Способ разделения фосфолипидов

 

Описывается способ разделения фосфолипидов, которые могут применяться в качестве сырья для медицинских и фармакологических целей. Способ разделения фосфолипидов заключается в том, что разделение проводят пропусканием спиртового раствора смеси фосфолипидов через неионогенный сорбент МХДЭ-100, который предварительно подвергают модификации путем насыщения его этиловым спиртом, взятым в количестве 10 мл на 1 г сорбента, в течение 20 - 24 ч, элюируют сорбированный продукт этиловым спиртом и разделяют фосфолипиды хроматографическим методом. Технический результат - создание простого и экологически безопасного метода разделения фосфолипидов.

Изобретение относится к усовершенствованию способов очистки и производства фосфолипидов, широко применяемых в промышленных технологиях, медицине, косметологии.

Известны способы производства фосфолипидов химическим или ферментативным синтезом (М. Кейтс. Техника липидологии. Мир; Москва, 1991; А.Е.Степанов, Ю. М.Краснопольский, В.И. Швец. Физиологически активные липиды. -Наука, Москва, 1991).

Известен способ обогащения фосфолипидной смеси путем переосаждения отдельных ее компонентов в виде солей (И.А. Василенко, Ю.М. Краснопольский, А.Е. Степанов, В.И. Швец. Проблемы и перспективы производства фосфолипидов. Хим. -фарм. Журнал. 1988. -N 5, -с. 9-15), а также в виде комплексов с ионами кадмия. Использование таких технологий связано с проблемами очистки сточных вод.

Наиболее близким по совокупности признаков является способ разделения нуклеиновых и аминокислот (Патент РФ N 2129614 C1. 27.04.1999. МПК C 12 P 21/06), при котором их водные растворы приводят в контакт с сорбентом МХДЭ-100. Однако этот способ не применим для выделения фосфолипидов из смеси из-за плохой растворимости их в воде.

Задачей предлагаемого способа является получение и разделение фосфолипидов более простым и экологически безопасным методом.

Поставленная задача решается тем, что сорбент МХДЭ-100 подвергают модификации путем насыщения его этиловым спиртом при Т:Ж=1:10 в течение 20-24 часов, пропускают через такой сорбент спиртовой раствор фосфолипидов, элюируют сорбированный продукт этиловым спиртом и разделяют хроматографическим методом. Исходный фосфолипидный комплекс содержал в %: фосфатидовые кислоты - 26,39; фосфатидилхолин - 25,00; фосфатидилинозитол - 8,33; фосфатидилэтаноламин - 2,78; остальные фосфолипиды - 37,50.

Растворы фосфолипидов были приготовлены на этиловом спирте. После насыщения колонки 10 объемами раствора фосфолипидов было произведено их разделение. Элюирование сорбированных фосфолипидов проводили этиловым спиртом.

Измеряли оптическую плотность полученных растворов на спектрофотометре СФ-26 в интервале длин волн 205-340 нм. Отсутствие характерных максимумов при спектрофотометрическом контроле на выходе из колонки свидетельствовало о поглощении фосфолипидов. Разделение фосфолипидов осуществляли путем пропускания раствора этилового спирта со скоростью 0,5 мл/мин.

Контроль осуществляли во фракциях после контакта с сорбентом (спектрофотометрический, ВЭТХ со специфическими проявителями).

Стиросорб МХДЭ-100 представляет собой тип полистирольных сеток, по своей химической природе близкий к сополимерам стирола и дивинилбензола, но обладающий принципиально другой структурой, и называется сверхсшитым (Даванков В. А. , Рогожин С.В., Цюрупа М.П. /Журн. Физ. Химии. -1973, т. 48, N 12, -с. 2964-2967). Такие полимеры получают не традиционными методами сополимеризации мономеров, а сшиванием цепей полистирола, находящихся в растворе или в набухшем состоянии, бифункциональными соединениями, образующими в конечной сетке мостики жесткой структуры (М.П.Цюрупа. Сверхсшитый полистирол - новый вид полимерных сеток. Автореф. Дис. ...докт. Хим. наук. М., 1985. -48 с.) В качестве сшивающих агентов используют 4,4-бисхлорметилдифенил (ХМД), ксилендихлорид (КДХ) или монохлордиметиловый эфир (МХДЭ). Между полимерными цепями образуются мостики следующей структуры: При содержании сшивающих мостиков более 40% сетки получают название "сверхсшитые" полимеры. Сверхсшитые сорбенты отличаются высокими кинетическими характеристиками и легкостью регенерации и могут быть использованы для разделения биологических растворов на компоненты (М.П.Цюрупа, В.А.Даванков, В.Ф.Селеменев и др. //Прикладная биохимия и микробиология. -1985. -Т. 21. -N 1. -С. 7225-7274).

Пример. Навеску сорбента МХДЭ-100 массой 25 г обрабатывали 250 мл этилового спирта в течение 24 часов для набухания и модификации. Подготовленный сорбент загружали в колонку диаметром 50 мм и высотой 140 мм. Размер гранул подготовленного сорбента 0,5-1 мм. Через колонку пропускали 500 мл спиртового раствора фосфолипидов концентрацией 0,72 г/л со скоростью 0,5 мл/мин. На выходе из колонки собирали фракции по 50 мл.

Количество выделенных фосфолипидов составило в %: фосфатидовые кислоты - 26,61; фосфатидилхолин - 24,22; фосфатидилинозитол - 7,55; фосфатидилэтаноламин - 2,00. Остальные фосфолипиды выделены непосредственно из фильтрата, полученного после пропускания фосфолипидного комплекса через сорбент. Потери фосфолипидов при их разделении составили не более 5%.

Формула изобретения

Способ разделения фосфолипидов, отличающийся тем, что разделение проводят пропусканием спиртового раствора смеси фосфолипидов через неионогенный сорбент МХДЭ-100, который предварительно подвергают модификации путем насыщения его этиловым спиртом, взятым в количестве 10 мл на 1 г сорбента, в течении 20 - 24 ч, элюируют сорбированный продукт этиловым спиртом и разделяют фосфолипиды хроматографическим методом.