Способ приготовления комплексного иммунного модулятора

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к лекарственным препаратам для повышения общей и специфической резистентности организма. Способ приготовления комплексного иммунного модулятора включает охлаждение отобранных оплодотворенных неинфицированных яиц при температуре 2-4°С до 7 дней, гомогенизацию, разбавление физиологическим раствором яичной массы, бактерицидную обработку, консервацию раствором фенола до его 0,3% концентрации, с последующей фильтрацией целевого продукта, при этом яичную массу разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1:5, затем проводят термическую обработку на водяной бане при температуре 70-80°С, в течение 1 часа и перед консервацией целевой продукт охлаждают в бактерицидной камере под лампой с ультрафиолетовым облучением в течение 30-40 минут. Способ обеспечивает повышение общей и специфической резистентности организма, получение более дешевого и доступного биостимулятора, упрощение способа приготовления. 3 табл.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к лекарственным препаратам для повышения общей и специфической резистентности организма животных путем применения неспецифических стимулирующих препаратов, обладающих регуляторным влиянием на иммунную систему - иммуномодуляторам.

Уровень техники

Известен биостимулятор-плацента, активное начало из плаценты женщин. Препарат изготавливается по новой технологии, без термообработки с использованием при стерилизации эффекта кавитации и вновь открытых химических реагентов (см. Новое поколение тканевых препаратов - ПАН// «Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях». Международная конференция. Воронеж, 3-4 октября 2002 г. Материалы конференции. - Том 1. - Воронеж, 2000. - 295 с.).

Недостатком данного способа приготовления биостимулятора является дороговизна, сложность и многоступенчатость приготовления.

Известен также способ приготовления биостимулятора для кормления птицы, предусматривающий введение в основной рацион биостимулятора, приготовленного путем охлаждения при температуре 2-4°С в течение 4-5 суток, разведения водой в пятикратном объеме и отстаивания в течение суток с последующим автоклавированием полученной массы, при этом в качестве биостимулятора используют яичную и после обработки вводят ее в рацион в количестве 0,2-0,3 мл на 1 кг живой массы с интервалом 6-7 дней (см. а.с. СССР №150163, кл. А 23 К 1/16).

Недостатком данного способа приготовления биостимулятора для кормления птицы является недостаточно высокий эффект повышения общей и специфической резистентности организма.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому положительному эффекту к заявляемому способу является «Способ приготовления биостимулятора эмбрионального (СТЭМБа)». Сущность способа заключается в следующем. Проводят отбор свежих неинфицированных куриных яиц, затем их инкубируют в течение 9 суток, при этом на 5, 6, 7 сутки яйца облучают по 30 секунд при частоте модуляции 9 Гц и мощности излучения 9 мВт, затем яйца охлаждают в течение 6-7 суток, проводят гомогенизацию, разбавляют яичную массу 1:10 физиологическим раствором, тщательно перемешивают, добавляют к полученной смеси 5% раствор фенола, так чтобы концентрация фенола составляла 0,3%, фильтруют полученный раствор и разливают в стерильные флаконы, закрывают и хранят в холодильнике при температуре 2-6°С (патент 2197251 РФ, МКИ 7 А 61 К 35/12).

Недостатком способа является высокая стоимость материалов, сложность и многоступенчатость, высокие энергозатраты и себестоимость препарата.

Раскрытие изобретения

Целью изобретения является создание комплексного иммунного модулятора (КИМ), который способствует интенсификации лечения и профилактики целого ряда заболеваний и патологических состояний животных, сопровождающихся снижением иммунобиологических свойств организма, и обеспечивает приготовление дешевого и эффективного иммуномодулятора, в котором в качестве субстрата входит оплодотворенное куриное яйцо. При этом использованы рациональные приемы, направленные как на сохранение исходных свойств субстрата, так и на получение целого ряда биологически активных веществ.

