Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный марбург)
Владельцы патента RU 2257916:
Вирусологический центр НИИ Микробиологии Министерства обороны Российской Федерации (RU)
Изобретение относится к области медицины. Предложен препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный Марбург). Препарат представляет собой 9,0-11,0% раствор иммуноглобулинов сыворотки крови лошадей. Имеет величину рН от 7,0 до 7,5. Содержание γ-глобулиновой фракции в нем составляет не менее 90,0% от количества общего белка. В качестве неспецифических примесей препарат содержит альбумин, α- и β-глобулиновые фракции в количестве не более 10,0% и остаточный этиловый спирт в количестве не более 4,0%. Обладает вируснейтрализующей активностью к вирусу Марбург. Титр вируснейтрализующих антител не менее 1:2048. Препарат может быть использован для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей. 1 табл.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к лекарствам и медикаментам (к иммуноглобулинам) для терапевтических целей, и может быть использовано для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей.
Специфические средства профилактики и лечения лихорадки Марбург, являющейся тяжелым лихорадочным заболеванием, протекающим с ярко выраженным геморрагическим синдромом и поражением почти всех органов при летальности до 80% [1], в настоящее время отсутствуют. Лечение заболевших симптоматическое.
Было показано, что при лихорадке Марбург эффективно применение сыворотки реконвалесцентов [2]. Однако наша страна не обладает ее запасами. Кроме того, недостатком сыворотки является то, что она может быть контаминирована вирусами иммунодефицита и гепатита В. Применение такой сыворотки связано с риском инфицирования людей возбудителями инфекционных заболеваний.
Известны данные о разработке лечебно-профилактических препаратов иммуноглобулина против лихорадки Марбург из иммунной сыворотки крови овец и коз, которые представляют собой 12%-ные растворы иммуноглобулинов, выделенных спиртовым методом на холоде из гипериммунной сыворотки коз или овец (прототип) [3, 4]. Препараты содержат гамма-глобулиновую фракцию и примеси в количестве не более 10,0% от общего белка. В случае их применения для экстренной профилактики экспериментальной лихорадки Марбург у животных они проявляли защитные свойства.
Недостатком овец и коз, выбранных в качестве продуцента иммунной сыворотки, является то, что они не обеспечивают необходимого количества иммунной сыворотки, и их сыворотка может оказаться контаминированной посторонними микроорганизмами (например, скрепи у овец). Они также могут быть носителями губчатой энцефалопатии [5], а препараты иммунглобулина, выделенные из сыворотки крови данных животных, могут оказаться источником инфицирования людей возбудителями инфекционных заболеваний при их введении. Ранее уже были предприняты попытки использовать овец, коз, мулов, ослов и крупный рогатый скот для получения гипериммунных сывороток. Однако эти исследования не принесли желаемых разультатов.
Кроме того, препараты иммуноглобулина против лихорадки Марбург из сыворотки крови овец и коз находятся на стадии разработки и исследования свойств экспериментальных образцов, а данные по их эффективности [3, 4] не позволяют однозначно оценить их протективные свойства и возможность использования препаратов для профилактики лихорадки Марбург у людей в случае их специфического поражения.
Ранее было отмечено, что, кроме овец и коз, лошади также реагируют выработкой специфических антител в ответ на их заражение вирусом Марбург [4, 6, 7]. Лошади обладают высокой иммунологической реактивностью и обеспечивают большие объемы сыворотки. Поэтому для получения специфических гипериммунных сывороток, являющихся исходным сырьем для выделения иммуноглобулинов, наиболее часто используют лошадей [8].
Сыворотка крови лошадей лишена недостатков, присущих сывороткам крови овец и коз. В настоящее время лошади остаются общепризнанным продуцентом гипериммунных сывороток и они в основном используются в производственном масштабе. Кроме того, имеется опыт получения препаратов иммуноглобулина против ряда вирусных инфекций из сыворотки крови лошадей [8-10]. На основании этого, в качестве продуцента гипериммунной сыворотки к вирусу Марбург была выбрана лошадь.
