Способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах
Владельцы патента RU 2252767:
Государственное научное учреждение Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны РФ Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)
Изобретение относится к ветеринарии и касается нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах. Коровам за 20-25 дней до отела однократно внутримышечно вводят 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл. Двукратно до и двукратно после отела с интервалом 10 дней - тетравит в дозе 10 мл с содержанием в 1 мл 50000 ME витамина А, 25000 ME витамина D, 20 мг витамина Е и 5 мг витамина F. Внутрь вводят в течение 20-25 дней до и после отела янтарную кислоту в дозе 1,0 г. Способ обеспечивает эффективную коррекцию основных показателей гомеостаза у коров после отела. 4 табл.
Изобретение относится к ветеринарии, касается способа нормализации иммунобиохимического гомеостаза у коров во время беременности и в послеродовом периоде и может быть использовано для лечебно-профилактической защиты коров от массовых болезней репродуктивных органов и получения высокорезистентного приплода.
Исследования показывают, что многочисленные стрессы и интенсивная эксплуатация высокопродуктивных коров, как правило, сопровождаются функциональными расстройствами системы органов размножения и их высокой заболеваемостью во время беременности, родов и в послеродовом периоде. По данным ряда авторов, акушерская патология в эти физиологические периоды репродукции может принимать массовый характер и сопровождается снижением воспроизводительной функции. Так, родовые и послеродовые осложнения у коров снижают их оплодотворяемость на 17,7-26,0%, увеличивают продолжительность бесплодия на 42 дня, уменьшают выход приплода на 12-18% (1).
В развитии акушерской патологии существенную роль играет состояние иммунобиохимического гомеостаза, в частности клеточного и гуморального иммунитета и естественной резистентности. Так, отмечено, что накануне и в день отела у коров снижается количество Т- и В-лимфоцитов, что особенно заметно при патологическом отеле, после которого в послеродовом периоде их уровень восстанавливается медленно (2).
Установлено, что в основе этиопатогенеза массовой акушерской патологии у коров лежит состояние стрессовой дезадаптации, сопровождающееся гиперактивностью процессов перекисного (свободно-радикального) окисления липидов (ПОЛ), снижением активности системы антиоксидантной защиты (АОЗ) и иммунологической резистентности, связанным с иммунодепрессивным действием продуктов ПОЛ. Период запуска и отел, являсь мощными стрессовыми факторами для организма стельных коров, сопровождаются активацией процессов ПОЛ и снижением активности системы АОЗ. Уровень токсических продуктов ПОЛ (диеновые конъюгаты, кетодиены, малоновый альдегид) в предродовом периоде характеризуются высокими показателями, а активность системы АОЗ, как в ферментативном (каталаза, глутатион-пероксидаза), так и в неферментативном (витамины А, Е, С) звене - низкими. После отела коров показатели продуктов ПОЛ возрастают еще более резко, а показатели системы АОЗ снижаются.
В настоящее время избыточное накопление в организме продуктов ПОЛ рассматривается как один из ведущих универсальных механизмов повреждения клетки вследствие нарушения структурно-функциональной организации биомембран.
Следовательно, избыточное накопление в организме токсических продуктов ПОЛ в предродовом и раннем послеродовом периодах является основой развития цепи структурно-метаболических изменений, способствующих возникновению и развитию послеродового эндометрита (нарушение ионного равновесия между клеткой и внешней средой нарушает механизмы возбуждения и сокращения миометрия, а повреждение эндотелиальных клеток и деполимеризация гиалуроновой кислоты снижает их защитную роль и создает условия для деятельности микрофлоры).
Значение состояния иммунобиохимического гомеостаза в качестве патогенетического фактора акушерской патологии коров подтверждается низкой эффективностью способов профилактики с применением лекарственных препаратов без учета иммунобиохимических процессов (3).
