Индивидуальные вещества, полученные на основе химического взаимодействия дисульфидсодержащих пептидов с производными пуриновых или пиримидиновых оснований, фармацевтические композиции и препараты на их основе, способы их применения для лечения инфекционных заболеваний и профилактики осложнений

Авторы патента:

Кожемякин Л.А.

Кожемякин А.Л.

A61P33 - Антипаразитические средства

A61P31 - Противоинфекционные средства, т.е. антибиотики, антисептики, химиотерапевтические средства

A61K38/08 - пептиды, содержащие 5-11 аминокислот

A61K31/7052 - Лекарственные препараты, содержащие органические активные ингредиенты

A61K31/52 - пурины, например аденин

A61K31/505 - пиримидины; гидрированные пиримидины, например триметоприм

Изобретение относится к медицине, а именно к созданию новых лекарственных средств на основе активных метаболитов пептидной и нуклеозидно-нуклеотидной природы. Сущность изобретения: предлагаются новые соединения, полученные на основе химического взаимодействия окисленного глутатиона (GSSG) с производными пуриновых или пиримидиновых оснований; фармацевтические композиции и препараты на их основе, обладающие противовирусным, противобактериальным, иммуномодулирующим и гепатопротекторным действием; способы лечения и профилактики инфекционных заболеваний. Технический результат: создание новых лекарственных средств и разработка способов их применения для лечения и профилактики инфекционных заболеваний различной этиологии. 13 с. и 76 з. п. ф-лы, 42 ил. , 60 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к противоинфекционной фармакологии, а именно к созданию новых лекарственных средств на основе активных метаболитов пептидной и нуклеозидно-нуклеотидной природы, предназначенных для лечения и профилактики инфекционных заболеваний, прежде всего, вирусных гепатитов В и С, а также СПИДа и герпеса; а также вызванных грамположительными и грамотрицательными бактериями, кроме того, простейшими и грибами, в частности, для лечения туберкулеза, малярии, кишечных инфекций, хламидиозных и микоплазменных инфекций.

Инфекции, вызванные вирусами гепатита В (HBV) и гепатита С (HCV) по распространенности существенно превосходят ВИЧ-инфекцию. Темпы инфицирования HBV и, особенно, HCV с каждым годом растут. В некоторых регионах мира гепатитом С поражено более 10% взрослого населения. При этом HCV обладает наиболее высоким хрониогенным потенциалом, являясь основной причиной формирования всего спектра тяжелых хронических заболеваний печени. В частности, доля хронических гепатитов, индуцируемых гепатитом С, составляет более 70%, при этом доля циррозов печени равняется 40%, а случаев гепатоцеллюлярной карциномы - 60% [1] . Основополагающими механизмами хронизации вирусных гепатитов, особенно гепатита С, являются механизмы "ускользания вируса" из-под иммунного надзора, а также в связи с существованием множественных одновременно присутствующих вариантов вируса с измененным, но близкородственным геномом - квазиразновидностей ("quasisspecies"). Исследования последних лет свидетельствуют о присутствии в клетках печени вирусспецифических Т-лимфоцитов, что подтверждает иммуноопосредованный патогенез гепатита С [2] . Более того, установлена зависимость активности морфологических изменений в печени (индекс Кноделя) от уровня внутрипеченочных СД4+ клеток [3] . Исключительное значение представляет Т-клеточный ответ, в первую очередь ответ СД4+, СД8+ и СД16/56+ на NS3 белок HCV, характеризуемый как высокосущественный для спонтанного разрешения гепатита С, а также для положительных результатов противовирусной терапии [4, 5] .

В свою очередь, известно, что характер иммунного ответа зависит от доминирующего участия клонов СД4+ Т-лимфоцитов - хелперов 1 типа (Тh1) и хелперов 2 типа (Th2), которые различаются по продуцируемым ими цитокинам и в активации иммунного ответа по клеточному или гуморальному типу. Активация Th1, продуцирующих интерферон гамма (IFN-

), интерлейкин 2 (IL-2), фактор некроза опухоли альфа и бета (TNF-

), ведет к стимуляции функции Т-лимфоцитов и резидентных макрофагов, т. е. к развитию иммунного ответа по клеточному типу, играющему решающую роль в защите от вирусов. Активация Th2, которые секретируют IL-4, IL-5, IL-6, IL-9, IL-10 и IL-13, запускает гуморальное звено иммунитета. Отсюда, нарушение баланса продукции цитокинов Th1/Th2 клетками играет решающую роль в иммунопатогенезе HBV, HCV и HIV инфекций, а преимущественное участие цитокинов Th2 типа ассоциируется с вирусной персистенцией и хронизацией процесса. Наоборот - активация продукции Th1-зависимых цитокинов способствует спонтанному выздоровлению при острых вирусных инфекциях и эффективности терапии, направленной на элиминацию вирусов из организма и восстановлению функциональной дееспособности пораженных органов [6, 7, 8, 9] .

В этом плане столь же важна функция плейотропного цитокина IL-12, который является одной из ключевых "фигур" в регуляции иммунного ответа макроорганизма. Регулируя баланс Th1/Th2, IL-12 модулирует функцию макрофагов, особенно резидентных макрофагов (клетки Купфера) печени. При хроническом гепатите С, как и при хроническом гепатите В, IL-12 активирует секрецию цитокинов клетками Th1, угнетая соответствующую функцию Th2. Хронизация и неблагоприятное течение вирусных гепатитов сопровождается снижением уровня IL-12 [10] . Таким образом, можно утверждать, что определяющий течение и исход HBV и HCV инфекции и их успешную терапию - Т-клеточный иммунитет страдает функциональной слабостью, в первую очередь, на наш взгляд, в плане эндогенной продукции адекватной и состоятельной "команды" цитокинов в ответ на антигенный фактор. Именно цитокины в условиях постоянного "состязания" на скорость между образованием новых "quasisspecies" и иммунной реакцией организма определяют способность модулировать качество и направленность ответа системы иммунитета. Отсюда методы терапии вирусных гепатитов, а также СПИДа должны предполагать использование иммунореабилитирующих средств, одновременно являющихся противовирусными препаратами, способных не только тонко регулировать эндогенную продукцию цитокинов (в том числе воспроизводить их эффекты в условиях блокирования хелперной и цитотоксической активности), - но также избирательно ингибирующих репликативную активность вирусов.

Все противовирусные химиопрепараты, применяемые для лечения вирусных гепатитов, относятся к 3 основным группам: 1 - ингибиторы обратной транскриптазы, включая аналоги нуклеозидов, аналоги нуклеотидов и ненуклеозидные аналоги; 2 - ингибиторы протеаз; 3 - аналоги пирофосфата. Как показано в научной литературе, при гепатитах В (ГВ) из препаратов группы аналогов нуклеозидов, наибольшей эффективностью обладает ламивудин, азидотимидин, фамцикловир [11, 12] ; при гепатитах С (ГС) в качестве широко распространенных терапевтических средств используются: рибавирин (ребетол), азидотимидин [11, 13] .

В качестве аналогов по применению, с учетом приведенных данных о природе известных противовирусных средств и принципиальной структурной формуле названных веществ, а также для оценки их сравнительной эффективности с предлагаемыми в данном изобретении новыми препаратами были выбраны противовирусные препараты 1 группы, а именно ламивудин, рибавирин и азидотимидин.

В ряде исследований [14, 15, 16] нуклеозидный аналог ламивудин назван многообещающим препаратом при лечении хронического гепатита В. В то же время обращает на себя внимание тот факт, что лишь к 52 недели лечения ламивудином у пациентов определяется отсутствие HbsAg, устойчивое подавление ДНК HBV и устойчивая нормализация уровня аланин-аминотрансферазы.

Несмотря на отсутствие данных по длительному наблюдению за пациентами, получающими ламивудин, известны многочисленные побочные эффекты ламивудина, в том числе: со стороны желудочно-кишечного тракта (рвота, тошнота, диаррейный синдром); гепато- и нефротоксичность; со стороны системы кроветворения (нейтропения, тромбоцитопения и анемия); имеют место неблагоприятные дерматологические реакции (кожная сыпь, алопеция).

Анализ литературных данных по эффективности терапии хронического гепатита С рибавирином позволяет сделать следующий основной вывод: применение рибавирина в монорежиме не обеспечивает удовлетворительного терапевтического эффекта; в то же время комбинация высоких доз интерферона и рибавирина, применяемых в течение длительных сроков - не менее 12 месяцев, является оптимальной терапией, обеспечивающей высокий процент устойчивого ответа на лечение [17] .

Рибавирин также не лишен серьезных побочных эффектов, в частности таких как: бронхоспазм, отек легких, артериальная гипотензия, анемия, кожная сыпь, астения. Однако главным недостатком рибавирина является крайне низкая противовирусная активность и отсутствие гепатопротекторных эффектов, что принципиально важно для содержания методологии лечения вирусных гепатитов.

Препараты группы AZT в недавнем прошлом были основными препаратами при лечении СПИДа и герпетических инфекций [18] . Их широкое применение сдерживалось быстрым развитием (после 2-3 курсов лечения) очень тяжелых осложнений в форме гемо- и иммуносупрессий, аллергических дерматозов и кандидозов слизистых, что исключало применение AZT.

Подводя итог предшествующему уровню техники, следует подчеркнуть, что на сегодняшний день основным методом терапии гепатитов В и С являются рекомбинантные интерфероны и аналоги нуклеозидов. Принятая программа комбинированной терапии (3 млн ME интерферона 3 раза в неделю в течение 6 месяцев и рибавирин), до последнего времени считающаяся "золотым стандартом", вчера обеспечивала ремиссию заболевания у более чем 30% пациентов, сегодня - у 12-15% пациентов. Подобная негативная динамика терапевтической эффективности традиционной противовирусной комбинации обусловлена, наряду с другими механизмами, тем, что интерфероны - высокомолекулярные (крупногабаритные) белковые вещества, вызывающие образование антител. Отсюда, чем масштабнее и длительнее подобная терапия в рамках человеческой популяции (учитывая темпы галопирующей эпидемии вирусных гепатитов), тем ниже с каждым годом ее эффективность и выше уровень осложнений в форме иммуноаутоагрессий.

При лечении вирусных гепатитов, наряду с указанными препаратами прямого противовирусного действия, используются препараты, обладающие гепатопротекторными эффектами. Одним из таких препаратов является гептрал (S-аденозилметионин). Данный препарат рассматривается в качестве аналога заявляемого препарата в плане гепатопротекторных свойств.

В этой связи, переходя к концептуальной модели предлагаемого изобретения, считаем возможным постулировать перспективность и приоритетность применения низкомолекулярных соединений, структурно-функциональных аналогов ключевых клеточных регуляторных факторов (активных метаболитов), обладающих противовирусными, одновременно иммуномодулирующими, а также гепато- и гемопротекторными эффектами.

В настоящем изобретении используется следующая, принятая в этой области, терминология.

Понятие "метаболизм" подразумевает совокупность всех биохимических реакций, происходящих в клетках живых организмов [19] . "Активные метаболиты", в свою очередь, - это отдельные биохимические соединения, часто короткоцепочечные пептиды (от 2-х до 9 аминокислот), динамика содержания которых в клетках определяет направленность и активность тех или иных метаболических процессов.

Понятие "апоптоз" подразумевает морфологически распознаваемую форму генетически программированной клеточной смерти [20, 21, 22] . Механизмами апоптоза стареющие клетки удаляются из организма; механизмами апоптоза индуцируется гибель клеток во время эмбриогенеза, а также гибель "отработавших" активированных иммунных клеток. В классическом определении, таким образом, апоптоз определяется как физиологическое самоубийство клеток.

Понятие цитокины, в том числе интерлейкины (IL); интерфероны (IFN); факторы некроза опухолей (TNF) и другие, подразумевает регуляторные вещества белковой природы, продуцируемые, как правило, иммунокомпетентными клетками и играющими ключевую роль в развитии иммунного ответа, гематопоэзе, процессов апоптоза. Отсюда, динамика и содержание эндогенной продукции цитокинов в значительной степени определяет характер и особенности течения патогенеза различных, в том числе инфекционных заболеваний [20, 23] .

Иммунокомпетентные клетки, обозначаемые, как: СД3+; СД4+; СД8+; СД16/56+ (NK-клетки) - это различные типы (дифференцировочные маркеры) Т-лимфоцитов, выполняющих присущие для данного конкретного типа клеток свои функции, формирующие иммунный ответ организма на действие антигенов или других патогенных элементов.

Индекс гистологической активности Кноделя (ИГА), предложенный R. G. Knodell et al. (1981), определяет характер и степень воспалительно-некротических поражений печеночных клеток (гепатоцитов), а также характер морфологических изменений печеночной ткани. Индекс Кноделя используется для определения степени активности поражения печеночной ткани в условных единицах - баллах - при различных видах гепатитов, в том числе вирусных гепатитов В и С. При этом оценка в диапазоне 1-3 балла характерна для минимальной активности; 4-8 - для слабовыраженной; 9-12 - для умеренной и 13-18 - для выраженной, обычно наблюдаемой в случае цирротических изменений в печени.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) определяет наличие (+) или отсутствие (-) репликативной активности ДНК-овых или РНК-овых вирусов, например, соответственно вируса гепатита В (HBV) или вируса гепатита С (HCV). Количественная ПЦР позволяет определить (измерить) количество вирусных копий в 1 мл крови человеческого организма. Отсюда, например, высокая репликативная активность, т. е. активное размножение вируса в организме (высокая вирусная "нагрузка"), будет определять тяжесть клинического течения инфекционного заболевания и, наоборот, прекращение репликативной активности вируса или ее существенное снижение свидетельствует о противовирусной активности лекарственных препаратов, применяемых для лечения вирусных заболеваний.

Неструктурный белок вируса гепатита С (NS3) - ключевой регуляторный белок вируса, необходимый для вирусной репликации (следовательно, активности). Данный белок является полифункциональным ферментом, обладающим тремя каталитическими активностями, такими как: протеазной, хеликазной ("расплетание" ДНК клеток "хозяина" для внедрения вируса) и АТФ-азной, т. е. способностью расщеплять АТФ для обеспечения энергией процесса репликации вируса (так называемый "кэп" синтез) [24] .

Уникальные свойства окисленного глутатиона (GSSG) - стимулировать эндогенную продукцию цитокинов и гемопоэтических факторов - установлены и запатентованы авторами ранее [25] .

Стабилизация дисульфидной связи GSSG способствует пролонгированию времени пребывания экзогенно введенного GSSG в биологических средах в окисленной (дисульфидной) форме и принципиально усиливает впервые установленные биолого-фармакологические эффекты GSSG [25, 26] . В биологических средах GSSG метаболизируется ферментом НАДФ

Н⁺-зависимой глутатион-редуктазой, который расщепляет дисульфидную связь GSSG с образованием двух молекул восстановленного глутатиона (GSH) [25, 26] .

Отсюда новым решением по пролонгированию времени "полужизни" экзогенно введенного GSSG в биологических средах в дисульфидной форме стал метод получения композитного соединения GSSG с инозином или с инозинмонофосфатом (ИМФ). Инозин и ИМФ в составе названного композитного соединения защищали GSSG от "атаки" НАДФ

Н⁺-зависимой глутатион-редуктазы, обеспечивая данному композитному соединению новое качество его биолого-фармакологических эффектов, интегративным результатом которых является возможность регулировать процессы пролиферации, дифференцировки и апоптоза клеток [26] .

В вышеуказанном патенте [26] представлена группа фармацевтически приемлемых веществ, содержащих в качестве активного начала производные GSSG в виде его солей, которые обеспечивают: - новую фармакокинетику GSSG в составе данных производных GSSG; - адресную доставку GSSG в тот или иной орган, т. е. целенаправленную тропность к различным тканям и органам; - новое содержание основных биолого-фармакологических эффектов GSSG, точнее его структурно-функционального аналога - гексапептида со стабилизированной дисульфидной связью.

Таким образом, в патенте [26] , как в наиболее близком аналоге, выбранном нами в качестве прототипа заявляемого изобретения, описаны соли окисленного глутатиона, которые являются органическими солями GSSG, получаемыми при взаимодействии глутатиона окисленного и неорганическими основаниями.

Задачей, на решение которой направлено настоящее изобретение, является создание новых индивидуальных веществ, фармацевтических композиций и препаратов, получаемых на основе взаимодействия дисульфидсодержащих пептидов с пуринами и пиримидинами, в том числе с азотистыми основаниями; нуклеозидами и нуклеотидами, а также разработка способов их применения для лечения инфекционных заболеваний и профилактики их осложнений.

По своей природе это: - либо органические соли, противоионами в которых являются GSSG и азотистые основания; или GSSG и нуклеозиды пуриновой и пиримидиновой природы; - либо новые химические вещества, полученные на основе образования ковалентной связи между GSSG и нуклеотидмонофосфатами.

По классификации IUPAC, не говоря уже о соединениях, получаемых на основе образования ковалентной связи между двумя веществами, - органическая соль, образующаяся на основе формирования ионных связей между составляющими ее компонентами также является индивидуальным веществом, так как строго определены соответствующие солеобразующие катионы и анионы.

В настоящем изобретении раскрывается, что в случае получения ряда органических солей GSSG с азотистыми основаниями и/или нуклеозидами пуриновой и/или пиримидиновой природы в качестве аниона образующейся соли выступает ионизированная карбоксильная группа остатка глицина молекулы GSSG, а в качестве катиона - протонированный атом азота внутри гетероцикла молекулы азотистого основания (например, аденина, гуанина или урацила); или нуклеозидов (например, инозина или тимидина с протонированным атомом азота N₁).

Одновременно показано образование ряда органических солей на основе взаимодействия GSSG и нуклеотидов, например: - GSSG и инозинмонофосфатом (GSSG-ИМФ); - GSSG и уридинмонофосфатом (GSSG-УМФ).

В настоящем изобретении раскрывается ряд соединений, полученных на основе формирования ковалентной связи между GSSG и нуклеотидмонофосфатами, например: инозин-5¹-фосфатом, уридин-5¹-фосфатом, цитидин-5¹-фосфатом, тимидин-5¹-фосфатом, аденозин-5¹-фосфатом и гуанозин-5¹-фосфатом. В этом случае целенаправленно используется образование фосфороамидной связи между аминогруппой натриевой или иной неорганической соли GSSG и остатками фосфорной кислоты нуклеотидмонофосфатов. Образование ковалентной связи проходит по одной схеме химической реакции и дает продукты, формулы которых представлены на соответствующих фигурах.

Одним из воплощений изобретения является представленный ряд веществ, полученный: а) на основе образования ионных связей между D-формами GSSG и азотистыми основаниями, между D-формами GSSG и нуклеозидами, формулы которых представлены на соответствующих фигурах; а также б) на основе образования ковалентной связи между солями D-форм GSSG и нуклеотидмонофосфатами, формулы которых представлены на соответствующих фигурах.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона, в которых противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и азотистые основания пуриновой или пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагается органическая соль окисленного глутатиона, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и аденин.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона, в которых противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и нуклеозиды пуриновой или пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагается органическая соль окисленного глутатиона, в которых противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и уридин.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона (GSSG), в которых противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и азотистые основания, или нуклеозиды или нуклеотиды пуриновой или пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона (GSSG), в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и азотистые основания пуриновой или пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагается органическая соль окисленного глутатиона, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и аденин.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона (GSSG), в которых противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и нуклеозиды пуриновой или пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона (GSSG), в которых противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, или окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и нуклеозиды пуриновой или пиримидиновой природы, в формуле которых рибоза представлена в форме

-D-рибозы, или в форме

-D-дезоксирибозы.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона (GSSG), в которых противоионами являются окисленный глутатион в L- или D-форме, и одновременно два азотистых основания: одно из которых пуриновой, а второе - пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагаются органические соли окисленного глутатиона (GSSG), в которых противоионами являются окисленный глутатион в L- или D-форме, и одновременно два нуклеозида: один из которых пуриновой, а второй - пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагаются индивидуальные вещества, которые содержат органические катионы, представленные рядом нуклеозидов или нуклеотидов и фосфамидные производные окисленного глутатиона (GSSG), аминокислоты которого представлены в L-форме.

Согласно изобретению предлагается вещество, в котором в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с аденозинмонофосфатом (АМФ).

Согласно изобретению предлагается вещество, в котором в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с гуанозинмонофосфатом (ГМФ).

Согласно изобретению предлагается вещество, в котором в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с инозинмонофосфатом (ИМФ).

Согласно изобретению предлагается вещество, в котором в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с цитидинмонофосфатом (ЦМФ).

Согласно изобретению предлагается вещество, в котором в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с уридинмонофосфатом (УМФ).

Согласно изобретению предлагается вещество, в котором в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с тимидинмонофосфатом (ТМФ).

Согласно изобретению предлагаются вещества, в которых в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производные нуклеотидов пуриновой или пиримидиновой природы, в которых рибоза представлена в форме

-D-рибозы или в форме

-D-дезоксирибозы.

Согласно изобретению предлагаются индивидуальные вещества, которые содержат органические катионы, представленные рядом нуклеозидов или нуклеотидов и фосфамидные производные окисленного глутатиона (GSSG), в структуре которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме.

-D-рибозы или в форме

-D-дезоксирибозы.

Согласно изобретению предлагаются индивидуальные вещества, содержащие неорганические катионы щелочных, щелочно-земельных и/или переходных металлов и фосфамидные производные окисленного глутатиона в L-форме или D-форме с рядом нуклеозидов или нуклеотидов пуриновой или пиримидиновой природы, в которых рибоза представлена в форме

-D-рибозы или в форме

-D-дезоксирибозы.