Целью данного изобретения является разработка препарата, содержащего иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей жидкого, предназначенного для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей.
Указанная цель достигается за счет способности вируса Марбург индуцировать у животных выработку специфических протективных антител в ответ на их заражение, и использования нативной гипериммуной сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, в качестве сырья для получения препарата.
Сущность изобретения заключается в том, что препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург жидкий, представляет собой 9,0-11,0%-ный раствор иммуноглобулинов гипериммунной сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, обладает вируснейтрализующей активностью к вирусу Марбург и при введении оказывает выраженное профилактическое действие у людей при лихорадке Марбург.
Пример выполнения
Сырьем для получения препарата иммуноглобулина является гипериммунная лошадиная сыворотка, содержащая антитела к вирусу Марбург. Выделение иммуноглобулина из сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, проводят методом спиртового фракционирования на холоде по Кону [11].
Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей, представляет собой прозрачную или слегка опалесцирующую жидкость, бесцветную или с желтоватым оттенком, иногда с наличием незначительного, легко разбивающегося при встряхивании осадка, с величиной рН от 7,0 до 7,5 и является 9,0-11,0%-ным раствором иммуноглобулинов сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург. Содержание гамма-глобулиновой фракции в нем составляет не менее 90,0% от количества общего белка. В качестве неспецифических примесей в препарате присутствуют альбумин, α- и β-глобулины в количестве не более 10,0% и остаточный этиловый спирт, содержание которого не более 4,0%. Препарат обладает вируснейтрализующей активностью к вирусу Марбург, характеризующейся титром вируснейтрализующих антител не ниже 1:2048.
Препарат стерильный, апирогенный и нетоксичный. При внутримышечном введении он оказывает выраженное профилактическое действие при лихорадке Марбург.
По физико-химическим и иммунобиологическим показателям препарат иммуноглобулина лошадиного Марбург соответствует показателям качества коммерческих гетерологичных иммуноглобулинов, выделенных из сыворотки крови лошадей [8] и рекомендован для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей.
Было получено 9 серий препарата иммуноглобулина против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей. Характеристика препаратов представлена в таблице.
Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей, жидкий, (иммуноглобулин лошадиный Марбург) аттестован ГИСК им. Л.А.Тарасевича и одобрен Комитетом МИБП. Нормативно-техническая документация на препарат представлена для рассмотрения в Фармакопейный комитет МЗ РФ.
| Таблица Характеристика гетерологичных препаратов иммуноглобулина, полученных из сыворотки крови лошадей | ||
| Наименование показателя качества, единица измерения | Величина показателя для препаратов иммуноглобулина | |
| гетерологичных коммерческих [8] | против лихорадки Марбург (данные по 9 сериям) | |
| Внешний вид | Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком. Допускается наличие незначительного осадка, легко разбивающегося при встряхивании. | Прозрачная или слегка опалесцирующая жидкость, бесцветная или с желтоватым оттенком. Допускается наличие незначительного осадка, легко разбивающегося при встряхивании. |
| Концентрация водородных ионов, ед. рН | От 7,0 до 7,5 | От 7,0 до 7,5 |
| Количество общего белка, процент | От 9,0 до 11,0 | От 9,0 до 11,0 |
| Содержание гамма-глобулиновой фракции, процент | От 70,0 до 95,0 [12] | От 90,0 до 97,4 |
| Содержание остаточного этилового спирта, процент | Не более 4,5 | От 1,4 до 3,7 |
| Пирогенность | Апирогенный | Апирогенный |
| Токсичность | Нетоксичный | Нетоксичный |
| Стерильность | Стерильный | Стерильный |
| Срок годности, лет | Не более 3 | 3 |
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ДАННЫЕ
1. Muhlberger E., Weik M., Beeker S., Klenk H.D. The replication and transcription strategy of Marburg and Ebola viruses: differences and similarities // Infect. Dis. Rev. - 2000. - Vol.2, №4. - P.251.
