 30 мин после введения препаратов животное выдерживали в темноте в течение 1 мин и затем помещали на центральную площадку в направлении к одному из открытых рукавов. В течение 5 мин фиксировали отдельно время пребывания животного в отмытых рукавах и центральной площадке, а также количество забегов в открытые и закрытые рукава. Эксперимент проводили при комнатном освещении. Статистическую обработку результатов проводили, оценивая на первом этапе влияние различных доз испытуемого соединения на поведение животных методом однофакторного дисперсионного анализа по методу Ньюмена-Кьюлса. Статистическую обработку проводили методами компьютерного анализа с помощью статистического пакета "Pharmacologic Calculation System" (R.J.Tallarida and R.B.Murray (Eds.), Manual of Pharmacologic Calculation with Computer Programs, 2end Edition, Springer-Verlag, New York, 1986).

На фиг. 1 представлены данные по влиянию одного из препаратов сравнения - альпразолама на поведение мышей линии Balb/c в условиях ПКС. Видно, что в дозах от 0.01 мг/кг до 0.25 мг/кг альпразолам статистически достоверно увеличивал время пребывания экспериментальных животных в открытых рукавах лабиринта (фиг. 1А), а также процент забегов в открытые рукава (в дозах 0.1 и 0.25 мг/кг) (фиг. 1Г), что интерпретируется как анксиолитический эффект. В то же время в диапазоне доз от 0.01 до 0.25 мг/кг повышение времени пребывания в открытых рукавах сопровождалось увеличением общего числа забегов в открытые и закрытые рукава (фиг. 1В), что может свидетельствовать о развитии активирующего действия, свойственного бензодиазепиновым транквилизаторам (Г. Я. Авруцкий, А.А.Недува. Лечение психических больных. М.: Медицина, 1981, с. 493). Однако в диапазоне доз от 0.25 мг/кг до 1.0 мг/кг наблюдалось дозозависимое увеличение времени задержки животного в центральной площадке лабиринта (фиг. 1Б), что, вместе со значительным снижением (ниже контрольного уровня) в дозе 1.0 мг/кг, как общего числа забегов (фиг. 1В), так и процента забегов в отмытые рукава (фиг. 1Г), свидетельствует об одновременном развитии седативного действия. Таким образом, полученные результаты позволяют вычленить три дозовых диапазона в спектре фармакологической активности альпразолама, в которых данный препарат обладает различными фармакологическими эффектами: 1-анксиолитическое действие с активирующим компонентом (транквило-активирующее); 2- анксиолитическое действие с седативным компонентом (транквило-седативное); 3- седация. Вместе с тем необходимо отметить, что все три группы эффектов, характерных для альпразолама, развиваются в достаточно узком диапазоне доз (от 0.01 мг/кг до 1.0 мг/кг) и взаимно перекрываются.

В следующей серии экспериментов было изучено действие другого препарата сравнения - гидазепама на поведение животных Balb/c в тесте ПКС. Оказалось, что в диапазоне доз от 1.0 мг/кг до 9.0 мг/кг гидазепам статистически достоверно увеличивал как общее время пребывания животных в открытых рукавах лабиринта (фиг. 2А), так и процент забегов в открытые рукава (фиг. 2Г), что можно оценить как развитие анксиолитического действия. Однако увеличение общего числа забегов (двигательная активность) наблюдали только в диапазоне доз от 1.0 мг/кг до 3.0 мг/кг (фиг. 2В), а стистически достоверное повышение времени задержки на центральной площадке только в максимально испытанной дозе -11.0 мг/кг (фиг.2Б). Таким образом, для гидазепама можно выделить те же три группы эффектов, развивающихся в различных дозовых диапазонах, что и для альпразолама. Однако селективность различных вариантов анксиолитического действия гидазепама оказалась значительно выше в сравнении с альпразоламом.