Согласно изобретению предлагаются вещество, в котором в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с двумя нуклеотидами, один из которых пуриновой, а второй - пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагается фармацевтическая композиция, проявляющая противовирусную, противобактериальную, иммунореабилитирующую и гепатопротекторную активность, содержащая в качестве активного вещества по меньшей мере одно из описанных выше соединений в эффективном количестве, а также фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.

Согласно изобретению предлагается фармацевтический препарат, обладающий противовирусным, противобактериальным, иммунореабилитирующим и гепатопротекторным действием и содержащий в качестве активного вещества по меньшей мере одно из описанных выше соединений в эффективном количестве, а также фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.

Согласно изобретению предлагается способ получения органической соли окисленного глутатиона и инозина, в которой в качестве аннона выступает молекула окисленного глутатиона, а в качестве катиона выступает молекула инозина (9

-D-рибофуранозил-гипоксантина), отличающийся тем, что к раствору динатриевой соли окисленного глутатиона при перемешивании и комнатной температуре добавляют 1 эквивалент порошка инозина и оставляют до полного растворения, после чего прозрачный раствор фильтруют и лиофильно высушивают.

Согласно изобретению предлагается способ получения инозил-5-фосфорил-N-глутатиона, в котором фосфамидную связь между аминогруппой глутаминовой кислоты в молекуле окисленного глутатиона и остатком фосфорной кислоты в молекуле инозин-5-монофосфата получают в процессе реакции его N-оксисукцинимидного активированного эфира и окисленного глутатиона в диметилформамиде при рН 8.0-8.5.

Согласно изобретению предлагается способ воздействия на инфекционные агенты (в том числе внутриклеточно локализованные) и/или стимуляции Т-клеточного и гуморального противоинфекционного иммунитета наряду с обеспечением цитопротекторных эффектов, заключающийся во введении в организм млекопитающих эффективного количества соединений, получаемых на основе химического взаимодействия дисульфидсодержащих пептидов с азотистыми основаниями, или нуклеозидами, или нуклеотидами пуриновой или пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагается способ, заключающийся в индукции механизмов апоптоза, в том числе посредством экспрессии индуктора апоптоза, FAS/APO-1 антигена (CD95+) на мембранах вирусинфицированных клеток, на мембранах макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, на мембранах клеток, инфицированных микоплазмами, хламидиями, малярийным плазмодием и другими инфектагентами, посредством введения в организм млекопитающих фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин, GSSG

урацил, GSSG

тимтн, GSSG

аденин, GSSG

гуанин, GSSG-инозинмонофосфат, GSSG-урацилмонофосфат, GSSG-тимидинмонофосфат, GSSG-цитозинмонофосфат и другие соединения, полученные на основе взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона и его солей с азотистым основаниями или нуклеозидами или нуклеотидами пуриновой или пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагается способ, состоящий во введении в организм млекопитающих, инфицированных вирусом гепатита С, фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного ингредиента, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин, GSSG-инозинмонофосфат, GSSG-урацилмонофосфат и другие производные L- или D-форм окисленного глутатиона с компонентами нуклеиновых кислот с целью ингибирования АТФ-азно/хеликазной активности NS3 вируса гепатита С для прекращения репликативной активности и элиминации вируса гепетита С, следовательно, достижения лечебного эффекта.

Согласно изобретению предлагается способ, заключающийся в преимущественном ингибировании репликативной активности РНК-содержащих вирусов, в случае использования в качестве активного вещества, соединений, полученных на основе химического взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона и его солей с азотистыми основаниями, или нуклеозидами, или нуклеотидами пиримидиновой природы.

Согласно изобретению предлагается способ, заключающийся в преимущественном ингибировании репликативной активности ДНК-содержащих вирусов, в случае использования в качестве активного вещества соединений, полученных на основе химического взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона и его солей с азотистыми основаниями, или нуклеозидами, или нуклеотидами пуриновой природы.

Согласно изобретению предлагается способ, заключающийся во введении в организм млекопитающих фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин, и другие соединения окисленного глутатиона с компонентами нуклеиновых кислот, с целью преимущественной активации функциональной активности Th1-группы Т-клеток, либо Th2-группы Т-клеток, либо их регулируемого соотношения, что дифференцированно определяет эффективность системы иммунитета организма млекопитающих в отношении этиотропных факторов инфекционных болезней.

Согласно изобретению предлагается способ, заключающийся во введении в организм больного вирусным гепатитом С фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин, и/или GSSG-инозинмонофосфат, с целью восстановления нормального соотношения Th1/Th2 клеток, следовательно, достижения оптимального содержания цитокинов, продуцируемых Th1 и Th2 группой клеток, в том числе с целью повышения эндогенной продукции IL-2, IL-12, ИФН-

Согласно изобретению предлагается способ, заключающийся во введении в организм больного вирусным гепатитом А, В и/или С фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин и другие соединения окисленного глутатиона, его солей с компонентами нуклеиновых кислот, с целью достижения гепатопротекторных эффектов, в том числе предупреждения и/или лечения осложнений названных хронических вирусных гепатитов, а именно профилактики и лечения циррозов печени и гепатоцеллюлярных карцином.

Согласно изобретению предлагается способ, в котором заболевание выбирается из всех видов инфекционных заболеваний, включающих вирусные и бактериальные, в том числе анаэробные инфекции; хламидийные и микоплазменные инфекции; микозы (кандидозы); протозойные инфекции.

Согласно изобретению предлагается способ, в котором вещества, полученные на основе химического взаимодействия дисульфидсодержащих пептидов с азотистыми основаниями, нуклеозидами и нуклеотидами, посредством фармацевтически приемлемых растворителей или носителей вводят в инфицированный организм парентерально, перорально, в форме ингаляционных растворов, растворов для локальных инстилляций, глазных или интраназальных капель, мазей, кремов или гелей для накожного применения, а также в форме суппозиториев - до достижения лечебного эффекта и/или профилактики осложнений, вызванных инфектагентами в процессе развития инфекционного заболевания.

Согласно изобретению предлагается способ лечения субъекта, нуждающегося в прекращении репликативной активности вирусов, бактерий или других инфектагентов, индукции механизмов апоптоза инфицированных клеток, восстановлении и стимуляции противоинфекционного дееспособного иммунитета: Т-клеточного, и/или гуморального, системных цитопротекторных эффектах, заключающийся во введении субъекту фармацевтического препарата, содержащего биологически активное вещество, выбираемое из группы, содержащей биологически активные соединения, полученные на основе химического взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона, его солей с азотистыми основаниями, или нуклеозидами или нуклеотидами пуриновой или пиримидиновой природы в количестве, достаточном для достижения терапевтического эффекта.

Согласно изобретению способ включает лечение острого, с затяжным течением вирусного гепатита В, а фармацевтический препарат выбирают из группы, состоящей из GSSG

инозина и GSSG-инозинмонофосфата.

Согласно изобретению способ включает лечение острого вирусного гепатита С, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

урацил и GSSG-инозинмонофосфат.

Согласно изобретению способ включает лечение хронического вирусного гепатита В, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

гуанозин, GSSG

аденозин, GSSG-инозинмонофосфат и GSSG-тимидинмонофосфат.

Согласно изобретению способ включает лечение хронического вирусного гепатита С, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

урацил, GSSG

цитозин, GSSG

дигидроурацил, GSSG-урацилмонофосфат, GSSG-цитозинмонофосфат, урацил-GSSG-инозин.

Согласно изобретению способ включает лечение хронических вирусных гепатитов в цирротической стадии, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

уридин, GSSG

тимидин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат и Na₂-GSSG-тимидинмoнoфocфaт.

Согласно изобретению способ включает лечение легочного туберкулеза, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

цитозин, GSSG-5-метилцитозин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат.

Согласно изобретению способ включает лечение туберкулеза мочеполовой системы, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

тимин, Na₂-GSSG-гyaнoзинмoнoфocфaт и урацил-Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфат.

Согласно изобретению способ включает лечение СПИДа, а также цитомегаловирусной инфекции и инфекции, вызванной вирусом Эпштейн-Барр и/или пневмоцистами, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

дигидроурацил, GSSG

4-тиоурацил, а также Zn₂-GSSG-тимидинмонофосфат и Ag₂-GSSG-ypaцилмoнoфocфaт и уридин

GSSG

инозин.
Согласно изобретению способ включает лечение инфекций, вызываемых вирусами герпеса, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфат, а также D-форму Na₂-GSSG-цитозинмонофосфата и D-форму GSSG

урацила.
Согласно изобретению способ включает лечение микозов (кандидозов), а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

уридин, GSSG

4-тиоурацил и Ag₂-GSSG-ypaцилмoнoфocфaт.

Согласно изобретению способ включает лечение микоплазменной инфекции, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

аденозин, а также Nа₂-GSSG-аденозинмонофосфат.

Согласно изобретению способ включает лечение хламидийной инфекции, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

тимин, GSSG

уридин, GSSG

гуанозин, а также Na₂-GSSG-гуанозинмонофосфат.

Согласно изобретению способ включает лечение малярии, лейшманиоза, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин,

и GSSG

5-метилцитозин.
Согласно изобретению способ включает лечение анаэробной инфекции, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей D-форму GSSG

инозина (D-цистеин) и D-форму GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота).

Согласно изобретению способ включает лечение вирусного гепатита А, дизентерии и холеры, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат и Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфат, а также D-форму GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота).

Согласно изобретению способ включает лечение инфекционного менингита, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат, D-форму GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота), GSSG

5-метилцитозин, Ag₂-GSSG-ypaцилмoнoфocфaт.

Согласно изобретению способ включает лечение особо опасных инфекций чумы, туляремии и сибирской язвы, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

аденин, GSSG

тимин, GSSG

5-метилцитозин, GSSG

4-тиоурацил, D-форму GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота), D-форму GSSG

инозина(D-цистен), аденин

GSSG

тимин.
Согласно изобретению способ включает лечение инфекции, вызываемой прионами ("коровые белки"), а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

уридин, GSSG

дигидроурацил, Ag₂-GSSG-урацилмонофосфат, Ag₂-GSSG-тимидинмoнoфocфaт, а также урацилмонофосфат-Li₂-GSSG-инозинмонофосфат.

Согласно изобретению способ включает лечение гриппа и острых респираторных вирусных инфекций, а фармацевтический препарат выбирают из
группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

аденозин, GSSG

урацил и GSSG

тимин,
Изобретение поясняется чертежами, которые являются схематичными и были сделаны для представления структурных формул новых веществ. При этом не каждый элемент обозначен на каждом чертеже и не каждый компонент для каждого воплощения идеи изобретения приведен в случае, если иллюстрация не является необходимой для того, чтобы позволить обычному специалисту в данной области понять изобретение. На представленных фигурах изображены соответственно:
На фиг. 1 - структурная формула органической соли бис-(

-L-глутамил)-L-цистеинил-бис-глицина (GSSG) с аденином.

На фиг. 2 - структурная формула органической соли GSSG с гуанином.

На фиг. 3 - структурная формула органической соли GSSG с тимином.

На фиг. 4 - структурная формула органической соли GSSG с урацилом.

На фиг. 5 - структурная формула органической соли GSSG с цитозином.

На фиг. 6 - структурная формула органической соли GSSG с 5-метилцитозином.

На фиг. 7 - структурная формула органической соли GSSG с 4-тиоурацилом.

На фиг. 8 - структурная формула органической соли GSSG с дигидроурацилом.

На фиг. 9 - структурная формула вещества (органической соли), противоионы которого GSSG и инозин (9-

-D-рибофуранозилгипоксантин).

На фиг. 10 - структурная формула вещества (органической соли), противоионы которого GSSG и тимидин (3-

-D-2-дезоксирибофуранозилтимин).

На фиг. 11 - структурная формула вещества (органической соли), противоионы которого GSSG и уридин (3-

-D-рибофуранозилурацил).

На фиг. 12 - структурная формула вещества (органической соли), противоионы которого GSSG и гуанозин, где R - остаток рибозы.

На фиг. 13 - структурная формула вещества (органической соли), противоионы которого GSSG и аденозин, где R - остаток рибозы.

На фиг. 14 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Na₂-GSSG и уридин-5¹-фосфатом (УМФ).

На фиг. 15 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Na₂-GSSG и цитидин-5¹-фосфатом (ЦМФ).

На фиг. 16 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Na₂-GSSG и тимидин-5¹-фосфатом (ТМФ).

На фиг. 17 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Na₂-GSSG и аденозин-5¹-фосфатом (АМФ).

На фиг. 18 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Na₂-GSSG и гуанозин-5¹-фосфатом (ГМФ).

На фиг. 19 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Zn₂-GSSG и тимидин-5¹-фосфатом.

На фиг. 20 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Ag₂-GSSG и уридин-5¹-фосфатом.

На фиг. 21 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между Li₂-GSSG и гуанозин-5¹-фосфатом.

На фиг. 22 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между D-формой Na₂-GSSG (D-глутаминовая кислота) и УМФ.

На фиг. 23 - структурная формула вещества, полученного на основе образования ковалентной связи между D-формой Na₂-GSSG (D-цистеин) и ЦМФ.

На фиг. 24 - структурная формула вещества (органической соли), противоионы которого D-форма GSSG и урацил.

На фиг. 25 - структурная формула вещества (органической соли), противоионы которого D-форма GSSG и инозин.

На фиг. 26 - структурная формула комбинированной органической соли, противоионами которой являются GSSG и азотистые основания пуриновой и пиримидиновой природы.

На фиг. 27 - структурная формула комбинированной органической соли, противоионами которой являются GSSG и нуклеозиды пуриновой и пиримидиновой природы.

На фиг. 28 - структурная формула комбинированного соединения, образованного на основе ковалентных связей между аминогруппами неорганической соли GSSG и фосфамидными группами нуклеотидов пуриновой и пиримидиновой природы.

Фиг. 29 - структурная формула 9-

-D-рибофуранозил-5'-фосфорил-N-бис-(

-L-глутамил)-L-цистинил-бис-глицин динатриевая (дилитиевая) соль, полученная на основе образования ковалентной связи между Na₂(Li₂)-GSSG и инозин-5'-монофосфатом (ИМФ).

Фиг. 30 - динамика клинико-лабораторных и морфологических показателей больной К. , получавшей терапию препаратом GSSG

инозин.
Фиг. 31 - динамика клинико-лабораторных и морфологических показателей больного З. , получавшего терапию препаратом GSSG

инозин.
Фиг. 32 - рентгенография грудной клетки, левое легкое. До лечения (октябрь 1999 г. ) (пример 16).

Фиг. 33 - рентгенография грудной клетки, левое легкое. После лечения (январь 2000 г. ) (пример 16).

Фиг. 34 - лечебная эффективность исследуемых гепатопротекторных соединений при экспериментальном дихлорэтановом гепатите (Пример 17).

Фиг. 35 - лечебная эффективность исследуемых гепатопротекторных соединений при экспериментальном ацетоминофеновом гепатите (Пример 17).

Фиг. 36 - лечебная эффективность исследуемых гепатопротекторных соединений при сочетанном (дихлорэтан+ацетоминофен) экспериментальном гепатите (Пример 17).

Фиг. 37 - изменение показателей цитолитического синдрома (АЛТ, ACT) при сочетанном экспериментальном гепатите (дихлорэтан+ацетаминофен) (Пример 17).

Фиг. 38 - изменение уровня билирубина в плазме крови при сочетанном экспериментальном гепатите (дихлорэтан+ацетаминофен) (Пример 17).

Фиг. 39 - динамика иммунологических показателей у больных хроническим вирусным гепатитом С до и на фоне лечения препаратом GSSG

инозин.
Фиг. 40 - динамика иммунологических показателей при лечении острого вирусного гепатита В препаратом GSSG

инозин.
Фиг. 41 - уровень цитокинов в сыворотке крови больных хроническим вирусным гепатитом С до и на фоне лечения препаратом GSSG

инозин.
Фиг. 42 - схема синтеза инозил-5'-фосфорил- GSSG-Nа₂.

В качестве предпочтительного воплощения цели изобретения представляется новое соединение, полученное как органическая соль окисленного глутатиона, в которой катионом является 9-

-D-рибофуранозилгипоксантин (инозин). Методика получения GSSG

инозина представлена ниже, его структурная формула на фиг. 9.

Методика получения органической соли GSSG

инозин
Берется 200 г (0.65 М) восстановленного глутатиона (GSH) и растворяется в 700 мл дистиллированной воды при постоянном перемешивании и температуре 12-15^oС (ледяная баня). Добавляется 163 мл (0.65 М) 4N раствора NaOH. После полного растворения медленно вносится 295 мл 3% раствора Н₂О₂, при этом раствор находится на ледяной бане и температура сохраняется на том же уровне. Перемешивание продолжается еще 3-4 часа (это время определено опытным путем по работе с платиной в качестве катализатора), при этом температура раствора поддерживается ниже 20^oС. После завершения реакции проводится ВЭЖХ (конечное содержание GSSG - 98% и более). Проверяется рН раствора и при необходимости добавляется 4N раствор NaOH, pН доводится до 5.5.

Затем добавляется 174.2 г (0.65 М) инозина (в виде гомогенного сухого порошка) и перемешивание продолжается при 23-25^oС еще 10-12 часов до полного его растворения.

Полученный раствор фильтруется через фильтр с размером пор не более 0.7 микрон. Профильтрованный раствор должен быть прозрачным, бесцветным, не опалесцировать, рН 5.3+/-0.2. рН доводится до 6.0, добавляя 1-4N раствор NaOH. Контроль - ВЭЖХ: пики GSSG и инозина (Nucleosil С 18, MeCN - 0.1% TFA).

Полученный раствор лиофилизируется в соответствии с нижеследующими рекомендациями (смотри также прилагаемую схему лиофилизации):
- полки охлаждаются до -20+/-0.2^oС;
- поместить емкости с раствором на полки;
- заморозить раствор до -35+/-0.2^oС;
- замороженный раствор содержится при указанной температуре в течение 3+/-0.5 часов;
- отключить полки;
- включить конденсатор на охлаждение до -54+/-2^oС на 15+/-3 мин;
- вакуумная обработка в течение 30+/-5 мин до достижения 4-6 Па;
- материал оставляется на 2 часа;
- температура на полках постепенно повышается до достижения постоянной температуры на полках и температуры материала.

Важным элементом заявляемого нового технического решения получения названного соединения (GSSG

инозина) является установленный факт о том, что плохо растворимый в водных растворах инозин в составе органической соли с GSSG становится хорошо растворимым соединением, что является дополнительным доказательством образования ионных связей между GSSG и инозином, т. е. образования особого типа органической соли.

Следующим предпочтительным воплощением изобретения является получение D-формы GSSG

инозина. В этом случае в формуле GSSG две химически однозначных аминокислоты (цистеины) представлены в D-форме, а остальные аминокислоты в L-форме (фиг. 25). В то же время на фиг. 24 представлена формула D-GSSG-урацила, в которой в D-форме глутаминовая кислота.

В свою очередь, в следующем воплощении изобретения раскрывается, что фармацевтический препарат, полученный на основе GSSG

инозина обладает уникальным сочетанием биолого-фармакологических эффектов, обеспечивающих принципиально новое решение проблемы лечения вирусных заболеваний, таких как: вирусные гепатиты В и С и их осложнения; СПИДа (см. примеры реализации изобретения 5-8, 12-13); герпетических и урогенитальных инфекций (см. примеры реализации изобретения 14-15).

Подчеркивается, что новый уровень терапевтической эффективности GSSG

инозина, особенно в отношении вирусных гепатитов, обусловлен тем, что препарат обладает тремя видами активности: противовирусной, иммунореабилитирующей и гепатопротекторной.

Установлено, что каждый из трех видов фармакологической активности GSSG

инозина является уникальной и, в этой связи, важнейшим воплощением изобретения является раскрытие механизмов противовирусной, противобактериальной, иммунореабилитирующей и гепатопротекторной активности GSSG

инозина (его D-форм) и других соединений, полученных на основе взаимодействия дисульфидсодержащих пептидов и пуринов/пиримидинов.

В отношении противовирусной активности показано, что названные соединения обладают двумя системами механизмов противовирусного действия. Первая, своего рода неспецифическая система механизмов обусловлена общим свойством препаратов индуцировать механизмы апоптоза вирусинфицированных клеток, в частности, вследствие усиления экспрессии индуктора апоптоза - FAS/APO-1 - рецептора (CD95+) (см. пример реализации изобретения 3). Именно данный механизм обусловливает высокую эффективность GSSG

инозина и ряда других соединений (GSSG-IMP, GSSG-UMP, Li₂-GSSG-IMP, Zn₂-GSSG-ТМР) при их применении в качестве средств лечения инфекционных заболеваний, вызванных ДНК-овыми и РНК-овыми вирусами.

В частности, противовирусная активность GSSG

инозина установлена на ряде моделей вирусных инфекций, а именно: лихорадки долины Рифт (ЛДР); генерализованной формы герпетической инфекции; венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ); гриппа (А-вирус, H3N2) (см. примеры реализации изобретения 2). Принципиальным результатом этих исследований явилось установление того факта, что GSSG

инозин был эффективнее традиционных противовирусных препаратов.

