Способ диагностики хронического панкреатита, развившегося на фоне язвенной болезни двенадцатиперстной кишки

Изобретение относится к области медицины, в частности к гастроэнтерологии. Способ позволяет повысить точность диагностики хронического панкреатита, развившегося на фоне язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, и кроме того, он прост в исполнении. Проводят определение клинических признаков и уровня содержания панкреатических ферментов в крови, при этом при нормальном содержании ферментов в сыворотке крови хронический панкреатит диагностируют путем дополнительного определения отклонения от нормального содержания их уровня после 5-кратного внутримышечного введения больному имунофана и по характерным изменениям показателей иммунного статуса больного. 5 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии и иммунологии, и может найти применение в диагностике хронического панкреатита (ХП).

Статистический анализ показывает, что язвенной болезнью двенадцатиперстной кишки (ЯБ ДПК) болеют около 10% населения в мире. Длительное, часто рецидивирующее течение ЯБ ДПК в 63-100% случаев приводит к необратимым изменениям структуры и функции поджелудочной железы, способствуя развитию вторичного ХП (Сухова Н.А., 1992, Кокуева О.В., 1998). Поражение поджелудочной железы происходит с участием иммунокомпетентных клеток в результате истощения резервов иммунного ответа и срыва иммунологической толерантности у больных ЯБ ДПК. Развившийся на фоне ЯБ ДПК хронический панкреатит формирует качественно новый симптомокомплекс, изменяющий и утяжеляющий течение основного заболевания. Предотвратить развитие ХП у больных ЯБ ДПК возможно при диагностировании его на самом раннем этапе, задолго до манифестации функциональных расстройств.

В диагностике ХП важную роль играет выявление гиперферментемии, которую исследуют путем количественного определения содержания в сыворотке крови амилазы, липазы, трипсина (Справочник “Медицинские лабораторные технологии”, С.-Петербург, 1999, т.2, стр.19-20, 39-41, 20-21. Биохимические методы исследования в клинике. М., 1969, стр.186-191, 206-208. Богер М.М., Методы исследования поджелудочной железы, Новосибирск: Наука, 1982, стр.80-94).

В клинической практике чаще всего исследуют активность амилазы, поскольку для этого фермента имеется специфический субстрат и методы определения его несложны. Существуют три основные группы способов исследования амилазы в биологических жидкостях:

1) редуктометрические, основанные на определении образующихся из крахмала сахаров;

2) амилокластические, основанные на определении количества нерасщепленного крахмала по его реакции с йодом;

3) хромолитические, основанные на использовании комплексов субстрат-краситель, которые под действием амилазы распадаются с образованием водорастворимого красителя.

Активность липазы определяют в большинстве способов на основании титрометрического определения количества освободившихся под действием фермента жирных кислот. Эти способы отличаются используемым субстратом: оливковое масло, твин, тербутирин. Фотометрический способ определения липазы связан с введением в реакционную смесь особых реактивов. В качестве унифицированного способа используют турбидиметрический, в котором в качестве субстрата используют оливковое масло.

Трипсин определяют в сыворотке крови путем исследования его активности по Эрлангеру с сотр. в модификации В.А. Шорникова. Способ основан на расщеплении трипсином синтетического бесцветного субстрата-бензоиларгинин-р-нитроанилид с образованием окрашенного р-нитроанилина, количество которого определяют калибриметрически.

Однако по активности панкреатических ферментов в крови зачастую трудно судить о наличии и выраженности ХП, поскольку заболевание в сочетании с ЯБ ДПК часто не сопровождается повышением активности ферментов. В этих случаях применяемые методы не имеют существенной ценности и ХП может быть вовремя не диагностирован, что повлечет прогрессирование воспалительно-дегенеративного процесса в поджелудочной железе с нарушением ее функциональной активности, манифестацию заболевания и развитие осложнений вследствие отсутствия своевременного патогенетического лечения.

