Метод диагностики глистной инвазии по гистологическим препаратам кала или мокроты и способ приготовления этих препаратов

 

Изобретение относится к лабораторным методам исследования биологических препаратов и может быть использовано в патогистологической практике для диагностики глистной инвазии. В качестве микропрепарата используют гистологический препарат из выделений человека, преимущественно кала или мокроты, а глистную инвазию диагностируют по наличию в гистологическом препарате фрагментов тел мелких гельминтов, паразитирующих в толстом кишечнике, их яиц, а также личинок нематод. Способ приготовления гистологических препаратов из выделений человека, преимущественно кала и мокроты, включает консервирование пробы и помещение в сетчатую оболочку, обезвоживание в спиртах, пропитку в диоксанах и парафине и последующую заливку с образованием парафинового блока, получение срезов на микротоме и окрашивание. Выделения дифференцируют на плотные или жидкие пробы, жидкую пробу формируют с объемом, в 3-5 раз превышающим объем плотной пробы, составляющий 2-2,5 см³. В качестве сетки для оболочки используют безворсовую синтетическую ткань, преимущественно газовую, с размером пор менее 0,001 мм. Технический результат - способ и метод обеспечивают возможность анализа жидких проб с помощью информативного и безопасного гистологического препарата из выделений человека. 2 с. и 2 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к лабораторным методам исследования биологических препаратов и может быть использовано в патогистологической практике для диагностики различных заболеваний, в том числе глистной инвазии.

Широко известны методы исследований выделений человека для выбора методов лечения по установленному с их помощью диагнозу (Справочник по клиническим и лабораторным методам исследований п/р проф. Е.А.Кост, М., Медицина, 1975)[1].

Так, известен метод диагностики глистных инвазий путем забора пробы из свежих испражнений и выполнения мазка на предметном стекле с последующим просмотром под микроскопом. По обнаруженным в мазке яйцам глистов и личинок диагностируют тот или иной тип гельминтоза (Генис Д.Е. Медицинская паразитология, М., Медицина, 1975, с.186-187 [2]) (ближайший аналог 1).

Для проведения качественных исследований необходимо проводить предварительную подготовку пробы для концентрации в ней яиц паразитов (метод Калантарян, Фюллеборна) и личинок (методы Бермана и Шульмана).

Известные методы [2] , применяемые в практике, имеют общие недостатки: персонал контактирует со свежими испражнениями, которые кроме яиц и личинок гельминтов могут содержать различные заразные начала: бактерии кишечных инфекций, туберкулеза, патогенные простейшие, что небезопасно. Кроме того, сама диагностика приготовленных препаратов недостаточно информативна, поскольку мазок содержит мало исследуемого материала, яйца глист имеют различную морфологию в зависимости от того, оплодотворены они или нет. Яйца, вступившие в эмбриональные преобразования, не распознаются. Именно поэтому такие исследования дают ложно-отрицательные результаты. Еще одним недостатком является невозможность хранения препаратов длительное время.

Известен гистологический метод исследования биологического материала, включающий формирование пробы и помещение в сетчатую оболочку, консервирование, обезвоживание в спиртах, пропитку в диоксанах и парафинах и последующую заливку с образованием парафинового блока, получение срезов на микротоме и окрашивание (см. Основы гистологии и гистологической техники, п/р проф. Елисеева В. Г. и др., М., Медицина, 1967, с.118-149) [3] (ближайший аналог П).

Однако этот метод используется для исследования тканей в норме и патологии и не предназначен для изучения выделений человека (кала, мокроты) с целью выявления глистной инвазии.

Задачей группы изобретений является создание информативного метода диагностики глистных инвазий с использованием выделений (преимущественно испражнений или мокроты) человека и способа получения гистологических препаратов, характеризующихся высокой контрастностью и возможностью применения различных окрасок в пределах одной пробы, для диагностики различных патологических состояний, в том числе глистных инвазий.

