Алкиламинозамещенные бициклические азотсодержащие гетероциклы и фармацевтическая композиция на их основе

Описываются алкиламинозамещенные бициклические азотсодержащие гетероциклы общей формулы I

где

n - целое число 1;

R¹ обозначает С₁-С₆-алкил;

R² обозначает гало;

R³ обозначает С₁-С₆-алкокси-С₁-С₆-алкил, С₁-С₆-алкилсульфонил-С₁-С₆-алкил, гидрокси-С₁-С₆-алкил, дигидрокси-С₁-С₆-алкил, N-гетероциклил-С₁-С₆-алкил или (С₁-С₆-алкилен)-С(O)R³¹, где

R³¹ обозначает гидрокси или С₁-С₆-алкокси;

и его фармацевтически приемлемые соли.

Новые соединения являются ингибиторами протеинкиназы р38 и могут быть использованы в медицине. 2 н. и 6 з.п. ф-лы.

 

Настоящее изобретение относится к бициклическим азотсодержащим гетероциклам. Объектом изобретения являются алкиламинозамещенные дигидропиримидо[4,5-d]пиримидиноновые производные, способ их получения, их применение, их содержащие фармацевтические препараты и способ получения фармацевтических препаратов.

Митогенактивированные протеинкиназы (MAP киназы) относятся к семейству пролиннаправленных серин/треонин киназ, которые активируют свои субстраты путем двойного фосфорилирования. Киназы активируются различными сигналами, включая пищевой и осмотический стресс, УФ-излучение, факторы роста, эндотоксин и воспалительные цитокины. Одна группа MAP киназ представляет собой группу р38 киназ, которая включает различные изоформы (например, р38α, р39β и р38γ). Так же, как и другие киназы, р38α киназы ответственны за фосфорилирование и активацию факторов транскрипции, и они сами активируются физическим и химическим стрессами, прововоспалктельными цитокинами и бактериальными липополисахаридами.

Еще более важно, как было показано, продукты фосфорилирования посредством р38 являются медиаторами продукции воспалительных цитокинов, включая TNF (фактор, вызывающий некроз опухолевых тканей), IL-1 (интерлейкип-1) и циклооксигеназу-2. Каждый из этих цитокинов вовлекается в участие в различных болезненных состояниях и условиях. Так, например, TNF-α является цитокином, продуцируемым в основном активированными моноцитами и макрофагами. Его избыточное и нерегулируемое образование играет важную роль в патогенезе ревматоидного артрита. Совсем недавно было показано, что ингибирование продуцирования TNF может найти широкое применение для лечения воспаления, воспалительного заболевания кишечника, рассеянного склероза и астмы.

TNF причастно и к воздействию вирусных инфекций, таких как ВИЧ, вирус гриппа, вирус герпеса, включая среди прочего вирус простого герпеса типа 1 (ВПГ-1), вирус простого герпеса типа 2 (ВПГ-2), цитомегаловирус (ЦМВ), вирус ветряной оспы (ВВО), вирус Эпштейна-Барра, вирус герпеса типа 6 (ГВЧ-6) человека, вирус герпеса типа 7 (ГВЧ-7) человека, вирус герпеса типа 8 (ГВЧ-8) человека, инфекционный бульбарный паралич и ринотрахеит.

Подобным образом IL-1 продуцируется активированными моноцитами и макрофагами и играет роль во многих патофизиологических реакциях, включая ревматоидный артрит, лихорадку и снижение резорбции костной ткани. Ингибирование этих цитокинов ингибиторами р38 киназы может оказаться полезным при подавлении, ослаблении и смягчении многих из этих болезнанных состояний.

Соединения формулы I и их вышеупомянутые соли являются ингибиторами протеинкиназ и in vivo проявляют неожиданно высокую активность против р38. Соединения формулы I не проявляют активности против тирозинкиназ р56^lck Т-клеток при уровне ниже примерно 10 мкМ. Такие соединения могут быть эффективными при лечении заболеваний, медиированных провоспалительными цитокинами, такими как TNF и IL-1.

