Штамм бактерий pseudomonas aeruginosa 4992, используемый для изготовления вакцины против псевдомоноза пушных зверей

 

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии и предназначено для производства вакцинных препаратов против синегнойной инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 4992 депонирован в коллекции штаммов - возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А. Афанасьева и имеет регистрационный номер 4992. Штамм относится к 02/05 сероварианту. Штамм культивируют на бульоне Мартена или синтетической среде при 32°С в течение 18-20 ч при постоянном встряхивании. После контроля выросшей культуры на токсигенность и протеолитическую активность отделенную бакмассу подвергают инактивации. Далее добавляют адъювант - гидроокись алюминия и расфасовывают. Изобретение позволяет предотвратить скрытые потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, не благополучных по синегнойной инфекции независимо от серологического профиля возбудителя.

Изобретение относится к области биотехнологии и ветеринарии и предназначено для производства вакцинных препаратов против синегнойной инфекции пушных зверей, преимущественно песцов и лисиц.

Синегнойная инфекция распространена повсеместно, наносит значительный экономический ущерб звероводству и представляет опасность здоровью людей. В зверосовхозах ежегодно регистрируются энзоотипии среди норок, песцов и лисиц. Зарегистрированы случаи болезни у кроликов, нутрий, хорей. В последние годы стали отмечать синегнойную инфекцию у собак домашнего содержания.

Патология при синегнойной инфекции как у людей, так у животных очень разнообразна - поражение репродуктивной системы, септические процессы в организме, поражение желудочно-кишечного тракта у молодых животных, поражение молочных желез и т.д. У лисиц и песцов она протекает с поражениями гениталий и сопровождается нарушением процесса беременности - абортами, рассасыванием эмбрионов, пропустованием самок.

Возбудитель псевдомоноза обладает серотиповой вариабельностью, поэтому эффективность специфической профилактики определяется полнотой антигенного состава входящих в вакцину компонентов.

Известен вакцинный штамм Pseudomonas aeruginosa PA-7 второго серотипа, используемый для изготовления анатоксин-вакцины против синегнойной инфекции (SU N 1202109, опубл. 15.06.86).

Однако известный штамм не содержит антигены возбудителя псевдомоноза пушных зверей и не обеспечивает формирование иммунитета против синегнойной инфекции пушных зверей.

Наиболее близким аналогом является штамм Pseudomonas aeruginosa N 202 шестого серотипа, входящий в состав инактивированной вакцины против псевдомоноза пушных зверей, преимущественно норок ("Ветеринарные препараты". Справочник, под ред. Д.Ф.Осидзе. М.: Колос, 1981).

Однако известный производственный штамм имеет нестабильные вирулентные и иммуногенные свойства и, более того, не позволяет профилактировать псевдомоноз песцов и лисиц, вызываемый возбудителями других серовариантов.

Задачей изобретения является получение штамма Pseudomonas aeruginosa для изготовления эффективной вакцины против псевдомоноза пушных зверей независимо от серологического профиля возбудителя.

Технический результат изобретения заключается в получении нового штамма Pseudomonas aeruginosa 4992, способного продуцировать основные факторы патогенности в оптимальных значениях и позволяющий изготовить вакцину против любых серовариантов синегнойной палочки не только для песцов и лисиц, но и других восприимчивых к данной инфекции зверей и животных.

Сущность изобретения: штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 4992 выделен от щенка песца З/с "Гурьевский" и депонирован в коллекции штаммов - возбудителей заболеваний пушных зверей музея бактериальных и вирусных культур Научно-исследовательского института пушного звероводства и кролиководства (НИИПЗК) им. В.А.Афанасьева и имеет регистрационный номер 4992.

Штамм Ps. aeruginosa 4992 предназначен в качестве продуцента протеолитических ферментов (щелочной протеазы и эластазы) при изготовлении специфического иммунного препарата против синегнойной инфекции песцов и лисиц.

Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa НИИПЗК N 4992 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Генетические маркеры: Серовариант 02/05 (Habs) Пиоцинотип 682668 Штамм 4992 протеолитический, с адгезивной активностью в отношении эритроцитов кролика.

Морфологические свойства. Производственная культура представляет собой тонкие прямые грамотрицательные палочки, размером 2-3 х 0,5 микрона. Палочки подвижные, монотрихи, спор не образуют, в мазках располагаются поодиночке и рядами.

Культуральные свойства. Аэроб, оптимальная температура роста при 32-37oC, сохраняет способность к росту и размножению при 42oC. Растет почти на всех питательных средах с pH 8,0. На поверхности МПБ образует характерную серовато-серебристую пленку. Образует пигмент пиоцианин. Лучшей средой культивирования является среда Iensen'a, обогащенная солями и аминопептидом. На МПА образует S- и R-формы, с преобладанием S-форм.

Биохимическая активность. Высокая кислотообразующая активность в отношении глюкозы и галактозы; в аэробных условиях расщепляет сахара с образованием глюконовой кислоты без газа, разжижает желатин, свертывает молоко, не вызывает образования индола и сероводорода. Образует цитохромоксидазу, вызывает гидролиз ацетамида.

Вирулентные свойства. При внутрибрюшинном введении белым мышам LD/50 составляет 1,28107 KOE/мл.

Антигенные свойства. Штамм вырабатывает щелочную протеазу, эластазу, обладает адгезивной активностью.

Токсигенные свойства. В жидкой питательной среде вырабатывает щелочную протеазу (показатель гидролиза казеина 320), эластазу (РП 1:32). Титр адгезина в РГА 1:32.

Хранение штамма. При температуре 62oC в ампулах в лиофилизированном состоянии более трех лет; в пробирках в столбике полужидкого агара, приготовленного на бульоне Мартена с добавлением 0,5%-ного глютамата натрия и 1%-ного глицерина, под вазелиновым маслом в течение трех месяцев; в пробирках на скошенном агаре не более 14 дней.

Контроль за состоянием штамма. Контролируют морфологические, биохимические, культуральные и вирулентные свойства не реже 1 раза в три месяца. Антигенные свойства (протеазу и эластазу) проверяют перед производством иммунного препарата. Штамм предварительно культивируют в среде Iensen'a.

Показатель гидролиза казеина щелочной протеазой в реакции диффузии в казеиновый агар должен быть не менее 320, а титр эластазы в реакции супернатанта с моновалентной антиэластазной сывороткой в 1%-ном агаре Пурифайта должен быть не менее 1:32.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 4992 культивируют на бульоне Мартена или синтетической среде при 32oC в течение 18-20 часов при постоянном встряхивании на шуттель-аппарате. По истечении срока инкубации культуру проверяют на чистоту роста в мазках, окрашенных по Грамму.

Далее из выросшей культуры отбирают пробу, центрифугируют ее при 6000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливают и исследуют на содержание: экзотоксина А в реакции преципитации (РП) с антитоксической сывороткой и/или на щелочную протеазу в реакции гидролиза казеина и/или на эластазу в РП с моновалентной антиэластазной сывороткой. Титры должны составлять: экзотоксина А - не ниже 1:4, щелочной протеазы - не ниже 1:32, эластазы - не ниже 1:16.

После контроля выросшей культуры на токсигенность и протеолитическую активность отделенную бакмассу подвергают инактивации любым известным способом и добавляют адъювант, например гидроокись алюминия.

Пример 2. Полученную по примеру 1 вакцину проверяют на безвредность на 9 песцах. Вакцину вводят внутримышечно в область бедра правой лапы в дозах: трем песцам по 1,0 мл, трем - по 2,0 мл и трем - по 3,0 мл.

Проводят ежедневное наблюдение за песцами в течение 7 дней с индивидуальным прощупыванием места инъекции. Термометрию песцов проводят дважды на 2-ой и 4-ый дни после введения препарата.