В свою очередь, уникальная терапевтическая эффективность GSSG

инозина и других рассматриваемых соединений продемонстрирована в клинике инфекционных болезней при использовании названных соединений для лечения больных туберкулезом (см. примеры реализации изобретения 16); урогенитальными инфекциями (см. примеры реализации изобретения 14-15); СПИДом (см. примеры реализации изобретения 12-13); острым и хроническим гепатитом В (см. примеры реализации изобретения 5-8, табл. 12-21, фиг. 30 и 31).

Таким образом, выявленная способность GSSG

инозина и других рассматриваемых соединений индуцировать апоптоз вирусинфицированных клеток распространяется также на клетки, инфицированные микобактериями туберкулеза; хламидиями, микоплазмой, уреаплазмой и другими инфектагентами.

В большинстве приведенных примеров реализации изобретения, демонстрирующих новое качество терапевтических решений перечисленных социально значимых заболеваний, эффективность предлагаемых в изобретении препаратов приводится в сравнении с эффективностью, рекомендуемых сегодняшней медицинской практикой, лечебно-профилактических средств. При этом показано, что терапевтическая эффективность, например, GSSG

инозина (запатентованное название в Российской Федерации -Моликсан

) в случае острых и хронических гепатитов В, определяемая по срокам нормализации таких объективных показателей течения инфекционного процесса, как: активность трансаминаз (АЛТ и ACT); содержание билирубина; содержание протромбина; содержание HbsAg существенным образом выше терапевтической эффективности традиционной терапии.

Так, в случае острого гепатита В традиционная терапия обеспечивает положительную динамику трансаминазной активности, содержания билирубина и HbsAg, как правило, к 50-60 дням лечения. Применение GSSG

инозина в монорежиме - к 14-17 дням лечения (см. примеры реализации изобретения 5 и 6, табл. 12-17, фиг. 40).

В случае хронического гепатита В ключевыми показателями эффективности проводимой терапии являются, опять же, активность трансаминаз (показатель степени цитолиза гепатоцитов) и репликативная активность вируса, определяемая с помощью теста ПЦР.

По данному основному показателю эффективности лечения хронического гепатита В традиционная терапия (рекомбинантные интерфероны плюс аналоги нуклеозидов) обеспечивают снижение процента положительной ПЦР ДНК HBV от 100% не более чем на 30-40%; т. е. у 60-70% пациентов лечение малоэффективно. Применение GSSG

инозина обеспечивает конверсию ПЦР ДНК HBV с положительной в 100% случаев в отрицательную у 70-80% пациентов (см. примеры реализации изобретения 7 и 8, табл. 17-21, фиг. 30 и 31). Восстановление функциональной дееспособности печени в случае вирусных и токсических гепатитов, определяемой по таким показателям, как белоксинтезирующая и детоксикационная функции печени, достигается с помощью GSSG

инозина в 2-3 раза более короткие сроки, чем при проведении традиционной терапии, например, гептралом

(S-аденозил-метионин) или эссенциале

(см. примеры реализации изобретения 11; 14).

Следующим предпочтительным воплощением изобретения является раскрытие специфической, т. е. прямой противовирусной активности GSSG

инозина (Моликсана

), GSSG-IMP и GSSG-UMP, а также их солей, относительно вируса гепатита С (РНК HCV), т. е. РНК-содержащего вируса в отличие от ДНК-содержащего вируса гепатита В (ДНК HBV). Данное воплощение изобретения утверждает уникальное свойство GSSG

инозина (Моликсана

), а также GSSG-IMP и GSSG-UMP - способность ингибировать АТФ-азно/хеликазную активность регуляторного неструктурного белка-фермента (NS3) вируса гепатита С (см. пример реализации изобретения 4). Имеющиеся у нас данные свидетельствуют о том, что Zn₂-GSSG-IMP, а также прочие соли GSSG-UMP, например Ag₂-GSSG-UMP, обладают способностью ингибировать активность неструктурных (регуляторных) белков-ферментов не только HCV, но и HIV.

Следовательно, убедительная терапевтическая активность GSSG

инозина относительно острых и хронических вирусных гепатитов; герпетической инфекции и СПИДа (см. примеры реализации изобретения 5-14) обусловлена сочетанием его опосредованной (индукция апоптоза вирусинфицированных клеток) и прямой противовирусной активностью (ингибирование АТФ-азно/хеликазной активности NS3 HCV), что определяет новое решение лечебно-профилактических мероприятий относительно хронического гепатита С.

Одновременно показано, что по отношению к вирусным инфекциям и особенно это касается вирусных гепатитов, а также СПИДа, - D-форма GSSG

инозина обладает большей противовирусной активностью, обеспечивая прекращение высокой репликативной активности вирусов и их элиминацию из организма (см. пример реализации изобретения 12).

Чрезвычайно актуальной для терапии хронических вирусных гепатитов и, особенно для терапии гепатита С, оказалась векторность иммунореабилитирующей активности GSSG

инозина, в качестве второго вида фармакологической активности данного и родственных ему соединений.

Характерными особенностями иммунореабилитирующей эффективности GSSG

инозина является:
- нормализация соотношения продукции цитокинов Th1/Th2 типами клеток с преимущественной активацией Т-клеточного иммунитета;
- преимущественная стимуляция эндогенной продукции IL-2, IL-12, а также IFN и TNF.

Как следует из клинических примеров реализации изобретения 9-11, характерное для тяжелого течения и хронизации инфекционного процесса (хронического неблагоприятного развития картины гепатита С), - нарушение баланса продукции цитокинов Th1/Th2 группами Т-хелперов положительно исправляется на фоне применения GSSG

инозина. При этом наблюдаемое у больных HCV-инфекцией преобладание активности Th2 группы цитокинов: IL-4, IL-10, IL-6 и IL-13 под воздействием GSSG

инозина сменяется на преимущественное преобладание активности Th1 группы с повышенной секрецией IL-2; IL-12; IFN-

, а также TNF-

. Одновременно существенно активируется Т-клеточное звено иммунитета (увеличение содержания в крови СД4⁺; СД8⁺; СД16⁺/56⁺; СД25⁺; повышение активности резидентных макрофагов), обеспечивая тем самым попадание HBV и HCV (вирусов гепатита В и С) под надлежащий иммунологический надзор, а следовательно, элиминацию вирусов из организма и благоприятный терапевтический исход.

Один из важнейших механизмов терапевтического эффекта GSSG

инозина - индукция секреции IL-12, который способствует стабилизации процесса преобладания активности Th1 группы, следовательно, активной продукции эндогенных (собственных для организма) интерферонов (см. примеры реализации изобретения 5-7, 12).

Третий вид биолого-фармакологической активности GSSG

инозина, как препарата предпочтительно реализующего воплощение изобретения, - его гепатопротекторная активность, целенаправленно определяющая уникальные противоцирротические эффекты GSSG

инозина (Моликсана

).
Сама постановка данного вопроса органически связана с одним из основных концептуальных положений изобретения - создание индивидуальных веществ, способных реализовать принципиально новое решение проблемы лечения таких инфекционных заболеваний, как вирусные гепатиты, особенно гепатита С.

С учетом сказанного во введении о том, что более 40% циррозов печени и 60% рака печени обусловлено хроническим гепатитом С, - это означает, что всякое конструктивное решение терапии хронического гепатита С предполагает как ликвидацию собственно вирусоцитопатического поражения ткани печени, так и предупреждение процессов фиброзирования печени, наряду с предупреждением процессов злокачественной трансформации гепатоцитов.

В изобретении представлено обоснование противоцирротических эффектов

полученных на экспериментальной модели цирроза печени и в клинике.

В частности, на модели цирроза, полученной вследствие хронического введения экспериментальным животным диметилнитрозоамина (ДМНА), установлено, что применение препарата GSSG

инозина в дозе 10 мг/кг 3 раза в неделю в течение 6 недель обеспечило снижение количества соединительной ткани в печени на 64% и способствовало восстановлению поврежденных гепатоцитов. При этом препарат сравнения - Гептрал (S-аденозил-метионин) обладал существенно более низким терапевтическим эффектом, снижая степень фиброзирования печени экспериментальных животных лишь на 35% и не оказывая существенного влияния на восстановление функциональной дееспособности печени (белоксинтезирующей и других) (см. пример реализации изобретения 29).

Столь же убедительные результаты получены в клинике при лечении препаратом GSSG

инозин больных с диагнозом: хронический вирусный гепатит В (и/или хронический гепатит С); цирротическая стадия (PCR HBV+; PCR HCV+), асцит, портальная гипертензия. Применение препарата GSSG

инозин в монорежиме в течение повторных курсов обеспечило уникальный лечебный эффект, подтверждаемый позитивной динамикой клинического состояния и специальными методами обследования пациентов (см. Примеры реализации изобретения 8-11).

Таким образом, лечение больных хроническими вирусными гепатитами, особенно гепатитом С, с применением лекарственных форм препарата GSSG

инозин (Моликсан

) обеспечивает не только ликвидацию собственно инфекционного процесса, но и профилактику осложнений вирусных гепатитов, прежде всего циррозов и рака печени. Кроме того, раскрывается, что в случае сформировавшихся токсических циррозов, абсолютно аналогичных алкогольным циррозам, применение GSSG

инозина в эксперименте и клинике демонстрирует терапевтическую эффективность, не имеющую себе равных с точки зрения соответствующего применения известных гепатопротекторных лекарственных средств.

Следовательно, концептуальной платформой заявляемого изобретения является представляемая группа оригинальных веществ (возможное наименование - тионуклеины), получаемых (синтезируемых) как органические соли GSSG с азотистыми основаниями и/или нуклеозидами; и/или как соединения на основе образования ковалентной связи между GSSG и нуклеотидами пуриновой и пиримидиновой природы.

Данные индивидуальные вещества (формулы на фиг. 1-29) обладают уникальным сочетанием биолого-фармакологических эффектов, а именно: а) противовирусным действием - прямым (ингибирование АТФ-азно/хеликазной активности NS3 HCV) и опосредованным (через индукцию апоптоза вирусинфицированных клеток, в том числе вследствие экспрессии индуктора апоптоза FAS/APO-1 рецептора); б) иммунореабилитирующей активностью; и в/системными цитопротекторными и, особенно, специфическими гепатопротекторными эффектами со способностью предупреждать цирротические изменения в печени и даже осуществлять обратное развитие процесса фиброзирования печени.

Фармацевтические препараты, содержащие в качестве биологически-активных веществ представленные в изобретении соединения, могут использоваться в различных лекарственных формах: а) для парентерального введения; б) для приема per os в капсулах и таблетках; в) в форме суппозиториев - ректальных и вагинальных; г) в виде глазных капель; а также д) в виде кремов, гелей и мазей для наружного применения.

В этой связи, представляется целесообразным использование представленных веществ в качестве лекарственных средств для лечения широкой группы инфекционных заболеваний и профилактики их осложнений. Прежде всего, это относится к той группе инфекционных болезней, для которых принципиальными факторами этиопатогенеза хронизации и прогрессирования болезнетворного процесса являются: а) наличие стадии внутриклеточного персистирования инфектагента; б) квазивариантность генетического аппарата инфектагента, что позволяет ему "уходить" из-под иммунологического надзора поражаемых организмов; в) нарушение целесообразного, с позиций защиты организма, соотношения продукции цитокинов Th1/Th2 группами лимфоцитов-хелперов, т. е. нарушение направленности эффективного иммунного ответа организма; г) системные цитопатические, особенно гепато-, нефро и гемоцитопатические эффекты.

В свою очередь, выполненные экспериментальные и клинические исследования (см. примеры реализации изобретения 2-18) показали, что GSSG

инозин и другие представляемые препараты, обладают высокой терапевтической эффективностью именно в связи с их способностью корригировать все названные факторы этиопатогенеза инфекционных процессов, что позволяет сформулировать следующие медицинские показания их применения.

Прежде всего, для лечения инфекционных заболеваний, в отношении которых этиотропным фактором является внутриклеточный патоген, например: ДНК-овые и РНК-овые вирусы; хламидии, микоплазма и уреаплазма, отсюда для лечения острых и хронических вирусных гепатитов; СПИДа; герпетической, микоплазменной и хламидиозной инфекций.

Для лечения протозойных инфекций (малярия, лейшманиоз); для лечения инфекционных заболеваний, вызываемых грибами (микозы) и пневмоцистами, в сочетании с традиционной антибактериальной терапией в острый период и в монорежиме в рамках поддерживающей терапии.

Для лечения инфекционных заболеваний, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями, а также неспорообразующими анаэробами, содержащих в процессе этиопатогенеза этап внутриклеточного персистирования возбудителя, например, как это характерно для туберкулеза и персистирования микобактерий в макрофагах организма. В этом случае индукция апоптоза инфицированных клеток (макрофагов в том числе) препаратами группы GSSG

инозина обеспечивает поражаемость микобактерий специфической химиотерапией и системой Т-клеточного иммунитета.

При этом для лечения острых вирусных гепатитов В и С, а также микст-гепатитов предпочтительно применение GSSG

инозина, а также GSSG-инозин-монофосфата, Li₂-GSSG-инозинмонофосфата.

Для лечения хронических гепатитов В и С предпочтительно применение GSSG

инозина, а также GSSG-инозин-монофосфата (GSSG-ИМФ), а также GSSG-урацил-монофосфата (GSSG-УМФ).

Для лечения хронических гепатитов в цирротической стадии предпочтительно применение GSSG

инозина, а также GSSG

аденозина, GSSG

уридина, GSSG

тимидина и Na₂- GSSG-тимидинмонофосфата (Na₂- GSSG-ТМФ), в зависимости от особенностей морфологических изменений в печени и степени нарушения ее функциональной дееспособности.

Для лечения легочного туберкулеза предпочтительно применение GSSG

инозина, GSSG

цитозина и GSSG-5-метилцитозина.

В случае туберкулеза мочеполовой системы предпочтительно применение Na₂-GSSG-гуанозинмонофосфата (Na₂-GSSG-FMФ) и/или урацил-Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфата (УМФ-Li₂-GSSG-ГМФ).

Для лечения СПИДа, а также цитомегалоцирусной инфекции; инфекций, вызванных вирусом Эпштейцн-Барр и/или пневмоцистами, предпочтительно применение ПП

инозина, GSSG

дигидроурацила, а также Zn₂-GSSG-TMФ, Ag₂-GSSG-УМФ и уридин

GSSG

инозина, в зависимости от стадии заболевания, природы оппортунистических инфекций и наличия саркомы Капоши.

Для лечения герпетических инфекций предпочтительно применение Li₂-GSSG-ГМФ, а также D-формы Na₂-GSSG-цитoзинмoнoфocфaтa (D-форма Na₂-GSSG-ЦМФ) и D-формы GSSG

урацила.
Для лечения микозов предпочтительно применение GSSG

уридина, GSSG

4-тиоурацила и Ag₂-GSSG-ypaцилмoнoфocфaтa.

Для лечения микоплазменной инфекции предпочтительно применение GSSG

инозина, GSSG

аденозина, а также Nа₂-GSSG-аденозинмонофосфата (Na₂-GSSG-АМФ).

Для лечения хламидийной инфекции предпочтительно применение GSSG

инозина, GSSG

гуанозина, GSSG

тимина, а также Na₂-GSSG-ГМФ.

Для лечения инфекций, вызванных вирусами герпеса предпочтительно применение GSSG

инозина, Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфата, а также D-формы Nа₂-GSSG-цитозинмонофосфата и D-формы GSSG

урацила.
Для лечения вирусного гепатита А, а также кишечных инфекций (дизентерия, холера) предпочтительно применение Li₂-GSSG-ГМФ, GSSG

инозина, а также D-формы GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота).

Для лечения гриппа, а также других острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ) предпочтительно применение GSSG

инозина, GSSG

аденозина, GSSG

урацила и GSSG

тимина, в зависимости от типа вируса гриппа и вирусов, вызывающих ОРВИ.

Результаты доклинического изучения общетоксического действия заявляемых фармацевтических препаратов позволяют отнести заявляемые лекарственные формы к практически нетоксичным лекарственным веществам - 5 класс [28, 29] .

Приведенные ниже примеры реализации изобретения демонстрируют возможности получения указанных выше веществ, способы их медицинского применения, а также терапевтическую эффективность семейства разработанных новых фармацевтических препаратов (полученных на основе представленных новых индивидуальных веществ) с учетом их апробации на широкой палитре инфекционных заболеваний (Примеры реализации изобретения 1-18).

Пример 1
Способ получения (синтеза) инозил-5'-фосфорил-GSSG-Na₂
I. Общая характеристика препарата.

1. Название: 9-

-D-рибофуранозил-5'-фосфорил-N-бис-(

-L-глутамил)-L-цистинил-бис-глицин динатриевая (дилитиевая) соль.

2. Структурная формула - приведена на фиг. 29.

3. Брутто-формула: C₃₆H₅₅N₁₀O₁₉Na₂S₂P.

4. Молекулярный вес: 1072,96 (для динатриевой соли).

5. Внешний вид: белый порошок без запаха.

6. Растворимость: растворим в воде, изотоническом растворе хлорида натрия 0,9% для инъекций; нерастворим в спирте 95%, хлороформе, эфире и других органических растворителях.

7. Прозрачность и цветность раствора: раствор 0,05 г препарата в 10 мл воды прозрачен и бесцветен.

8. pH 0,1% раствора: 4.5-5.5 потенциометрически.

9. Подлинность:
а) аминокислотный анализ (6 н HCl, 110^oС, 20 ч), (допустимая погрешность 20%, для цистеина 35%), в соответствии: глицин - 2,0; глутаминовая кислота - 2,0; цистеин - 2,0;
б) ЯМР(¹Н) - спектроскопия, в соответствии "BRUKER" AM 500, 500 MHz, D₂O (см. табл. А);
в) по времени выхода соответствует стандарту.

10. Чистота (содержание основного вещества):
а) ВЭЖХ: не менее 97%
прибор BECKMAN "Gold Nouveau Chromatography Data System" Version 1.0, Diod Array Detector Module 126. Проба 20 мкл 0,1% раствора препарата, хроматографирование на колонке ULTRASPERE ODS 250х4,6 мм с обращенной С₁₈ фазой в изократическом режиме ацетонитрил - 0,1% трифторуксусная кислота (2: 98); скорость потока 1 мл/мин, детектирование при 220 нм, сканирование 190-600 нм, PDA функции - Contour Plot, 3D;
б) по аминокислотному анализу 85% (анализ по п. 9а с точной навеской);
в) ТСХ - гомогенен, анализ проводится при нанесении в полосу 5 мкл 0.1% раствора препарата; пластинки Kieselgel 60_f (Merck) 10х5 см, система: н. бутанол - уксусная кислота - вода (4: 1: 1); проявление по стандартным методикам - нингидрин и хлор/бензидин; R_f= 0,15;
г) содержание натрия (Na) по эмиссионному спектральному методу 4,0-4,8%.

11. Найденное содержание элементов, мкг/г:
Серебро (Ag) - < 1,0 (менее 0,0001%)
Алюминий (Al) - 2,0
Мышьяк (As) - < 1,0
Барий (Ва) - < 0,50
Бериллий (Ве) - < 0,05
Кальций (Са) - 7,0
Кадмий (Cd) - < 0,05
Кобальт (Со) - < 0,5
Хром (Cr) - 1,7
Медь (Cu) - < 0,5
Железо (Fe) - < 1,0
Калий (К) - < 2,5
Селен (Se) - < 2,0
Магний (Mg) - < 2,5
Марганец (Mn) - < 0,2
Молибден (Mo) - < 0,2
Натрий (Na) - 48 мг/г
Никель (Ni) - < 0,5
Свинец (Pb) - < 0,40
Стронций (Sr) - 1,9
Титан (Ti) - < 0,5
Ванадий (V) - < 0,5
Цинк (Zn) - 0,65
Сурьма (Sb) - < 0,5
Методика определения
Точная навеска пробы (около 50 мг) растворялась в 50 мл бидистиллированной воды и раствор использовался для анализа.

Содержание платины определялось количественно методом масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой на приборе модели PQe, фирмы VG Elemental, Англия. Относительная точность анализа 5%.

Содержание других элементов определяется количественно методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой на приборе модели TRACE 61E, фирмы Thermo Jarrell Ash, США. Относительная точность анализа 5%.

12. Потеря массы при сушке: 10% при сушке до постоянного веса при 100^oС в вакууме (1 мм Hg) над CaCl₂ и Р₂О₅.

II. Описание методики синтеза.

13. Химическая схема синтеза (см. фиг. 42).

I - инозин-5-монофосфат,
HOSu - оксисукцинимид,
DCC - дициклогексилкарбодиимид,
II - инозин-5-монофосфат оксисукниннмидный активированный эфир,
III - инозин-5-монофосфорил-N-глутатион.

14. Описание методики
Инозин-5-монофосфат (I) растворяют в диметилформамиде и при перемешивании и охлаждении до 0-5^oС добавляют 1 эквивалент N-оксисукцинимида и 1,2 экв. N, N-дициклогекснлкарбодиимида. Перемешивают при охлаждении 1 ч, затем 12 часов при комнатной температуре. Выпавшую дициклогексилмочевину отфильтровывают и к остатку добавляют 3 эквивалента динатриевой соли окисленного глутатиона. Перемешивание при комнатной температуре 24 часа. Далее диметилформамид упаривают и при помощи препаративной ВЭЖХ в режиме, описанном выше, продукт подвергают очистке. Контроль по УФ-спектру по полосе поглощения пуринового основания 260 нм.