Среди используемых в настоящем описании понятий "алкил" означает линейный насыщенный одновалентный углеводородный радикал, содержащий от одного до шести углеродных атомов, или разветвленный насыщенный одновалентный углеводородный радикал, содержащий от трех до шести углеродных атомов, например метил, этил, н-пропил, 2-пропил, трет-бутил, пентил и т.п.;

"алкилен" означает линейный насыщенный двухвалентный углеводородный радикал, содержащий от одного до шести углеродных атомов, или разветвленный насыщенный двухвалентный углеводородный радикал, содержащий от трех до шести углеродных атомов, например метилен, этилен, пропилен, 2-метилпропилен, пентилен и т.п.;

"алкенил" означает линейный одновалентный углеводородный радикал, содержащий от двух до шести углеродных атомов, или разветвленный одновалентный углеводородный радикал, содержащий от трех до шести углеродных атомов, включающий по меньшей мере одну двойную связь, например этенил, пропенил и т.п.;

"алкинил" означает линейный одновалентный углеводородный радикал, содержащий от двух до шести углеродных атомов, или разветвленный одновалентный углеводородный радикал, содержащий от трех до шести углеродных атомов, включающий по меньшей мере одну тройную связь, например этинил, пропинил и т.п.;

"циклоалкил" относится к насыщенному одновалентному циклическому углеводородному радикалу, содержащему от трех до семи кольцевых углеродных атомов; циклоалкил может быть необязательно независимо замещенным одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из алкила, необязательно замещенного фенила или -C(O)R (где R обозначает водородный атом, алкил, галоалкил, амино-, монозамещенную амино-, дизамещенную амино-, гидрокси-, алкоксигруппу или необязательно замещенный фенил); более конкретно понятие "циклоалкил" охватывает, например, циклопропил, циклогексил, фенилциклогексил, 4-карбоксициклогексил, 2-карбоксамидоциклогексил, 2-диметиламинокарбонилциклогексил и т.п.;

"циклоалкенил" означает ненасыщенный неароматический одновалентный циклический углеводородный радикал, содержащий от трех до семи кольцевых углеродных атомов; типичные примеры включают циклогексенил и циклопентенил;

"циклоалкилалкил" означает радикал -R^a R^b, где R^a обозначает алкиленовую группу, a R^b обозначает циклоалкильную группу, как она представлена в настоящем описании, например циклопропилметил, циклогексилпропил, 3-циклогексил-2-метилпропил и т.п.;

"ацил" означает группу -C(O)R', где R' обозначает алкил, галоалкил, гетероалкил, арил, гетероарил, аралкил или гетероаралкил;

"алкокси", "арилокси", "аралкилокси" или "гетероаралкилокси" означает радикал -OR, где R обозначает соответственно алкил, арил, аралкил или гетероаралкил, как они представлены в настоящем описании, например метокси, фенокси, пиридин-2-илметилокси, бензилокси и т.п.;

"гало" или "атом галогена" означает атом фтора, хлора, брома или иода, предпочтительно фтора или хлора; "галоалкил" означает алкил, замещенный одним или несколькими одинаковыми или разными атомами галогена, например -СН₂Cl, -CF₃, -СН₂CF₃, -СН₃CCl₃ и т.п., и далее охватывает те алкильные группы, такие как перфторалкил, в которых все водородные атомы замещены атомами фтора;

"гидроксиалкил" означает алкильный радикал, как он представлен в настоящем описании, замещенный одной или несколькими, предпочтительно одной, двумя или тремя, гидроксильными группами, при условии, что один и тот же углеродный атом не несет больше одной гидроксильной группы; типичные примеры включают, хотя ими их список не ограничен, 2-гидроксиэтил, 2-гидроксипропил, 3-гидроксипропил, 1-(гидроксиметил)-2-метилпропил, 2-гидроксибутпл, 3-гидроксибутил, 4-гидроксибутил, 2,3-дигидроксипропил, 1-(гидроксиметил)-2-гидроксиэтил, 2,3-дигидроксибутил, 3,4-дигидроксибутил и 2-(гидроксиметил)-3-гидроксипропил, предпочтительно 2-гидроксиэтил, 2,3-дигидроксипропил и 1-(гидроксиметил)-2-гидроксиэтил, вследствие чего встречающееся в настоящем описании понятие "гидроксиалкил" служит для обозначения подгруппы гетероалкильных групп;

"монозамещенная аминогруппа" означает радикал -NHR, где R обозначает алкил, гетероалкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, аралкенил, гетероарил, гетероаралкил, гетероаралкенил, гетероциклил или гетероциклилалкил, например метиламино-, этиламино-, фениламино-, бензиламиногруппу и т.п.;