На фиг. 3 представлены данные по влиянию отобранного на первом этапе исследований соединения 1а на поведение мышей Balb/c в тесте ПКС. Видно, что время пребывания животных в открытых рукавах лабиринта (фиг. 3А) и процент забегов в открытые рукава (фиг. 3Г) были повышены в сравнении с контрольными показателями после введения соединения Iа в дозах от 1 мг/кг до 15 мг/кг. В том же дозовом диапазоне наблюдали статистически достоверное увеличение общего числа забегов в рукава лабиринта (фиг. 3В). В то же время заметное развитие седации выявлялось только после введения соединения Iа в дозах 20,0 и 30,0 мг/кг (фиг. 3Б). Таким образом, исходя из вышеприведенного фармакологического анализа поведения, описываемого в данной тестовой системе, можно заключить, что в сравнении с гидазепамом и альпразоламом, спектр психофармакологической активности соединения Iа характеризуется прежде всего наличием селективного анксиолитического эффекта с преимущественно активирующим компонентом, при резко сниженном седативном действии.

Для непосредственной оценки возможной седативной активности в следующей серии экспериментов было изучено влияние соединения Iа на спонтанную двигательную активность мышей Balb/c и C 57 B 1/6 в приборе "Optovarimex", как было описано ранее (С.Б.Середенин, Ю.А-Бледнов, А.Д.Дурнев и соавт. Гидазепам. Киев: Наукова Думка,1992, с.92). Животных помещали в прозрачные клетки группами по 3 мыши на клетку и выдерживали в течение 5-ти дней в условиях лабораторного вивария при свободном доступе к пище и воде. В день эксперимента животные получали в/бр инъекцию суспензии изучаемого соединения или физиологического раствора (контрольная группа) и в течение 30 минут содержались в знакомой клетке, после чего эти клетки помещали в прибор "Optovarimex", где с помощью инфракрасных датчиков измеряли суммарную двигательную активность экспериментальной группы животных. Данные, представленные в табл. 12, 13, демонстрируют, что лишь в дозе 30 мг/кг избранное вещество достоверно снижает уровень спонтанной двигательной активности (ниже контрольных показателей) у мышей обеих линий. Таким образом, представленные экспериментальные данные свидетельствуют, что соединение Iа в широком диапазоне доз (до 30 мг/кг) не обладает седативным действием.

Острая токсичность измерялась в опытах на белых беспородных мышах при внутрибрюшинном введении испытуемых соединений в виде их суспензии в 1% растворе крахмала. Для соединения Iа величина LD₅₀, рассчитанная по общепринятому методу Литчфилда-Уилкоксона, оказалась равной 803,4 мг/кг (при 95% доверительном интервале 540,2-1194,7 мг/кг). Выявленная острая токсичность является довольно низкой и не сильно отличается от токсичности других известных препаратов с бензодиазепиновой структурой (Т.А.Воронина. Гидазепам. Киев: Наукова Думка,1992, с. 63-75).

Пояснения к чертежам.

Фиг. 1. Влияние альпразолама на поведение мышей Balb/c в "приподнятом крестообразном лабиринте".

По оси ординат: А - Время в открытых рукавах (сек); Б - время задержки в центре лабиринта (сек); В - общее число забегов в рукава; Г- % забегов в открытые рукава от общего числа забегов. По оси абсцисс: дозы препарата (мг/кг). ^* - статистически достоверные отличия от контроля (P<0,05, Ньоман-Кьюлс тест).

Фиг. 2. Влияние гидазепама на поведение мышей Balb/c в "приподнятом крестообразном лабиринте".

По оси ординат: А - Время в открытых рукавах (сек); Б - время задержки в центре лабиринта (сек); В - общее число забегов в рукава; Г - % забегов в открытые рукава от общего числа забегов. По оси абсцисс: дозы препарата (мг/кг). ^* - статистически достоверные отличия от контроля (P<0,05, Ньюман-Кьюлс тест).

Фиг. 3. Влияние соединения Iа на поведение мышей Balb/c в "приподнятом крестообразном лабиринте".

По оси ординат: А - Время в открытых рукавах (сек); Б - время задержки в центре лабиринта (сек); В - общее число забегов в рукава; Г - % забегов в открытые рукава от общего числа забегов. По оси абсцисс: дозы препарата (мг/кг). ^* - статистически достоверные отличия от контроля (P<0,05, Ньюман-Кьюлс тест).

Формула изобретения

Производные 1,4-бензодиазепина общей формулы

где R¹ - бром;
R = CH₃O, NHNH₂;
R³ - H, галоген,
обладающие селективной анксиолитической активностью.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16