Пример 2
Противовирусная активность препарата GSSG

инозин
1) Лихорадка долины Рифт (ЛДР) - острое лихорадочное заболевание вирусной этиологии, поражающее домашних животных и людей. Заболевание человека характеризуется острым началом, быстрым развитием лихорадочных симптомов, болями в суставах и конечностях, поражением глаз, симптомами геморрагического диатеза. Одним из характерных признаков ЛДР у людей и животных является поражение вирусом печени, в результате чего в этом органе наблюдаются кровоизлияния и массивный некроз паренхиматозной ткани. Заболевание сопровождается также лейкопенией.

Существующие средства и методы этиотропной и патогенетической терапии ЛДР недостаточно эффективны. Учитывая особенности патогенеза ЛДР, в частности высокий тропизм возбудителя к гепатоцитам, представлялось целесообразным оценить на экспериментальной модели этой инфекции противовирусную активность препарата GSSG

инозин.
1. Материалы и методы исследования.

1.1. Животные. В опытах использовали взрослых рандомбредных белых мышей-самцов массой 18-21 г, поставленных из питомника "Рапполово" РАМН.

1.2. Возбудитель инфекции. Для моделирования инфекции ЛДР использовали штамм вируса, изолированный в Узбекистане в 1987 г. от человека, больного геморрагической лихорадкой, из музея вирусных культур НИИ военной медицины. Инокулятом служила суспензия головного мозга новорожденных мышей, зараженных интрацеребрально указанным штаммом возбудителя. Заражающие дозы вируса в настоящем исследовании находились в диапазоне 1-20 LD₅₀, возбудитель вводили внутрибрюшинно. Период наблюдения за животными составил 14 сут.

1.3. Препараты. GSSG

инозин - лекарственная форма для инъекций (1% и 3%) - использовали в дозах 3, 10 и 30 мг/кг на одно введение. Препарат вводили внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 6-7 сут. Начало введения - за 1-2 сут до заражения, затем препарат вводили в день заражения (за 4 ч до заражения) и продолжали вводить еще 4 сут. Таким образом, курс лечения состоял из 6-7 инъекций GSSG

инозина.
Рибамидил - препарат сравнения (аналог имп. виразола, рибавнрина), производства "Олайне" (Латвия), инъекционная лекарственная форма. Рибамидил в настоящее время является одним из наиболее эффективных противовирусных химиопрепаратов, в частности, при геморрагических лихорадках. Препарат назначали подкожно по оптимальной, ранее отработанной схеме: разовая (суточная) доза была равна 100 мг/кг, сроки введения соответствовали времени назначения GSSG

инозина.
1.4. Оценка эффективности препаратов. Защитную эффективность препаратов оценивали по уровню выживаемости (%) и средней продолжительности жизни (сут) животных опытных и контрольных групп.

2. Результаты исследования
2.1. Влияние монотерапии GSSG

инозином на исход инфекции ЛДР
В первой серии экспериментов было проведено изучение эффективности GSSG

инозина при назначении его в режиме монотерапии. Препарат начинали вводить до заражения животных возбудителем; при одной схеме - за 48 ч до заражения, при двух других - за 4 ч до заражения. В целом курсы терапии состояли из 6-7 инъекций GSSG

инозина внутрибрюшинно в разовых дозах 3, 10 и 30 мг/кг. Рибамидил вводили подкожно в субтерапевтической дозе, равной 100 мг/кг, в течение 5 сут.

У животных контрольной группы инкубационный период составил 6 сут. В то же время у животных опытных групп признаки инфекции появились на 2 сут позже. Конечные результаты этого эксперимента представлены в таблице 1.

Как следует из представленных данных, летальность животных контрольной группы, зараженных вирусом в дозах 10-20 LD₅₀, составила 100%. При заражающей дозе, равной 1-2 LD₅₀, погибло 67% инфицированных мышей. Препарат сравнения рибамидил, взятый в качестве положительного контроля, защитил от летального исхода примерно одну третью часть животных, инфицированных высокой дозой вируса, и до 60% животных, зараженных низкими дозами возбудителя. Препарат GSSG

инозин на данной модели острой генерализованной вирусной инфекции также обладал определенным защитным эффектом, повышая выживаемость животных на 22-59% относительно контроля в зависимости от терапевтической дозы и тяжести инфекции.

Во второй серии экспериментов оценивали защитную эффективность комбинированного применения рибамидила и GSSG

инозина. Препараты использовали в тех же дозах и по тем же схемам, что и в первой серии. Результаты этого эксперимента представлены в табл. 2. Полученные данные свидетельствуют о том, что противовирусный эффект сочетанного использования GSSG

инозина и рибамидила при экспериментальной инфекции, вызванной вирусом ЛДР у белых мышей, выше, чем каждого препарата в отдельности.

В третьей серии опытов изучалось влияние GSSG

инозина на течение инфекции ЛДР по показателям выживаемости и наличию геморрагии на поверхности печени у опытных и контрольных мышей, вскрытых в процессе развития данной инфекции.

В опыте использовано 40 рандомбредных мышей-самцов массой 18 г, поставленных из питомника "Рапполово" РАМН. Для заражения вирус взят в дозе 4 LD₅₀, заражение осуществляли внутрибрюшинно.

GSSG

инозин вводили также внутрибрюшинно в двух дозах - 3 и 30 мг/кг в течение 7 дней. Начало терапии - сразу же после заражения животных, а затем ежедневно (1 раз в сутки). Наблюдение осуществляли в течение 10 сут (табл. 3).

Установлено, что при данной схеме назначения GSSG

инозин в дозе 3 мг/кг обладал защитным эффектом в отношении экспериментальной инфекции у белых мышей, вызванной внутрибрюшинным заражением 4 LD₅₀ вируса лихорадки долины Рифт, повышая выживаемость животных примерно в 2 раза (66% против 31% в контроле). Необходимо отметить, что общее состояние животных опытных групп было лучше, чем контрольных, в частности они значительно лучше потребляли корм в течение всего периода наблюдения, в то время как у мышей контрольной группы уже с 5 сут после заражения наблюдалась анорексия.

Вскрытие живых мышей опытных и контрольной группы производили на 5 сут (начало гибели) и 10 сут (завершение опыта) наблюдения. Для вскрытия брали внешне здоровых мышей. Исследование павших мышей не проводили. На 5-е сут было вскрыто по 1 животному из каждой группы, на 10 - по 2 из опытных групп и 3 животных из контрольной группы. При внешнем осмотре печени животных было установлено, что количество геморрагических очагов у животных опытных групп меньше, чем в контроле. В последнем случае их насчитывалось свыше 15-20 на каждой печени, а у животных опытных групп - 1-3, причем более лучший показатель отмечен у животных, получавших более высокую дозу GSSG

инозина - 30 мг/кг (очаги не выявлены).

Таким образом, новый системный цитотопротектор и иммуномодулятор GSSG

инозин обладает противовирусной активностью и повышает устойчивость белых мышей к возбудителю лихорадки долины Рифт, вызывающего у этих животных летальную генерализованную инфекцию с поражением печени и других органов. Введение GSSG

инозина внутрибрюшинно в разовых дозах 3, 10, 30 мг/кг в течение 6 сут при экспериментальной ЛДР у белых мышей, зараженных 1 -20 LD₅₀ вируса, позволяет повысить уровень выживаемости животных на 30-60%, а также существенно (в 2 и более раза) увеличить продолжительность их жизни. Назначение GSSG

инозина при экспериментальной лихорадке долины Рифт у белых мышей совместно с противовирусным препаратом рибамидилом позволяет повысить защитный эффект последнего, о чем свидетельствует увеличение уровня выживаемости (на 20%) и продолжительности жизни (в 2 раза) зараженных мышей.

2.2. Влияние препарата GSSG

инозин на течение генерализованной герпетической инфекции у белых мышей
В опытах использовали белых рандомбредных мышей-самцов массой 12-14 г, поставленных из питомника "Рапполово" РАМН.

Для моделирования герпетической инфекции использовали вирус простого герпеса, штамм Л-2 из музея НИИ военной медицины. Заражение животных проводили внутрибрюшинно инокулятом, представлявшим собой эмульсию головного мозга зараженных и заболевших новорожденных мышей.

GSSG

инозин вводили ежедневно, 1 раз в день в дозе 30 мг/кг в течение 5 сут; начало введения - за 2 ч до заражения.

Герпетическая инфекция протекала на фоне иммунодефицита, вызванного циклофосфамидом (ЦФА) - 1 группа, гидрокортизоном (ГК) - 2 группа, облучением (Обл)- 3 группа.

Препарат сравнения - циклоферон (однократно, за 2 ч до заражения в дозе 100 мг/кг).

Срок наблюдения - 14 сут.

Результаты: Проведенный эксперимент показал, что GSSG

инозин оказывает защитный эффект и в отношении ДНК-содержащих вирусов, к которым относится вирус простого герпеса. Даже в условиях летальных заражающих доз GSSG

инозин способствовал выживанию до 30% животных при полной гибели животных контрольных групп (табл. 4).

2.3. Влияние препарата GSSG

инозин на течение инфекции, вызванной вирусом венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ) у экспериментальных животных
В опытах использованы белые неинбредные мыши-самцы массой 18-20 г, поставленные из питомника "Рапполово" РАМН. Всего в опыте использовано 144 животных.

Возбудитель инфекции: вирус ВЭЛ, штамм "ТРИНИДАД", заражающие дозы - 1 и 2 LD₅₀. Вирус вводили подкожно.

Исследуемый препарат: GSSG

инозин. Препарат вводили внутрибрюшинно в дозах 3 и 30 мг/кг; сухие навески растворяли в изотоническом растворе хлорида натрия так, чтобы необходимая разовая доза содержалась в объеме 0,5 мл.

Схемы введения препарата: препарат в указанных дозах вводили по 2 схемам - профилактической (-72 ч, -48 ч, -24 ч, 0) и экстренно-профилактической (+2, +24, +48, +72, +96, +120 ч).

Препарат сравнения (положительный контроль): индуктор интерферона ЦИКЛОФЕРОН (ЦФ) в дозе 50 мг/кг, который вводили за 4 ч до заражения.

Контроль вируса: животных заражали вируссодержащим материалом, лечение отсутствовало.

Комбинированное применение препаратов: в 2 опытных группах применяли комбинированное профилактическое назначение GSSG

инозина в дозе 3 мг/кг и Циклоферона в дозе 50 мг/кг.

Наблюдение за животными: осуществляли в течение 14 сут после заражения.

Оценка эффективности препаратов: по разнице в показателях выживаемости (%) и средней продолжительности жизни (Т, сут) животных опытных и контрольных групп.

Полученные результаты представлены в табл. 5.

Как следует из полученных данных, заражающая доза вируса ВЭЛ в данном опыте оказалась даже несколько более низкой, чем расчетная, - гибель от 2 LD₅₀ возбудителя наступила у 50% животных контрольной группы, а от 1 LD₅₀ - у 33%.

В группах 1, 4 и 9 на 3 и 4 день после заражения отмечена неспецифическая гибель 1-2 животных, которая, как правило, вызывается либо токсичными препаратами, либо травмами. Специфическая летальность при ВЭЛ у белых мышей обычно регистрируется с 5 сут после заражения.

Препарат сравнения - ЦИКЛОФЕРОН, взятый в субтерапевтической дозе, равной 50 мг/кг, при 2LD₅₀ защитным действием не обладал, а при 1 LD₅₀ - защитный эффект был равен 33%.

Препарат GSSG

инозин при использовании в дозе 30 мг/кг оказывал противовирусное действие. В случае применения профилактической схемы: в этом случае его защитная эффективность была равна эффективности циклоферона (повышение выживаемости на 33%, значительное увеличение продолжительности жизни).

В опытах с комбинированной профилактикой отмечено четкое положительное действие препарата GSSG

инозин как по показателю выживаемости (повышение его на 17-30%), так и по значению показателя Т - средней продолжительности жизни (увеличение в 3 раза).

2.4. Противовирусная активность препарата GSSG

инозин
В лаборатории химиотерапии Института гриппа МЗ РФ (Санкт-Петербург) было проведено изучение противовирусной активности GSSG

инозина в отношении вируса гриппа А (НЗ 2). Противовирусную активность определяли по способности испытуемого препарата подавлять репродукцию вируса гриппа на модели переживающих фрагментов хорионаллантоисной оболочки куриного эмбриона (ХАО).

Препараты, которые вызывали снижение инфекционного титра в опыте по сравнению с контролем (индекс нейтрализации) более, чем на 2.0 lg ИД₅₀. считали активными; от 1.0 до 2.0 lg ИД₅₀ - умеренно активными и менее 1.0 lg ИД₅₀ - неактивными.

Предварительное проведенное изучение токсичности препарата GSSG

инозин показало, что даже в концентрации 1 мг/0.5 мл он не вызывал повреждающего действия на клетки ХАО. Таким образом, максимально переносимая доза (МПД)

1000 мкг/0.5 мл.

Результаты опытов по изучению противовирусной активности образцов GSSG

инозина в отношении модельного вируса гриппа А/Гонконг/1/68 (НЗ 2) представлены в табл. 6.

Как видно из представленных данных, образцы GSSG

инозина обладают выраженной противовирусной активностью (ХТИ= 5) и снижают инфекционную активность вируса.

Таким образом, представленные данные оправдывают выбор экспериментальных моделей токсических гепатитов для изучения специфической фармакологической активности GSSG

инозина с последующей экстраполяцией результатов и на вирусные поражения печени.

ВЫВОДЫ
1. Новый системный цитотопротектор и иммуномодулятор

повышает устойчивость белых мышей к возбудителю лихорадки долины Рифт, вызывающего у этих животных летальную генерализованную инфекцию с поражением печени и других органов.

2. Введение GSSG

инозина внутрибрюшинно в разовых дозах 3, 10, 30 мг/кг в течение 6 сут при экспериментальной ЛДР у белых мышей, зараженных 1-20 LD₅₀ вируса, позволяет повысить уровень выживаемость животных на 30-60%, а также существенно (в 2 и более раза) увеличить продолжительность их жизни.

3. Назначение GSSG

4. GSSG

инозин в дозе 30 мг/кг при введении в течение 5 дней повышает устойчивость иммунокомпроментированных белых мышей к ДНК-содержащему вирусу - возбудителю простого герпеса.

5. На модели нейровирусной инфекции, вызванной возбудителем венесуэльского энцефаломиелита лошадей (ВЭЛ). выявлен противовирусный эффект препарата GSSG

инозин. Профилактическая схема назначения препарата GSSG

инозин оказалась более эффективной, чем экстренно-профилактическая.

6. Исследование противовирусной активности в отношении вируса гриппа А показало, что препарат GSSG

инозин обладает выраженной противовирусной активностью (ХТИ= 5) и снижают инфекционную активность вируса.

Таким образом, уникальное свойство GSSG

инозина индуцировать механизмы апоптоза вирусинфицированных клеток и активизировать пролиферацию и дифференцировку нормальных клеток обеспечивает высокую эффективность GSSG

инозина в отношении широкого спектра вирусных инфекций.

Пример 3
Усиление экспрессии индуктора апоптоза - Fas/APO-I - рецептора (CD95) в вирусинфицированных гепатоцитах препаратом GSSG

инозин
Fas-рецепторы, обозначаемые также как антиген CD95, являются начальным звеном рецептор-опосредованного апоптозного каскада. Ткань печени богата этими рецепторами и поэтому апоптоз клеток печени обычно реализуется через Fas-зависимый механизм. Активация Fas-мембранных рецепторов в дефектных гепатоцитах приводит к гибели генетически измененных или зараженных вирусом клеток. В случае благоприятного течения заболевания, вызванного вирусом гепатита С, показано накопление Fas-рецепторов в зараженных вирусом клетках, что способствует их программированной гибели и элиминации, таким образом, зараженных клеток из ткани. Наличие в экстраклеточной части Fas-рецептора доменов, богатых реактивными цистеинами, предопределяет его активацию при резком изменении состояния SH-групп в межклеточной среде. Это могло бы происходить при изменении соотношения окисленного и восстановленного глутатиона при лечении больных препаратами группы Глутоксим. В настоящем исследовании как раз и изучено влияние лечения препаратом GSSG

инозин на экспрессию Fas-рецепторов в биоптатах печени таких больных.

Формирование групп больных для обследования с использованием биопсии печени проводили в зависимости от клинического течения заболевания, типа обнаруженного вируса и применения вместо стандартных медикаментозных средств препарата GSSG

инозин. Биопсию выполняли больным только с хроническим течением гепатита В или С. Первую биопсию проводили для оценки поражения печеночной ткани до курса лечения. Повторную биопсию выполняли через 3 (гепатит В) или 6 месяцев (гепатит С) после начала курса стандартной терапии или терапии курсами инъекций препарата GSSG

инозин.
Всего обследовано 84 больных с гепатитом В и 63 человека с гепатитом С. При морфологическом изучении биоптатов они были разделены в соответствии с классификацией по Кноделю. Таким образом, в протоколе участвовали больные с умеренно-выраженной степенью воспалительного процесса в печени, а также с умеренно-выраженными явлениями фиброзного замещения паренхимы. В крови больных на начало курса терапии методом ПЦР выявляли от 500000 до 1000000 копий/мл вирусных частиц. Всего было отобрано 78 больных с гепатитом В и 54 больных с гепатитом С.

Помимо морфологической оценки фиброзных процессов и выявления вирусных частиц проводили иммуноморфололгическнй анализ клеток, содержащих Fas-рецепторы, а также иммунохимическим методом количественно определяли содержание Fas-рецепторов в свежеприготовленном гомогенате из биоптатов. Для иммуноморфологических анализов использовали реагенты и антитела фирмы "DAKO" (ДАНИЯ), а иммуноанализ проводили с набором фирмы Oncogene (США).

Образцы фиксированных тканей из парафиновых блоков готовят в виде срезов толщиной 5 микрон, которые депарафинируются и обезвоживаются, как описано в протоколе фирмы "DAKO". Моноклональные антитела против Fas/Apo1-рецепторов узнают его на поверхности. Антитела разводили в соответствии с инструкцией (1: 150) и наносили на предметное стекло со срезом. Инкубировали во влажной камере 30 минут или 1 час в соответствии с прилагаемой прописью. Отмывали не связавшиеся антитела дважды в 50 мл PBS-буфера по 2 минуты и далее связавшиеся первичные антитела выявляют вторичными антителами, содержащими биотиновую метку, используя набор фирмы DAKO (DAKO LSAB kit k675). Связавшийся биотин выявляют стрептоавидин-пероксидазным конъюгатом в присутствии хромогенного субстрата, например диаминобензидина (ДАБ), как описано в протоколе. Соответствующие компоненты и реагенты прилагаются в наборе фирмы DAKO. Оценку соотношения клеток с выраженными Fas-рецепторами к остальным клеткам проводили в соответствии с протоколом.

Иммунноанализ Fas-антигена проводили с лизатом клеток свежевзятого биоптата. Энзимоиммуноанализ выполняли методом "сэндвича" с использованием мышиных моноклональных антител к Fas-белку человека, иммобилизованных в лунках 96-луночного планшета Oncogene (США). Инкубация лизата в течение часа вызывает связывание Fas-антигена, и при последующей отмывке связанный Fas-антиген остается в лунках. В отмытые лунки добавляли другие специфические биотинилированные антитела к Fas-антигену, и после их связывания с Fas-антигеном лунки снова промывали. Далее добавляли конъюгат стрептоавидина с пероксидазой хрена. Стрептоавидин с пришитой к нему пероксидазой хрена специфически связывается с биотином вторых антител, и после отмывки весь комплекс остается в лунках. В лунки добавляли хромогенный субстрат тетраметил бензидина (ТМБ), который под действием пероксидазы переходит из бесцветного состояния в ярко-синий окрашенный продукт, что и регистрируется спектрофотометрически. Использовали готовые наборы для анализа Fas-APO-1 фирмы Oncogene^TM Research Products (США).

К кусочку биоптата добавляли лизирующий буфер в соотношении 10: 1 и гомогенизировали. Инкубируют 30 минут на льду, периодически встряхивая. Удаляют клеточные остатки центрифугированием в течение 5 минут, 12000 об/мин в эппендорфовской центрифуге. Супернатант используют сразу или хранят при -80^oС.

100 мкл супернатанта клеточного лизата вносили в лунки планшета с иммобилизованными антителами и инкубируют 1 час при комнатной температуре. Отмывали 3 раза в отмывочном буфере. Добавляли в каждую лунку по 100 мкл детектирующих антител и инкубировали еще час при комнатной температуре. Отмывали 3 раза в отмывочном буфере. Разводили стрептоавидин-пероксидазный конъюгат 1: 400 и добавляли по 100 мкл в каждую лунку. Инкубировали 30 минут при комнатной температуре. Отмывали лунки отмывочным буфером. Добавляли по 100 мкл раствора хромогенного субстрата на 30 минут. Добавляли по 100 мкл стоп раствора (2.5 Н серная кислота) и измеряли поглощение раствора в каждой лунке на спектрофотометре или ридере для иммуноанализа при длине волны 450/540 нм. Измерение выполняли не позднее 30 минут после добавления стоп раствора. Результаты сопоставляли с контрольными образцами, приложенными в наборе. Было показано, что как у больных с гепатитом В, так и больных с гепатитом С, большой процент клеток обогащен Fas-рецепторами (табл. 7, 8).