"дизамещенная аминогруппа" означает радикал -NRR', где каждый из R и R' независимо друг от друга обозначает алкил, гетероалкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, аралкенил, гетероарил, гетероаралкил, гетероаралкенил, гетероциклил или гетероциклилалкил, или R и R' совместно с азотным атомом, с которым они связаны, образуют гетероциклическое кольцо; типичные примеры включают, хотя ими их список не ограничен, диметиламино-, метилэтиламино-, ди(1-метилэтил)аминогруппы, пиперазин-1-ил и т.п.; "арил" означает одновалентный моноциклический или бициклический ароматический углеводородный радикал, содержащий от 6 до 10 кольцевых атомов, каждый из которых независимо замещен одним или несколькими заместителями, предпочтительно одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из алкила, галоалкила, гетероалкила, гало, нитро-, цианогрупп, метилендиокси, этилендиокси, циклоалкила, необязательно замещенного фенила, гетероарила, галоалкокси, необязательно замещенного фенокси, гетероарилокси, -COR (где R обозначает алкил или необязательно замещенный фенил), -(CR'R'')_n-COOR (где n обозначает целое число от 0 до 5, каждый из R' и R'' независимо обозначает водородный атом или алкил, а R обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил) и -(CR'R'')_n-CONR^aR^b (где N обозначает целое число от 0 до 5, каждый из R' и R'' независимо обозначает водородный атом или алкил, а каждый из R^a и R^b независимо друг от друга обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил или R^a и R^b совместно с азотным атомом, с которым они связаны, образуют гетероциклическое кольцо); более конкретно понятие "арил" охватывает, хотя ими их список не ограничен, фенил, 1-нафтил, 2-нафтил и их производные;

"аралкил" означает радикал -R^a R^b, где R^a обозначает алкиленовую группу, а R^b обозначает арильную группу, как она представлена в настоящем описании, например бензил, фенилэтил, 3-(3-хлорфенил)-2-метилпентил и т.п.;

"аралкенил" означает радикал -R^aR^b, где R^a обозначает алкениленовую группу, а R^b обозначает арильную группу, как она представлена в настоящем описании, например 3-фенил-2-пропенил и т.п.;

"арилгетероалкил" означает радикал -R^aR^b, где R^a обозначает гетероалкиленовую группу, а R^b обозначает арильную группу, как она представлена в настоящем описании, например 2-гидрокси-2-фенилэтил, 2-гидрокси-1- гидроксиметил-2-фенилэтил и т.п.;

"необязательно замещенный фенил" означает фенильное кольцо, которое необязательно независимо замещено одним или несколькими заместителями, предпочтительно одним или двумя заместителями, выбранными из алкила, галоалкила, гетероалкила, гало, нитро-, цианогрупп, метилендиокси, этилендиокси, циклоалкила, циклоалкилалкила, -COR (где R обозначает алкил или необязательно замещенный фенил), -(CR'R'')_n-COOR (где n обозначает целое число от 0 до 5, каждый из R' и R" независимо обозначает водородный атом или алкил, а R обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил) и -(CR'R'')_n-CONR^aR^b (где n обозначает целое число от 0 до 5, каждый из R' и R'' независимо обозначает водородный атом или алкил, а каждый из R^a и R^b независимо друг от друга обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил или R^a и R^b совместно с азотным атомом, с которым они связаны, образуют гетероциклическое кольцо);

"гетероарил" означает одновалентный моноциклический или бициклическкй радикал, содержащий от 5 до 12 кольцевых атомов, у которого имеется по меньшей мере одно ароматическое кольцо, включающее одно, два или три кольцевых гетероатома, выбранных из N, О и S, причем остальные кольцевые атомы приходятся на С и необходимо иметь в виду, что место присоединения гетероарильного радикала обычно находится в ароматическом кольце; это гстероарильное кольцо необязательно независимо замещено одним или несколькими заместителями, предпочтительно одним или двумя заместителями, выбранными из алкила, галоалкила, гетероалкила, гало, нитро-, цианогрупп, циклоалкила, циклоалкилалкила, -COR (где R обозначает алкил или необязательно замещенный фенил), -(CR'R'')_n-COOR (где n обозначает целое число от 0 до 5, каждый из R' и R'' независимо обозначает водородный атом или алкил, а R обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил) и -(CR'R'')_n-CONR^aR^b (где n обозначает целое число от 0 до 5, каждый из R' и R'' независимо обозначает водородный атом или алкил, каждый из R^a и R^b независимо друг от друга обозначает водородный атом, алкил,

