Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция

 

Изобретение может быть использовано в медицине и фармации для создания препаратов, содержащих протеины. Лиофилизат содержит буфер, аланин и маннитол. Массовое соотношение аланин : маннитол 1 : 0,1 - 1. В качестве протеина могут содержаться фермент оксидаза-урат, гормон hGH, интерлейкин - 13. В качестве буфера - фосфатный буфер. Аланин может содержаться в кристаллической форме, маннитол - в аморфной. Протеин, содержащийся в композиции, остается стабильным при комнатной температуре. Содержание воды в лиофилизате совместимо с сохранением активности протеина. 7 з.п.ф-лы, 6 табл., 5 ил.

Изобретение относится к фармацевтически приемлемой композиции, находящейся в форме лиофилизата и содержащей протеин в качестве действующего начала. Эта композиция стабильна при 25^oC и может быть переведена в жидкую форму путем добавки растворителя. Ее можно вводить парентерально человеку или животному или использовать в анализирующем наборе.

Известно, что составы таких композиций обладают значительным разрушающим воздействием на протеины в процессе лиофилизации, а также сильно влияют на их стабильность в лиофилизированной форме. Конкретные переменные композиции, влияющие на эти свойства, представляют собой главным образом pH, количество присутствующих солей, тип и количество экципиентов, выбранный тип криозащиты, а также выбранные температуру, давление и продолжительность операций замораживания, сублимации и высушивания. Эти различные переменные влияют также на физическое состояние полученного лиофилизата, а именно аморфное стеклообразное, аморфное мягкое, кристаллическое или их сочетание.

Роль каждой из этих переменных исследовалась в отдельности, но их синергический эффект еще плохо выяснен (Pikai M.J., Dellermann K.M., Roy M.Z., Riggin M.N., Fhe effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research, 1991, 8, N4, 427-236).

Имеющаяся информация о влиянии аминокислот и многоатомных спиртов на свойства лиофилизируемых растворов или лиофилизатов позволяет сделать следующие заключения.

Преимущества и недостатки, связанные с присутствием аминокислот, маннитола, кристаллической или аморфной фаз, перечислены ниже.

Преимущества, связанные с присутствием аминокислот.

Показано, что наличие глицина в лиофилизате индуцирует кристаллизацию молекул, присутствующих в растворе, в процессе стадии замораживания во время лиофилизации (Korey D. J. , Schwartz J. B., Effects of excipients on the cristallization of pharmaceutical compounds during lyophylization, J. Parenteral Sci. Tech., 1989, 43, 2, 80-83).

Эта кристаллизация действующего начала, однако, маловероятная в случае протеинов, позволяет улучшить его стабильность.

Кроме того, аланин в кристаллизованной форме препятствует созданию лиофилизата в процессе сублимации и высушивания и позволяет получать лиофилизат с более высокой удельной поверхностью, что позволяет достичь более быстрого его высыхания (Pikai M.J., Freeze-drying of proteins, Biopharm. 26 - 30 октября 1990).

Недостатки, связанные с присутствием аминокислот.

Добавка аминокислоты к сахару или многоатомному спирту, находящемуся в лиофилизирующем растворе, обычно вызывает снижение температуры стеклоперехода сахара (te Booy MPWH de Ruiter R.A., de Meere ALJ, Evaluation of the physical stability of freeze-dried sucrose containing formulations by differential scanning calorimetry, Pharm. Research, 1992, 9, 109-114).

Однако снижение температуры стеклоперехода обычно сопровождается ухудшением стабильности лиофилизата (Frauks Z., Freeze-drying; from empiricism to predictability. Cryo-Letters, 1990, 11, 93-110).

Преимущества, связанные с присутствием маннитола.

Наличие маннитола в аморфной форме в присутствии протеина гарантирует наличие некристаллизационной воды, связанной с протеином, в процессе замораживания, и таким образом препятствует денатурации протеина. Кроме того, наличие многоатомных спиртов стабилизирует протеины от терморазрушений за счет гидрофобных взаимодействий (Back J.F., Oakenfull D., Smith M.B., Increased thermal stability of proteins in the presense of sugars and polyols, Biochemistry, 1979, 18, 23, 5191-96).