В качестве вспомогательного метода для выявления ХП используют иммунологическое исследование периферической крови. Применяемые иммунологические методы делят на 3 группы (Велбри С.К. Иммунологическая диагностика заболеваний поджелудочной железы, М., 1985):

1) определение нормальных и измененных антигенов ткани и отдельных составных компонентов поджелудочной железы в крови и биологических жидкостях как признака повреждения или нарушения функции поджелудочной железы;

2) определение антител или сенсибилизированных лимфоцитов против антигенов поджелудочной железы или ее отдельных компонентов, комплексов антиген-антитело как показателей иммунного ответа. Эти показатели могут быть диагностическими критериями течения заболевания;

3) определение иммунологических показателей, не указывающих прямо на поражение поджелудочной железы, но характеризующих состояние иммунной системы в целом, степень ее реактивности как способности организма противостоять развитию основного патологического процесса, так и его резистентности к осложнениям.

Важен тот факт, что при ХП уровень панкреатических ферментов в крови и моче обычно повышается позже и нормализуется раньше, чем исчезает антиген поджелудочной железы из крови. Поэтому выявление последнего в сыворотке крови является высокоспецифическим методом диагностики ХП. Но при сочетании ХП с ЯБ ДПК результативность метода может быть неудовлетворительной, т.к. антиген поджелудочной железы у данной категории больных выявляется только в 1 из 7 случаев. Наличие антипанкреатических антител не является специфичным для ХП, т.к. они могут циркулировать в крови при раке, кистозном фиброзе поджелудочной железы и отсутствовать при тяжелой форме ХП и сниженной реактивности больного, что, естественно, снижает их диагностическую ценность.

В работе нами использовано комплексное исследование иммунного статуса II уровня с оценкой состояния клеточного, гуморального, фагоцитарного звеньев иммунной системы.

Исследуемый материал: периферическая венозная кровь. Взятие крови производят в асептических условиях из вены локтевого сгиба в стерильные силиконизированные пробирки. В одну из них предварительно вносят раствор гепарина из расчета 10 ЕД/мл крови, затем добавляют 5 мл венозной крови. В другую (сухую) пробирку вносят 3 мл крови.

Оценку состояния клеточного звена производят с применением моноклональных антител к CD3-, CD4-, CD8-, CD16-, СD19-рецепторам лимфоцитов.

Ход исследования.

Гепаринизированную кровь смешивают в объемном соотношении 2:1 с 3% раствором желатина на среде 199, перемешивают и помещают на 20-25 минут в термостат при температуре +37°С. После расслаивания верхний слой осторожно переносят пастеровской пипеткой в центрифужные пробирки и центрифугируют 10 минут при 1000 об/мин на холоде. Для удаления эритроцитов осадок ресуспендируют в 1 мл в 1 мл гемолитического буфера или в 0,5 мл дистиллированной воды (время воздействия 20-30 с) с последующим разбавлением 20-кратным объемом забуференного фосфатами физиологического раствора (ЗФР). Клетки осаждают центрифугированием при 400-430 об/мин в течение 20 минут на холоде и собирают в интерфазу, содержащую лимфоциты, при помощи пастеровской пипетки. Полученную суспензию лимфоцитов трижды отмывают в ЗФР.

Выделенные лимфоциты ресуспендируют в необходимом объеме ЗФР, доводя их концентрацию до 1-2 млн/мл, и вносят по 100 мл клеточных суспензий в U-образные лунки 96-луночного планшета. Планшеты центрифугируют на холоде в течение 2 минут при 1000 об/мин, супернатант удаляют, а осадок ресуспендируют в 100 мкл моноклональных антител требуемого разведения на забуференном фосфатами изотоническом растворе с 0,5% бычьего сывороточного альбумина и 0,02% азида натрия. Клетки инкубируют с антителами при +4°С в течение 30 минут с периодическим осторожным встряхиванием. После окончания срока инкубации клетки центрифугируют при +4°С в течение 2 минут, осадок ресуспендируют в 150-200 мкл ЗФР или среды 199, осаждают, подвергают повторной отмывке.

Полученные фиксированные пробы анализируют под микроскопом в ультрафиолетовом свете. Для оценки результатов реакции с достаточной степенью достоверности необходимо подсчитать не менее 200-300 клеток в каждой пробе.

Физиологические нормы относительного содержания лимфоцитов, принятые в лаборатории:

- CD3- 54-77%;

- CD4- 35-50%;

- CD8- 18-25%;

- CD16- 5-15%;

- CD19- 3-13%.