Коррекцию иммунобиохимического гомеостаза проводят с применением биологически активных веществ, например адаптогенов, антистрессовых средств, антиоксидантов. Из антиоксидантов особенно широко применяют неорганические и органические соединения селена и препараты на их основе в качестве ультрамикродобавок к кормам (4). Так, известен способ профилактики послеродовых заболеваний у коров, включающий двукратное за 40-50 дней до и через месяц после первой инъекции внутримышечное введение 10 мл 0,5%-ного раствора селена с одновременным введением в рацион комплекса микро- и макроэлементов, что обеспечивает повышение резистентности организма коров (5). Известен также способ коррекции патологий обмена веществ и лечения и профилактики их последствий, включающий использование универсального комплексного препарата, содержащего селенит натрия, витамин Е, янтарную кислоту, сульфат цинка и фармазин, который вводят внутримышечно за 45, 30, 15 дней до родов и в день родов (6). Однако известные способы при сложности их осуществления не обеспечивают нормализацию иммунобиохимического гомеостаза в полном объеме, воздействуя на его отдельные показатели без учета механизмов нарушения метаболизма в зависимости от физиологического состояния животного, важнейшим из которых является нарастание напряженности в метаболических процессах, сопровождающееся накоплением токсических продуктов ПОЛ в предродовом периоде и значительное повышение их уровня после отела. В этих физиологических периодах репродукции происходит интенсивное использование пластических соединений тканей, в первую очередь жира, в дальнейшем - структурных липидов (6). Мобилизация жирных кислот вследствие нарушения утилизации в сопряженных реакциях их окисления с углеводами приводит к поступлению в кровь недоокисленных соединений, что на фоне ослабления системы АОЗ из-за многочисленных стрессов и интенсивной эксплуатации создает благоприятные условия для активации неферментативного окисления липидов и как результат - к угнетению клеточных и гуморальных факторов иммунитета.
Цель изобретения - высокоэффективный и экологически безопасный способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза у коров в предродовом и послеродовом периодах.
Поставленная цель достигается комплексом оптимально подобранных биологически активных средств с антиоксидантной активностью и параметрами их применения по оригинальной схеме.
Способ осуществляется следующим образом.
Коровам за 20-25 дней до отела однократно внутримышечно вводят 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл, двукратно до и двукратно после отела с интервалом 10 дней - тетравит в дозе 10 мл с содержанием в 1 мл 50000 ME витамина А, 25000 ME витамина D, 20 мг витамина Е и 5 мг витамина F, в течение 20-25 дней до и после отела внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г.
Осуществимость способа определялась в научно-производственном опыте на коровах черно-пестрой породы молочной продуктивностью 3500-3800 кг в условиях одного из хозяйств Нижегородской области с высокой (более 90%) заболеваемостью репродуктивных органов после отела.
Перед проведением опыта и на 2-3 день после отела от 10 коров каждой группы брали пробы крови для оценки состояния иммунобиохимического гомеостаза по показателям гемоглобина, эритроцитов, общего белка сыворотки крови и белковых фракций (определялись общепринятыми методами), глюкозы (определялись орто-толуидиновым методом), общих липидов (определялись по методу Криницкого в модификации Волгина /1969/), продуктов ПОЛ - диеновых конъюгатов и кетодиенов (определялись по методу Плацерта /1976/), малонового диальдегида (определялись в реакции с тиобарбитуровой кислотой), лизоцимной активности сыворотки крови (определялись по методу В.Г.Дорофейчук), бактерицидной активности сыворотки крови (определялись по методу О.В.Смирновой и Т.А.Кузьминой), фагоцитарной активности нейтрофилов крови (определялись по методу B.C.Гостева), активности каталазы (определялись в реакции с молибдатом аммония), витамина А /ретинола/ (определялись в реакции с треххлористой сурьмой), витамина Е /токоферола/ (определялись по методу Биери в модификации Р.Ш.Киселевич, С.И.Скварко /1972/).
Сущность способа поясняется примерами.