2. Stille W., Bohle F., Helm E. et al. Uber eine durch cercopithecus aethiops ubertragene infektions-krankheit / «Grune Meerkatzenkrankheit», «Green Monkey Discase» // Dtsch. Med. Wschr. - 1968. - Bd.93. - S.572-582.
3. Кудоярова Н.М., Кизимов Н.В., Смолина М.П., Дедкова Л.М. Изучение протективных свойств препаратов гамма-глобулинов против вирусов Эбола и Марбург // Актуальные проблемы биотехнологии: Материалы 2-ой отраслевой конференции 25-27 апреля 1990 г., п.г.т. Кольцове, 1990. - С.53-54.
4. Кизимов Н.В., Кудоярова Н.М., Калиберов С.А. и др. Разработка лечебно-профилактических препаратов гамма-глобулина против болезней Марбург, Эбола, Боливийской геморрагической лихорадки // Актуальные вопросы медицинской биотехнологии: Материалы научной конференции, посвященной 85-летию Томского НИИ вакцин и сывороток НПО «Вирион», Томск, 1991. - Ч.2. - С.31-32.
5. Вирусология / Под ред. Б.Филдса - M., 1989. - Т.3. - С.419-430.
6. Краснянский В.П., Пшеничнов В.А. Гончар Н.И. и др. Иммунологические особенности геморрагических лихорадок Марбург и Ласса и перспективы их специфической профилактики // Первый всесоюзный иммунологический съезд, Сочи 16-17 ноября 1989 г.: Тезисы секционных и стендовых сообщений. - M., 1989. - Т.1. - С.226.
7. Гончар Н.И., Пшеничнов В.А., Походяев В.А. и др. Чувствительность к вирусу Марбург различных экспериментальных животных // Вопр. вирусол. - 1991. - №5. - С.435-437.
8. Руководство по вакцинному и сывороточному делу / Под ред. П.Н.Бургасова. - М., Медицина, 1978.
9. Краснянский В.П., Градобоев В.Н., Борисевич И.В. и др. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Ласса // Вопр. вирусол. - 1997. - №2. - С.71-74.
10. Борисевич И.В., Михайлов В.В., Краснянский В.П. и др. Разработка и изучение свойств иммуноглобулина против лихорадки Эбола / Вопр. вирусол. - 1995. - №6. - С.270-273.
11. Cohn E.J., Strong L., Hughes W.L. et al. Preparation and properties of serum and plasma proteins // J. Amer. Chem. Soc. - 1946. - Vol.68, №3. - P.459-475.
12. Справочник по применению бактерийных и вирусных препаратов / Под ред. С.Г.Дзагурова, Ф.Ф.Резепова. - М., Медицина, 1975.
Препарат, содержащий иммуноглобулин против лихорадки Марбург из сыворотки крови лошадей жидкий (иммуноглобулин лошадиный Марбург), обладающий вируснейтрализующей активностью к вирусу Марбург и используемый для экстренной профилактики лихорадки Марбург у людей, отличающийся тем, что в качестве исходного сырья для его получения используют гипериммунную сыворотку крови лошадей и представляющий собой 9,0-11,0%-ный раствор иммуноглобулинов гипериммунной сыворотки крови лошадей, содержащей антитела к вирусу Марбург, содержащий γ-глобулиновую фракцию в количестве не менее 90,0% от общего содержания белка, в качестве неспецифических примесей содержащий альбумин, α- и β-глобулиновые фракции в количестве не более 10,0% и остаточный этиловый спирт в количестве не более 4,0%, имеющий величину рН от 7,0 до 7,5 и характеризующийся титром вируснейтрализующих антител не менее 1:2048.