Титр иммуноглобулинов классов А, М, G вычисляют математически на основе данных радиальной иммунодиффузии в агаровом геле по методу Манчини.

Ход исследования.

При температуре 55-56°С смешивают агар с соответствующей антисывороткой в соотношении 3:1. Быстро выливают смесь в стеклянную чашку Петри, лежащую на горизонтальном столе. После застывания агара в нем по трафарету пробойником выбивают 33 лунки, в каждую лунку пастеровской пипеткой вносят по 5 мл испытуемой сыворотки, в средние четыре лунки добавляют в 4-кратных разведениях тест-сыворотку с известным содержанием иммуноглобулинов. После этого чашки помещают во влажную среду в строго горизонтальном положении на 24-48 часов при 4°С (для JgA и JgG - 24 часа, для JgM - 48 часов). Через 24-48 часов реакцию учитывают. При косом освещении кольцо преципитации становится видимым и измеряется линейкой. По диаметру кольца вокруг лунок с тест-сывороткой строят калибровочную кривую на полулогарифмической бумаге. При ее построении учитывают то обстоятельство, что в определенном интервале концентрации иммуноглобулинов диаметр кольца прямо пропорционален логарифму концентрации иммуноглобулинов.

После измерения диаметра кольца в испытуемых пробах по калибровочной кривой оценивают концентрацию иммуноглобулина соответствующего класса в исследуемых образцах.

Концентрацию выражают в ME или в мг белка на 100 мл (мг%) или г/л (система СИ).

Физиологически нормальное содержание иммуноглобулинов:

- JgA - 0,7-3,0 г/л;

- JgG - 8,0-16,0 г/л;

- JgM - 0,8-2,5 г/л.

Уровень содержания в сыворотке крови общей фракции циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) оценивают методом преципитации 3,5% раствором полиэтиленгликоля (ПЭГ).

Необходимые материалы и оборудование:

- изотонический раствор натрия хлорида;

- 7% раствор ПЭГ;

- 0,1 н. раствор едкого натрия;

- центрифуга;

- спектрофотометр;

- центрифужные пробирки;

- пипетки емкостью 1 мл и 5 мл.

Реактивы.

7% раствор ПЭГ: 7 г ПЭГ растворяют 100 мл боратного буфера (рН 8,4). Боратный буфер готовят путем смешивания 55 мл 1,24% раствора борной кислоты и 45 мл 1,9% раствора буры, доводят до 200 мл дистиллированной водой. 3,5% раствор ПЭГ: 20 мл 7% раствора ПЭГ и 20 мл боратного буфера. 0,1 н. раствора едкого натрия: 4 г NaOH разводят в 1 мл дистиллированной воды.

Постановка метода.

Сыворотку крови разводят изотоническим раствором хлорида натрия в соотношении 1:25 (0,1 мл + 2,5 мл). Разведенную сыворотку смешивают с 7% раствором ПЭГ в соотношении 1:1 (0,5 мл + 0,5 мл). Для проведения реакции преципитации пробирки помещают в холодильник при 4°С на 18 часов. Пробирки центрифугируют 15 минут при 1500 об/мин и удаляют надосадочную жидкость. Далее осадок растворяют в 2,5 мл 0,1 н. раствора NaOH, очень тщательно перемешивают и оставляют при комнатной температуре не менее чем на 30 минут. Пробы замеряют на спектрофотометре, длина волны 280 нм против 0,1 н. раствора NaOH. Уровни ЦИК выражают в единицах оптической плотности. Уровни ЦИК, определенные методом преципитации 3,5% раствором ПЭГ, в норме не должны превышать 0,110 единиц оптической плотности.

Поглотительную активность нейтрофильных гранулоцитов и степень завершенности фагоцитоза исследуют с помощью реакции с живой культурой золотистого стафилококка (штамм 209).

Ход исследования.

Каплю венозной крови в количестве 0,1 мл помещают на чистое обезжиренное покровное стекло. Его выдерживают во влажной камере при 37°С 45 минут, после чего образовавшийся сгусток осторожно удаляют пинцетом. Покровное стекло с прикрепленными нейтрофилами промывают в растворе Хенкса, наносят расчетную дозу суточной культуры Staf. aureus и снова помещают во влажную камеру при 37°С на 30 минут. После инкубации стекло промывают в растворе Хенкса для удаления непоглощенных частиц и высушивают. Высушенный препарат фиксируют и красят по Романовскому-Гимзе.

