Способ идентификации модулятора связывания между полипептидом d и vcam-1 (варианты)

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для поиска модулятора биологической активности β₂-интегрина человека. Модулятор связывания между полипептидом α_d(α-субъединица β₂-интегрина) и VCAM-1 идентифицируют путем контактирования полипептида α_d с последовательностью аминокислот SEQ ID N2, 53, 55 или 103 и VCAM-1 и детектированием связывания. Полипептид α_d или VCAM-1 иммобилизуют на твердом носителе, неиммобилизованный партнер связывания метят детектируемым агентом, в частности флуоресцентным агентом. Детектирование связывания осуществляют по эмиссии света из флуоресцентного агента. Изобретение позволяет разрабатывать практические средства для терапевтического вмешательства в связанные с β₂-интегрином иммунные и воспалительные реакции. 2 с и 2 з.п.ф-лы, 4 ил., 2 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

1. Способ идентификации модулятора связывания между полипептидом α_d и VCAM-1, включающий в себя а) контактирование полипептида α_d как изложено в SEQ ID Nos: 2, 53, 55 или 103, и VCAM-1 в присутствии и в отсутствие предполагаемого модуляторного соединения; b) детектирование связывания между α_d и VCAM-1 и с) идентификацию предполагаемого модуляторного соединения в связи с уменьшенным или увеличенным связыванием между α_d и VCAM-1 в присутствии предполагаемого модулятора в сравнении со связыванием в отсутствие предполагаемого модулятора.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что его осуществляют в клетке-хозяине, содержащей растворимый α_d и растворимый VCAM-1, а уменьшенное или увеличенное связывание определяют количественно посредством измерения зависимого от связывания фенотипического изменения в клетке-хозяине, возникающего вследствие изменения в экспрессии продукта репортерного гена.

3. Способ идентификации модулятора связывания между полипептидом α_d и VCAM-1, включающий в себя а) иммобилизацию полипептида α_d как изложено в SEQ ID Nos: 2, 53, 55 или 103, или его фрагмента или VCAM-1 или его фрагмента на твердом носителе; b) мечение неиммобилизованного партнера связывания детектируемым агентом; с) контактирование указанного иммобилизованного партнера связывания с указанным меченым партнером связывания в присутствии и в отсутствие предполагаемого модуляторного соединения, способного специфически реагировать с α_d или VCAM-1; d) детектирование связывания между указанным иммобилизованным партнером связывания и указанным меченым партнером связывания и е) идентификацию модулирующих соединений как соединений, влияющих на связывание между указанными иммобилизованным партнером связывания и меченым партнером связывания.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что α_d или VCAM-1 иммобилизуют на твердом носителе, покрытом или пропитанном флуоресцентным агентом, указанный неиммобилизованный партнер связывания метят соединением, способным возбуждать указанный флуоресцентный агент, и взаимодействие α_d с партнером связывания α_d детектируют по эмиссии света из указанного флуоресцентного агента.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91, Рисунок 92, Рисунок 93, Рисунок 94, Рисунок 95, Рисунок 96, Рисунок 97, Рисунок 98, Рисунок 99, Рисунок 100, Рисунок 101, Рисунок 102, Рисунок 103, Рисунок 104, Рисунок 105, Рисунок 106, Рисунок 107, Рисунок 108, Рисунок 109, Рисунок 110, Рисунок 111, Рисунок 112, Рисунок 113, Рисунок 114, Рисунок 115, Рисунок 116, Рисунок 117, Рисунок 118, Рисунок 119, Рисунок 120, Рисунок 121, Рисунок 122, Рисунок 123, Рисунок 124, Рисунок 125, Рисунок 126, Рисунок 127, Рисунок 128, Рисунок 129, Рисунок 130, Рисунок 131, Рисунок 132, Рисунок 133, Рисунок 134, Рисунок 135, Рисунок 136, Рисунок 137, Рисунок 138, Рисунок 139, Рисунок 140, Рисунок 141, Рисунок 142, Рисунок 143, Рисунок 144, Рисунок 145, Рисунок 146, Рисунок 147, Рисунок 148, Рисунок 149, Рисунок 150, Рисунок 151, Рисунок 152, Рисунок 153, Рисунок 154, Рисунок 155, Рисунок 156, Рисунок 157, Рисунок 158, Рисунок 159, Рисунок 160, Рисунок 161, Рисунок 162, Рисунок 163, Рисунок 164, Рисунок 165, Рисунок 166, Рисунок 167, Рисунок 168, Рисунок 169, Рисунок 170, Рисунок 171, Рисунок 172, Рисунок 173, Рисунок 174, Рисунок 175, Рисунок 176, Рисунок 177, Рисунок 178, Рисунок 179, Рисунок 180, Рисунок 181, Рисунок 182, Рисунок 183, Рисунок 184, Рисунок 185, Рисунок 186, Рисунок 187, Рисунок 188, Рисунок 189, Рисунок 190, Рисунок 191, Рисунок 192, Рисунок 193, Рисунок 194, Рисунок 195, Рисунок 196, Рисунок 197, Рисунок 198, Рисунок 199, Рисунок 200, Рисунок 201, Рисунок 202, Рисунок 203, Рисунок 204, Рисунок 205, Рисунок 206, Рисунок 207, Рисунок 208, Рисунок 209, Рисунок 210, Рисунок 211, Рисунок 212, Рисунок 213, Рисунок 214, Рисунок 215, Рисунок 216, Рисунок 217, Рисунок 218, Рисунок 219, Рисунок 220, Рисунок 221, Рисунок 222, Рисунок 223, Рисунок 224, Рисунок 225, Рисунок 226, Рисунок 227, Рисунок 228, Рисунок 229, Рисунок 230, Рисунок 231, Рисунок 232, Рисунок 233, Рисунок 234, Рисунок 235, Рисунок 236, Рисунок 237, Рисунок 238, Рисунок 239, Рисунок 240, Рисунок 241, Рисунок 242, Рисунок 243, Рисунок 244, Рисунок 245, Рисунок 246, Рисунок 247, Рисунок 248, Рисунок 249, Рисунок 250, Рисунок 251, Рисунок 252, Рисунок 253, Рисунок 254, Рисунок 255, Рисунок 256, Рисунок 257, Рисунок 258, Рисунок 259, Рисунок 260, Рисунок 261, Рисунок 262, Рисунок 263, Рисунок 264, Рисунок 265, Рисунок 266, Рисунок 267, Рисунок 268, Рисунок 269, Рисунок 270, Рисунок 271, Рисунок 272, Рисунок 273, Рисунок 274, Рисунок 275, Рисунок 276, Рисунок 277, Рисунок 278, Рисунок 279, Рисунок 280, Рисунок 281, Рисунок 282, Рисунок 283