Результаты исследования показали, что все песцы вели себя обычно, корм поедали полностью, агрессивность не наблюдалась. Температура тела была в пределах нормы - 37-39oC. При прощупывании места инъекции вакцины не было обнаружено опухания конечности, болезненности.

Пример 3. Полученной вакциной иммунизируют песцов на ферме, не благополучной по синегнойной инфекции, для исследования влияния иммунизации на результаты воспроизводства, поскольку основная патология при синегнойной инфекции проявляется именно в период воспроизводства.

В данном хозяйстве среди песцов отмечаются случаи абортов, пропустования самок, рождение мертвых щенков. При этом у абортированных самок на последних сроках беременности (за неделю до срока щенности) при бактериологическом исследовании была выделена культура синегнойной палочки 03 и 09 сероваров.

Полученной по примеру 1 вакциной иммунизируют 50 самок песцов внутримышечно в дозе 1,5 мл. В качестве контроля служат другие 50 самок, аналогичные по возрасту, окрасу и условиям содержания и кормления.

Установлено, что применение вакцины повысило плодовитость песцов опытной группы на 0,7 щенка. Вакцина предотвратила рассасывание плодов у некоторых самок опытной группы, в то время как у некоторых самок контрольной группы был зарегистрирован приплод всего в 4-5 щенков. Это чаще всего обусловлено рассасыванием плодов в первой половине беременности.

Таким образом, вакцина на основе штамма 4992 позволит предотвратить скрытые потери при воспроизводстве пушных зверей в хозяйствах, не благополучных по синегнойной инфекции.

Формула изобретения

Штамм бактерий Pseudomonas aeruginosa 4992, используемый для изготовления вакцины против псевдомоноза пушных зверей.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового штамма бактерий Leuconostoc mesenteroides - как продуцирующего декстран, так и не продуцирующего его в зависимости от условий культивирования

Изобретение относится к области бродильной промышленности, конкретно к использованию нового штамма дрожжей при получении спирта и других продуктов этой отрасли

Изобретение относится к производству микробиологических средств, стимулирующих рост растений, в частности люпина
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к микробиологическому способу очистки от загрязнений (нагаров, лаков отложений и других) авиационных и других деталей техники в процессе их эксплуатации
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к микробиологическому способу очистки от загрязнений (нагаров, лаков отложений и других) авиационных и других деталей техники в процессе их эксплуатации
Изобретение относится к микробиологии и касается способа получения селенсодержащей спирулины с содержанием органического (биодоступного) селена 6,15-6,5 г/кг
Изобретение относится к области микробиологии, в частности к получению атипичных микобактерий

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии, микробиологии и биотехнологии, в частности, к производству вакцины для специфической профилактики смешанных инфекционных диарей новорожденных телят, основными этиологическими агентами которых признаны рота-, корона-, герпесвирусы и энтеропатогенные штаммы E

Изобретение относится к биотехнологии и касается получения нового штамма бактерий Leuconostoc mesenteroides - как продуцирующего декстран, так и не продуцирующего его в зависимости от условий культивирования

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству бактерийных препаратов, и может быть использовано для профилактики и лечения заболеваний животных и птиц, а также производства гнотобиологических организмов (SPF- животных и птиц)
Изобретение относится к области медицины
Изобретение относится к области микробиологии, в частности к получению атипичных микобактерий

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии и иммунологии и касается выделения, идентификации и селекции штамма Moraxella bovis "Г97-ВНИВИ" - основного возбудителя инфекционного кератоконъюнктивита крупного рогатого скота (ИКК), впервые установленного в РФ и странах СНГ, который может быть использован для изготовления диагностикумов и вакцин против данной болезни

Изобретение относится к области клинической микробиологии и может быть использовано при бактериологическом исследовании мочи
Изобретение относится к промышленной микробиологии
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и иммунологии, в частности к способам специфической профилактики мыта лошадей
Наверх