Недостатки, связанные с присутствием маннитола.

Известно, что маннитол не позволяет сохранять активность фермента при 37^oC в противоположность лактозе (Ford A.W., Dawson P.J., The effect of carbo-Rydrate additives in the freeze-drying of alkaline phosphatase, J. Pharm. Pharmacol., 1993, 45 (2), 86 - 93).

Преимущества, связанные с присутствием кристаллической фазы.

Наличие кристаллизованного растворенного вещества в замороженном растворе благоприятствует стабилизации протеинов в процессе высушивания (Carpenter J.F., and Crowe J.H., Modes of stabilization of a protein by organic solutes during dessication, Cryobiology, 1988, 25, 459 - 470).

Недостатки, связанные с присутствием кристаллической фазы.

Показано, что потеря активности лиофилизированного протеина прямо связана со степенью кристалличности криозащищающей молекулы (Izutsu K.I., Joshioka S. , Terao T., Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectants due fo crystallization, Pharm. Research. 1993, 10, N 8, 1232 - 1237).

В лекарственных средствах, содержащих протеины, следует избегать кристаллизации экципиентов (Hermansky M., Pesak M., Zyophilization of drugs. VI Amorphous and Crystalline forms. Cesk. Farm., 1993, 42 (2), 95 - 98).

Преимущества, связанные с присутствием аморфной фазы.

Наличие добавок, находящихся в аморфном состоянии, стабилизирует активность некоторых ферментов пропорционально концентрации добавки (Izufzu K.I., Joshioka S. , Terao T. Decreased protein-stabilizing effects of cryoprotectants due to crystallization, Pharm. Research, 1993, 10, N 8, 1232 - 1237).

Криозащитный эффект экципиентов объясняется аморфным состоянием глицина в полученном лиофилизате (Pikai M.J., Dellermann K.M., Roy M.Z., Riggin M.N. , The effects of formulation variables on the stability of freeze-dried Human Growth Hormone, Pharm. Research, 1991, 8, N 4, 427 - 436).

Недостатки, связанные с присутствием аморфной фазы.

В присутствии только одной твердой аморфной фазы лиофилизат оседает при температурах выше температуры стеклоперехода в процессе замораживания.

В мягкой аморфной фазе разрушительные химические реакции имеют намного более высокую кинетику, чем в кристаллической фазе.

Таким образом, обзор научной литературы позволяет сделать вывод о противоречивом характере влияния экципиентов на стабилизацию протеинов. Нет никакой единой теории о связи между структурой лиофилизата и его стабильностью. Кроме того, не описывается роль многоатомных спиртов и аминокислот, взятых в отдельности или в сочетании друг с другом, в зависимости от совокупности их общих свойств, однако были получены противоречивые результаты в зависимости от изучаемых протеинов и используемых количеств экципиентов.

В настоящее время заявителем было обнаружено, что имеется синергическое воздействие маннитола и аланина на стабилизацию лиофилизированных протеинов. Доказано, что это синергическое воздействие существует только в области относительных концентраций каждого из этих экципиентов. Оптимальный эффект имеет место для соотношения R, где R обозначает отношение: масса маннитола/масса аланина, присутствующих в лиофилизате, в интервале значений 0,1 - 1, особенно 0,2 - 0,8.

Кроме того, показано, что при R = 0,1 - 1: лиофилизат образован аморфной фазой и кристаллической фазой; аморфная фаза большей частью образована маннитолом и протеином; кристаллическая фаза в большинстве своем образована аланином.

Эффект стабилизации протеинов объясняется согласно предложенным гипотезам тем, что в указанном интервале соотношений: образованная аморфная фаза криозащищает протеин в процессе замораживания; кристаллическая фаза фиксирует структуру лиофилизата и позволяет устранить его разрушение.