Технический результат первого изобретения группы - повышение информативности и безопасности для персонала - обеспечивается тем, что метод диагностики глистной инвазии включает приготовление микропрепарата из выделений человека и выявление в нем при микроскопии фрагментов гельминтов, личинок и их яиц. Готовят гистологический микропрепарат из кала или мокроты человека, а глистную инвазию диагностируют по наличию фрагментов тел мелких гельминтов, паразитирующих в толстом кишечнике, их яиц, а также личинок нематод.

Метод может характеризоваться тем, что выявляют фрагменты тел остриц, власоглавов, токсокар.

Технический результат второго изобретения группы - обеспечение высокой контрастности препарата и возможности применения различных окрасок в пределах одной пробы для диагностики различных патологических состояний - обеспечивается тем, что способ приготовления гистологического препарата из выделений человека включает формирование пробы, консервирование, помещение в сетчатую оболочку, обезвоживание в спиртах, пропитку в диоксанах и парафине, последующую заливку с образованием парафинового блока, получение срезов на микротоме и окрашивание.

Пробу из выделений человека дифференцируют на плотную или жидкую по консистенции, плотную пробу формируют с объемом 2-2,5 см³, а жидкую пробу формируют с объемом, в 3-5 раз превышающим упомянутый объем плотной пробы. В качестве сетчатой оболочки используют безворсовую синтетическую ткань, преимущественно газовую, с размером пор менее 0,001 мм, причем перед заливкой пробы в парафин сетчатую оболочку в подогретом состоянии вскрывают и расправляют, а остаток выделений формируют в единый комок, который затем заливают парафином.

Способ может характеризоваться также тем, что окрашивание срезов осуществляют гематоксилином и эозином.

Патентуемые методы основаны на получении информативных микропрепаратов, которые могут сохраняться длительное время и безопасны для исследований. Это обеспечивается концентрацией исследуемого материала из жидкого субстрата и применением особой технологии приготовления гистологического препарата, ранее из этих выделений не выполнявшихся. Перспективность и диагностическая ценность методик подтверждается высокой выявляемостью паразитов - см. Чернышева Е.С. "Новые методические подходы в лабораторной диагностике некоторых гельминтозов", сб. "Фитотерапия в практике интерниста"// Материалы 1-ой научной конференции Московского Фитотерапевтического общества и НИФ "Ультрасан", 16-17 сентября 2000 г.. Санаторий "Сосенки", Владимирская обл.) [4] , Чернышева Е.С. и др. "Значение гельминтозов в этиологии острого аппендицита"// Труды 1-го Съезда Российского общества патологоанатомов, 21-24 января 1997, М., 1996 г., с.235-236 [5].

Использование гистологических срезов испражнений с применением разнообразных специфических окрасок значительно расширяет диагностические возможности исследований этого материала в пределах одной пробы. При этом возможно выявить микобактерии туберкулеза, цисты простейших, обнаруживать элементы опухолей, колонии грибков, а также эритроциты и лейкоциты, свидетельствующие о воспалении.

Пример 1. Полученный от пациента Б., страдающего хронической диареей, кал представляет собой слизеобразную субстанцию с различными включениями. Для проведения патентуемой диагностики проба дифференцируется как жидкая. Объем отборанной пробы составляет 10 мл. Далее, проба подвергалась консервированию: кал заливали 50 мл 10%-ного формалина, выстаивали в течение 1 суток, затем помещали в сетчатую оболочку из тонкой безворсовой капроновой ткани с размером пор менее 0,001 мм. Из ткани формировался мешочек, который затем проводился через батарею этиловых спиртов возрастающей концентрации, диоксанов и парафина. Далее, в теплом виде мешочек вскрывали, из разрозненных частиц выделений формировали комочек, закладывали комочек в формочку и заливали парафином с получением парафинового блока. Далее, блок режут на микротоме, полученные срезы депарафинируют и окрашивают гематоксилином и эозином по обычной методике [3]. При микроскопии полученных препаратов на фоне колонии микробов выявлены фрагменты тел и кутикул гельминтов остриц, власоглавов, кутикулы личинок нематод и яйца. Диагностирована смешанная глистная инвазия.