Учет фагоцитарной активности проводят, определяя процент нейтрофилов с фагоцитарным материалом - фагоцитарное число - и количество поглощенных частиц из расчета на один нейтрофил - фагоцитарный индекс. В каждом препарате подсчитывают не менее 200 клеток. Физиологические нормы по лаборатории:

- поглотительная активность - 50-70%;

- фагоцитарное число - 2,2-4,3;

- фагоцитарный индекс - 1,4-2,5;

- переваривающая активность - 70-94%;

- индекс переваривания - 1,3-2,0.

С целью диагностики уровня ферментемии нами использованы:

I. Спектрофотометрическое определение изменения мутности суспензии оливкового масла под действием липазы (Справочник “Медицинские лабораторные технологии”, т.2, С.-Петербург, 1999, с.39-41).

Наиболее специфичным субстратом для липазы является триомин (оливковое масло).

Определение активности липазы по Титцу.

Под влиянием липазы оливковое масло расщепляется с образованием жирных кислот, которые титруются щелочью. По количеству ушедшей на титрование щелочи судят об активности липазы.

Реактивы:

1. Эмульсия оливкового масла: 93 мл дистиллированной воды; 0,2 г бензоата натрия и 7 мл гуммиарабика хорошо смешивают. К этой смеси добавляют 93 мг оливкового масла (медленно). Затем смесь эмульгируют в течение 10-15 минут сначала на малых, а затем на больших оборотах.

2. 0,2 М трис-буфера с рН 8,0: 50 мл 0,4 М раствора трис-гидроксиметиламинометана (48,4 г/л) смешивают с 26,8 мл 0,4 н. соляной кислоты и доводят объем до 100 мл дистиллированной водой.

3. Индикатор: 1 г тимолфталеина растворяют в 100 мл этанола.

4. 0,05 н. раствор едкого натрия, не содержащий карбонаты, титруют до появления голубой окраски. Разница в объеме 0,05 н. едкого натрия, израсходованного на опыт и контроль, составляет активность липазы в единицах Титца.

Таблица 1
ход исследования	опыт	контроль
буферный раствор	1,0	1,0
эмульсия оливкового масла	0,5	0,5
дистиллированная вода	2,5	2,5
сыворотка крови	1,0	-
смешивать, затем инкубировать в термостате в течение 2 часов при 37°С
переносить содержимое всех пробирок в эрленмейеровские колбы 50 мл
этанол	3,0	3,0
сыворотка крови	-	1,0
1% раствор тимолфталеина	4 капли	4 капли
титрование 0,05 н. едкого натрия

II. Определение уровня содержания трипсина фотометрическим способом. В основе метода лежит способность трипсина гидролизировать хромогенный субстрат N-α-тозил-L-аргинин-4-нитроанилид. Образовавшийся 4-нитроанилид определяют фотометрически.

Определение активности трипсина по Хэвербеку-Эрлангеру.

Оборудование:

- спектрофотометр, термостат. Базисные реактивы:

- трис;

- хлористый кальций;

- диметилформамид;

- 0,001 н. раствор соляной кислоты;

- нитроанилин 0,1 мкМ: 13,8 г нитроаналина разводят в 1 л дистиллированной воды;

- хлористый калий 0,14 н.;

- бензоил-аргинин-пара-нитроаналин (БАПНА);

- уксусная кислота, 30% раствор.

Рабочие растворы:

1. Трис-буфер 0,2 М раствор с рН 7,8: 24,23 г триса и 3,67 г хлористого кальция разводят в 800 мл дистиллированной воды, рН устанавливают 7,8 с помощью 2 н. раствора соляной кислоты. Затем объем доводят до 1000 мл дистиллированной водой.

2. Раствор субстрата (20 мг%): 2 мг БАПНА растворяют при легком нагревании в 0,1 мл диметилформамида, затем добавляют трис-буфера до 10 мл.

3. 30% раствор уксусной кислоты.