Пример 1. Для изучения влияния различных биологически активных средств с антиоксидантной активностью (селенита натрия в виде 0,5% раствора, тетравита и янтарной кислоты) на процессы ПОЛ и состояние иммунобиохимического гомеостаза по принципу аналогов формировали 4 группы глубокостельных коров по 10 голов в каждой. Коровам первой опытной группы за 20-25 дней до отела однократно внутримышечно вводили 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл, коровам второй опытной группы в течение 20-25 дней до и после отела давали внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г, коровам третьей опытной группы за 20-25 дней до и в первые 20 дней после отела внутримышечно вводили тетравит с интервалом 10 дней. Коровам четвертой группы препаратов не применяли, они служили контролем. Результаты исследований приведены в таблицах 1 и 2.
| Таблица 1 Влияние различных антиоксидантов на показатели продуктов ПОЛ и системы АОЗ у коров | ||||||||
| Показатели | Группы коров | |||||||
| 1-я, n=10 гол. (селенит натрия) | 2-я, n=10 гол. (янтарная кислота) | 3-я, n=10 гол. (тетравит) | 4-я, n=10 гол. (без препаратов) | |||||
| М±m | ±в % | M±m | ±в % | M±m | ±в % | M±m | ±в % | |
| Диеновые конъюгаты, ед. А/мл | | +16,7 |  | +8,7 |  | 33,3 |  | +63,6 |
| Кетодиены, ед. А/мл |  | +18,2 |  | +12,7 |  | +54,6 |  | +75,0 |
| Малоновый диальдегид, мкмоль/л |  | +1,5 |  | +1,5 |  | +9,9 |  | +32,4 |
| Каталаза, Мкат/л |  | -10,2 |  | -15,4 |  | -18,2 |  | -49,2 |
| Витамин А, Мкмоль/л |  | -32,6 |  | -31,7 |  | -12,6 |  | -57,0 |
| Витамин Е, Мкмоль/л |  | -26,5 |  | -24,6 |  | -18,4 |  | -45,1 |
| Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отела в знаменателе - показатели на 2-3 день после отела |
| Таблица 2 Влияние различных антиоксидантов на состояние иммунобиохимического гомеостаза коров | ||||||||
| Показатели | Группы коров | |||||||
| 1-я, n=10 гол (селенит натрия) | 2-я, n=10 гол (янтарная кислота) | 3-я, n=10 гол (тетравит) | 4-я, n=10 гол (без препаратов) | |||||
| М±m | ±в % | M±m | ±в % | M±m | ±в %M | ±m | ±в % | |
| Гемоглобин, г/л |  | +20,8 |  | +19,5 |  | +7,45 |  | +2,4 |
| Эритроциты, 1012/л |  | +9,4 |  | +9,3 |  | +9,6 |  | +1,9 |
| Общий белок сыворотки крови, г/л |  | +9,3 |  | +6,5 |  | +5,9 |  | +1,1 |
| Гаммаглобулины, % |  | +18,3 |  | +21,2 |  | +14,9 |  | -12,0 |
| Глюкоза, ммоль/л |  | +20,5 |  | +20,7 |  | -21,4 |  | -47,4 |
| Общие липиды, г/л |  | -13,7 |  | -12,5 |  | -13,3 |  | +4,2 |
| Лизоцимная активность, % |  | +21,9 |  | +27,3 |  | +17,7 |  | -42,9 |
| Бактерицидная активность, % |  | +14,8 |  | +13,4 |  | +13,9 |  | -7,3 |
| Фагоцитарная активность нейтрофилов, % |  | +8,0 |  | +7,2 |  | +9,8 |  | -15,0 |
| Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отела в знаменателе - показатели на 2-3 день после отела |
Показатели продуктов ПОЛ - диеновые конъюгаты, кетодиены и малоновый диальдегид - у коров за 20-25 дней до отела характеризовались высокими уровнями, превышавшими физиологическую норму для данного периода в 1,59-1,74, 1,08-1,1 и 4,49-4,64 раза соответственно. Показатели системы АОЗ были снижены как в неферментативном (витамины А и Е), так и в ферментативном (каталаза) звене. На 2-3 день после отела показатели продуктов ПОЛ - диеновые конъюгаты, кетодиены и малоновый диальдегид - значительно повысились и превысили физиологическую норму для данного периода в 1,2-1,8, 1,1-1,29 и 2,08-2,73 раза соответственно, а показатели системы АОЗ напротив понизились (таблица 1). В зависимости от примененных средств меньше всего показатели продуктов ПОЛ повышались в следующей последовательности: вторая группа - янтарная кислота, первая группа - селенит натрия, третья группа - тетравит, что свидетельствовало о снижении интенсивности процессов ПОЛ под влиянием испытанных средств.