циклоалкил пли циклоалкилалкил или R^a и R^b совместно с азотным атомом, с которым они связаны, образуют гетероциклическое кольцо); более конкретно понятие "гетероарил" охватывает, хотя ими их список не ограничен, пиридил, фуранил, тиенил, тиазолил, изотиазолил, триазолил, имидазолил, изоксазолил, пирролил, пиразолил, пиримидинил, бензофуранил, тетрагидробензофуранил, изобензофуранил, бензотиазолил, бензоизотиазолил, бензотриазолил, индолил, изоиндолил, бензоксазолил, хинолил, тетрагидрохинолинил, изохинолил, бензимидазолил, бензизоксазолил, бензотиенил и их производные;

"гетероаралкил" означает радикал -R^aR^b, где R^a обозначает алкиленовую группу, a R^b обозначает гетероарильную группу, как она представлена в настоящем описании, например пиридин-3-илметил, 3-(бензофуран-2-ил)пропил и т.п.; "гетероаралкенил" означает радикал -R^a R^b, где R^a обозначает алкениленовую группу, а R^b обозначает гетероарильную группу, как она представлена в настоящем описании, например 3-(пиридин-3-ил)пропен-2-ил и т.п.;

"гетероциклил" означает насыщенный или ненасыщенный неароматический циклический радикал, содержащий от 3 до 8 кольцевых атомов, в котором один или два кольцевых атома являются гетероатомами, выбранными из NR (где R независимо обозначает водородный атом или алкил), О или S(O)_n (где n обозначает целое число от 0 до 2), причем остальные кольцевые атомы приходятся на С, где один или два атома С могут, но необязательно, быть замещенными карбонильной группой; это гетероциклическое кольцо может быть необязательно независимо замещено одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из алкила, галоалкила, гетероалкила, гало, нитро-, циано-, гидроксила, алкокси, амино-, монозамещенной амино-, дизамещенной аминогрупп, -COR (где R обозначает алкил или необязательно замещенный фенил), -(CR'R'')_n-COOR (где n обозначает целое число от 0 до 5, R' и R'' каждый независимо обозначает водородный атом или алкил, а R обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил) и -(CR'R'')_nCONR^aR^b(где n обозначает целое число от 0 до 5, R' и R'' каждый независимо обозначает водородный атом или алкил, а каждый из R^a и R^b независимо друг от друга обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или циклоалкилалкил или R^a и R^b совместно с азотным атомом, с которым они связаны, образуют гетероциклическое кольцо); более конкретно понятие "гетероциклил" охватывает, хотя ими их список не ограничен, тетрагидропиранил, пиперидино, N-метилпиперидин-3-ил, пиперазино, N-метилпирролидин-3-ил, 3-пирролидино, морфолино, тиоморфолино, тиоморфолино-1-оксид, тиоморфолино-1,1-диоксид, пирролинил, имидазолинил и их производные;

"гетероциклилалкил" означает радикал -R^aR^b, где R^a обозначает алкиленовую группу, а R^b обозначает гетероциклическую группу, как она представлена в настоящем описании, например тетрагидропиран-2-илметил, 4-метилпиперазин-1-илэтил, 3-пиперидинилметил и т.п.;

"гетероалкил" означает алкильный радикал, как он представлен в настоящем описании, с одним, двумя или тремя заместителями, независимо выбранными из -ORa'NRbR^с и -S(O)_nR^d (где n обозначает целое число от 0 до 2), где R^a обозначает водородный атом, алкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, арил, аралкил, гетероарил, гетероаралкил, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил, карбоксамидогруппу или моно- или диалкилкарбамоил; R^b обозначает водородный атом, алкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, арил, аралкил, гетероарил или гетероаралкил; R^c обозначает водородный атом, алкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, арил, аралкил, алкилсульфонил, алкоксикарбонил, арилоксикарбонил, карбоксамидогруппу или моно- или диалкилкарбамоил; R^d обозначает водородный атом (при условии, что n обозначает 0), алкил. галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, арил, аралкил, гетероарил, гетероаралкил, амино-, монозамещенную амино-, дизамещенную аминогруппу или гидроксиалкил; типичные примеры включают, в частности, 2-метоксиэтил, бензилоксиметил, тиофен-2-илтиометил, 2-гидроксиэтил и 2,3-дигидроксипропил;

"гетероалкилен" означает линейный насыщенный двухвалентный углеводородный радикал, содержащий от одного до шести углеродных атомов, или разветвленный насыщенный углеводородный радикал, содержащий от трех до шести углеродных атомов, с одним, двумя или тремя заместителями, независимо выбранными из -OR^a, -NR^bR^c и -S(O)_nR^d (где n обозначает целое число от 0 до 2), где R^a, R^b, R^c и R^d имеют такие же значения, как указанные в настоящем описании для гетероалкильного радикала; примеры включают 2-гидроксиэтан-1,1-диил, 2-гидроксипропан-1,1-диил и т.п.;