Сыворотку крови разводят 1:2 0,14 н. раствором хлористого натрия. Оптическую плотность жидкости определяют на спектрофотометре при длине волны 410 нм.

Для расчета концентрации пара-нитроанилина следует построить калибровочную кривую. За единицу активности трипсина принимают такую активность, при которой расщепляется 1 мкМ субстрата в минуту. Активность трипсина определяется по разнице концентрации паранитроанилина в опытной и контрольной пробирках. С учетом времени инкубации и разведения активность трипсина в сыворотке крови подсчитывается по формуле:

Ео - экстинкция опыта;

Ек - экстинкция контроля;

А - оптическая плотность фактора, получаемого от разделения концентрации крови в пробирках калибровочной кривой на их оптическую плотность.

Таблица 2
ход исследования	опыт	контроль
сыворотка крови в разведении	0,5	0,5
субстрат	4,0	4,0
раствор уксусной кислоты	-	1
термостирование 30 минут при 37°С
раствор уксусной кислоты	1	-
фотометрия

У здоровых людей активность трипсина в крови находится в пределах 0-4 мед./мл.

III. Для исследования активности амилазы в качестве прототипа нами использован унифицированный амилокластический способ со стойким крахмальным субстратом (способ Каравея) (Справочник “Медицинские лабораторные технологии”, С.-Петербург, 1999, т.2, с.20-21). Принцип метода заключается в том, что амилаза гидролизует расщепление крахмала с образованием конечных продуктов, не дающих цветной реакции с йодом. Об активности амилазы судят по снижению интенсивности окраски.

Оборудование:

- фотоэлектроколоримерт, водяная баня.

Реактивы:

1. 2% раствор крахмала: к 1 мл холодной дистиллированной воды добавляют 200 мг крахмала, размешивают его, затем доливают 6-7 мл горячей дистиллированной воды и ставят на кипящую водяную баню до полного растворения. После этого объем дистиллированной воды доводят до 10 мл. Субстрат должен быть прозрачным.

2. Фосфатный буферный раствор с рН 7,1. Для его приготовления смешивают 7,62 г. кислого фосфорнокислого калия (KP₂PO₄) и 20,45 г двузамещенного фосфорнокислого натрия (Na₂HPO₄), доводят объем дистиллированной водой до 1000 мл.

3. 3% раствор поваренной соли.

4. 0,1 н. раствор йода: 3 г йодистого калия вносят в 2,5 мл дистиллированной воды, добавляют 1,2 г кристаллического йода и доводят объем дистиллированной водой до 10 мл.

5. 1 н. раствор соляной кислоты.

Таблица 3
ход исследования	опыт	контроль
раствор крахмала	5	5
буферный раствор	3	3
раствор поваренной соли	1	1
смешивать и 10 минут подогревать при 37°С
сыворотка крови	1	1
1 н. раствор соляной кислоты	-	2
смешивать и термостатировать в течение 30 минут при 37°С
1 н. раствор соляной кислоты	2	-
по 0,2 мл из каждого опыта и контроля вносят в колбу с раствором иода, смешивают
фотометрия

Для приготовления рабочего раствора йода в колбы 50 мл вносят 40 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 1 н. раствора соляной кислоты и 0,1 н. раствора йода. Количество колб должно соответствовать количеству пробирок с опытом и контролем. Фотометрия производится в кювете емкостью 1 мл при красном светофильтре (длина волны 630-69 нмк) против воды.

Ек - экстинкция контроля;

Ео - экстинкция опыта;

А - оптическая плотность фактора, получаемого от разделения концентрации крови в пробирках калибровочной кривой на их оптическую плотность. Этот фактор отражает концентрацию пара-нитроанилина, соответствующую единице оптической плотности.

Единица активности амилазы соответствует 10 мг расщепленного крахмала при условии инкубации в течение 30 минут при 37°С. В норме активность амилазы в сыворотке крови составляет 80-120 ед.

Основной недостаток используемых способов исследования ферментемии заключен в малой их информативности у пациентов с ЯБ ДПК, осложненной ХП, когда уровень содержания ферментов соответствует нормальным показателям.

Задача изобретения состоит в повышении точности и своевременности диагностики ХП, развившегося на фоне ЯБ ДПК.