Состояние иммунобиохимического гомеостаза у коров за 20-25 дней до отела характеризовалось снижением ряда показателей ниже уровня физиологической нормы - содержание гемоглобина на 3,3-5,6%, количество эритроцитов на 10-13%, гамма-глобулинов на 4,4-8,8%, что указывало на наличие гипоксии и снижение иммунобиологической резистентности, а содержание глюкозы до уровня нижней границы физиологической нормы - на снижение интенсивности процессов гликолиза и биоэнергетических процессов. Установлен повышенный уровень общих липидов вследствие нарушения метаболизма липоидных соединений, что может привести к расстройству синтеза стероидных гормонов и нарушению инволюционных процессов репродуктивных органов после отела. Низкие показатели лизоцимной, бактерицидной активности сыворотки крови и фагоцитарной активности нейтрофилов крови свидетельствовали о снижении естественной резистентности сухостойных коров. После отела у коров контрольной группы отмечено резкое падение показателей естественной резистентности и глюкозы. У коров опытных групп проявилась тенденция к нормализации иммунобиохимического гомеостаза, о чем свидетельствовало повышение основных показателей - содержание гемоглобина, количество эритроцитов, содержание общего белка сыворотки крови, количество гамма-глобулинов, уровень глюкозы, лизоцимная, бактерицидная активность сыворотки крови и фагоцитарная активность нейтрофилов крови (таблица 2).
Пример 2. Для изучения влияния различных сочетаний биологически активных средств с антиоксидантной активностью (0,5% раствор селенита натрия, тетравита и янтарной кислоты) и параметров их применения на процессы ПОЛ и состояние иммунобиохимического гомеостаза по принципу аналогов формировали 4 группы глубокостельных коров. Коровам первой группы (32 гол.) за 20-25 дней до отела применяли однократную внутримышечную инъекцию 0,5% раствора селенита натрия в дозе 10 мл, внутримышечные инъекции тетравита в дозе 10 мл двукратно с интервалом 10 дней до и после отела и в течение 20-25 дней до и после отела внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г. Коровам второй группы (27 гол.) за 20-25 дней до отела применяли однократную внутримышечную инъекцию 0,5% раствора селенита натрия в дозе 10 мл, внутримышечные инъекции тетравита в дозе 10 мл двукратно с интервалом 10 дней до и после отела. Коровам третьей группы (10 гол.) препараты не применяли, они служили контролем. Результаты представлены в таблицах 3 и 4.
Сочетанное применение антиоксидантов обеспечивало нормализацию иммунобиохимического гомеостаза (при этом сочетанное применение селенита натрия и тетравита - до уровня нижней границы физиологической нормы, сочетанное применение селенита натрия, тетравита и янтарной кислоты - до уровня средней границы физиологической нормы) вследствие снижения уровней продуктов ПОЛ и активации системы АОЗ (таблицы 3 и 4).