Этот неожиданный синергический эффект, возникающий при сосуществовании аморфной фазы и кристаллической фазы, стабилизирует лиофилизированный протеин.

Настоящее изобретение относится таким образом к лиофилизированным формам композиций, содержащим эффективное количество биологически активного протеина, буфер для доведения pH оптимального значения для стабилизации протеина, аланин и маннитол, причем эти два последних экципиента находятся в массовом соотношении R = масса маннитола/масса аланина, составляющем 0,1 - 1. Протеин, содержащийся в вышеуказанной композиции, остается стабильным в лиофилизированной форме. Полученный лиофилизат быстро и полностью растворяется. Внешний вид лиофилизата не нарушен и содержание в нем воды совместимо с сохранением активности протеина.

В эту композицию могут быть введены другие фармацевтически приемлемые и хорошо известные специалисту экципиенты, например сорастворители, консерванты, антиоксиданты или хелатирующие агенты.

Более конкретно настоящее изобретение касается стабилизированных протеинсодержащих лиофилизатов, содержащих главным образом протеин, криозащищенный твердой аморфной фазой, и маннитол, причем эта аморфная фаза в лиофилизате, полученном после сублимации и высушивания замороженного раствора, существует одновременно с кристаллической фазой, образованной главным образом аланином.

Биологически активный протеин, который используют согласно настоящему изобретению, может представлять собой гликозилированный или нет природный, синтетический, полусинтетический или рекомбинантный полипептид такой, который используют в клинической или лабораторной практике. Более конкретно, вышеуказанным протеином может быть, например, гормон, как гормон роста, предпочтительно человеческого роста (hGH); гормон желтого тела (лютеиновый гормон) (LH-RH); гонадотропин. Протеин также может представлять собой фермент, например тромболитический фермент, такой как урокиназа, проурокиназа, стрептокиназа, стафилокиназа, тканевый активатор плазминогена (tPA), или такой фермент, как фосфатаза, сульфатаза, ацил-трансфераза, моноамино-оксидаза, оксидаза-урат.

Протеин согласно настоящему изобретению может также представлять собой цитокин, например интерлейкин-2 (IL-2), интерлейкин-4 (IL-4), интерлейкин-6 (IL-6) или интерлейкин-13 (IL-13). Другой класс протеинов согласно настоящему изобретению включает, например, антитела, иммуноглобулины, иммунотоксины. Пептиды, такие как холецистокинин (CCK), вещество P, нейрокинин A, нейрокинин B, нейротензин, нейропептид Y, эледоизин, бомбезин, могут вводить в композиции согласно настоящему изобретению.

Предпочтительным биологически активным протеином является hGH (или человеческий гормон роста), оксидаза-урат или интерлейкин-13.

Человеческий гормон роста представляет собой протеин, образованный одной полипептидной цепью из 191-й аминокислоты с двумя дисульфидными мостиками между цистеиновыми остатками 53 и 165 и цистеиновыми остатками 182 и 189.

Оксидаза-урат представляет собой фермент, который окисляет мочевую кислоту в аллантоин и экстрагируется из биомассы Aspergillus flavus (Zaboureur и др., Bull. Soc. Chim. Biol., 1968, 50, 811 - 825).

Этот фермент используют для лечения гиперурикемии в течение последних двадцати лет.

кДРНК (кодирующая дезоксирибонуклеиновая кислота), кодирующая этот протеин, недавно была клонирована и экспрессирована в E. coli (LEGOUX R. и др., J. of Biol. Chem., 1992, 267, 12, 8565 - 8570); Aspergillus flavus и Saccharomyces cerevisiae.

Фермент представляет собой тетрамер с идентичными субъединицами молекулярных масс, близких к 3200. Мономер, образованный одной полипептидной цепью из 301-й аминокислоты, не содержит дисульфидных мостиков и ацетилирован на N-конце.

Интерлейкин-13 представляет собой цитокин, образованный одной полипептидной цепью из 112 аминокислот с двумя дисульфидными мостиками (Minty и др., Nature, 1993, 362, 248 - 250).