Сущность изобретения состоит в том, что при нормальном содержании панкреатических ферментов в периферической крови ХП диагностируют путем дополнительного определения отклонения их уровня от физиологических значений и по характерным изменениям показателей иммунограммы больного после пятикратного внутримышечного введения пациенту иммунотропного препарата имунофана 0,005% по 1 мл через день.

Способ осуществляют следующим образом. У больного, страдающего ЯБ ДПК, выявляют характерные жалобы на боли в левом подреберье, эпигастрии, иррадиирующие в спину, снижение массы тела, неустойчивый стул, тошноту. Объективным исследованием обнаруживают болезненность при пальпации в панкреатодуоденальной зоне, положительные симптомы Мейо-Робсона и Кача. Производят инструментальное исследование, подтверждающее наличие ЯБ ДПК и признаков ХП: эзофагогастродуоденоскопия, ультразвуковое исследование. Из вены больного осуществляют забор крови и определяют уровень содержания амилазы, липазы и трипсина, выполняют комплексное исследование иммунного статуса. При исследовании периферической крови данных за гиперферментемию не получено, показатели иммунного статуса соответствуют физиологическим значениям, то есть диагностических признаков обострения ХП не выявлено. Пациенту вводят имунофан 0,005% по 1 мл внутримышечно через день № 5. Препарат обладает иммуностимулирующим эффектом, способен в первые 2-3 дня после введения увеличивать продукцию антител и за счет повышенной опсонизирующей способности сыворотки крови стимулировать фагоцитарную функцию нейтрофилов. У пациентов с аутоиммунными заболеваниями независимо от активности процесса введение препарата вызывает кратковременное обострение иммунного воспаления. Через 3-4 дня у больного повторно берут кровь из периферической вены для исследования уровня содержания ферментов и комплексной оценки иммунного статуса в динамике. При выявлении гиперферментемии относительно нормы и гипосупрессорного типа работы иммунной системы (дисбаланс субпопуляций Т-лимфоцитов с превалированием содержания клеток-хелперов, дефицитом СД3 и СД8-лимфоцитов и повышением иммунорегуляторного индекса; гипериммуноглобулинемия всех основных или отдельных классов иммуноглобулинов и повышение уровня циркуляции иммунных комплексов; истощение функциональной активности фагоцитов и незавершенность фагоцитоза) диагностируют ХП, развившийся на фоне ЯБ ДПК.

Пример 1.

Больная Ш., история болезни № 4731.

Поступила в гастроэнтерологическое терапевтическое отделение Краснодарской краевой клинической больницы с жалобами на боли в эпигастрии, тошноту после приема пищи, слабость.

Из анамнеза: больна ЯБ ДПК около 20 лет.

Объективно при поступлении: живот болезненный при пальпации в области эпигастрия, обоих подреберьях, по ходу проекции поджелудочной железы, положительные симптомы Мейо-Робсона и Кача.

При инструментальном и лабораторном исследованиях было выявлено: на эзофагогастродуоденоскопии рубцово-язвенная деформация луковицы ДПК, катаральный гастрит, бульбит; косвенные признаки патологии панктреато-билиарной зоны (слизистая постбульбарных отделов с телелимфоангиоэктазиями).

Ультразвуковое исследование: размеры поджелудочной железы в пределах нормы, контуры ее неровные, ЭХО-генность повышена, структура диффузно неоднородная. Заключение: ультразвуковые признаки ХП.

При исследовании ферментативной активности поджелудочной железы показатели не выходили за пределы верхней границы нормы.

В иммунограмме умеренный Т-клеточный дефицит за счет СД4-лимфоцитов, депрессия поглотительной активности нейтрофилов. Содержание иммуноглобулинов и ЦИК - в пределах нормы.

Пятикратно больной производилось внутримышечное введение 1 мл 0,005% раствора имунофана через день. Через 3 дня после последнего введения уровень амилазы, липазы, трипсина и иммунограмма были исследованы вновь. Показатели выразились в следующих цифрах по сравнению с исходными данными.