Технический результат, который может быть достигнут с помощью предлагаемого способа, сводится к повышению общей и специфической резистентности организма, получению более дешевого и доступного биостимулятора, упрощению способа приготовления. Технический результат достигается с помощью способа приготовления комплексного иммунного модулятора, включающий охлаждение отобранных оплодотворенных неинфицированных яиц при температуре 2-4°С до 7 дней, гомогенизацию, разбавление физиологическим раствором яичной массы, бактерицидную обработку, консервацию раствором фенола до его концентрации 0,3%, с последующей фильтрацией целевого продукта, отличающейся тем, что яичную массу разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1:5, затем проводят термическую обработку на водяной бане при температуре 70-80°С, в течение 1 часа и перед консервацией целевой продукт охлаждают в бактерицидной камере под лампой с ультрафиолетовым облучением в течение 30-40 минут.

Сущность предлагаемого способа

На первом этапе яйца отбирают из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Используют яйца среднего размера, примерно одинаковые по массе, без видимых повреждений и загрязнения скорлупы. На втором этапе помещают яйца в темную холодильную камеру при температуре 2-4°С на 5-7 дней, что приводит к медленной гибели эмбриона с выработкой биогенных веществ в неблагоприятных условиях. Извлекают яйца из холодильной камеры, вскрывают, осматривают желток на предмет наличия зародыша, отмечают объем массы, проводят гомогенизацию. Полученный гомогенизат разводят 0,9% физиологическим раствором в соотношении 1:5. Выдерживают полученную смесь на водяной бане при температуре 70-80°С в течение 1 часа. Гомогенизат помещают в бактерицидную камеру и выдерживают в ней в течение 30-40 минут. Затем фильтруют и разливают в стерильные флаконы. Для консервации используют 0,5% раствор фенола до его концентрации 0,3%.

Осуществление изобретения

Примеры конкретного выполнения предлагаемого способа

Пример 1. На первом этапе яйца отбирают из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Используют яйца среднего размера, примерно одинаковые по массе, без видимых повреждений и загрязнений скорлупы. Охлаждение отобранных оплодотворенных неинфицированных яиц при температуре 2-4°С в течение 2-3 дней, гомогенизацию, разбавление физиологическим раствором яичной массы в пропорции 1:3, термическую обработку в автоклаве при температуре 120°С и давлении 1,5 атм. При выдержке в холодильной камере в течение 2-3 дней после термической обработки массы в автоклаве, масса свернулась, оказалась не годной к дальнейшей работе с ней.

Пример 2. На первом этапе яйца отбирают из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Используют яйца среднего размера, примерно одинаковые по массе, без видимых повреждений и загрязнения скорлупы. Охлаждение отобранных оплодотворенных неинфицированных яиц при температуре 2-4°С в течение 5-7 дней, гомогенизацию, разбавление физиологическим раствором яичной массы в пропорции 1:3, термическую обработку на водяной бане при температуре 70-80°С, в течение 1 часа, охлаждают в бактерицидной камере под лампой с ультрафиолетовым облучением в течение 40 минут. Консервация проводится 0,5%-ным раствором фенола до его концентрации 0,1% от массовой доли яичной массы. Количество биологически активных веществ в полученном препарате оказалось очень низким, т.к. белок яйца свернулся и остался на фильтре. Концентрация фенола низкая, посевы на стерильность положительны.

Пример 3. На первом этапе яйца отбирают из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Используют яйца среднего размера, примерно одинаковые по массе, без видимых повреждений и загрязнения скорлупы. Данный способ включает охлаждение отобранных оплодотворенных неинфицированных яиц при температуре 2-4°С до 7 дней, гомогенизацию, разбавление физиологическим раствором яичной массы, бактерицидную обработку, консервацию раствором фенола до его концентрации 0,3%, с последующей фильтрацией целевого продукта, отличается тем, что яичную массу разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1:5, затем проводят термическую обработку на водяной бане при температуре 70-80°С, в течение 1 часа и перед консервацией целевой продукт охлаждают в бактерицидной камере под лампой с ультрафиолетовым облучением в течение 30-40 минут.

Этот способ является наиболее эффективным, т.к. концентрация активных веществ - наибольшая, препарат безопасен при данной концентрации консерванта при его применении на животных.