Сосуществование аморфной (маннитол + протеин) фазы с кристаллической аланиновой фазой не зависит от наличия и концентрации буфера, регулирующего pH раствора, но зависит от вышеуказанного соотношения R.

Для получения протеинсодержащих композиций, которые можно было бы предложить для широкого использования в качестве терапевтических средств, необходимо выпускать их в достаточно стабильном состоянии, чтобы сохранить их биологическую активность между моментом изготовления и моментом использования. Например, композицию на основе гормона роста hGH можно получать многочисленными способами, например, описанными в следующих патентах или заявках на патенты: патент США 5 096 885; ВОИС 89/09614; ВОИС 92/17200; патент Австралии 30771/89; ВОИС 91/19773; ВОИС 93/19776.

Композиции согласно изобретению могут храниться при комнатной температуре, тогда как композиции, содержащие эти протеины и имеющиеся в настоящее время в продаже, нужно хранить при температурах 2 - 8^oC.

В большинстве случаев выпускаемой фармацевтической формой является лиофилизированная, замороженная или форма раствора. Они содержат протеин, буфер, глицин, аргинин, маннитол, цинк, поверхностно-активные агенты, декстран, ЭДТК или другие экципиенты, но никогда не содержит комбинацию аланин/маннитол в массовом соотношении R = 0,1 - 1. (EP 0178665, US 5266310, EP 0396777, US 4992419).

Лиофилизированные или замороженные формы используются для сохранения биохимической целостности и биологической активности молекулы. Лиофилизированные формы перед использованием нужно разбавлять с помощью стерильных фармацевтически приемлемых растворителей, таких как дистиллированная вода, водные 0,9%-ные растворы хлорида натрия или водные 5%-ные растворы глюкозы, или любой другой физиологически приемлемый растворитель, возможно содержащий антибактериальные консерванты, такие как бензиловый спирт, фенол или мета-крезол.

Композиция, стабильная при комнатной температуре до момента ее разведения, особенно предпочтительна для амбулаторного лечения, как в случае гормона hGH, она выпускается в форме флакона или в форме многоразовой ручки шприца.

Такие виды упаковки могут также входить в дозировочный набор.

Согласно настоящему изобретению предпочтение отдается лиофилизованной форме композиции. Этот лиофилизат получают путем лиофилизации из раствора.

Способ получения этой композиции включает стадии смешения, растворения, фильтрации и лиофилизации.

Состав лиофилизируемого раствора следующий: протеин, фармацевтически приемлемый буфер для регулирования pH, аланин, маннитол, причем массовое соотношение R = масса маннитола/масса аланина составляет 0,1 - 1; вода для инъекцируемого препарата.

Лиофилизируемый раствор готовят следующим образом.

Раствор протеина получают на колонке гель-фильтрации, он содержит буфер, поддерживающий pH-значение в области, совместимой со стабильностью протеина.

В этот раствор добавляют желаемое количество буфера, аланина, маннитола и воды для растворения всех экципиентов. Раствор отфильтровывают в стерильных условиях и распределяют по емкостям, предпочтительно флаконам.

Лиофилизацию растворов проводят следующим образом.

Раствор подвергают циклу замораживания, затем сублимации и высушивания с учетом лиофилизируемого объема и емкости, в которой содержится раствор. Предпочтительно выбирают скорость замораживания, близкую к 2^oC/мин в лиофилизаторе Usi-froid (Франция) типа SMH15, или SMJ 100, или SMH2000.

Время, температуру и давление высушивания лиофилизата выбирают в зависимости от объемов лиофилизируемого раствора и желательного содержания остаточной воды в лиофилизате.

Полная информация о способах приготовления инъекцируемых формулировок дается для специалиста в Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985, 17-e издание; или в William N.A. and Polli J.P., The lyophilization of pharmaceuticals: литературный обзор. J.Parenteral Sci: Tech., 1984, 38 (2), 48-59: или в Franks J., Freeze-drying: from empiricism to predictability, Cryo-Letters, 1990, 11, 93-110.

