Прямая экспрессия пептидов в культуральные среды

 

Изобретение относится к генетической инженерии. Экспрессирующий плазмидный вектор содержит нуклеиновые кислоты (НК), кодирующие пептидный продукт. Указанные НК присоединены в рамке считывания справа (3') от нуклеиновых кислот, кодирующих сигнальный пептид. Регуляторный район оперативно соединен с кодирующим районом. Регуляторный район содержит множество промоторов и хотя бы один сайт связывания рибосом. По меньшей мере один из промоторов представляет собой tac. Вектор может содержать НК, кодирующие, по меньшей мере, один усиливающий секрецию пептид. Культивируют Е.соli, трансформированную или трансфецированную заявленным экспрессирующим плазмидным вектором. Пептид извлекают из среды. Культивирование проводят в присутствии в среде источника углерода и при регулировании роста клеток-хозяев при скорости роста 0,05 и 0,20 удвоений в час. Изобретение позволяет осуществлять прямую экспрессию пептида в культуральную среду за пределами клетки. 4 с. и 9 з.п.ф-лы, 17 ил., 5 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

1. Экспрессирующий плазмидный вектор, содержащий (a) кодирующий район с нуклеиновыми кислотами, кодирующими пептидный продукт и присоединенными в рамке считывания справа (3') от нуклеиновых кислот, кодирующих сигнальный пептид; (b) регуляторный район, оперативно соединенный с кодирующим районом, причем указанный регуляторный район содержит множество промоторов и по меньшей мере один сайт связывания рибосом, причем по меньшей мере один из упомянутых промоторов представляет собой tac.

2. Вектор по п.1, отличающийся тем, что содержит множество транскрипционных кассет, причем каждая кассета имеет упомянутый регуляторный район и указанный кодирующий район.

3. Вектор по п.1, отличающийся тем, что указанный регуляторный район имеет точно два промотора.

4. Вектор по п.1, отличающийся тем, что указанный промотор tac находится слева (5') от другого промотора в указанном регуляторном районе.

5. Вектор по п.1, отличающийся тем, что С-концевая аминокислота указанного пептидного продукта представляет собой глицин.

6. Вектор по п.1, отличающийся тем, что дополнительно содержит нуклеиновые кислоты, кодирующие по меньшей мере один усиливающий секрецию пептид.

7. Вектор по п.6, отличающийся тем, что усиливающий секрецию пептид выбран из группы, состоящей из secY и pr1A-4.

8. Вектор по п.1, отличающийся тем, что является введенным в клетку-хозяина.

9. Способ получения пептидного продукта, предусматривающий культивирование Е.соli, трансформированной или трансфецированной вектором по п.1, в культуральной среде и извлечение этого пептидного продукта из среды.

10. Способ получения пептидного продукта, предусматривающий культивирование E.coli, трансформированной или трансфецированной вектором по п.6, в культуральной среде и извлечение этого пептидного продукта из среды.

11. Способ получения пептидного продукта, предусматривающий стадии

(a) культивирования E.coli, трансформированной или трансфецированной вектором по п.1, в культуральной среде в присутствии источника углерода и индукции экспрессии пептидного продукта при регулировании роста этих клеток-хозяев при скорости роста между 0,05 и 0,20 удвоений в час; (b) извлечения после этого упомянутого пептидного продукта из этой среды.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что в среде присутствует увеличивающее проницаемость мембраны количество глицина во время по меньшей мере части периода упомянутого регулируемого роста.

13. Способ по п.11, отличающийся тем, что извлечение упомянутого продукта предусматривает (a) отделение клеток-хозяев от культуральной среды; (b) проведение жидкостной хроматографии с обращенной фазой этой среды и извлечение фракций, содержащих пептидный продукт; (c) проведение катионообменной хроматографии фракций стадии (b)

(d) извлечение после этого фракций, содержащих пептидный продукт.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63, Рисунок 64, Рисунок 65, Рисунок 66, Рисунок 67, Рисунок 68, Рисунок 69, Рисунок 70, Рисунок 71, Рисунок 72, Рисунок 73, Рисунок 74, Рисунок 75, Рисунок 76, Рисунок 77, Рисунок 78, Рисунок 79, Рисунок 80, Рисунок 81, Рисунок 82, Рисунок 83, Рисунок 84, Рисунок 85, Рисунок 86, Рисунок 87, Рисунок 88, Рисунок 89, Рисунок 90, Рисунок 91



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к средствам для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний телят
Изобретение относится к биотехнологии и пищевой промышленности и может быть использовано для получения нуклеиновых кислот и аминокислот

Изобретение относится к биотехнологии и, в частности, к способам получения рекомбинантных полипептидов через промежуточную форму слитого белка

Изобретение относится к молекулярной биологии, в частности к получению инсулина из предшественника
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к способам получения белковых гидролизатов, и может быть использовано при получении основных питательных сред для накопления и культивирования микроорганизмов бактериальной природы

Изобретение относится к области получения ферментных препаратов методами генной инженерии и может быть использовано в биотехнологических процессах и микробиологической промышленности

Изобретение относится к получению биологически активной IL-1 протеазы с помощью технологии рекомбинантных ДНК и может быть использовано в медицине

Изобретение относится к области биотехнологии и генетической инженерии и может быть использовано в диагностике заболеваний свиней

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии и может быть использовано для выделения и очистки физиологически активного рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека (рчГ-КСФ)

Изобретение относится к биотехнологии, касается порционной ферментации с подпиткой с особой системой вектор-хозяин E.coli для эффективного образования рекомбинантных протеинов, в особенности рекомбинантных молекул антител, предпочтительно фрагментов антител, таких как миниантитела

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммуноглобулинам против РТРrH, полученным генно-инженерными методами

Изобретение относится к белку, характеризуемому следующими свойствами: (а) молекулярной массой при электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (SDS-PAGE), составляющей приблизительно 60 кД в условиях восстановления, приблизительно 60 кД и 120 кД в невосстанавливающих условиях; (б) высокой аффинностью к катионообменной колонке и к колонке с гепарином; (в) биологической активностью ингибирования дифференцировки и/или созревания остеокластов, причем указанная активность снижается при нагревании при 70oС в течение 10 мин или при 56oС в течение 30 мин, указанная активность теряется при нагревании при 90oС в течение 10 мин; (г) внутренними аминокислотными последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и (д) необязательно имеющему N-концевые аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7; способу получения таких белков путем культивирования человеческих фибробластов; очистки белка путем сочетания колоночной ионообменной хроматографии, колоночной аффинной хроматографии и колоночной хроматографии с обращенной фазой

Изобретение относится к области молекулярной биологии и генетической инженерии и может быть использовано в фармацевтической промышленности, а также в медицинской практике с целью снижения эндогенной активности фолликулостимулирующего гормона (ФСГ)

Изобретение относится к генетической инженерии

Наверх