Определение содержания Fas-рецептора в свежеприготовленном гомогенате части биотапов также свидетельствовало о накоплении Fas-рецепторов в печеночной ткани после лечения препаратом GSSG

инозин, как при гепатите В и особенно при гепатите С (табл. 9). Так в супернатанте лизата-гомогената клеток печени из свежевзятых биоптатов содержание Fas составляло менее 2 ед/мг при сопоставлении с Fas-стандартами.

Наличие вирусной инфекции приводило к достоверному повышению содержания Fas-рецепторов. При повторном анализе через 3 (гепатит В) или 6 (гепатит С) месяцев на фоне стандартного ведения больных содержание Fas-рецепторов оставалось на том же уровне. Напротив при терапии с использованием GSSG

инозина содержание Fas-рецепторов достоверно увеличивалось.

Реализация Fas-зависимого апоптоза - основной путь программируемой клеточной гибели гепатоцитов. Учитывая наличие в экстраклеточной части Fas-рецептора доменов, обогащенных реактивными цистеинами, можно предположить, что препарат GSSG

инозин способствует агрегации и, таким образом, активации Fas-рецепторов за счет волнообразного изменения соотношения восстановленных и окисленных SH-групп в пуле внеклеточного глутатиона. Более того, внутриклеточный каскад каспаз, реализующих Fas-зависимые сигналы клеточной смерти, являющихся цистеиновыми протеазами, также может активироваться препаратом GSSG

инозин.
Заключение: Активация Fas-зависимого апоптоза способствует очищению ткани от инфицированных вирусом клеток. Однако из-за вирусзависимого синтеза ингибиторов апоптоза Fas-индуцируемые процессы реализуются в неполном объеме и тогда вирусинфицированные клетки избегают апоптоза. Повышение содержания и активности Fas-рецепторов с помощью препарата GSSG

инозин обеспечивает более полную элиминацию инфицированных вирусом клеток. Эти результаты согласуется с данными о снижении или отсутствии вируса гепатита С в кровотоке после лечения препаратом GSSG

инозин.
Пример 4
Исследование ингибирования АТФ-азно/хеликазной активности вируса гепатита С GSSG

инозином, GSSG-IMP и GSSG-UMP в культуре нормальных и вирусинфицированных клеток
Оценивали способность соединений окисленного глутатиона с инозином (GSSG-I), инозинмонофосфатом (GSSG-IMP) и уридинмонофосфата (GSSG-UMP) влиять на АТФ-азно/хеликазную активность нормальных и вирусинфицированных (НЕР-2) клеток. Для этого осуществляли инкубацию этих веществ с ядерным лизатом нормальных лимфоцитов, полученных из периферической крови здоровых доноров, или с гомогенатом НЕР-2 клеток, зараженных вирусом гепатита С.

Венозную кровь от здоровых доноров собирали в гепаринизированные пробирки, тестированные на отсутствие эндотоксина. Мононуклеарную фракцию лейкоцитов крови получали центрифугированием в градиенте плотности фиколл-пака (Pharmacia). Концентрацию клеток доводили до 2

10⁶ клеток на 1 мл полной культуральной среды (RPMI 1640), содержащей 20 мМ HEPES, 2 мМ глутамина, 50 мкг/мл гентамицина и 10% эмбриональную телячью сыворотку. Жизнеспособность клеток оценивали в тесте с трипановым синим. Затем клеточную суспензию вновь центрифугировали для удаления остатков фикола со средой. Осадок суспензировали в 1 мл физиологического раствора и подвергали лизису с Nonidet 40 для получения клеточных ядер, как описано (Маниатис и др). Далее проводили лизис ядер и в лизате анализировали изменение АТФ-азно/хеликазной активности в присутствии исследуемых соединений.

К 0,2 мл лизата ядер добавляли 0,1 мл, отожженной с Р³²-меченым комплементарным олигонуклеотидом (длинною 42 нуклеотида), ДНК одноцепочечного фага М13 mp10. Предварительно подбирали концентрации ДНК фага, позволяющие визуально, при радиоавтографии, выявлять как минимальное расплетание и отделение меченого олигонуклеотида с ДИК фага, так и практически полное отделение олигонуклеотида от ДНК одноцепочечной формы фага М13.

В инкубационную смесь также вводили 0,1 мл Трис-НСl буферного раствора, содержащего АТР и Mg⁺⁺. Далее 0,1 мл физиологического раствора NaCl или 0,1 мл физиологического раствора с добавлением испытуемого композита до конечной концентрации 10, 50 и 100 мкг/мл.

После инкубации в течение 30 минут 10 мкл образца подвергали вертикальному электрофорезу в 8% полиакриламидном геле. Происходило разделение на высокомолекулярную фракцию, представляющую из себя гибрид Р³²-меченого олигонуклеотида, связанного с ДНК фага, и низкомолекулярную фракцию - высвободившийся из гибрида под действием хеликазы олигонуклеотид. Денситометрией радиоавтографов выявляли изменения соотношения связанного и высвободившегося под действием хеликазы Р³²-меченого олигонуклеотида.

При оценке хеликазной активности в лизате культуры, инфицированной вирусом гепатита С, использовали ту же методику, но вместо лизата ядер использовали лизат клеток, чтобы оценить вклад вирусиндуцированных белков цитоплазмы.

Результаты исследований представлены в табл. 10 и 11. Как видно из табл. 1, ни одно из изученных веществ в концентрации 10 мкг/мл не вызывает изменения хеликазной активности в лизате ядер донорских лимфоцитов, тогда как в концентрациях 50 и 100 мкг/мл достоверно подавляют хеликазную активность все три испытанные соединения. GSSG-UMP среди них вызывает наибольшую ингибицию АТФ-азно/хеликазной активности.

В лизате вирусинфицированных клеток хеликазная активность выше, так как расплетение 90% двухцепочечных гибридов ДНК одноцепочечного домена М13 с олигонуклеотидом достигалось при концентрации гибрида 20 пгк/мл по сравнению с 5 пкг/мл в лизате ядер донорских лимфоцитов. Эффект исследуемых соединений также проявляется при этих более высоких уровнях хеликазной активности. Достоверная ингибиция хеликазной активности наблюдалась при концентрации этих веществ как 50, так и 100 мкг/мл, но при концентрации 100 мкг/мл ингибирование АТФ-азной/хеликазной активности было выражено в большей степени. Максимальный ингибирующий эффект на АТФ-азную/хеликазную активность получен при использовании соединения GSSG-UMP.

Обсуждение и заключение:
Высокая хеликазная активность в клетках, зараженных вирусом гепатита С, по сравнению с донорскими лимфоцитами может быть связана не только с пролиферативной активностью, но и с экспрессией 3-его неструктурного белка вируса гепатита С, который является ферментом с АТФазно/хеликазной активностью. Подавление хеликазной активности не только в лизате ядер донорских лимфоцитов, но и в лизате вирусинфицированных клеток позволяет предположить, что соединения окисленного глутатиона с нуклеозидами (GSSG-I) или нуклеотидами (GSSG-IMP, GSSG-UMP) вызывает подавление хеликазной активности неструктурного белка NS3 вируса гепатита С, что препятствует синтезу вирусспецифичной РНК в зараженных клетках.

Пример 5
Лечение острого вирусного гепатита В с затяжным течением препаратом GSSG

инозин
Фамилия, имя, отчество пациента: К. В. В.

Пол: мужской
Возраст: 32 года
История болезни 661
Диагноз: Острый вирусный гепатит В, фаза репликации (PCR HBV+), затяжное течение, умеренно выраженная степень активности.

Жалобы при осмотре: На слабость, тяжесть в правом подреберье, тошноту, потливость.

Анамнез заболевания: Болен с 01.10.98, когда появились резкие боли в мелких суставах кисти, а затем боли и гиперемия, отечность во всех суставах. С 09.10.98 - потемнение мочи. Поступил для лечения в клинику вирусных инфекций. После проведенного курса лечения (см. ниже) сохраняется высокий цитолитический синдром.

Предшествующее лечение: Проведен курс дезинтоксикационной, спазмолитической, антибактериальной (канамицин 0,5

2 раза в день в/м N 7), противовоспалительной (индометацин 1 табл. , 3 раза в день) терапии.

Курс терапии препаратом

GSSG

инозин

с 29.10.98 по 21.11.98:
0 день
Внутримышечно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл ежедневно
1-14 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл
15-17-19 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 3% - 1 мл
20-24 день
Внутримышечно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл
Состояние пациента после окончания курса лечения: Значительное улучшение состояния, которое выражается в отсутствии слабости, тошноты, тяжести в нравом подреберье. Результаты лабораторных анализов - см. табл. 12, 13 и 14.

Заключение: Проведение курса терапии препаратом "GSSG

инозин" обеспечило позитивную динамику ключевых показателей состояния пациента, которая выражается в нормализации биохимических показателей, прекращении репликации HBV, персистенции Hbs Ag, улучшении общего состояния. Наблюдение в динамике (через 1 и 3 месяца после окончания курса лечения) показало стабилизацию данных показателей и позволило расценить данное состояние как ранняя реконвалесценция.

Пример 6
Лечение острого вирусного гепатита В, тяжелое течение, препаратом GSSG

инозин
Фамилия, имя, отчество пациента: А. Я. В.

Пол: женский
Возраст: 18 лет
История болезни 6006
Диагноз: Острый вирусный гепатит В, фаза репликации (PCR HBV+), тяжелое течение.

Жалобы при осмотре: На слабость, тяжесть в правом подреберье, тошноту, потливость, быструю утомляемость.

Анамнез заболевания: Больна с 12.03.99, когда появились резкие боли в мелких суставах кисти, а затем боли и гиперемия, отечность во всех суставах. С 16.09.99 - потемнение мочи. Поступила для лечения в 26 отделение больницы им. С. П. Боткина. После проведенного курса лечения (см. ниже) сохраняется высокий цитолитический синдром.

Предшествующее лечение: Проведен курс массивной дезинтоксикационной, спазмолитической, антибактериальной (гентамицин 40 мг

2 раза в день в/м N 7), противовоспалительной (индометацин по 1 табл. , 3 раза в день) терапии.

Курс терапии препаратом

GSSG

инозин

с 08.04.99 по 02.05.99:
0 день
Внутримышечно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл
1-14 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл
15-17-19 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 3% - 1 мл
20-24 день
Внутримышечно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл
Состояние пациентки после окончания курса лечения: Значительное улучшение состояния, которое выражается в отсутствии слабости, тошноты, тяжести в правом подреберье. Результаты лабораторных анализов - см. табл. 15, 16 и 17.

Заключение: Проведение курса терапии препаратом "GSSG

инозин" обеспечило позитивную динамику объективных показателей состояния пациента, а именно:
а) нормализацию биохимических показателей;
б) прекращение репликации HBV и персистенции HbsAg;
в) улучшение общего состояния.

Наблюдение в динамике (через 1 месяц после окончания курса лечения) показало стабилизацию данных показателей и позволило расценить данное состояние как ранняя реконвалесценция.

Пример 7
Лечение хронического вирусного гепатита В препаратом GSSG

инозин
Фамилия, имя, отчество пациента: К. М. Д.

Пол: женский
Возраст: 41 год
Диагноз: Хронический вирусный гепатит В (HbsAg+) фаза репликации (PCR HBV+), умеренно выраженная степень активности. Сопутствующие заболевания: хронический холецистит, хронический панкреатит. Ожирение II степени.

Биопсия печени (фон): Балочное и дольковое строение печени сохранено. Портальные тракты расширены за счет разрастания соединительной ткани с формированием порто-портальных септ. В перипортальной соединительной ткани умеренная лимфо-макрофагальная инфильтрация (3 балла). Внутренняя пограничная пластинка частично разрушена, ступенчатые некрозы (2 балла). В дольках определяются фокальные некрозы (1 балл). Внутридольковая и нерицентральная лимфоидная инфильтрация. Вакуолизация цитоплазмы гепатоцитов с дегенерацией и полиморфизмом их ядер. Определяются матово-стекловидные гепатоциты. Заключение: хронический гепатит со слабо выраженной активностью (ИГА Кноделя = 6) и умеренным фиброзом.

Биопсия печени (12 месяцев после окончания лечения): Балочное и дольковое строение печени сохранено. Портальные тракты незначительно расширены за счет разрастания соединительной ткани. В перипортальной соединительной ткани слабо выраженная лимфо-макрофагальная инфильтрация (1 балл). Внутренняя пограничная пластинка сохранена. Незначительная внутридольковая и нерицентральная лимфоидная инфильтрация. Заключение: хронический гепатит с минимальной активностью (ИГА Кноделя = 1) и слабым фиброзом.

Жалобы при осмотре: Слабость, невозможность выполнения обычной работы.

Анамнез заболевания: Находилась на стационарном лечении с 9 по 30.04.97 с диагнозом хронического вирусного гепатита В. Заболевание протекало с умеренным цитолитическим синдромом. Проведен курс дезинтоксикационной терапии. За время лечения уровень АЛТ уменьшился с 620 до 365 Е/л, уровень билирубина был при выписке в норме.

Предшествующее лечение: В связи с репликативной активностью вируса (PCR HBV+) был назначен курс ацикловира с 25.04.97 в течение 21 дня, а затем циклоферона с 26.05.97. За время лечения уровень АЛТ колебался от 421 до 168 Е/л. Активность вируса была приостановлена в течение 1 месяца, затем опять активизировалась с 15.10.97 г.

Курс терапии препаратом "GSSG

инозин" с 15.10.97:
0 день
Внутримышечно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл
1-14 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 1% - 1 мл
15 -30 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 3% - 1 мл
31-90 день
"GSSG

инозин" 3% - 1 мл три раза в неделю
Состояние пациентки после окончания курса лечения: Впервые за 7 месяцев болезни уровень биохимических показателей крови пришел в норму (АЛТ - 33 Е/л, билирубин - 9,0 мкмоль/л). Пациентка чувствует себя хорошо, отсутствует слабость, появилась нормальная переносимость физических нагрузок. Лабораторные показатели - см. табл. 18, 19, 20 и фиг. 30.

Заключение: проведение курса терапии препаратом "GSSG

инозин" обеспечило:
- прекращение репликации HBV;
- нормализацию биохимических показателей;
- нормализацию иммунологических показателей и цитокинового статуса;
- выраженное улучшение морфологических показателей (уменьшение индекса Кноделя и фиброза).

Таким образом, препарат "GSSG

инозин" является эффективным лекарственным средством для лечения хронического вирусного гепатита В.

Пример 8
Лечение хронического вирусного гепатита В, цирротическая стадия, препаратом GSSG

инозин
Фамилия, имя, отчество пациента: А. В. И.

Пол: мужской
Возраст: 59 лет
Диагноз: Хронический вирусный гепатит В, цирротическая стадия (PCR HBV+), асцит, портальная гипертензия.

Жалобы на начало курса лечения: Слабость, сохраняющийся асцит, головокружение.

Анамнез заболевания: Впервые находился в клинике по поводу ХВГВ, цирротическая стадия, асцит в 1995 году. Впоследствии лечился повторно в апреле 1997 года. Данное ухудшение с начала октября: усилилась одышка и тянущие боли в левом подреберье и эпигастрии. Принимает фуросемид 2 раза в неделю по 1 таблетке. При поступлении: состояние средней тяжести, бледные кожные покровы, язык яркий, влажный, пульс 110 уд. в мин, АД 140/90, ЧД 20 дв/мин. Слева, ниже угла лопатки притупление перкуторного тона, дыхание не проводится. Живот увеличен в размерах (объем живота 113 см) за счет асцита. На голенях отеков нет. Получил курс дезинтоксикационной, симптоматической, антибиотикотерапии. Проводилась инфузионная терапия с мочегонными препаратами, белками.

Курс терапии препаратом

GSSG

инозин

:
1 курс с 27.11.97 по 20.12.97 1% в/м 3 раза в неделю,
2 курс с 12.01.98 по 06.02.98 1% в/м 3 раза в неделю,
3 курс с 11.02.98 по 14.05.98 1% в/м 3 раза в неделю,
4 курс с 06.06.98 по 10.07.98 1% в/м 3 раза в неделю.

Состояние пациента после окончания 1 курса лечения: Состояние удовлетворительное. Отмечает значительное улучшение состояния, отмечает бодрость, гуляет. Асцит уменьшился (объем живота 89 см), адекватный диурез, отсутствие боли в левом подреберье. Клинико-лабораторные данные представлены в табл. 21. По настоянию пациента назначены повторные курсы препаратом "GSSG

инозин" по схемам. Курсы данной терапии позволили поддерживать стабильное хорошее самочувствие, а также стабильную картину клинико-лабораторных данных (табл. 21).

Заключение: Проведение курса терапии

GSSG

инозин

обеспечило:
- позитивную коррекцию лимфоцито- и тромбоцитопении;
- прекращение репликации HCV;
- отсутствие цитолитического синдрома (нормализация содержания билирубина и активности АЛТ);
- уменьшение асцита;
- повышение качества жизни: улучшение самочувствия и его стабилизацию на протяжении 8 месяцев наблюдения, которое выражается в повышении энергии, бодрости, желании активно проводить дальнейшее лечение.

Пример 9
Лечение хронического вирусного гепатита В, цирротическая стадия, препаратом GSSG

инозин
Фамилия, имя, отчество пациента: Т. И. Н.

Пол: мужской
Возраст: 48 лет
Диагноз:
Основной: Хронический вирусный гепатит В (HbsAg+), фаза интеграции (PCR HBV-), цирротическая стадия
Сопутствующий: Состояние после холецистэктомии
Жалобы на начало курса лечения: Слабость, бессонница
Анамнез заболевания: Впервые выявлен хронический гепатит В в 1999 году при обследовании по поводу оперативного лечения холецистита. После выполненной в январе 2000 года холецистэктомии, начата терапия препаратом GSSG

инозин с 26 апреля 2000 года.

Курс терапии препаратом GSSG

инозин.
1% раствор 3 раза в неделю 12 недель.

УЗИ: Фон от 18.04.00 1344. Печень нормальных размеров, структура гомогенная, мелкозернистая, контуры ровные, четкие сосуды просматриваются но периферии, структура уплотнена. Воротная вена 13 мм, v. mesenterica superior 14 мм, холедох 7 мм, селезенка нормальных размеров, структура гипоэхогенная, контуры ровные, четкие. Желчный пузырь удален. Pancreas: головка 22 мм, тело 16 мм, хвост 20 мм, контуры ровные, структура гомогенная, мелкозернистая, эхогенность равна печени. Почки нормальных размеров, бобовидной формы. конкрементов нет. Заключение: диффузные изменения печени.

Состояние пациента после окончания курса лечения: отмечает значительное улучшение и возможность выполнять свои профессиональные обязанности в полную силу. Проведенный курс лечения позволил улучшить клинико-лабораторные показатели и качество жизни пациента (табл. 22, 23 и 24).

Заключение: проведение курса терапии препаратом GSSG

инозин обеспечило:
- коррекцию тромбоцитопении;
- прекращение цитолитического синдрома (нормализация содержания билирубина и активности АЛТ);
- стимуляцию клеточного иммунитета (повышение содержания CD3+, CD4+, CD16/56);
- выраженное улучшение портального кровообращения по данным доплерографии.

Пример 10
Лечение больного с хроническим вирусным гепатитом С и хроническим вирусным гепатитом В препаратом GSSG

инозин
Фамилия, имя, отчество пациента: З. В. В.

Пол: мужской
Возраст: 18 лет
История болезни: 1043
Диагноз: Хронический вирусный гепатит С, фаза репликации (PCR HCV+), умеренно выраженная степень активности; хронический вирусный гепатит В, фаза интеграции (PCR HBV-), наркотическое опьянение, наркомания.

Биопсия печени (фон): Балочное и дольковое строение печени сохранено. Портальные тракты незначительно расширены за счет разрастания соединительной ткани. В перипортальной соединительной ткани умеренная лимфо-макрофагальная инфильтрация (3 балла). Внутренняя пограничная пластинка сохранена. В некоторых дольках определяются тельца Каунсильмена (1 балл). Внутридольковая и перицентральная лимфоидная инфильтрация. Вакуолизация цитоплазмы и некоторых ядер гепатоцитов. Заключение: хронический гепатит с минимальной активностью (ИГА Кноделя = 4) и слабым фиброзом.

Биопсия печени (12 месяцев после окончания лечения): Балочное и дольковое строение печени сохранено. Портальные тракты не изменены. В перипортальной соединительной ткани слабая лимфо-макрофагальная инфильтрация (1 балл). Внутренняя пограничная пластинка сохранена. В некоторых дольках определяются тельца Каунсильмена (1 балл). Внутридольковая и перицентральная лимфоидная инфильтрация. Вакуолизация цитоплазмы и некоторых ядер гепатоцитов. Заключение: хронический гепатит с минимальной активностью (ИГА Кноделя = 2).

Жалобы при осмотре: Слабость, сильные боли в правом подреберье, коленных суставах, позвоночнике, суставах кисти.

Анамнез заболевания: Заметил боли в суставах коленей, позвоночнике в начале августа 1997 года. При обследовании крови было обнаружено повышение уровня билирубина до 34,0 мкмоль/л и АЛТ - 86 Е/л. При стационарном обследовании с 15.08.97 были определены анти HCV IgG и репликативная активность вируса гепатита С.

Анамнез жизни: Применять наркотики начал применять с 14 лет. Внутривенное их введение проводил с 17 лет. На момент осмотра доза героина составляет около 2 г в день.

Предшествующее лечение: Не проводилось.