Пример 4. На первом этапе яйца отбирают из благополучного по инфекционным заболеваниям хозяйства. Используют яйца среднего размера, примерно одинаковые по массе, без видимых повреждений и загрязнения скорлупы. Отличие этого способа заключается в охлаждении отобранных оплодотворенных неинфицированных яиц при температуре 2-4°С до 7 дней, гомогенизации, разбавлении физиологическим раствором яичной массы в пропорции 1:7, термической, бактерицидной обработке, фильтрации. Термическую обработку проводят на водяной бане при температуре 70-80°С, в течение одного часа, охлаждают в бактерицидной камере под лампой с ультрафиолетовым облучением в течение 30-40 минут, консервация проводится 0,5% раствором фенола до его концентрации 1%, фильтрацию.

При введении данного препарата животным, в местах инъекции появлялись инфильтраты, препарат оказывал раздражающее действие на кожу животного, вследствие высокой концентрации фенола. В результате снижения концентрации самого препарата его эффективность заметно снизилась.

Результаты испытания препарата КИМ на животных

При изготовлении экспериментальной партии препарата проведена биологическая проба на его безвредность. Проба проведена на лабораторных мышах и кроликах.

Результаты испытания препарата КИМ на лабораторных животных

Разработка и применение препаратов-биостимуляторов, используемых для повышения иммунобиологичеекой реактивности у животных в качестве профилактики и в составе различных лечебных схем, представляют собой серьезную задачу.

Биологическая апробация препарата была проведена в лаборатории на белых мышах. В опыт было взято две группы, по пять мышей: первая группа была опытной, вторая служила контролем. Животные находились в одинаковых условиях содержания и кормления. Взвешивание животных проводились: перед постановкой на опыт и через каждые два дня. Наблюдение за физиологическим состоянием животных велось ежедневно. Мыши опытной группы инъецировались препаратом (КИМ) в дозе 0,5 мл/гол. По результатам взвешивания получены следующие данные: в опытной группе получили увеличение живой массы в среднем на 25% больше, чем у животных контрольной группы. Результаты использования препарата КИМ на норках приводятся в таблице 1.

Таблица 1 Результаты применения препарата КИМ на норках
Половозрастные группы	Кол-во голов	Доза, мл/кг	Кратность введения	Примечание
Взрослые животные: Самцы	20	0,1	3-х кратно ч/з 3дня	- улучшение аппетита; увеличение количества покрытий в период гона и быстрое восстановление после него; улучшение качества спермы.
Самки	20	0,1	3-х кратно ч/з 3 дня	- снижение случаев, каннибализма; улучшение лактации; улучшение сохранности молодняка до отсадки; быстрое восстановление самок после лактационного истощения
Молодняк: Новорожденные	20	0,01 мл/гол	3-х кратно ч/з 3 дня	- отмечается хороший аппетит; увеличение живей массы; быстрое приучение к самостоятельному питанию.
30-45 дней	20	0,05 мл/кг	3-х кратно ч/з 3 дня	- отмечается хороший аппетит; увеличение живой массы; быстрое приучение к самостоятельному питанию.
45-60 дней	20	0,05 мл/кг	3-х кратно ч/з 3 дня	- отмечается хороший аппетит; увеличение живой массы; быстрое приучение к самостоятельному питанию; уменьшение случаев каннибализма; снижение ответной реакции организма на вакцинацию.

Исследования, проведенные на племенном предприятии «Красногвардейское» Ставропольского края в 2003 году убедительно свидетельствуют, что использование препарата КИМ в дозе 0,05 мл на 1 кг живой массы трехкратно через 7 суток способствует повышению в крови хряков-производителей гемоглобина на 6,33 г/л, бактерицидной активности сыворотки крови на 5,75%, лизоцимной активности сыворотки крови на 3,97%. Повышается активность ферментов переаминирования АЛТ и ACT на 0,07 и 0,08 мккат/л, резервная щелочность на 4,4 об% СО², содержание общего белка в крови на 10,2 г/л, содержание γ-глобулинов на 6,27% по сравнению с контрольной группой.

Изучение биохимических показателей крови норок показало, что количество гемоглобина у самцов опытной группы, где применялся комплексный иммуномодулятор КИМ, было больше, чем у аналогов контрольной группы на 4,7 г/л. По количеству общего белка в сыворотке крови также было преимущество у самцов, где применялся препарат КИМ на 3,5 г/л. По альбуминовой фракции различия между группами были в пользу животных опытной группы. По гамма-глобулиновой фракции животные опытной группы превосходили контрольную на 1,8%.