Получают лиофилизат, в котором аланин находится в кристаллизованной форме, а маннитол - в аморфной форме. Лиофилизат можно хранить при 25^oC без ухудшения биологической активности протеина.

Настоящее изобретение иллюстрируется на примерах с протеином hGH или оксидазы-урата. Так готовят несколько растворов, содержащих hGH или оксидазу-урат в качестве биологически активного протеина, фосфатный буфер различных концентраций с pH 7 для растворов, содержащих hGH (с 4 UI/0,5 мл), и с pH 8 для растворов, содержащих оксидазу-урат (с 30 UAE/мл); только маннитол, только аланин и смесь аланин/маннитол, затем их лиофилизируют и анализируют.

Составы описываются подробно в примерах табл. 1 и 2, представленных ниже. Методы анализа, а также время и температуры сохранения устойчивости описываются ниже.

Аналитические методы, которые используют для определения различных параметров, следующие.

Содержание димеров и родственных веществ с более высокими молекулярными массами.

Содержание димеров и родственных веществ с более высокими молекулярными массами определяют путем эксклюзивной хроматографии (SEC-HPLC), используя колонку SUPERO SE 12 (Pharmacia, реф. 17-0538-01). Продукт элюируют с помощью буферного раствора фосфата аммония с pH 7,0 (1,38 г дигидрофосфата аммония в 1 литре воды при доведении pH-значения до 7 с помощью концентрированного раствора аммиака с дебитом 0,4 мл/мин). Сбор данных осуществляют при 220 нм (это содержание, приведенное в результатах анализа, выражается в процентах /олигомеров + полимеров).

Содержание димеров и веществ с более высокой молекулярной массой также можно определять по методу, описанному в монографии Европейской фармакопеи "Somatropine pour preparation nizectable", январь 1994 г.

Количественное определение протеина путем хроматографии с обратной фазой.

Выражаемое в мг на флакон количество протеина определяют с помощью хроматографии с обратной фазой, используя колонку C18-300 ангстрем длиной 25 см, диаметром 4,6 мм (SYNchrOM, реф. CR 103-25). Продукт элюируют в течение 35 минут градиентным методом при использовании мобильной фазы, пропуская от 75 объемов воды с 0,1% трифторуксусной кислоты (по объему) (ТФК) и 25 объемов ацетонитрила с 0,08% ТФК (по объему) до 30 объемов воды с 0,1% ТФК и 70 объемов ацетонитрила с 0,08% ТФК. Дебит составляет 1 мл в минуту и определение осуществляют при 220 нм.

Количественное определение ферментативной активности оксидазы-урата.

Ферментативную активность оксидазы-урата в UAE определяют с помощью спектрофотометрии в термостатируемой кювете при 30^oC, по исчезновению полосы мочевой кислоты при 292 нм, согласно Legoux R., Delpech Brunc, Dumont X., Guillemout J. C. , Ramond P., Shire D., Caput D., Ferrara P., Loison G., J. Biol, Chem., 1992, 267 (12), 8565-8570.

Мутность растворов растворенных веществ.

Мутность растворов, содержащих hGH лиофилизатор, определяют путем спектрофотометрии (Ph. Eur, 2(1), т. 619) при 500 нм на спектрофотометре Perkin Elmer 554. Результаты представлены в единицах поглощения х 1000.

Мутность растворов, содержащих оксидазу-урат в лиофилизате, определяют с помощью турбидиметра Ratio Hach 18900-00. Результаты определения мутности выражают в нефелометрических единицах мутности (NTU), определяемой согласно: Standard mefhods for examination of wafer and wastewafer de l'American Public Healfh Association.

Степень опалесценции также определяют по методу, указанному в Европейской Фармакопее (II), т. 6, путем сравнения анализируемого образца с контрольной суспензией.

Органолептические критерии лиофилизатов.

