Способ стимуляции гуморального и клеточного иммунитета при холодовом воздействии

 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к моделированию стимуляции гуморального и клеточного иммунитета при холодовом стрессе. Для этого животным перед холодовым воздействием перорально вводят препарат "Эпсорин" ежедневно в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/кг. Способ позволяет предупредить иммуносупрессирующий эффект холодового воздействия на организм. 3 табл.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к моделям стимуляции гуморального и клеточного иммунного ответа при холодовом воздействии.

Существуют данные о том, что холодовое воздействие в значительной мере подавляет иммунный ответ организма, что приводит к развитию целого ряда патологических состояний, трудно поддающихся терапии [1, 2, 3].

В настоящее время стимуляцию иммунного ответа при холодовом воздействии осуществляют путем применения препарата тимуса и костного мозга - "Тимогемин", который обладает иммуномодулирующим действием при холодовом стрессе, восстанавливая показатели иммунной системы на 14-е сутки [4].

Другие известные препараты (антиоксиданты, ингибиторы синтеза простагландина, гормоны) повышают устойчивость организма к холоду за счет усиления теплопродукции, активации терморегуляторных функций, уменьшения катаболических процессов [5, 6, 7, 8].

В последние годы все большее применение находят препараты природного происхождения, обладающие общим тонизирующими, антистрессорными, биостимулирующими свойствами. К числу последних относится препарат из пантов северного оленя "Эпсорин".

Заявителям не известны работы о действии Эпсорина на функциональную активность клеток иммунной системы при холодовом воздействии.

Задачей изобретения является снижение иммуносупрессивного действия холодового стресса.

Поставленная задача достигается за счет введения в организм животного перорально до холодового воздействия препарата "Эпсорин" ежедневно в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/кг.

Авторами впервые показано, что введение "Эпсорина" до холодового воздействия позволяет предупреждать иммуносупрессивный эффект гипотермии на организм экспериментальных животных.

Иммуностимулирующие свойства препарата изучались на мышах (CBAxC57Bl/6)F1, возрастом 2 - 3 месяца, обоего пола, по способности влиять на: 1) гуморальный иммунный ответ; 2) клеточный иммунный ответ; 3) процесс фагоцитоза.

1. Влияние препарата "Эпсорин" на первичный гуморальный ответ оценивали общепринятым методом Cunningham [9] по способности антителообразующих клеток (АОК) селезенки продуцировать IgM антитела к эритроцитам барана (ЭБ).

Опытной группе вводили перрорально ежедневно в течение 5-ти дней препарат "Эпсорин" в дозе 0,5 мл/кг, содержащейся в 0,2 мл разведенного дистиллированной водой "Эпсорина".

Контрольной группе животных вводили перорально спиртовый раствор в той же концентрации, которая была при разведении спиртового раствора "Эпсорина", по той же схеме.

После чего животных помещали в холодильную камеру на 3 часа при температуре 7 - 8^oC.

Пример конкретного использования Мыши линии (CBAC57Bl/6)F1 (самки, 3 мес.).

Число АОК/10 кл селезенки у опытной мыши составило 6894, у контрольной мыши - 3831.

При изучении гуморального иммунного ответа использовано 74 мыши в 7-ми опытах.

Результаты исследования представлены в табл. 1.

Как видно из табл. 1, число АОК в опытной группе по сравнению с контрольной группой выше 2,1 раза, что свидетельствует о стимулирующем влиянии "Эпсорина" на развитие гуморального иммунного ответа при холодовом воздействии.

2. Способность препарата "Эпсорин" стимулировать клеточный иммунный ответ в условиях холодового воздействия оценивали по степени выраженности реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), которую оценивали по величине отека лапы после введения разрешающей дозы антигена сенсибилизированным (этим же антигеном - эритроциты барана) мышам. Животным до сенсибилизации вводили перорально "Эпсорин" ежедневно в течение 5-ти дней в дозе 0,5 мл/кг, затем подвергали холодовому воздействию в холодильной камере при T = 7 - 8^oC в течение 3-ч часов. Оценивали эффект препарата в период развития индуктивной фазы ГЗТ.

Для сенсибилизации мышам вводили внутрибрюшинно 0,5% суспензию ЭБ в дозе 0,5 мл. Через 96 часов этим мышам под апоневроз правой задней лапы вводили разрешающую дозу 50% суспензии ЭБ в дозе 0,05 мл, а в противоположную (контрольную) лапу - 0,05 мл физ. р-ра.

Через 24 часа производили учет реакции по отечности стопы.

Пример конкретного воздействия Мыши линии (CBAxC57Bl/6)F1 (самки, 3 мес.) Величина разницы отека между правой и левой лапами составила 0,6 мм, а у контрольной мыши 0,4 мм.