Все вышеизложенное говорит о повышении резистентности организма хряков-производителей и самцов норок, а также о иммунномодулирующих свойствах препарата КИМ.

Биохимический анализ препарата имеет важное значение как показатель их качества. По данным многих ученых целый ряд соединений обладает высоким биологическим потенциалом и могут обуславливать основную биостимулирующую функцию препарата. К таким веществам прежде всего относятся аминокислоты. Аминокислотный состав препарата показан в таблице 2.

Таблица 2 Аминокислотный состав препарата КИМ
Аминокислоты	Мг %
Заменимые
Аспарагиновая кислота	5,4
Серин	3,4
Глютаминовая кислота	10,0
Аланин	7,6
Тиразин	3,2
Всего	29,6
Незаменимые
Трианин	3,8
Глицин	4,9
Валин	6,2
Метианин	1,5
Изолейцин	5,2
Лейцин	9,2
Фенилаланин	5,2
Гистидин	3,7
Лизин	3,3
Аргинин	4,0
Всего	47,0

Для характеристики биологической ценности данного препарата пользуются таким понятием как аминокислотный индекс, который определяет аминокислотную полноценность, он равен соотношению незаменимых аминокислот к заменимым. В биологически полноценных веществах он выше 1, аминокислотный индекс (КИМа)=47,0/29,6=1,59.

В препарате КИМ содержится следующие гормоны (табл.3)

Таблица 3 Содержание гормонов в препарате КИМ
Наименование гормонов	Количество
ТТГ (тиреотропный гормон), мМед/л	0,09
ФСГ (фолликулостимулирующий гормон), мМЕ/мл	1,5
Свободный Т4 (L-тироксин), пмоль/л	0,2
ЛГ (лютенизирующий гормон), мМЕ/мл	2,2
Прогестерон, нмоль/л	>100,0
Тестостерон, нмоль/л	5,8
Корнизол, нмоль/л	0,1
Пролактин, мМЕ/мл	75,0
СТГ (соматотропный гормон), мМЕд/л	10,0
ДГЭАс (дегидроэпиандростерон), мкг/мл	0,26
АКТГ (адренокортикотропный гормон), пг/мг	0,9

Количественный состав препарата

В 100 мл препарата входит:

- 20 мл биологически активной яичной массы;

- 79,7 мл раствора хлорида натрия 0,9%;

- 0,3 мл фенола, как консерванта.

Данный препарат применяют в пушном звероводстве для снижения иммуннодефицитных состояний, связанных с ростом и линькой щенков. Также данный препарат хорошо себя зарекомендовал при подготовке зверей к гону и щенению.

Таким образом, иммуномодулятор обладает высоким эффектом повышения общей и специфической резистентности организма.

Предлагаемое изобретение по сравнению с прототипом и другими известными техническими решениями имеет следующие преимущества:

- биостимулятор, полученный с помощью предлагаемого изобретения, обладает эффектом тканевой терапии, белковой гидролизатотерапии, органотерапии, неспецифической протеинотерапии, а также бактерицидным эффектом;

- способ приготовления позволяет не только получить препарат с эффектом тканевой и других видов терапии, но и позволяет сохранить полезные свойства яйца: высокий аминокислотный состав, витамины и гормоны, высокие иммунные показатели, активизацию уровня метаболизма;

- более дешевое изготовление;

- основные методики, препараты, аппараты, используемые в приготовлении препарата КИМ легко доступны.

Способ приготовления иммунного модулятора, включающий охлаждение отобранных оплодотворенных неинфицированных яиц при температуре 2-4°С до 7 дней, гомогенизацию, разбавление физиологическим раствором яичной массы, бактерицидную обработку, консервацию раствором фенола до его 0,3%-ной концентрации, с последующей фильтрацией целевого продукта, отличающийся тем, что яичную массу разбавляют физиологическим раствором в соотношении 1:5, затем проводят термическую обработку на водяной бане при температуре 70-80°С в течение 1 часа и перед консервацией целевой продукт охлаждают в бактерицидной камере под лампой с ультрафиолетовым облучением в течение 30-40 мин.