Эти критерии изучают визуально, принимая во внимание цвет лиофилизата, его структуру (разрушена или нет), а также наблюдают за возможным фазовым смещением между наружным слоем и сердцевиной лиофилазата.

Рентгеновский структурный анализ порошка.

Рентгеновский структурный анализ лиофилизатов осуществляют на дифрактометре СИМЕНС D 500 ТТ: источник: CuKα1; генератор: 40 кВ, 25 мА; экранированный монохроматор; щели: 1/1/1/0,16/0,6; отбор образцов на пирексовом носителе; область сканирования (развертки): 4 - 40^o в минуту в виде 2 тета Bragg.

Дифференциальный термический анализ.

Исследование лиофилизатов с помощью дифференциального термического анализа осуществляют в следующих условиях: аппаратура: DSC 7 Perkin Elmer; эталонирование: индий и свинец, отбор пробы: между 5 и 10 мг в капсуле емкостью 50 мкл; начальная температура: 10^oC; скорость нагрева 10^oC в минуту; конечная температура: 300^oC.

Дезамидированные формы hGH.

Процент дезамидированных форм определяют путем анионообменной хроматографии (AEX - HPLC), используя анионообменную колонку (PHARMACIA моно-Q HR 5/5, реф. 17-0546-01). Элюирование осуществляют с помощью раствора А (13,8 г дигидрофосфата аммония в 1000 мл воды; pH=7, доводимое с помощью концентрированного раствора аммиака) и воды в качестве раствора B, используя следующую программу: 5% раствора A в течение 2-х минут; затем пропускание с 15% раствора A в течение 5 минут; после этого пропускание с 50% раствора A в течение 20 минут; наконец, пропускание со 100% раствора A в течение 5 минут и поддерживание этого последнего раствора в течение 5 минут. За элюированием hGH (пропускание около 15 минут) и дезамидированных форм наблюдают при 220 нм. Дебит составляет 1 мл в минуту.

Результаты этих различных методов анализа представлены ниже.

Содержание димеров и родственных веществ с более высокой молекулярной массой.

Содержание суммы олигомеров с полимерами в лиофилизатах, включающих 4UI hGH, поглощенных 0,5 мл воды, определяют в зависимости от соотношения R (фиг. 1). На фиг. 1 показано, что минимальное содержание олигомеров с полимерами в растворах получают при R = 0,1 - 1, причем величина 0,1 получается путем интерполяции кривой.

В качестве дополнительного примера, наблюдают за стабильностью при 25^oC и 35^oC двух партий: hGH с концентрацией 4UI и 8UI. Их стабильность превосходная после хранения в течение 6 месяцев.

В нижеприведенных табл. 3 и 4 указываются содержания в процентах олигомеров и полимеров, дезамидированных форм в различное время и при разных температурах по сравнению с нормами Европейской Фармакопеи. В этих таблицах R = 0,45.

Определение ферментативной активности оксидазы-урата.

Ферментативную активность лиофилизатов, содержащих 30 UAE оксидазы-урата, поглощенных 1 мл воды, определяют в зависимости от соотношения R спустя 1 месяц при 35^oC (см. фиг. 2). На фиг. 2 показано, что начальная ферментативная активность оксидазы-урата сохраняется спустя 1 месяц при 35^oC при R = 0,4 - 1.

В качестве дополнительного примера состав с R = 0,45 или R = 0,67 совершенно стабилен спустя 3 месяца при 25^oC (остаточная активность близка к 100% активности во время нуль).

Мутность растворенных форм лиофилизата.

Мутность растворов лиофилизатов, содержащих 4 UI hGH, поглощенных 0,5 мл воды, определяют в зависимости от соотношения R (см. фиг. 3). На фиг. 3 показано, что минимальная мутность растворов достигается при R = 0 - 1,5.

Мутность растворов лиофилизатов, содержащих 30 UEA оксидазы-урата, поглощенных 1 мл воды, определяют в зависимости от соотношения R (см. фиг. 4). На фиг. 4 показано, что получаемая минимальная мутность растворов достигается при R = 0,2 - 1.

