Способ приготовления сыворотки анти-kеll для экспресс-метода

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и переливанию крови, касается способа приготовления сыворотки анти-Kell и может быть использовано для определения антигена Kell эритроцитов человека. Сущность изобретения заключается в том, что 9% раствор фиколла смешивают с 76% раствором верографина и добавляют дистиллированную воду, доводя раствор до необходимой плотности 1077 г/л. Полученную смесь конглютининов смешивают с сывороткой анти-Kell с неполными антителами в соотношении 7 частей сыворотки +2,5-3 части смеси конглютининов и добавляют 0,3-0,5 части 10% раствора желатина. При взаимодействии полученной таким образом сыворотки с Kell-положительными эритроцитами на плоскости при комнатной температуре отмечается быстрое (через 10-30 с) появление агглютинации в виде крупных хлопьев. Технический результат заключается в разработке способа определения фактора Kell экспресс-методом, обеспечивающим максимальную выраженность реакции агглютинации, при взаимодействии с Kell-положительными эритроцитами.

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и переливанию крови, и может быть использовано для определения антигена Kell эритроцитов человека.

В настоящее время известен способ приготовления сыворотки для определения резус-фактора (антигена D) экспресс-методом на плоскости при комнатной температуре. Способ заключается в том, что к сыворотке анти-D, содержащей неполные антирезус антитела, добавляют какой-либо конглютинин [раствор альбумина, полиглюкина (1) или фиколла (2, 3)].

До настоящего времени не существовало способа приготовления сыворотки анти-Kell для экспресс-метода на плоскости при комнатной температуре. Существовал способ приготовления сыворотки анти-Kell, предназначенной для определения фактора Kell методом конглютинации в пробирках с нагреванием до 46-48^oС (данный метод не относится к экспресс-методам).

Указанные два способа приготовления сывороток анти-D и анти-Kell являются прототипом заявляемого. Как было нами установлено в процессе экспериментов, антитела анти-Kell значительно слабее антител анти-D, поэтому смесь сыворотки анти-Kell с каким-либо одним конглютинином малоэффективна при определении фактора Kell экспресс-методом.

Сущность изобретения заключается в том, что сыворотку анти-Kell, содержащую неполные антитела, смешивают со смесью растворов нескольких конглютининов, после чего сыворотка может быть использована для определения фактора Kell экспресс-методом.

Цель изобретения - разработать способ приготовления сыворотки анти-Kell для определения фактора Kell экспресс-методом на плоскости без подогрева, обеспечивающий максимальную выраженность реакции агглютинации при взаимодействии с Kell-положительными эритроцитами и отсутствие агглютинации с Kell-отрицательными эритроцитами.

Цель достигается тем, что в сыворотку добавляют конглютинин, представляющий собой смесь нескольких ингредиентов: фиколла, верографина, желатина. При взаимодействии сыворотки анти-Kell, приготовленной таким способом, с Kell-положительными эритроцитами на плоскости при комнатной температуре отмечается быстрое (через 10-30 сек) появление агглютинации в виде крупных хлопьев. В то же время при взаимодействии данного реактива с Kell-отрицательными эритроцитами агглютинация отсутствует.

Таким образом, новый признак (использование смеси нескольких конглютининов) приводит к появлению у объекта изобретения новых свойств - сыворотка приобретает способность агглютинировать Kell-положительные эритроциты на плоскости без подогрева, повышается авидность сыворотки (увеличение размеров агглютинатов), повышается скорость реакции агглютинации.

Сыворотка анти-Kell для экспресс-метода готовится следующим образом: 9% раствор фиколла смешивают с 76% раствором верографина и добавляют дистиллированную воду, доводя раствор до необходимой плотности -1077 г/л. Полученную смесь конглютининов смешивают с сывороткой анти-Kell с неполными антителами в соотношении 7 частей сыворотки +2,5-3 части смеси конглютининов и добавляют 0,3-0,5 части 10% раствора желатина.

Определение антигена Kell с помощью полученной тестовой сыворотки осуществляют по методике, утвержденной приказом МЗ РФ 2 от 09.01.98 г. (4): на пластинку наносят каплю сыворотки, рядом с ней помещают каплю взвеси эритроцитов, капли перемешивают и, периодически покачивая пластинку, наблюдают за ходом реакции в течение 5 минут, после чего учитывают результат.

Пример изготовления сыворотки анти-Kell для экспресс-метода К 9 г фиколла добавляют дистиллированную воду, доводя объем раствора до 100 мл, затем в раствор вносят 18,6 г 76% раствора верографина и, продолжая добавлять к полученному раствору дистиллированную воду, доводят плотность раствора до 1077 г/л. После этого к 7 частям сыворотки анти-Kell с неполными антителами добавляют 2,5-3 части смеси конглютининов и 0,3-0,5 части 10% раствора желатина.

Пример использования сыворотки анти-Kell для экспресс-метода На пластинку в две точки наносили по одной капли сыворотки, рядом с 1-й каплей помещали каплю Kell-положительных эритроцитов, рядом со 2-й - каплю Kell-отрицательных эритроцитов. Капли перемешивали. Через 10 сек в 1-й капле отмечалось появление крупнозернистой агглютинации, во 2-й капле агглютинация отсутствовала в течение 5 мин (время наблюдения).

Литература 1. Приказ МЗ РФ 980 от 23 декабря 1967 г.

2. Левин В.И., Санько Н.М. Способ приготовления тестовой сыворотки для определения резус-фактора. Авторское свидетельство 719632, пр. от 25.11.77 г. Бюллетень 9 от 05.03.80 г.

3. Левин В. И. , Санько Н.М. К методике определения резус-фактора на плоскости без подогрева. Проблемы гематологии, 1980, 3, стр. 54-56.

4. Приказ МЗ РФ 2 от 09.01.98 г.

Формула изобретения

Способ приготовления сыворотки анти-Kell для экспресс-метода, включающий смешивание конглютининов с сывороткой анти-Kell c неполными антителами, отличающийся тем, что в качестве конглютининов используют смесь растворов фикола с верографином, полученную смешиванием 9% фикола с 76% верографина и доведением плотности раствора до 1077 г/л добавлением дистиллированной воды, смешивание сыворотки с полученной смесью конглютинов проводят в соотношении 7: 2,5-3 и добавляют 0,3-0,5 части 10% раствора желатина.