Таблица 4
исследуемая величина	исходный уровень	уровень после введения имунофана
Амилаза	25,0 г-л/ч	35,9 г-л/ч
Трипсин	175,4 ммоль/л	290 ммоль/л
Липаза	1,2 ед.	1,8 ед.
СД3-лимфоциты	52%	49%
СД4-лимфоциты	28%	35%
СД8-лимфоциты	20%	14%
иммуноглобулин А	0,6 мг/мл	0,9 мг/мл
иммуноглобулин М	1,2 мг/мл	2,8 мг/мл
иммуноглобулин G	9,3 мг/мл	20 мг/мл
ЦИК	0,06 ед.опт.пл.	0,201 ед.опт.пл.
% фагоцитоза	43%	54%
% переваривания	69%	51%

Полученные данные позволили поставить клинический диагноз: ХП, болевая форма, рецидивирующее течение в стадии обострения.

Рубцово-язвенная деформация луковицы ДПК, гастрит, бульбит.

Проведенное исследование подтвердило факт присоединения ХП к ЯБ ДПК и дало возможность своевременно провести адекватную патогенетическую терапию.

Пример 2.

Больная М., история болезни № 1625.

Поступила в гастроэнтерологическое терапевтическое отделение Краснодарской краевой клинической больницы с жалобами на боли в эпигастрии, левом подреберье, иррадиирующие в спину, носящие приступообразный характер, изжогу, снижение массы тела на 6 кг в течение 2-х месяцев.

Из анамнеза: страдает ЯБ ДПК в течение 10 лет. Неоднократно лечилась в стационаре. Госпитализирована в клинику с диагнозом: ЯБ ДПК в стадии затухающего обострения.

Объективные данные при поступлении: живот болезненный в эпигастрии, панкреато-дуоденальной зоне при пальпации, положительные симптомы Мейо-Робсона и Кача.

При обследовании выявлены следующие патологические изменения: на эзофагогастродуоденоскопии рубцово-язвенная деформация луковицы ДПК, хронический папиллит.

По данным ультразвукового исследования неоднородная, гиперэхогенная структура поджелудочной железы. Заключение: ультразвуковые признаки ХП.

Уровень содержания панкреатических ферментов - в пределах нормы.

В иммунограмме дисбаланс субпопуляций Т-лимфоцитов с преобладанием супрессоров, снижение индекса супрессоры, гипериммуноглобулинемия А, умеренное повышение поглотительной активности нейтрофилов и содержания ЦИК.

Больной пятикратно вводился внутримышечно 0,005% раствор имунофана по 1 мл через день. Через 4 дня произведено повторное исследование периферической крови.

Полученные данные отражены в таблице 5.

Таблица 5
исследуемая величина	исходный уровень	уровень после введения имунофана
амилаза	18,0 г-л/ч	33 г-л/ч
трипсин	205 ммоль/л	245 ммоль/л
липаза	1,3 ед.	1,7 ед.
СД3-лимфоциты	55%	52%
СД4-лимфоциты	32%	33%
СД8-лимфоциты	29%	18%
иммуноглобулин А	2,1 мг/мл	1,1 мг/мл
иммуноглобулин М	2,0 мг/мл	3,2 мг/мл
иммуноглобулин G	10,4 мг/мл	18 мг/мл
ЦИК	0,160 ед.опт.пл.	0,290 ед.опт.пл.
% фагоцитоза	65%	60%
% переваривания	74%	53%

Поставлен диагноз: ХП, болевая форма, рецидивирующее течение в стадии обострения. ЯБ ДПК, рубцово-язвенная деформация луковицы ДПК.

Таким образом, предполагаемый способ упрощает, облегчает и делает своевременной диагностику ХП, развившегося на фоне ЯБ ДПК, что позволит вовремя провести адекватное патогенетическое лечение, снизить частоту осложнений и обострении как ЯБ ДПК, так и ХП, уменьшить частоту повторных госпитализаций и сроки пребывания больных в стационаре.

Способ диагностики хронического панкреатита, развившегося на фоне язвенной болезни двенадцатиперстной кишки, включающий определение клинических признаков и уровня содержания панкреатических ферментов в крови, отличающийся тем, что при нормальном содержании ферментов в сыворотке крови хронический панкреатит диагностируют путем дополнительного определения отклонения от нормального содержания их уровня после 5-кратного внутримышечного введения больному имунофана и по характерным изменениям показателей иммунного статуса больного.