При изучении клеточного иммунного ответа использовано 60 мышей в 3-х экспериментах. Результаты представлены в табл. 2.

Как видно из табл. 2, величина отека лапы у мышей, получавших "Эпсорин", достоверно выше, чем в контрольной группе на 6,6%. Эти данные свидетельствуют о стимулирующем влиянии препарата "Эпсорин" на клеточный иммунный ответ после холодового воздействия.

3. Способность "Эпсорина" стимулировать фагоцитарную активность макрофагов (ФАМ) оценивали следующим образом.

После ежедневного перорального введения (в течение 5 дней) в дозе 0,5 мл/кг "Эпсорина", содержащейся в 0,2 мл разведенного дистиллированной водой препарата, животным внутрибрюшинно вводили 3%-ный раствор крахмала для привлечения в брюшную полость макрофагов. Спустя 96 часов животных подвергали холодовому воздействию в холодильной камере (3 часа при t = 7 = 8^oC), после чего вводили внутрибрюшинно антиген ЭБ (2% в дозе 0,5 мл) и выделяли клетки перитонеального экссудата согласно методу Rummage A. [10].

Результаты оценивали по величине абсорбции при длине волны 405 нм с использованием прибора Titrek Multiskan.

Пример конкретного исполнения Мыши линии (CBAxC57Bl/6)F1 (самцы, 3 месяца) Величина абсорбции у опытной мыши составила 1001, у контрольной мыши 509.

При изучении функциональной активности макрофагов было использовано 60 мышей в 5-ти опытах.

Как видно из табл. 3, величина абсорбции у мышей, получавших Эпсорин, достоверно выше, чем в контрольной группе в 1,76 раза, что свидетельствует о стимулирующем влиянии Эпсорина на фагоцитирующую активность макрофагов при холодовом воздействии.

Таким образом, предложенный нами способ позволяет предупреждать иммуносупрессивный эффект холодового воздействия на функциональную активность T, B-лимфоцитов и макрофагов. Это позволяет рекомендовать применение способа для предупреждения развития патологических осложнений, связанных со снижением функциональной активности клеток иммунной системы при холодовом стрессе у человека (острые и хронические инфекционно-воспалительные заболевания, аутоиммунная патология, развития анемий).

Эосорин является официнальным лечебным препаратом.

Литература 1. Jansky L., Janakova M., Honzova S., Sonek P. Immune response in cold exposed and cold adapted men.//Physiol.Res.-1993, v.42, n.4, р.16.

2. Матюшин И.Ф., Королев А.В., Ефимов М.Д., Овсянников В.Я., Петрова Т. Д. , Радькова О.А. Иммунологическая реактивность и морфологические изменения в лимфоидных и гемопоэтических органах и тканях под влиянием гипотермии в клинике и эксперименте.//В кн.: Гипотермия в клинике и эксперименте. Горький. 1979.

3. Баева Е. В. Влияние кратковременных холодовых воздействий в раннем постнатальном онтогенезе на клеточный иммунитет половозрелых крыс. //Иммунология. 1990, N 3, с.3-7.

4. Лущицкий М.А., Попов С.Д., Воропонов И.М., Хавинсон В.К., Морозов В. Г. Влияние полипептидов тимуса и костного мозга на заживление ран мягких тканей после глубокого переохлаждения.//Бюлл.экспер.биол.мед., 1988, n.2, с. 252.

5. Шорин Ю. Н. , Селятицкая В.Г., Колосова Н.Г., Куликов В.Ю. Влияние α-токоферола на реакцию надпочечников при холодовом сирессе.//Бюлл.экспер. биол.мед., 1985, n.6, с.669.

6. Исмафилова В.Т. О повышении термоустойчивости животных к охлаждению и перегреванию с помощью гормональных и фармакологических препаратов. //Автореферат канд.дисс., Ашхабад, 1986.

7. Кириченко Е.Ф. Влияние производного пиримидина ТБ-52 на уровень кортикостерона в сыворотке крови адаптирующихся к холоду крыс.//Труды Благовещенского мединститута. Т.2, 1992, с.109.

8. Плотников Н. Ю. Влияние ингибиторов биосинтеза простагландинов на устойчивость мышей к охлаждению.//Бюлл.экспер.биол.мед. 1984, n.5, с.540.

9. Cunningham A. Studies on the cellular basis of the IgM immunological memory.//J.Immunol. 1969, v.16, n.5, p.621.

10. Rummage A., Leu W. Photometric microassay for quantitation of macrophage Fc and C3b receptor function.//J.Immunol. Meth. 1985, v.77, p.155.

Формула изобретения

Способ стимуляции гуморального и клеточного иммунитета при холодовом стрессе, отличающийся тем, что животному перед холодовым воздействием вводят перорально препарат "Эпсорин" ежедневно в течение 5 дней в дозе 0,5 мл/кг.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3