Пример 2. От пациента С., страдающего хронической пневмонией, получена мокрота, представляющая собой густую слизеобразную массу с комочками гноя. Проба дифференцирована как жидкая. Мокрота в объеме около 10 мл заливалась 50 мл 10%-ного формалина, фиксировалась не менее 1 суток. Далее материал заключали в мешочек из безворсовой ткани и обрабатывали по методике, аналогичной примеру 1.

При микроскопии на фоне слизи, лейкоцитов и слущенных эпиталиальных клеток обнаруживали фрагменты личинок нематод, клетки которых нагружены эритроцитами. Личинки легко дифференцировались от других компонентов мокроты. Пациенту поставлен диагноз глистной инвазии.

Диагностирована глистная инвазия, миграционная фаза.

Пример 3. От Пациента У., страдающего хроническим колитом с запорами и анемией, получен плотный кал типа "овечий". Пробу величиной с лесной орех (2,5 см³) заливали 50 мл 10%-ного формалина, выстаивали в течение 1 суток. Затем пробу фиксированного материала помещали в мешочек из тонкой безворсовой капроновой ткани, который проводился через батарею этиловых спиртов возрастающей концентрации, диоксанов и парафина. Далее, в теплом виде мешочек вскрывали, из разрозненных частиц выделений формировали комочек и заливали его в парафин. Получение срезов на микротоме и окрашивание проводили также по обычной методике [3].

На препарате среди колоний микробов обнаружены фрагменты тел власоглавов, в телах которых имелись и гемолизированные эритроциты. Установлен диагноз трихоцефалеза.

Пример 4. От пациента О-кого получен оформленный кал обычной консистенции. Пробу, как плотную, в объеме 2,5 см³ заливали 50 мл 10%-ного формалина, выстаивали в течение 1 суток и обрабатывали по описанной методике (пример 1). В гистологических препаратах кала среди колоний микробов и других его компонентов обнаружены фрагменты тел половозрелых и неполовозрелых особей остриц, а также фрагменты и кутикул трихоцефалят и кутикулы личинок нематод, а также их яйца, часть из которых деформирована. Установлен диагноз смешанной формы глистной инвазии - трихоцефалеза и энтеробиоза.

Формула изобретения

1. Метод диагностики глистной инвазии, включающий выявление из выделений человека при микроскопии фрагментов гельминтов, личинок и их яиц, отличающийся тем, что готовят гистологический микропрепарат из кала или мокроты человека, а глистную инвазию диагностируют по наличию фрагментов тел мелких гельминтов, паразитирующих в толстом кишечнике, их яиц, а также личинок нематод.

2. Метод по п. 1, отличающийся тем, что выявляют фрагменты тел остриц, власоглавов, токсокар.

3. Способ приготовления гистологического препарата, включающий формирование пробы, консервирование, помещение в сетчатую оболочку, обезвоживание в спиртах, пропитку в диоксанах и парафине, последующую заливку с образованием парафинового блока, получение срезов на микротоме и окрашивание, отличающийся тем, что пробу из выделений человека дифференцируют на плотную или жидкую по консистенции, плотную пробу формируют с объемом 2-2,5 см³, а жидкую пробу формируют с объемом в 3-5 раз превышающим упомянутый объем плотной пробы, в качестве сетчатой оболочки используют безворсовую синтетическую ткань, преимущественно газовую, с размером пор менее 0,001 мм, причем перед заливкой пробы в парафин, сетчатую оболочку в подогретом состоянии вскрывают и расплавляют, а остаток выделений формируют в единый комок, который затем заливают парафином.

4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что окрашивание срезов осуществляют гематоксилином и эозином.