Органолептические критерии лиофилизатов.

Органолептические критерии каждого лиофилизата, содержащего 4 UI hGH или 30 UEA оксидазы-урата или не содержащего никакого протеина и изменяемые содержания фосфатного буфера, определяют в зависимости от значения R и эти параметры приводятся в табл. 5. В табл. 5 показано, что лиофилизаты обладают удовлетворительными органолептическими критериями при R = 0,125 - 1,7. Эти характеристики не изменяются в зависимости от времени.

Дифракция рентгеновских лучей (X-лучей).

Результаты рентгеноструктурного анализа порошковой формы полученных лиофилизатов, содержащих смеси аланина с маннитолом в соотношениях R, изменяющихся от 0 до + ∞, представлены в табл. 5.

Полученные дифрактограммы показывают, что при R = 0 - 1 проявляются одни линии кристаллической решетки аланина, более того, отклонение от базовой линии дифрактограммы указывает на наличие аморфной фазы, образованной маннитолом. Чем выше значение R, тем более значительной становится аморфная фаза за счет маннитола. Для R > 1 маннитол также кристаллизуется.

Для R = 0 - 1 получают аморфную фазу, образованную маннитолом, и кристаллическую фазу, образованную аланином.

Дифференциальный термический анализ.

Температуры стеклоперехода лиофилизатов, содержащих 4 UI hGH или 30 UAE оксидазы-урата или не содержащих никакого протеина, и изменяемые содержания фосфатных буферов определяют в зависимости от инверсии соотношения R (см. фиг. 5). На фиг. 5 показано, что максимальная температура стеклоперехода, получаемая в случае лиофилизатов, содержащих смеси аланина с маннитолом, достигается при (I/R) > 1, т.е. при R = 0 - 1.

Температура стеклоперехода лиофилизата представляет собой максимальную температуру стабильности лиофилизата. Максимальная температура стабильности лиофилизата, следовательно, достигается для R = 0 - 1.

Дезамидированные формы.

Результаты, полученные с партиями 4 UI и 8 UI, показывают очень незначительные изменения, которые совместимы с нормами монографии по соматропину Европейской Фармакопеи. Эти результаты позволяют полагать, что этот состав достаточно стабилен при 25^oC.

В заключение, обнаружено, что каждое свойство лиофилизатов, является оптимальным для интервала значений R, который в общем виде соответствует табл. 6.

Каждый аналитический критерий /% олигомеры + полимеры, стабильность hGH, ферментативная активность оксидазы-урата спустя 1 месяц при 35^oC, мутность растворов hGH, мутность растворов оксидазы-урата, внешний вид лиофилизатов, один кристаллический аланин, максимальная температура стеклоперехода дает конкретный оптимальный интервал для каждого свойства. Для того чтобы получить приемлемый состав, определяют предпочтительный интервал R, т.е. 0,1 < R < 1.

Примеры, приведенные в конце описания, иллюстрируют изобретение, не ограничивая его объема охраны.

Формула изобретения

1. Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция, содержащая буфер, аланин и маннитол, отличающаяся тем, что массовое соотношение аланин : маннитол составляет 1:0,1-1.

2. Стабилизированная протеинсодержащая композиция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве протеина она содержит гормон, фермент или цитокин.

3. Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве протеина она содержит гормон hGH.

4. Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве протеина она содержит фермент оксидаза - урат.

5. Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция по п. 2, отличающаяся тем, что в качестве протеина она содержит цитокин интерлейкин - 13.

6. Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержит аланин в кристаллической форме, а маннитол - в аморфной.

7. Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что содержит аморфную фазу, образованную маннитолом и протеином, и кристаллическую фазу, образованную аланином.

8. Стабилизированная протеинсодержащая лиофилизированная композиция по п. 1, отличающаяся тем, что в качестве буфера она содержит фосфатный буфер.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26

PD4A - Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:Санофи-Синтелябо (FR)

Извещение опубликовано: 20.05.2006        БИ: 14/2006

---