Способ получения альбумина из плаценты человека

 

Изобретение относится к медицине, в частности к способам получения альбумина из плаценты человека. Способ получения альбумина, основанный на одноэтапном методе кислотно-тепловой денатурации балластных белков, включает предварительный этап для очистки при рН 4,0-4,2, оптимизацию всех параметров кислотно-тепловой денатурации балластных белков и изменение условий осаждения альбумина. Анализ полученных по предлагаемому способу серий альбумина выявил их электрофоретическую чистоту (не менее 97-98%), низкое содержание гемпигмента (не выше 0,1 мг/г белка). Выход альбумина составил 3,8-4,8 г из 1 кг плаценты. Технический результат: повышение степени очистки и увеличения выхода целевого продукта. 1 табл.

Изобретение относится к медицине (биотехнологии), в частности к способам получения альбумина из плаценты человека.

Известен способ получения альбумина из плаценты человека. Способ включает 7 стадий, в качестве экстрагентов используется хлороформ, ТХУ и этанол. Способ энергоемкий, трудоемкий, требует больших материальных затрат и сопряжен с потерями целевого продукта в ходе очистки.

Прототип - способ получения альбумина из плаценты. Авторами предложен одноэтапный метод очистки альбумина от балластных компонентов путем осаждения их при pH 4,5 - 4,6 после кислотно-тепловой денатурации при pH 3,0 - 3,3 в присутствии 0,2% каприлата натрия и осаждения альбумина этиловым спиртом из центрифугата при pH 4,8 - 4,9. Метод не обеспечивает достаточную очистку альбумина от балластных белков и гемпигментов, тогда как именно степень очистки является основным показателем для препарата, используемого для внутривенного введения.

Целью изобретения является повышение степени очистки альбумина и увеличение его выхода. Эта цель достигается тем, что отработаны оптимальные условия экстракции белков из плаценты и параметры очистки альбумина от балластных белков и небелковых примесей.

Сущность предполагаемого изобретения состоит в том, что экстракцию белков плаценты проводят в водоспиртовом растворе, балластные компоненты удаляют в два этапа: при pH 4,0 - 4,2 и после кислотно-тепловой денатурации балластных белков (pH 1,8 - 2,0; температуре 20 - 22^oC в течение 40 - 60 минут). Центрифугат после второго этапа очистки концентрируют ультрафильтрацией и альбумин выделяют из концентрата путем осаждения этиловым спиртом.

Существенные отличия предполагаемого изобретения от прототипа состоят в изменении условий экстракции белков из плаценты, введении предварительного этапа очистки при pH 4,0 - 4,2, изменении всех параметров кислотно -тепловой денатурации белков (pH 1,8 - 2,0, концентрация каприлата натрия 0,4 - 0,8%, длительность 40 - 60 минут) и концентрации раствора альбумина на стадии спиртового осаждения.

Пример: 75 кг измельченной плаценты заливают 140 л 6% раствора этнола. Экстракцию ведут при температуре 2 -4^oC в течение 5 часов, осадок отделяют центрифугированием. К 170 л полученного центрифугата добавляют 8 л 10%-ного раствора каприлата натрия, устанавливают pH 4,0 1 N HCl и удаляют осадок путем центрифугирования. К 160 л центрифугата приливают 32 кг 96%-ного этанола, устанавливают pH 1,8 1 N HCl и выдерживают в течение 40 минут при 20 - 22^oC. Затем устанавливают pH 4,95 и отделяют денатурированные белки центрифугированием. Центрифугат концентрируют до 0,8 - 1,2% белка путем ультрафильтрации. К 50 л концентрата добавляют 18 кг 96%-ного этанола и альбумин осаждают при pH 4,8 - 4,9. Полученный осадок растворяют в деионизированной дистиллированной воде до концентрации белка 11 ± 0,5%, прогревают 10 ч при 60^oC, подвергают стерилизующей фильтрации и розливу. Полученный белковый раствор содержит не менее 97 - 98% альбумина, цветность его не выше 0,1 мг гема/г белка. Выход альбумина составляет 3,8 - 4,8 г из 1 кг плаценты.

Формула изобретения

Способ получения альбумина из плаценты человека путем экстракции, очистки от балластных белков кислотно-тепловой денатурацией с использованием каприлата натрия и спиртового осаждения альбумина, отличающийся тем, что белки плаценты после экстракции водоспиртовым растворов подвергают очистке путем удаления балластных компонентов при 4,0 - 4,2 в присутствии 0,4 - 0,8% каприлата натрия с последующей кислотно-тепловой денатурацией балластных белков при pH 1,8 - 2,0, температуре 20 - 22^oC в течение 40 - 60 мин, ультрафильтрацией центрифугата и осаждением альбумина из концентрата.

РИСУНКИ

Рисунок 1

PD4A - Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации

(73) Новое наименование патентообладателя:Каныгина Элла Львовна

(73) Новое наименование патентообладателя:Савкина Марина Александровна

Извещение опубликовано: 10.03.2005        БИ: 07/2005