Курс препаратом

GSSG

инозин

с 15.08.97:
0 день
Внутримышечно "GSSG

инозин" 3% - 1 мл
1-14 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 3% - 1 мл
15-30 день
Внутривенно "GSSG

инозин" 3% - 1 мл
Курс проведен в течение 3 месяцев.

Состояние пациента после окончания курса лечения: Состояние удовлетворительное. Отмечает значительное уменьшение слабости, отсутствие боли в правом подреберье, в суставах. Со слов пациента, выход из состояния наркотической абстиненции прошел практически безболезненно и менее длительно. Отмечается нормализация биохимических показателей и отсутствие репликативной активности вируса (см. табл. 25, 26, 27 и фиг. 31).

Заключение: Проведение курса терапии препаратом

GSSG

инозин

обеспечило положительную динамику, которая выражается в нормализации биохимических, серологических показателей, прекращении репликации HCV. Иммунологические показатели и данные цитокинового статуса коррелируют с купированием инфекционного процесса и отсутствием репликации вируса. При исследовании лимфоцитов периферической крови пациента методом проточной цитометрии с использованием моноклональных антител к FasAg (CD95+) после лечения показано увеличение CD95⁺-клeтoк, что свидетельствует об активации процесса программируемой клеточной гибели вирусинфицированных клеток. При наблюдении в динамике через месяц и три месяца после окончания курса лечения отмечается стабилизация данного состояния. При повторной биопсии через 12 месяцев после окончания лечения отмечается уменьшение индекса Кноделя и отсутствие фиброза.

Сопутствующее наркотическое опьянение и состояние абстиненции при применении

GSSG

инозин

купировалось в более ранние сроки и проходило с меньшими для пациента страданиями.

Таким образом, курс лечения препаратом

GSSG

инозин

хронического гепатита С с репликативной активностью и сопутствующей наркоманией позволил достигнуть следующих результатов:
- нормализация биохимических показателей крови;
- нормализация гематологических показателей;
- отсутствие репликативной активности вируса С;
- улучшение морфологических показателей состояния печеночной паренхимы;
- нормализация иммунологических показателей и цитокинового статуса;
- индукция апоптоза вирусинфицированных клеток;
- стабильный терапевтический эффект.

Пример 11
Лечение хронического вирусного гепатита С в стадии цирроза препаратом GSSG

инозин
Фамилия, имя, отчество пациента: Г. Н. В.

Пол: женский
Возраст: 48 лет
Диагноз: Цирроз (Чайлд С), хронический вирусный гепатит С.

Асцитический синдром, варикозное расширение вен пищевода и кардии желудка, стадия II.

Жалобы на начало курса лечения:
Слабость, бессонница, артралгии, кожный зуд, кровоточивость десен
Анамнез заболевания: Хронический гепатит С в цирротической стадии впервые выявлен в 1993 году при случайном обследовании. Асцит начал нарастать в 1999 году до начала терапии GSSG

инозином.
Курс терапии препаратом GSSG

инозин.
1% раствор 3 раза в неделю 12 недель.

Состояние пациента после окончания курса лечения: Состояние удовлетворительное. Отмечает значительное улучшение состояния (см. табл. Б), выполняет свои профессиональные обязанности в полном объеме. Проведенный курс лечения позволил улучшить клинико-лабораторные показатели и качество жизни пациента (см. табл. 28, 29 и 30).

Заключение: проведение курса терапии GSSG

инозином обеспечило:
- минимальные проявления асцитического синдрома;
- улучшение портального кровообращения по данным доплерографии;
- отсутствие доплерографических показателей портальной гипертензии (отсутствие сплено-ренальных анастомозов);
- практически полную нормализацию содержания лимфоцитов и тромбоцитов;
- повышение качества жизни.

Пример 12
Терапевтические эффекты препарата GSSG

инозин у больного СПИДом
Больной: М. В. М.

Пол: мужской
Возраст: 50 лет
Диагноз основной: СПИД. По классификации СДС Атланта: С3.

Диагноз сопутствующий: Саркома Капоши. Туберкулез внутригрудных лимфатических узлов, цитомегаловирусная инфекция, кандидоз слизистой ротовой полости, простой герпес, экзема, нейросифилис.

ВИЧ-инфекция диагностирована в 1994 г. Иммуноблотинг положительный по р24, р17, р25, р18, р55, р40, р68, р58, р34, gp120, gp160.

Исходное состояние: Тяжелое, температура 38.5^oС, сохраняющаяся больше месяца, индекс Карновского - 50, прогрессирующее ухудшение иммунологических показателей. Резкая лейкопения (1,8

10¹²) и лимфопения (570) исключали применение препаратов группы AZT и других противовирусных препаратов.

Курс лечения препаратом "GSSG

инозин (D-форма)":
"GSSG

инозин" 3% - 1 мл 3 раза в неделю внутримышечно 12 недель.

Лечебный эффект через месяц лечения:
- температура тела 37,5^oС;
- улучшение качества жизни - индекс Карновского 70;
- наметилась тенденция к нормализации иммунологических показателей (количество лимфоцитов возросло с 570 до 832, отношение CD4⁺/CD8⁺ возросло с 0,71 до 0,84);
- вирусная нагрузка 89000 копий/мл.

Лечебный эффект через 2 месяца лечения:
- температура тела 36,9^oС;
- улучшение качества жизни - индекс Карновского 75;
- сохраняется тенденция к нормализации иммунологических показателей (количество лимфоцитов 736, отношение CD4⁺/CD8⁺ - 0,87; CD4⁺ - 199; CD8⁺ - 228);
- вирусная нагрузка 56000 копий/мл.

Лечебный эффект по окончании лечения:
- температура тела 36.6^oС;
- улучшение качества жизни - индекс Карновского 90;
- сохраняется тенденция к нормализации иммунологических показателей (количество лимфоцитов 1350, отношение CD4⁺/CD8⁺ - 0,87; CD4⁺ - 527; CD8⁺ - 608);
- вирусная нагрузка 10000 копий/мл.

Лабораторные показатели - см. табл. 31 и 32.

Пример 13
Терапевтические эффекты Zn₂-GSSG-IMP¹ у больного СПИДом
(Zn₂-GSSG-IMP - цинковая соль GSSG, ковалентно связанная с инозин-монофосфатом)
Больной: Я. О. И.

Пол: женский
Возраст: 40 лет
Диагноз основной: ВИЧ-инфекция в стадии СПИД. По классификации СДС Атланта-С2. Хронический рецидивирующий простой герпес. Энцефалопатия. Хронический вирусный гепатит В (HbsAg+) в стадии интеграции.

При поступлении в клинику инфекционных заболеваний 12.03.99 (отделение СПИД) предъявляет жалобы на слабость, быструю утомляемость, повышенную потливость, особенно по ночам, похудание, снижение памяти, болезненность в лучезапястных суставах, в подколенной ямке слева.

Объективно: Состояние удовлетворительное. Питание понижено. Кожные покровы бледные. Шейные и подмышечные лимфоузлы до 1 см в диаметре. Слизистые ротовой полости бледные. Над легкими перкуторный звук не приглушен. При аускультации - жесткое дыхание, сухие рассеянные хрипы. Живот мягкий, чувствительный в эпигастральной области, в правой подвздошной области определяется небольшое уплотнение. Отмечается акроцианоз костей рук. Па губах видны рубцы от множественных герпетических высыпаний. Индекс Карновского -75.

Курс лечения препаратом " Zn₂-GSSG-IMP" с 26.03.99:
"Zn₂-GSSG-IMP" 3% - 1 мл 3 раза в неделю внутримышечно - 8 недель.

Через месяц лечения препаратом "Zn₂-GSSG-IMP": Пациентка отмечает уменьшение слабости, потливость по ночам исчезла. Прибавила в весе 1.8 кг. Уровень лимфоцитов в крови 1276. CD4⁺ - 319, CD8⁺ - 370. Индекс Карновского 80.

После проведенного курса лечения препаратом "Zn₂-GSSG-IMP": Жалоб не предъявляет. Состояние удовлетворительное: исчезла потливость, стала более энергичная. Кожные покровы стали менее бледными. Прибавила в весе 2,5 кг. Уровень лимфоцитов в крови 2295, CD4⁺ - 574, CD8⁺ - 597. Индекс Карновского 90.

Конкретная динамика показателей иммунограммы и гемограммы отражена в табл. 33 и 34.

Выводы
Курс лечения препаратом "Zn₂-GSSG-IMP" в режиме монотерапии обеспечил:
- снижение вирусной нагрузки;
- повышение качества жизни пациента;
- улучшение иммунологических показателей;
- стабилизацию гематологических показателей.

Пример 14
Терапевтическая эффективность GSSG

инозина при хламидиозной инфекции
Больной: С. И. М. , 29 лет.

Диагноз: Мочеполовой хламидиоз, протекающий с системными проявлениями. Хронический везикулопростатит. Хронический синовиит правого коленного сустава, хронический блефароконъюнктивит.

Анамнез: Больной в течение 8,5 лет страдает хроническим простатитом. Лечился 4 раза с помощью современных антибиотиков (макролиды, фторхинолоны, доксициклин). Последние 2 курса лечения проводились на фоне иммунотерапии (Циклоферон, Виферон). В 1999 г. последний раз лечился в клинике урологии Санкт-Петербургского мед. Ун-та, но через 3 мес. развился рецидив заболевания в виде обострения хронического простатита и синовиита правого коленного сустава; беспокоили также резь в глазах, светобоязнь, выделения из глаз после сна. По этому поводу лечился у офтальмолога (мазь с тетрациклином, эритромицином), но положительного эффекта не наблюдалось. С марта 1992 г. получал: бициллин, канамицин, доксициклин, тетрациклин, трихопол, тинидазол, метациклин, сумамед, цифран, заноцин, абактал, рулид, циклоферон, виферон.

В сентябре 2000 г. больной по рекомендации специалистов клиники военной травматологии и ортопедии ВМА был направлен на консультацию в клинику инфекционных болезней ВМА, где было проведено углубленное обследование и комплексная терапия с использованием препарата GSSG

инозин + антибиотики. Этиотропная терапия проводилась после определения антибиотикочувствительности хламидий, выделенных на культуре клеток из эякулята и синовиальной жидкости сустава.

При обращении: состояние удовлетворительное, жалобы на общую слабость, недомогание, длительную (более 1,5 мес. ) субфебрильную температуру. периодические боли в промежности и в области правого коленного сустава, а также отек мягких тканей и гиперемию кожных покровов в области сустава.

В секрете предстательной железы - признаки хронического простатита. При пункции правого коленного сустава получено 8 мл мутной синовиальной жидкости. После пункции отек несколько уменьшился.

Прямым иммунофлюоресцентным методом (ПИФМ) в секрете предстательной железы и синовиальной жидкости обнаружены ретикулярные и элементарные тельца С. Trachomatis в значительном количестве. Титр антител в сыворотке крови к С. trachomatis (в НИФМ - непрямом иммунофлюоресцентном методе) равен 1: 128, в синовиальной жидкости - 1: 64. Культура возбудителя выделена в чистом виде на культуре клеток из эйякулята и суставной жидкости, определена чувствительность к антибиотикам.

Динамика основных лабораторных показателей представлена в табл. 35.

Заключение: Применение препарата

GSSG

инозин

по схеме: 1 мл 3% р-ра 1 раз в 2 сут в течение 10 сут (5 инъекций) до антибиотикотерапии и аналогичным образом - в ходе антибиотикотерапии (8 сут - максаквин и 8 сут - вильпрафен) - обеспечило стойкий клинический и бактериологический эффект. Санация организма от хламидий установлена по основным показателям непосредственно после лечения, а по данным ПЦР - через 3 мес после курса терапии. GSSG

инозин способствовал сокращению сроков нормализации основных иммунологических показа гелей (Т- и В-лимфоциты, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-8, ИФН-

Пример 15
Терапевтическая эффективность GSSG

урацила при микст-инфекциях: герпетической и хламидиозной
Больная: Г-н М. М.

Диагноз: Хламидиоз. Генитальный герпес. Хронический пиелонефрит
Анамнез: В течение 5 лет страдает хроническим пиелонефритом и хламидийно-герпетической инфекцией. Лечилась всеми видами антибиотикотерапии (фторхинолоны, макролиды, тетрациклины), в том числе в сопровождении с препаратами типа роферон, циклоферон. Применение циклоферона вызвало токсические проявления в виде лихорадки (t до 40^oС), алопеции, кожных высыпаний. В 1996 году лечилась в урологическом отделении Центральной Медико-санитарной части 122 по поводу обострения хронического пиелонефрита.

За 5 лет постоянного лечения титр антител к хламидии трахоматис снижался до 64. Через месяц после окончания каждого лечебного курса возрастал выше 150.

С декабря 1993 г. по август 1997 года получала следующие препараты:
Трихопол, Тинидазол, Бициллин, Тимоген, Суммамед, Метациклин, Далацин С, Марверон, Доксициклин, Цифран, Заноцин, Макропен, Клотримазол, Реоферон, Абактал, Ровамицин, Таривид, Рулид.

В апреле 1999 г. больная обратилась для лечения на кафедру урологии и андрологии Медицинской Академии Последипломного Образования, где проведена терапия новым препаратом GSSG

урацил в сочетании с антибиотикотерапией.

Состояние при обращении удовлетворительное, жалобы на слабость, периодические боли в коленных суставах и поясничной области, на выделения в виде белей.

В моче слабая лейкоцитурия. В крови обнаруживаются аутоантитела к тканям почек в титре 1: 4 (Реакция связывания комплемента "на холоду" по В. И. Иоффе и К. М. Розенталь).

Динамика показателей периферической крови представлена в табл. 36.

Протокол лечения:
- 2 курса антибиотикотерапии (доксициклин по 0,1 г 2 раза в день в течение 10 дней 3-12 дни лечения; клацид по 0.25 2 раза в день в течение 10 дней 21-30 дни лечения);
- препарат GSSG

урацил по схеме (1-30 дни лечения).

Через месяц лечения: Состояние хорошее. Жалоб не предъявляет. Показатели крови и мочи в норме.

Заключение: применение препарата GSSG

урацил обеспечило:
- клиническое выздоровление больной;
- отсутствие признаков наличия хламидиоза и герпеса по лабораторным данным (бактериологический анализ, ПЦР, серологические исследования);
- отсутствие аутоантител к тканям почек, нормализацию показателей анализа мочи.

Пример 16
Терапевтические эффекты препарата Li₂-GSSG-ИМФ) у больного туберкулезом органов дыхания
Больной: Н. Ф. В.

Пол: мужской
Возраст: 30 лет
Диагноз основной: Инфильтративный туберкулез верхней доли левого легкого в фазе распада и обсеменения, БК(+).

Диагноз сопутствующий: Хронический бронхит в фазе обострения.

Анамнез: Туберкулез легких выявлен в местах лишения свободы в мае 1998 г. Лечение в тюремной больнице с мая по август 1998 года без эффекта, процесс прогрессировал. После освобождения в августе 1998 г. продолжил лечение в туберкулезном стационаре Санкт-Петербурга. Однако улучшения достигнуть не удалось, и на октябрь 1998 сохранялось массивное бактериовыделение, увеличилась полость распада в легочной ткани. Установлена резистентность микобактерий туберкулеза к стрептомицину и изониазиду.

Исходное состояние: Средней тяжести, вечерняя температура 37.5^oС, ночная потливость, слабость, кашель с отхождением гнойной мокроты, индекс Карновского - 50, прогрессирующее ухудшение иммунологических показателей. Лейкоцитопения, лимфоцитопения, моноцитоз, палочкоядерный сдвиг нейтрофилов. В мокроте БК (+) методом микроскопии до 100 в поле зрения. Рентгенологически в верхней доле левого легкого - инфильтрация с полостью распада 4х3 см и очагами отсева в нижнюю долю левого легкого.

Курс лечения препаратом "Li₂-GSSG-ИМФ" как сопровождение противотуберкулезной химиотерапии (изониазид, рифампицин, пиразинамид, амикацин).

"Li₂-GSSG-ИМФ" 3% - 1 мл внутримышечно 1 раз в день, 5 раз в неделю, длительность курса 3 месяца.

Лечебный эффект через месяц лечения:
- нормализация температуры тела;
- исчезновение ночной потливости;
- улучшение качества жизни - индекс Карновского 70;
- больной прибавил в весе 4 кг;
- улучшение гематологических показателей, наметилась тенденция к повышению уровня IL-12, нормализации соотношения Th₁/Th₂;
- уменьшилось бактериовыделение (БК+ 2-4 в поле зрения методом микроскопии), мокрота приобрела серозный характер.

Лечебный эффект через 2 месяца лечения:
- температура тела 36,7^oС;
- улучшение качества жизни - индекс Карновского 75;
- сохраняется тенденция к нормализации иммунологических показателей;
- прекращение бактериовыделения (БК-методом микроскопии).

Лечебный эффект по окончании лечения:
- температура тела 36,6^oС;
- улучшение качества жизни - индекс Карновского 90;
- нормализация иммунологических показателей;
- отсутствие бактериовыделения (трехкратно БК-методом флотации);
- рентгенологически: закрытие полости распада в верхней доле левого легкого с исходом в линейный рубец (см. фиг. 31 и 32).

Изменение основных лабораторных параметров приведены в табл. 37.

Заключение: применение препарата "Li₂-GSSG-ИМФ" в составе комплексной противотуберкулезной терапии в течение 3,5 месяцев обеспечило:
- прекращение бактериовыделения;
- заживление полости распада в легочной ткани;
- преодоление лекарственной резистентности микобактерий туберкулеза.

Эти эффекты не были достигнуты предшествующей традиционной химиотерапией за 6 месяцев лечения.

Пример 17
Гепатопротекторная эффективность препарата

Экспериментальное исследование гепатопротекторной активности препарата GSSG

инозин
Изучение гепатопротекторной активности препарата GSSG

инозин проведено на доступных и воспроизводимых моделях токсического гепатита, так как известно, что механизмы гепатотоксичности - воспаление, цитолиз и холестаз - универсальны и неспецифичны вне зависимости от агента, индуцирующего повреждение печени. Для сравнения использовали известные гепатопротекторы "Эссенциале" (Essentiale, Rhone-Poulenk Rorer) и "Легалон" (Legalon, Madaus).

При моделировании токсического гепатита применяли дихлорэтан и ацетаминофен. Оба соединения вводили в желудок крысам-самцам стандартной массы (160-170 г) через металлический атравматический зонд в дозах 500 и 400 мг/кг соответственно 1 раз в день на протяжении 4 дней в смеси с оливковым маслом (1: 1). Кроме того, использовали сочетанное введение дихлорэтана и ацетаминофена в дозах 300 и 250 мг/кг соответственно. Через 10 дней у всех экспериментальных животных по морфологической картине печени подтверждалось наличие токсического гепатита. С этого времени на протяжении 10 дней экспериментальным животным вводили 1 раз в сутки GSSG

инозин (5 мг/кг, в/м) и препараты сравнения: Эссенциале-ампулы (1 мл/кг в/в в хвостовую вену) и Легалон (силимарин) (100 мг/кг в/ж).

Об эффективности лечения судили по клинической картине, динамике массы тела, относительной массе печени, содержанию билирубина, активности трансаминаз, фосфатаз, уровню церулоплазмина, общего белка, липидов сыворотки крови, содержанию гликогена, глутатиона, SH-групп, цитохромов в печени, нагрузочным пробам (гексеналовый тест, бромсульфоалеиновая проба) и гистологической картине печени.

Установлено, что зависимость от вида токсиканта, гибель подопытных животных к 20 дню эксперимента колебалась от 40% (в группе затравленных дихлорэтаном) до 80% (в группе животных, подвергшихся сочетанному воздействию дихлорэтана и ацетаминофена) (фиг. 34, 35 и 36). Наиболее выраженное поражение печени наблюдалось при комбинированной интоксикации двух вышеперечисленных химических агентов, что подтверждено изменением биохимических показателей функционального состояния гепатоцитов: повышением активности трансаминаз, фосфатазы, лактатдегидрогеназы, снижением содержания в сыворотке общего белка, липидов, резерва сульфгидрильных групп крови, повышение уровней билирубина и церулоплазмина, значительным замедлением экскреции бромсульфалеина.

Наличие токсического гепатита подтверждалось морфологическими исследованиями ткани печени.

У животных, погибших или эфтаназированных через 1 сутки после перорального введения дихлорэтана, наблюдались признаки острого токсического гепатита. При микроскопии выявлено: цитоплазма гепатоцитов густо заполнена мелкими и крупными каплями жира. Жировая дистрофия печени носила диффузный характер, наблюдалась вакуолизация цитоплазмы гепатоцитов, набухание клеточных тел.

Аналогичная картина наблюдалась при введении ацетаминофена. В случае комбинированного поражения морфологическая картина биоптатов печени носила более выраженный и тотальный характер. Помимо описанных выше изменений печеночной паренхимы наблюдались очаги дольковых колликвационных некрозов.

При использовании сочетанной модели интоксикации животных в печени более существенно уменьшались запасы гликогена, восстановленного глутатиона, уровни детоксицирующих цитохромов. Поражение печени характеризовалось снижением ее функциональной активности в виде уменьшения скорости распада гексенала и экскреции бромсульфалеина. Применение препарата GSSG

инозин было более эффективным, нежели применение легалона и эссенциале.

Использование препарата GSSG

инозин значительно улучшало общее состояние животных, предотвращало их гибель и положительно сказывалось на морфометрических, биохимических и функциональных показателях, отражающих состояние метаболизма печеночной ткани.