| Таблица 3 Влияние сочетаний различных антиоксидантов на показатели продуктов ПОЛ и системы АОЗ у коров | ||||||
| Показатели | Группы животных | |||||
| 1-я, n=33 гол. (селенит натрия + тетравит + янтарная кислота) | 2-я, n=27 гол. (селенит натрия + тетравит) | 3-я, n=10 гол. (без препаратов) | ||||
| М±m | ±в % | M±m | ±в % | M±m | ±в % | |
| Диеновые конъюгаты, ед. А/мл |  | -46,6 |  | +9,7 |  | +40,7 |
| Кетодиены, ед. А/мл |  | -20,7 |  | +7,0 |  | +61,8 |
| Малоновый диальдегид, мкмоль/л |  | -20,4 |  | +2,2 |  | +27,9 |
| Каталаза, мкат/л |  | +6,5 |  | +3,7 |  | -29,4 |
| Витамин А, мкмоль/л |  | +12,3 |  | +5,0 |  | --33,5 |
| Витамин Е, мкмоль/л |  | +10,7 |  | +1,4 |  | -26,0 |
| Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отела в знаменателе - показатели на 2-3 день после отела |
Таблица 4
Влияние сочетаний различных антиоксидантов на состояние иммунобиохимического гомеостаза коров
| Показатели | Группы животных | |||||
| 1-я, n=33 гол (селенит натрия + тетравит + янтарная кислота) | 2-я, n=27 гол (селенит натрия + тетравит) | 3-я, n=10 гол (без препаратов) | ||||
| М±m | ±в % | M±m | ±в % | M±m | ±в % | |
| Гемоглобин, г/л |  | +13,5 |  | +11,5 |  | +3,1 |
| Эритроциты, 1012/л |  | +15,4 |  | +10,9 |  | +1,9 |
| Общий белок сыворотки крови, г/л |  | +7,1 |  | +4,4 |  | -2,3 |
| Гамма-глобулины, % |  | +32,5 |  | +12,7 |  | -7,2 |
| Глюкоза, ммоль/л |  | +16,3 |  | +14,7 |  | -22,6 |
| Общие липиды, г/л |  | -18,0 |  | -14,0 |  | +3,2 |
| Лизоцимная активность, % |  | +38,0 |  | +22,5 |  | -41,5 |
| Бактерицидная активность, % |  | +23,6 |  | +21,0 |  | -5,8 |
| Фагоцитарная активность нейтрофилов, % |  | +16,4 |  | +9,6 |  | -10,7 |
| Примечание: в числителе - показатели за 20-25 дней до отела в знаменателе - показатели на 2-3 день после отела |
Полученные данные подтвердили достижение заявленного технического результата - нормализация иммунобиохимического гомеостаза сочетанным применением селенита натрия, тетравита и янтарной кислоты по заявленной схеме. При сравнении динамики изменения показателей токсических продуктов ПОЛ, системы АОЗ и иммунобиохимического гомеостаза под влиянием отдельных антиоксидантов или их сочетаний наблюдали положительную тенденцию, которая выражалась в снижении показателей продуктов ПОЛ и повышении показателей системы АОЗ и иммунобиохимического гомеостаза. Однако если антиоксиданты преимущественно повышали отдельные показатели иммунобиохимического гомеостаза и снижали показатели роста уровня продуктов ПОЛ, то их сочетание при менее выраженном влиянии на отдельные показатели иммунобиохимического гомеостаза обеспечивало резкое снижение уровня токсических продуктов ПОЛ и как результат - повышение активности системы АОЗ и показателей естественной резистентности. Повышение уровня естественной резистентности по основным показателям до физиологической нормы создает необходимую основу для эффективной лечебно-профилактической защиты коров от массовых болезней репродуктивных органов и получения высокорезистентного приплода.
Источники информации, принятые во внимание:
1. Нежданов А.Г., Дащукаева К.Г. Фетоплацентарная недостаточность и ее профилактика у коров. //Ветеринария. - 1999. - №7. - С.6-11.
2. Яблонский В.А., Пригара В.В. Иммунный статус коров при нормальном и патологическом отелах //Ветеринария. - 1984. - №8. - С.50-51.
3. Ерохин А.С., Федорченко О.А., Кувшинов B.C. Профилактика нарушений воспроизводительной функции коров //Ветеринария. - 1998. - №3. - С.37-38.
4. Problems on selenium in animal nutrition. Norw. J. agr. Sci. - 1993. - Suppl. 11. - P.1-216.
5. Патент РФ №2201221 С2, 2003 г.
6. Заявка РФ №2001115497 А, опуб. 2003.06.20.
Способ нормализации иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах, включающий сочетанное применение 0,5% раствора селенита натрия и активнодействующих средств, отличающийся тем, что в качестве активнодействующих средств используют тетравит и янтарную кислоту по следующей схеме: коровам за 20-25 дней до отела однократно внутримышечно вводят 0,5% раствор селенита натрия в дозе 10 мл, двукратно до и двукратно после отела с интервалом 10 дней - тетравит в дозе 10 мл с содержанием в 1 мл 50000 ME витамина А, 25000 ME витамина D, 20 мг витамина Е и 5 мг витамина F в течение 20-25 дней до и после отела внутрь янтарную кислоту в дозе 1,0 г.
