Рекомбинантная плазмидная днк pacyclans для переноса и экспрессии в клетках escherichia coli гена l-аспарагиназы erwinia carotovora (ecar-lans) и способ получения рекомбинантной ecar-lans из биомассы штамма e.coli- продуцента

 

Изобретение относится к генной инженерии и биотехнологии и может быть использовано в медико-биологической промышленности. Сконструирована рекомбинантная плазмида (pACYCLANS), содержащая природную последовательность гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), которая находится под контролем промотора и терминатора РНК-полимеразы фага Т7 и кодирует полноразмерный предшественник фермента с сигнальным пептидом для экспорта белка в периплазму с последующим процессингом. Путем трансформации указанной плазмидой штаммов Е.coli, способных синтезировать РНК-полимеразу фага Т7, получают штаммы-продуценты, в которых содержание рекомбинантной L-аспарагиназы составляет от 8 до 12%. Для выделения и очистки фермента из биомассы используют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сульфатом аммония и хроматографию на SP-сефарозе FF. Изобретение обеспечивает получение с высоким выходом очищенного препарата L-аспарагиназы. 2 с.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть)н

Формула изобретения

1. Рекомбинантная плазмидная ДНК pACYCLANS для переноса и экспрессии в клетках Escherichia coli гена L-аспарагиназы Erwinia carotovora (ECAR-LANS), имеющая размер 5,8 т.п.н. и состоящая из следующих элементов: фрагмента BamH I-Pst I размером 3 т.п.н. плазмиды рАСYC 177, фрагмента Nhе I-BamH I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рBADLANS, содержащего ген ECAR-LANS с нуклеотидной последовательностью SEQ ID №1, фрагмента Bgl II-Xba I размером 0,2 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а), фрагмента BamHI-Рst I размером 1,3 т.п.н. плазмиды рЕТ23(а).

2. Способ получения рекомбинантной L-аспарагиназы, включающий стадии культивирования штамма-продуцента в оптимальных для синтеза указанного фермента условиях и последующего выделения и очистки продукта, отличающийся тем, что в качестве штамма-продуцента используют штамм Е.coli, трансформированный рекомбинантной плазмидной ДНК по п.1, а для выделения и очистки фермента применяют разрушение клеток с помощью ультразвуковой дезинтеграции, фракционирование сернокислым аммонием и хроматографию на SP-сефарозе FF.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22

NF4A Восстановление действия патента СССР или патента Российской Федерации на изобретение

Дата, с которой действие патента восстановлено: 20.03.2008

Извещение опубликовано: 20.03.2008        БИ: 08/2008




 

Похожие патенты:

Изобретение относится к генетической инженерии

Изобретение относится к области получения ферментных препаратов методами генной инженерии и может быть использовано в биотехнологических процессах и микробиологической промышленности

Изобретение относится к получению биологически активной IL-1 протеазы с помощью технологии рекомбинантных ДНК и может быть использовано в медицине

Изобретение относится к области биотехнологии и генетической инженерии и может быть использовано в диагностике заболеваний свиней

Изобретение относится к биохимии и биотехнологии и может быть использовано для выделения и очистки физиологически активного рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека (рчГ-КСФ)

Изобретение относится к биотехнологии, касается порционной ферментации с подпиткой с особой системой вектор-хозяин E.coli для эффективного образования рекомбинантных протеинов, в особенности рекомбинантных молекул антител, предпочтительно фрагментов антител, таких как миниантитела

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммуноглобулинам против РТРrH, полученным генно-инженерными методами

Изобретение относится к белку, характеризуемому следующими свойствами: (а) молекулярной массой при электрофорезе в полиакриламидном геле в присутствии ДСН (SDS-PAGE), составляющей приблизительно 60 кД в условиях восстановления, приблизительно 60 кД и 120 кД в невосстанавливающих условиях; (б) высокой аффинностью к катионообменной колонке и к колонке с гепарином; (в) биологической активностью ингибирования дифференцировки и/или созревания остеокластов, причем указанная активность снижается при нагревании при 70oС в течение 10 мин или при 56oС в течение 30 мин, указанная активность теряется при нагревании при 90oС в течение 10 мин; (г) внутренними аминокислотными последовательностями, представленными в SEQ ID NO: 1, 2 и 3, и (д) необязательно имеющему N-концевые аминокислотные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 7; способу получения таких белков путем культивирования человеческих фибробластов; очистки белка путем сочетания колоночной ионообменной хроматографии, колоночной аффинной хроматографии и колоночной хроматографии с обращенной фазой

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к генетической инженерии, и может быть использовано в медицинской практике
Наверх