Применение препарата GSSG

инозин обеспечило 100%-ную выживаемость экспериментальных животных при 80%-ной гибели в контроле; 45%-ной смертности в группе, получавшей легалон, и 30%-ной при лечении эссенциале (фиг. 36).

При исследовании биохимических показателей определялись явные достоверные признаки поражения печени: нарушение белоксинтезирующей и липидсинтезирующей функций, активация цитолитического синдрома и холестаза в условиях формирования токсического гепатита при сочетанном воздействии на организм вышеперечисленных токсикантов - дихлорэтана и ацетаминофена. Лечебное применение препарата GSSG

инозин способствовало восстановлению основных функций печени и нормализации всех основных показателей, характеризующих токсическое поражение печени (см. табл. 38, 39).

Показатели, непосредственно характеризующие состояние метаболизма печени (запасы гликогена, уровень глутатиона, активность микросомальных ферментов, относительная масса печени) у животных, получавших GSSG

инозин, практически не отличались от фоновых значений (см. табл. 40).

Таким образом, представленные результаты позволяют считать, что препарат GSSG

инозин является эффективным гепатопротектором. При курсовом 10-дневном применении у крыс в дозе 5 мг/кг препарат оказывал выраженное лечебное действие при комбинированных поражениях печени дихлорэтаном и ацетаминофеном, нормализуя негативные изменения биохимического статуса и морфологические показатели печени. Лечебное использование препарата GSSG

инозин обеспечило 100%-ную выживаемость экспериментальных животных при 80%-ной гибели в контроле; 45%-ной гибели животных, получавших легалон, и 30%-ной смертности на фоне введения эссенциале (см. табл. 38, 39 и 40).

Пример 18
Терапевтическая эффективность GSSG

инозина при экспериментальном токсическом циррозе печени
В опытах использовали нелинейных белых крыс-самцов массой 180-240 г, поставленных из питомника "Рапполово" РАМН, всего - 60 животных.

Для получения экспериментального цирроза печени у белых крыс применена методика Jezequel, A. M. et al. (1989) [27] , в соответствии с которой животным внутрибрюшинно вводили 1% раствор диметилнитрозоамина (ДМНА) в разовой дозе 1,0 мл/кг в течение 3 последовательных дней недели, затем следовал 4-дневный перерыв, после чего инъекции возобновлялись. ДМНА разводили физраствором. Для получения выраженного цирроза печени достаточно было провести 4 таких цикла инъекций.

Для гистологического исследования у животных после эфтаназии под наркозом иссекали образцы ткани печени из центральной и правой боковой долей. Фрагменты печени фиксировали смесью формалина, спирта и уксусной кислоты. Готовили парафиновые срезы толщиной 4 мкм, которые окрашивали гематоксилин-эозином и по ван Гизон.

С целью объективизации оценки влияния исследуемых препаратов на развитие соединительной ткани в печени при экспериментальном токсическом повреждении ДМНА проводили измерение площади, занимаемой соединительной тканью, в пределах 5-7 печеночных долек на 6 срезах печени. Морфометрии подвергали препараты, окрашенные по ван Гизон, на которых коллагеновые волокна были окрашены в красный цвет. С помощью компьютерной обработки сканированное изображение среза печени при увеличении х200 подвергали бинаризации по цвету с выделением окрашенных в красный цвет коллагеновых волокон. По числу пикселей, формирующих выделенные объекты, рассчитывали относительную площадь, занимаемую в ткани печени развившимся коллагеном (соединительной тканью).

Результаты измерений подвергали статистической обработке. Достоверность различий средних выборок осуществляли при помощи критерия Стьюдента при уровне значимости р= 0,05.

Оценку морфологических изменений проводили на препаратах со "слепой" маркировкой, снижающей риск аггравации результатов эксперимента.

Наличие патологического процесса и эффективность препаратов оценивали по клиническим признакам (вес животных, поедание корма, внешний вид, наличие асцита, подвижность, гибель), а также по патоморфологическим признакам при вскрытии животных и последующем гистологическом изучении препаратов печени.

После формирования патологического процесса, т. е. через 4 нед. после начала введения им ДМНА, все животные случайным образом были разбиты на 4 группы по 12 особей. Животные группы 1 не получали лечения, животные группы 2 - получали физраствор, 3 - GSSG

инозин, 4 - препарат сравнения - Гептрал. Группу 5 (12 животных) составили интактные животные той же популяции для морфометрических исследований.

Каждая группа животных была разбита на две подгруппы, одной из них препараты вводили в течение 3 недель, после чего провели оценку эффективности морфологическим методом; животных второй подгруппы лечили в течение 6 недель. Препараты вводили через день внутримышечно в мышцу бедра.

Полученные результаты свидетельствуют о следующем.

Первую экспериментальную группу (12 крыс) составили особи, не получавшие после завершения курса введения ДМНА никакого лечения. Эти животные отставали в весе (см. табл. 41), в течение 3-4 недель они были малоподвижны, плохо поедали корм, имели тусклую и свалявшуюся шерсть. При морфологическом и гистологическом исследовании, проведенном через 3 недели после прекращения введения ДМНА (6 животных), у этих особей отмечено наличие асцита и признаков портальной гипертензии. Изучение препаратов, окрашенных по ван Гизон, позволило определить созревание соединительной ткани в септах, вследствие чего последние приобретали регулярное строение. Просветы центральных вен, расположенных в узлах септ, были часто окклюзированы и замещены соединительной тканью. Коллатеральное кровообращение осуществлялось по расширенным измененным синусоидам, заключенным в упорядоченный регулярный волоконный остов септ. Печеночные клетки подвергались дистрофическим изменениям. На препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, выявлялось большое число клеток с признаками выраженной белково-гидропической дистрофии. Ядра гепатоцитов были частично пикнотизированы, а в ряде случаев - лизированы.

По сравнению с описанными выше изменениями, соответствующими 3-недельному сроку после введения токсического агента, наблюдение за животными (6 особей) в течение 6 нед. позволило установить отсутствие самопроизвольной регрессии патологических изменений. Так, при окраске по ван Гизон у животных через 6 нед. после окончания применения ДМНА отмечены утолщенные соединительно-тканные септы с расширенными венозными коллатералями, заполненными кровью. При окраске гематоксилин-эозином показано сохранение интенсивности дистрофических изменений в печени в виде зернистой и белково-гидропической дистрофии гепатоцитов.

Вторую контрольную группу (12 крыс) составляли особи, получавшие физиологический раствор. При ежедневном наблюдении за животными этой группы установлено, что они так же, как и животные группы 1, в течение длительного срока (3-4 недели) после завершения введения ДМНА плохо поедали корм, отставали в весе, имели плохой внешний вид - свалявшуюся грязную шерсть; они были вялыми, малоподвижными. При морфологическом и гистологическом исследовании установлено, что 3-недельное введение 0,9% раствора хлорида натрия не влияло на процесс формирования псевдодолек. Несмотря на назначение физраствора, развивались кровоизлияния из расширенных микрососудов, что приводило к нарушению структуры долек, дистрофии и гибели гепатоцитов с лизисом ядер клеток. Даже при 6-недельном введении 0,9% раствора хлорида натрия отчетливо сохранялись центро-центральные соединительно-тканные септы, ограничивающие портальные дольки. В септах и на местах разрушенных центральных вен были видны расширенные венозные коллатерали. При окраске гематоксилин-эозином отмечали выраженную белково-гидропическую дистрофию гепатоцитов с активацией процесса фиброгенеза.

Лечение животных группы 3 (12 крыс) препаратом GSSG

инозин приводило к быстрому улучшению их состояния. При ежедневном наблюдении уже через 7 сут после начала терапии этим препаратом отмечено повышение физической активности, увеличение потребления корма, улучшение внешнего вида, повышение веса практически всех подопытных крыс этой группы. На гистологических препаратах печени крыс, получивших GSSG

инозин в течение 3 недель, отмечено снижение количества соединительно-тканных септ, коллагеновые волокна распределялись преимущественно перисинусоидально в виде тонких нитей и в перипортальной зоне долек. При окраске препаратов гематоксилин-эозином отмечали значительное снижение количества клеток с белково-гидропической дистрофией. Макрофагальные элементы были заметно активированы. Введение препарата GSSG

инозин в течение 6 недель сопровождалось существенным снижением количества соединительной ткани. Признаки интраорганного окольного кровообращения отсутствовали. При этом курсе лечения на препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, отмечено статистически значимое снижение количества дистрофических изменений в гепатоцитах и клеток с лизированными ядрами. Дистрофические изменения представлены преимущественно в виде зернистой и гиалиново-капельной дистрофии отдельных гепатоцитов. На препаратах наблюдалась резорбция соединительно-тканных септ активированными фагоцитами. Количество лимфоцитов в соединительной ткани было увеличено.

Наблюдение за животными группы 4 (12 крыс), получавших лечение Гептралом, свидетельствовало о том, что в течение длительного времени (3 недели от начала терапии) их состояние не улучшалось: они плохо поедали корм, не набирали вес, имели плохой внешний вид, были малоподвижны. При морфологическом и гистологическом исследовании установлено, что после 3-недельного курса терапии степень выраженности острофазовых воспалительных процессов в портальных трактах находилась на уровне контроля (лечение физраствором). На препаратах отчетливо были видны псевдодольки, ограниченные соединительно-тканными септами, содержащими мелкие коллатерали центральных вен, анастомозирующими между собой и формирующие связи с сосудами портального тракта. Гепатоциты претерпевали глубокие дистрофические изменения, причем наиболее значимо проявлялась белково-гидропическая дистрофия. Лишь назначение Гептрала в течение 6 недель привело к некоторому положительному эффекту, хотя и более низкому, чем при терапии GSSG

инозином, - снизился процент коллагена в печени, уменьшилась выраженность воспалительных изменений, в составе соединительной ткани появились сидерофаги. При анализе состояния гепатоцитов даже после 6-недельного курса терапии Гептралом можно было отметить наличие достаточно значительного количества клеток, имеющих гидропические изменения. Все это свидетельствовало о недостаточно высокой эффективности терапии экспериментального цирроза Гептралом.

Для объективной оценки относительного содержания соединительной ткани в печени крыс опытных и контрольных групп была выполнена морфометрия фуксинофильных (т. е. соединительно-тканных, коллагеновых) волокон на срезах печени. Полученные данные представлены в табл. 42. Установлено, что лечение токсического цирроза печени препаратом GSSG

инозин в течение 3 недель сопровождается снижением количества
коллагена в печени в 1,6 раза по сравнению с контролем физраствора; в то же время применение Гептрала сопровождалось снижением коллагена в печени лишь в 1,1 раза. При 6-недельном курсе терапии разница в эффекте была еще более выраженной: ПП

инозин снижал количество соединительной ткани в 3,27 раза, а Гептрал - в 1,7 раза. Все это позволяет сделать вывод о том, что назначение GSSG

инозина способствует инволюции соединительной ткани при циррозе печени. Все это позволяет сделать вывод о том, что назначение GSSG

инозина способствует инволюции соединительной ткани при циррозе печени.

Таким образом, высокий лечебный эффект GSSG

инозина на модели экспериментального цирроза печени, вызванного диметилнитрозоамином, установлен при ежедневном наблюдении за экспериментальными животными и подтвержден гистологическими исследованиями. На препаратах печени крыс контрольной группы (ДМНА без лечения) отчетливо прослеживались участки гибели гепатоцитов, развитие воспаления в стенках мелких центральных вен, образование соединительно-тканных септ. Гепатоциты претерпевали дистрофические изменения, в наибольшей степени была выражена белково-гидропическая дистрофия. Применение физраствора не влияло положительным образом на развитие повреждений печени: в этом случае на гистологических препаратах были видны созревшие соединительно-тканные септы и дистрофические изменения гепатоцитов сформированных псевдодолек. Лечение Гептралом вызвало лишь небольшое снижение количества соединительной ткани и степени выраженности острофазовых воспалительных процессов в портальных трактах, а также дистрофических изменений клеток печени, причем, положительный эффект терапии Гептралом установлен только при 6-недельном курсе терапии. Наоборот, у животных, получивших GSSG

инозин, уже через 3 недели от начала лечения наблюдалось достоверное снижение количества соединительной ткани, еще более существенное при терапии в течение 6 недель. При гистологическом исследовании препаратов печени от этих животных отмечены лишь единичные мелкие соединительно-тканные септы, содержащие микрососуды, а значимых белково-гидропических изменений гепатоцитов не выявлено, что позволяет судить о достаточно высоком гепатопротективном действии этого препарата.

Заключение: Применение препарата GSSG

инозин в дозе 10 мг/кг 3 раза в неделю в течение 6 недель при экспериментальном циррозе печени у белых крыс, вызванном диметилнитрозоамином, прямо коррелировало с инволюцией соединительной ткани в этом органе, а также способствовало восстановлению поврежденных гепатоцитов. Препарат сравнения - Гептрал (S-аденозил-метионин) - обладал существенно более низким терапевтическим эффектом.

Пример 19
Клинико-экспериментальная эффективность GSSG

инозина, GSSG

аденина и GSSG

5-метилцитозина при лечении особо опасных инфекций: туляремии и мелиоидоза
Оценку терапевтической эффективности препаратов GSSG

инозина, GSSG

аденина и GSSG

5-метилцитозина проводили на белых мышах, которых иммунизировали вирулентной культурой возбудителя мелиоидоза, химической и живой туляремийной вакцинами.

В опытах использовали взрослых рандомбредных мышей-самцов массой 18-21 г, поставленных из питомника "Рапполово" РАМН. Для иммунизации применяли коммерческие препараты. Для изучения влияния GSSG

инозина на неспецифическую резистентность к мелиоидозу препарат в разных дозах (0,5; 2,5; 12,5 и 62,5 мг) вводили мышам однократно подкожно в объеме 0,2 мл за 1, 6, 12 и 18 ч до заражения вирулентной культурой возбудителя мелиоидоза штамма 59361, после чего определяли показатели летальности животных (процент погибших животных, средняя продолжительность жизни - СПЖ) при сроке наблюдения 1 мес.

При изучении влияния GSSG

аденина на неспецифическую резистентность мышей к живой туляремийной вакцине (ЖТВ) GSSG

аденин вводили внутрибрюшинно в дозе 2 мг/мышь (0,5 мл) за 6 ч до подкожной инокуляции животным ЖТВ в различных дозах с последующим определением ЛД50 ЖТВ в контрольной и опытной группах.

При изучении влияния GSSG

5-метилцитозина на протективность "С-комплекса", выделенного из возбудителя туляремии, (условно обозначенного нами "химическая туляремийная вакцина" - ХТВ), данную "вакцину" вводили мышам подкожно в разных дозах без GSSG

5-метилцитозина и в сочетании с ним. Через 21 сутки часть животных заражали вирулентным штаммом возбудителя мелиоидоза (10 ЛД50), а других - ЖТВ в летальной дозе (4

10⁶ м. кл. ). Для срочной профилактики туляремии GSSG

5-метилцитозина вводили однократно за 6 ч до вакцинации ХТВ, а для повышения иммунитета к мелиоидозу - дважды: за 6 ч до вакцинации и за 6 ч до заражения.

Результаты опытов оценивали статистически.

Установлено, что на 18 сутки после заражения животных 300 ЛД50 вирулентного штамма 59361 возбудителя мелиоидоза GSSG

инозин защищал от гибели 34% мышей при 100% гибели в контроле. На 30 сутки наблюдения отмечено снижение числа выживших животных до 17%, в то же время зарегистрировано достоверное повышение показателя СПЖ (р<0,05) погибших мышей, получавших GSSG

инозин. Наиболее активной в защите от мелиоидоза оказалась доза GSSG

инозина 2,5 мг, введенная животным за 1, 6, 12 или 18 час до заражения.

Результаты опыта по изучению лечебных свойств GSSG

аденина в отношении возбудителя туляремии представлены в табл. 56.

Показано, что введение животным GSSG

аденина повышало их устойчивость к ЖТВ; при этом ЛД50 ЖТВ для мышей, которым вводили GSSG

аденин, оказалось в 4 раза выше, чем у интактных животных.

Также была изучена способность GSSG

5-метилцитозина повышать иммуногенность ХТВ в отношении возбудителей мелиоидоза и туляремии. ХТВ использована нами одновременно в качестве неспецифического и специфического факторов защиты против мелиоидозной инфекции.

Отмечено, что вакцинация мышей ЖТВ в дозах 10, 50 и 250 мкг защищала от гибели до 25% животных, при этом СПЖ павших мышей лишь незначительно превышала аналогичный показатель в контрольной группе интактных животных (р>0,05). Двухразовое введение GSSG

5-метилцитозина (за 6 ч до вакцинации ХТВ и за 6 ч до заражения) способствовало увеличению выживаемости животных (на 12%) и существенному росту СПЖ (р<0,05) (табл. 57).

Следует отметить, что доза данной серии ХТВ 250 мкг оказалась токсичной для мышей: из 12 животных, вакцинированных этой дозой, погибло 8, в то время как в группе животных, получавших вместе с 250 мкг ХТВ 2 мг GSSG

5-метилцитозина, из 12 мышей до заражения дожили 11.

При изучении возможности GSSG

5-метилцитозина повышать специфический иммунитет к туляремии было показано, что однократное введение GSSG

5-метилцитозина за 6 ч до вакцинации 25-100 мкг ХТВ повышало иммуногенные свойства этого препарата, что выражалось в приросте выживаемости животных (на 14-17%) и в существенном увеличении (р<0,05) сроков СПЖ при заражении летальной дозой ЖТВ (табл. 58).

Проведенные исследования показали способность препаратов группы GSSG

инозина повышать резистентность организма к мелиоидозу и туляремии. Важной особенностью препаратов является иммуномодулирующее, системное цитопротекторное и, особенно, гепатопротекторное действие. Полученные данные о существенном снижении токсичности дозы ХТВ 250 мг для мышей с помощью GSSG

5-метилцитозина, введенного за 6 ч до вакцинации, свидетельствуют о его антибактериальном и цитопротекторном действии.

Таким образом, новые производные окисленного глутатиона и элементов нуклеиновых кислот при использовании по определенной методике обеспечивают достоверный уровень защиты мышей от мелиоидоза и туляремии; снижают остаточную токсичность туляремийного "С-комплекса", что может быть использовано при создании комплексных профилактических и лечебных препаратов.

Одновременно эти данные позволяют считать, что исследуемые препараты эффективны при инфекциях, вызванных прионами.

Источники информации:
1. Consensus Statement. EASL International Consensus Conference on hepatitis C. J. Hepatol. 1999, 30: 956-961.

2. Naoumov N. V. , Hepatitis С virus-specific CD4+ Т cells: do they help or damage? Gastroenterology, 1999, 117: 1012-1014.

3. Tran A. , Yang G. , Doglio A. et al. Phenotyping of intrahepatic and peripheral blood lymphocytes in patients with chronic hepatitis C. Dig. Dis. Sci. 1997, 42: 2495-2500.

4. Gerlach J. T. , Diepolder H. M. , Jung M. K. et al. Recurrence of hepatitis C virus after loss of virus-specific CD4+ Т cell response in acute hepatitis C. Gastroenterology, 1999, 117: 933-941.

5. Cramp M. E. , Carucci P. , Rossol S. et al. Hepatitis C vims (HCV) specific immune response in anti-HCV positive patients without hepatitis C viraemia. Gut, 1999, 44: 424-429.

6. Eckels D. D. , Tabatabail N. , Bian T. H. et al. IN vitro human TH-cell response to a recombinant hepatitis С virus antigen: failure in IL-2 production despite proliferation. Hum. Immunol. , 1999, 60: 187-199.

7. Ferrari С. , Penna A. , Bertoletti A. et al. Antiviral cell-mediated immune response during hepatitis В and hepatitis С virus infections. Recent Results Cancer Res. , 1998, 154: 330-336.

8. Fan X. G. , Li C. Z. et al. Circulating Th1 and Th2 cytokines in patients with hepatitis С virus infections. Mediators Innamm. 1998, 7: 295-297.

9. Rehermann В. et al. Cell mediated immune response to the hepatitis С virus. Cur. Top. Microbiol. Immunol. 2000, 242: 299-325.

10. Schlaak J. F. , Pitz Т. , Lohr H. F. et al. Interleukin 12 enhances deficient HCV-antigen-induced Th1-type immune response of peripheral blood mononuclear cells, J. Med. Virol. 1998, 56: 112-117.

11. Семененко Т. А. Клеточный иммунитет при гепатите С. Вирусный гепатит: достижения и перспективы. Инф. Бюлл. 1(8), 2000.

12. Bartholomew M. M. , Jansen R. W. , Jeffers L. J. et al. Lancet, 1997, 349, No. 9044, 20-22.

13. Di Bisceglie A. M. , Conjeevaram M. S. , Eried M. W. et al. Ann. Intern. Med. , 1995, 123, 897-903.

14. Schiff E. R. , J. Med. . Virol. , 2000 Jul; 61(3): 386-91.

15. Dienstag J. L. et al. , N. Endl. J. med. 1999 Oct 21; 341(17): 1256-63.

16. Yao G. B. et al. Long-term efficacy of lamivudine in the treatment of patients with chronic hepatitis В virus infection - a multicenter randomized, double-blind, placebo-controlled trial, DDW 1999.

17. Pol S. , Nalpas В. , Bourlierem et al. Combination of ribavirin and interferon-alpha surpasses high doses of interferon-alpha alone in patients with genotype-1b-related chronic hepatitis C. Hepatology, 2000 Jun; 31(6): 1338-44.

18. The Medical Management of AIDS, 4^th edition. Sande M. And Volberding P. W. B. Saunders, Company, 1995.

19. Robert С. Bohinski "Modern Concepts in Biochemistry", 4^th edition, 1987.

20. Harrison's Principles of Internal Medicine, 14^th edition, p. 511, 1998.

21. Apoptosis: a role in neoplasia, C. D. Gregory, 1996.

22. The Molecular Biology of Apoptosis, D. L. Vaux, A. Strasser; Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 (1996).

23. Цитокины в онкогематологии, Грачева Л. А. , Москва, 1996.

24. Paola Galinari et al. Multiple enzymatic activities associated with recombinant NS3 protein of hepatitis С virus. J. Virol. , August 1998, p. 6758-6769, Vol. 72, No. 8.

25. Патент РФ 2089179, МКИ А 61 К 38/00, 1997.

26. Патент РФ 2153350, МКИ А 61 К 38/00, 38/06, 33/00, 1999.

27. Jezequel, A. M. et al. Dimethylnitrosamine-induced cirrhosis. Evidence for an immunological mechanism. J. Hepatol. , 8, 42-52 (1989).

28. Руководящие методические материалы по экспериментальному и клиническому изучению новых лекарственных средств. Части 1 и 3 (Официальное издание). Фармакологический Комитет, М. , 1975, 1981.

29. Требования к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ (Временные методические рекомендации). Фармакологический комитет. М. , 1985 и Правила доклинической оценки безопасности фармакологических средств (GLP). РД 64-126-91. M. , 1992.

Формула изобретения

1. Органическая соль окисленного глутатиона (GSSG), отличающаяся тем, что в ней противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме и азотистое основание или нуклеозид, или нуклеотид пуриновой и пиримидиновой природы.

2. Органическая соль по п. 1, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и азотистое основание пуриновой или пиримидиновой природы.

3. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и аденин.

4. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и гуанин.

5. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и тимин.

6. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и цитозин.

7. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и урацил.

8. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и 5-метилцитозин.

9. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и 4-тиоурацил.

10. Органическая соль по п. 2, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и дигидроурацил.

11. Органическая соль по п. 1, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и нуклеозид пуриновой или пиримидиновой природы.

12. Органическая соль по п. 11, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и аденозин.

13. Органическая соль по п. 11, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и гуанозин.

14. Органическая соль по п. 11, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и инозин.

15. Органическая соль по п. 11, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и цитидин.

16. Органическая соль по п. 11, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и уридин.

17. Органическая соль по п. 11, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, и тимидин.

18. Органическая соль окисленного глутатиона (GSSG), отличающаяся тем, что в ней противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначные аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и азотистое основание, или нуклеозид, или нуклеотид пуриновой или пиримидиновой природы.

19. Органическая соль по п. 18, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и азотистое основание пуриновой или пиримидиновой природы.

20. Органическая соль по п. 19, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме и аденин.

21. Органическая соль по п. 19, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и гуанин.

22. Органическая соль по п. 19, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и тимин.

23. Органическая соль по п. 19, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и цитозин.

24. Органические соли по п. 19, в которых противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и урацил.

25. Органическая соль по п. 19, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и 5-метилцитозин.

26. Органическая соль по п. 19, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и 4-тиоурацил.

27. Органическая соль по п. 19, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и дигидроурацил.

28. Органическая соль по п. 18, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и нуклеозид пуриновой или пиримидиновой природы.

29. Органическая соль по п. 28, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и аденозин.

30. Органическая соль по п. 28, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и гуанозин.

31. Органическая соль по п. 28, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и инозин.

32. Органическая соль по п. 28, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и цитидин.

33. Органическая соль по п. 28, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и уридин.

34. Органическая соль по п. 28, в которой противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и тимидин.

35. Органическая соль окисленного глутатиона, отличающаяся тем, что в ней противоионами являются окисленный глутатион, в формуле которого все аминокислоты представлены в L-форме, или окисленный глутатион, в формуле которого две химически однозначных аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты представлены в L-форме, и нуклеозиды пуриновой или пиримидиновой природы, в формуле которых рибоза представлена в форме

-D-рибозы, или в форме

-D-дезоксирибозы.

36. Органическая соль по п. 35, в которой противоионами являются окисленный глутатион в L- или D-форме, и одновременно два нуклеозида, один из которых - пуриновой, а второй - пиримидиновой природы.

37. Органическая соль окисленного глутатиона, отличающаяся тем, что в ней противоионами являются окисленный глутатион в L- или D-форме и одновременно два азотистых основания: одно из которых пуриновой, а второе - пиримидиновой природы.

38. Индивидуальное вещество на основе фосфамидных производных окисленного глутатиона, отличающееся тем, что содержит органические катионы, представленные рядом нуклеозидов или нуклеотидов и фосфамидное производное окисленного глутатиона, аминокислоты которого существуют в L-форме.

39. Вещество по п. 38, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с аденозинмонофосфатом (АМФ).

40. Вещество по п. 38, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с гуанозинмонофосфатом (ГМФ).

41. Вещество по п. 38, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с инозинмонофосфатом (ИМФ).

42. Вещество по п. 38, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с цитидинмонофосфатом (ЦМФ).

43. Вещество по п. 38, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с уридинмонофосфатом (УМФ).

44. Вещество по п. 38, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с тимидинмонофосфатом (ТМФ).

45. Вещество по п. 38, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производные нуклеотидов пуриновой или пиримидиновой природы, в которых рибоза представлена в форме

-D-рибозы или в форме

-D-дезоксирибозы.

46. Индивидуальное вещество на основе фосфамидных производных окисленного глутатиона, отличающееся тем, что содержит органические катионы, представленные рядом нуклеозидов или нуклеотидов и фосфамидное производное окисленного глутатиона, в структуре которого две химически однозначные аминокислоты представлены в D-форме, а остальные аминокислоты - в L-форме.

47. Вещество по п. 46, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с аденозинмонофосфатом (АМФ).

48. Вещество по п. 46, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с гуанозинмонофосфатом (ГМФ).

49. Вещество по п. 46, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с инозинмонофосфатом (ИМФ).

50. Вещество по п. 46, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с цитидинмонофосфатом (ЦМФ).

51. Вещество по п. 46, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с уридинмонофосфатом (УМФ).

52. Вещество по п. 46, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с тимидинмонофосфатом (ТМФ).

53. Вещество по п. 46, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное нуклеотидов пуриновой или пиримидиновой природы, в котором рибоза представлена в форме

-D-рибозы или в форме

-D-дезоксирибозы.

54. Индивидуальное вещество, на основе фосфамидных производных окисленного глутатиона, отличающееся тем, что содержит неорганические катионы щелочных, щелочноземельных и/или переходных металлов и фосфамидное производное окисленного глутатиона в L-форме или D-форме, с рядом нуклеозидов или нуклеотидов пуриновой или пиримидиновой природы, в которых рибоза представлена в форме

-D-рибозы или в форме

-D-дезоксирибозы.

55. Вещество по п. 54, отличающееся тем, что в качестве фосфамидного производного окисленного глутатиона используют производное с двумя нуклеотидами, один из которых пуриновой, а второй - пиримидиновой природы.

56. Фармацевтическая композиция, проявляющая противовирусную, противобактериальную, иммунореабилитирующую и гепатопротекторную активность, содержащая в качестве активного вещества, по меньшей мере, одно из соединений по пп. 1-55 в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.

57. Фармацевтический препарат, обладающий противовирусным, противобактериальным, иммунореабилитирующим и гепатопротекторным действием, содержащий в качестве активного вещества, по меньшей мере, одно из соединений по пп. 1-55 в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество.

58. Способ получения органической соли окисленного глутатиона и инозина, в которой качестве аниона выступает молекула окисленного глутатиона, а в качестве катиона выступает молекула инозина (9-

-D-рибофуранозил-гипоксантина), заключающийся в том, что к раствору динатриевой соли окисленного глутатиона при перемешивании и комнатной температуре добавляют 1 эквивалент порошка инозина и оставляют до полного растворения, после чего прозрачный раствор фильтруют и лиофильно высушивают.

59. Способ получения инозил-5-фосфорил-N-глутатиона, заключающийся в том, что фосфамидную связь между аминогруппой глутаминовой кислоты в молекуле окисленного глутатиона и остатком фосфорной кислоты в молекуле инозил-5-монофосфата получают в процессе реакции его N-оксисукцинимидного активированного эфира и окисленного глутатиона в диметилформамиде при рН 8,0-8,5.

60. Способ воздействия на инфекционные агенты организма больного, в том числе внутриклеточно локализованные, и/или стимуляции Т-клеточного и гуморального противоинфекционного иммунитета, наряду с обеспечением цитопротекторных эффектов, заключающийся во введении в организм млекопитающих эффективного количества фармацевтического препарата, получаемого на основе химического взаимодействия дисульфидсодержащих пептидов с азотистыми основаниями или нуклеозидами или нуклеотидами пуриновой или пиримидиновой природы.

61. Способ по п. 60, заключающийся в индукции механизмов апоптоза, в том числе посредством экспрессии индуктора апоптоза, FAS/APO-1 антигена (CD95⁺) на мембранах вирус-инфицированных клеток, на мембранах макрофагов, содержащих микобактерии туберкулеза, на мембранах клеток, инфицированных микоплазмами, хламидиями, малярийным плазмодием и другими инфектагентами, посредством введения в организм млекопитающих фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин, GSSG

урацил, GSSG

тимин, GSSG

аденин, GSSG

гуанин, GSSG-инозинмонофосфат, GSSG-урацилмонофосфат, GSSG-тимидинмонофосфат, GSSG-цитозинмонофосфат и другие соединения, полученные на основе взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона и его солей с азотистыми основаниями или нуклеозидами или нуклеотидами пуриновой или пиримидиновой природы.

62. Способ по п. 60, состоящий во введении в организм млекопитающих, инфицированных вирусом гепатита С, фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного ингредиента, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин, GSSG-инозинмонофосфат, GSSG-урацилмонофосфат и производные L- или D-форм окисленного глутатиона и компонентов нуклеиновых кислот с целью ингибирования АТФ-азно/хеликазной активности NS3 вируса гепатита С для прекращения репликативной активности и элиминации вируса гепатита С, следовательно, достижения лечебного эффекта.

63. Способ по п. 60, заключающийся в преимущественном ингибировании репликативной активности РНК-содержащих вирусов, в случае использования в качестве активного вещества, соединений, полученных на основе химического взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона и его солей с азотистыми основаниями или нуклеозидами или нуклеотидами пиримидиновой природы.

64. Способ по п. 60, заключающийся в преимущественном ингибировании репликативной активности ДНК-содержащих вирусов, в случае использования качестве активного вещества, соединений, полученных на основе химического взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона и его солей с азотистыми основаниями или нуклеозидами или нуклеотидами пуриновой природы.

65. Способ по п. 60, заключающийся во введении в организм млекопитающих фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы содержащей GSSG

инозин и другие соединения окисленного глутатиона с компонентами нуклеиновых кислот с целью преимущественной активации функциональной активности Th1-группы Т-клеток, либо Th2-группы Т-клеток, либо их регулируемого соотношения, что дифференцированно определяет эффективность системы иммунитета организма млекопитающих в отношении этиотропных факторов инфекционных болезней.

66. Способ по п. 60, заключающийся во введении в организм больного вирусным гепатитом С фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин и/или GSSG-инозинмонофосфат для восстановления нормального соотношения Th1/Th2 клеток и достижения оптимального содержания цитокинов, продуцируемых Тh1 и Тh2 группами клеток, а также для повышения эндогенной продукции IL-2, IL-12, ИФH-

.
67. Способ по п. 60, заключающийся во введении в организм больного вирусным гепатитом А, В и/или С фармацевтического препарата, содержащего эффективное количество активного вещества, выбираемого из группы, содержащей GSSG

инозин и другие соединения окисленного глутатиона, его солей, с компонентами нуклеиновых кислот для достижения гепатопротекторных эффектов, в том числе предупреждения и/или лечения осложнений хронических вирусных гепатитов, а именно профилактики и лечения циррозов печени и гепатоцеллюлярных карцином.

68. Способ по п. 60, в котором заболевание выбирается из всех видов инфекционных заболеваний, включающих вирусные и бактериальные, в том числе, анаэробные инфекции; хламидийные и микоплазменные инфекции; микозы (кандидозы); протозойные инфекции.

69. Способ по п. 60, в котором фармацевтический препарат по п. 57, вводят в инфицированный организм парентерально, перорально, в форме ингаляционных растворов, растворов для локальных инстилляций, глазных или интраназальных капель, мазей, кремов или гелей для накожного применения, а также в форме суппозиториев, до достижения лечебного эффекта и/или профилактики осложнений, вызванных инфектагентами в процессе развития инфекционного заболевания.

70. Способ лечения субъекта, нуждающегося в прекращении репликативной активности вирусов, бактерий, или других инфектагентов, индукции механизмов апоптоза инфицированных клеток, восстановлении и стимуляции противоинфекционного дееспособного иммунитета: Т-клеточного, и/или гуморального, системных цитопротекторных эффектах, заключающийся во введении субъекту фармацевтического препарата, содержащего активное вещество, выбираемое из группы, содержащей биологически активные соединения, полученные на основе химического взаимодействия L- или D-форм окисленного глутатиона, его солей с азотистыми основаниями, или нуклеозидами или нуклеотидами пуриновой или пиримидиновой природы в количестве, достаточном для достижения терапевтического эффекта.

71. Способ по п. 70, в котором заболеванием является острый с затяжным течением вирусный гепатит В, а фармацевтический препарат выбирают из группы, состоящей из GSSG

инозина и GSSG-инозинмонофосфата.

72. Способ по п. 70, в котором заболеванием является острый вирусный гепатит С, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

урацил и GSSG-инозинмонофосфат.

73. Способ по п. 70, в котором заболеванием является хронический вирусный гепатит В, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

гуанозин, GSSG

аденозин, GSSG-инозинмонофосфат и GSSG-тимидинмонофосфат.

74. Способ по п. 70, в котором заболеванием является хронический вирусный гепатит С, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

урацил, GSSG

цитозин, GSSG

дигидроурацил, GSSG-урацилмонофосфат, GSSG-цитозинмонофосфат, урацил-GSSG-инозин.

75. Способ по п. 70, в котором заболеванием являются хронические вирусные гепатиты в цирротической стадии, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

уридин, GSSG

тимидин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат и Na₂-GSSG-тимидинмонофосфат.

76. Способ по п. 70, в котором заболеванием является легочный туберкулез, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

цитозин, GSSG-5-метилцитозин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат.

77. Способ по п. 70, в котором заболеванием является туберкулез мочеполовой системы, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSH

тимин, Na₂-GSSG-гуанозинмонофосфат и урацил-Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфат.

78. Способ по п. 70, в котором заболеванием является СПИД, а также цитомегаловирусная инфекция, инфекция, вызванная вирусом Эпштейн-Барр и/или пневмоцистами, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

дигидроурацил, GSSG

4-тиоурацил, а также Zn₂-GSSG-тимидинмонофосфат и Ag₂-GSSG-урацилмонофосфат и уридин

GSSG

инозин.
79. Способ по п. 70, в котором заболеванием является инфекция, вызываемая вирусами герпеса, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфат, а также D-форму Na₂-GSSG-цитoзинмoнoфocфaтa и D-форму GSSG

урацила.
80. Способ по п. 70, в котором заболеванием являются микозы (кандидозы), а фармацевтический препарат выбирают из группы, состоящей из GSSG

уридин, GSSG

4-тиоурацил и Ag₂-GSSG-урацилмонофосфат.

81. Способ по п. 70, в котором заболеванием является микоплазменная инфекция, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

аденозин, а также Na₂-GSSG-аденозинмонофосфат.

82. Способ по п. 70, в котором заболеванием является хламидийная инфекция, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

тимин, GSSG

уридин, GSSG

гуанозин, а также Na₂-GSSG-гуанозинмонофосфат.

83. Способ по п. 70, в котором заболеванием является малярия, лейшманиоз, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

цигозин и GSSG

5-метилцитозин.
84. Способ по п. 70, в котором заболеванием является анаэробная инфекция, а лекарственное средство выбирают из группы, включающей D-форму GSSG

инозина, (D-цистеин) и D-форму

(D-глутаминовая кислота).

85. Способ по п. 70, в котором заболевание выбирают из группы, состоящей из вирусного гепатита А, дизентерии и холеры, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат и Li₂-GSSG-гуанозинмонофосфат, а также D-форму GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота).

86. Способ по п. 70, в котором заболеванием является инфекционный менингит, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, Li₂-GSSG-инозинмонофосфат, D-форму GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота), GSSG

5-метилцитозин, Ag₂-GSSG-урацилмонофосфат.

87. Способ по п. 70, в котором заболевание выбирают из группы особо опасных инфекций, состоящей из чумы, туляремии и сибирской язвы, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

аденин, GSSG

тимин, GSSG

5-метилцитозин, GSSG

4-тиурацил, D-форму GSSG

урацила (D-глутаминовая кислота), D-форму GSSG

инозина, (D-цистеин), аденин

GSSG

тимин.
88. Способ по п. 70, в котором заболеванием является инфекция, вызываемая прионами ("коровье бешенство"), а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

уридин, GSSG

дигидроурацил, Ag₂-GSSG-ypaцилмoнoфocфaт, Ag₂-GSSG-тимидинмoнoфocфaт, а также урацилмонофосфат-Li₂-GSSG-инозинмонофосфат.

89. Способ по п. 70, в котором заболевание выбирают из группы, состоящей из гриппа и острых респираторных вирусных инфекций, а фармацевтический препарат выбирают из группы, включающей GSSG

инозин, GSSG

аденозин, GSSG

урацил и GSSG

тимин.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81

MF4A - Аннулирование патента Российской Федерации на изобретение в связи с признанием его недействительным полностью

Орган, принявший решение: Палата по патентным спорам

Дата принятия решения: 12.05.2005

Извещение опубликовано: 20.06.2005 БИ: 17/2005

Другие изменения, связанные с зарегистрированными изобретениями

Изменения:
Действие патента № 2178710 на изобретение "Индивидуальные вещества, полученные на основе химического взаимодействия дисульфидсодержащих пептидов, пуринов и пиримидинов, фармацевтические композиции и препараты на их основе, способы их применения для лечения инфекционных заболеваний и профилактики осложнений" восстановлено.

Извещение опубликовано: 10.08.2006 БИ: 22/2006

Изобретение относится к медицине и может быть применено в дерматовенерологии при лечении хронической инфекции в мочеполовых органах, а именно болезни Рейтера

Способ получения антипаразитарной настойки // 2174401

Изобретение относится к медицине

Способ получения средства, обладающего противоописторхозным действием // 2162701

Изобретение относится к медицине

Способ реабилитации больных хроническим описторхозом после дегельминтизации // 2162336

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии, касающейся реабилитации больных хроническим описторхозом после дегельминтизации

Способ комплексной патогенетической терапии больных описторхозом // 2161972

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, и может быть использовано для комплексного лечения описторхоза

Антигельминтное средство // 2153329

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к медицинской и ветеринарной гельминтологии, и может быть использовано для лечения ларвальных эхинококкозов и других цестодозов человека и животных

Иодированные галогениды четвертичных аммониевых солей, способ их получения и композиции на их основе // 2149866

Способ лечения фасциолеза и мониезиоза овец // 1715357

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к гельминтологии

Способ лечения кишечных нематодозов овец // 1710057

Препарат для профилактики и лечения эймериозов птиц "химиркок // 1694141

Способ лечения герпесовирусных инфекций, включающий озонотерапию // 2178699

Изобретение относится к медицине, а именно к кожным болезням, и может быть использовано для лечения герпесовирусных инфекций

Противовирусное средство для наружного применения на основе гиалуроновой кислоты // 2178693

Изобретение относится к медицине и касается противовирусного средства для наружного применения, обладающего противогерпетической активностью, ранозаживляющим и противовирусным действием

Ковалентные конъюгаты липидов с фосфонокарбоновой кислотой, их получение и применение в качестве антивирусных лекарственных средств // 2178418

Изобретение относится к фосфолипидным производным фосфонокарбоновых кислот формулы I (см

Средство для профилактики и лечения инфекционных заболеваний и коррекции патологических состояний живого организма // 2177788

Изобретение относится к медицине

Новые производные барбитуровой кислоты и фармацевтическая композиция, обладающая активностью ингибирования металлопротеаз // 2177475

Изобретение относится к новым производным барбитуровой кислоты и фармацевтической композиции, обладающей активностью ингибирования металлопротеаз

Состав с антисептическими, репаративными и болеутоляющими свойствами // 2177314

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии и касается состава с антисептическими, репаративными и болеутоляющими свойствами

Противовоспалительное средство // 2177309

Изобретение относится к области медицины - хирургии и касается противовоспалительного средства

Противовирусное средство в липосомальной форме // 2176518

Средство, обладающее противовирусной активностью, на основе соединений серебра и золота с тиазином и способ его получения // 2176505

Изобретение относится к медицине

Способ получения тетрадекапептида // 2175973

Средство, обладающее иммуностимулирующей активностью // 2177803

Изобретение относится к медицине, а именно к новым пептидным средствам, обладающим иммуностимулирующей активностью, и направлено на расширение их арсенала и повышение биологической активности