"гетерозамещенный циклоалкил" означает циклоалкильную группу, у которой один, два или три водородных атома замещены заместителями, независимо выбранными из ряда, включающего гидрокси, алкокси, амино-, монозамещеиную амино-, дизамещенную аминогруппу или -SO_nR (где n обозначает целое число от 0 до 2, а R обозначает водородный атом (при условии, что n обозначает 0), алкил, галоалкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, арил, аралкил, гетероарил, гетероаралкил, амино-, моноэамещенную амино-, дизамещенную аминогруппу или гидроксиалкил); примеры включают 4-гидроксициклогексил, 2-аминоциклогсксил;

"гетероалкилзамещенный циклоалкил" означает циклоалкильную группу, в которой один, два или три водородных атома независимо замещены гетероалкильными группами; примеры включают 1-гидроксиметилциклопент-1-ил, 2-гидроксиметилциклогекс-2-ил и т.п.;

понятие "уходящая группа" применяют в том значении, которое обычно ассоциируется с ней в химии органического синтеза, т.е. в значении атома или группы, способной к замещению нуклеофилом и охватывающей группу гало (такую как атом хлора, брома, иода), алкансульфонилокси, аренсульфонилокси, алкилкарбонилокси (например, ацетокси), арилкарбонилокси, мезилокси, тозилокси, трифторметансульфонилокси, арилокси (например, 2,4-динитрофенокси), метокси, N,О-диметилгидроксиламиногруппу и т.п.;

"фармацевтически приемлемый наполнитель" означает наполнитель, который может быть использован при приготовлении фармацевтической композиции, которая в общем безвредна, нетоксична и ни с биологической, ни с какой-либо иной точки зрения не является нежелательной, и охватывает наполнители, которые приемлемы для применения в ветеринарии, равно как для применения человеком с фармацевтическими целями; понятие "фармацевтически приемлемый наполнитель", используемое в настоящем описании и формуле изобретения, охватывает как один, так и больше одного такого наполнителя;

"фармацевтически приемлемая соль" соединения означает соль, которая фармацевтически приемлема и которая обладает целевой фармацевтической активностью исходного соединения; такие соли включают:

(1) кислотно-аддитивные соли, полученные с использованием минеральных кислот, таких как соляная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п., или полученные с использованием органических кислот, таких как уксусная кислота, пропионовая кислота, капроновая кислота, циклопентанпропионовая кислота, гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, бензойная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфокислота, этансульфокислота, 1,2-этандисульфокислота, 2-гидроксиэтансульфокислота, бензолсульфокислота, 4-хлорбензолсульфокислота, 2-нафталинсульфокислота, 4-толуолсульфокислота, камфорсульфоновая кислота, 4-метилбицикло[2.2.2]окт-2-ен-1-карбоновая кислота, глюкогептоновая кислота, 4,4'-метиленбис(3-гидрокси-2-ен-1-карбоновая кислота), 3-фенилпропионовая кислота, триметилуксусная кислота, трет-бутилуксусная кислота, лаурилсульфокислота, глюконовая кислота, глутаминовая кислота, гидроксинафтойная кислота, салициловая кислота, стеариновая кислота, муконовая кислота и т.п., и

(2) соли, образующиеся, когда кислотный протон, содержащийся в исходном соединении, либо замещается металлическим ионом, например ионом щелочного металла, ионом щелочно-земельного металла или алюминиевым ионом, либо образует координационную связь с органическим основанием, таким, как этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, трометамин, N-метилглюкамин и т.п.;

"пролекарства" означает любые соединения, которые, когда такие пролекарства вводят в организм млекопитающего субъекта, in vivo выделяют активное исходное лекарственное вещество, соответствующее формуле (I); пролекарства соединений формулы (I) готовят модификацией функциональных групп, имеющихся у соединений формулы (I), таким образом, чтобы модифицирующие группы были способны in vivo отщепляться с выделением исходного соединения; пролекарства включают соединения формулы (I), у которых гидроксильная, амино- или сульфгидрильная группа [в соединениях формулы (I)] связана с любой группой, которая in vivo способна отщепляться с восстановлением соответственно свободной гидроксильной, амино- или сульфгидрильной группы; примеры пролекарств включают, хотя ими их список не ограничен, сложные эфиры (в частности, ацетатные, формиатные и бензоатные производные), карбаматы (в частности, N,N-диметиламинокарбонил) гидроксильных функциональных групп в соединениях формулы (I) и т.п.;

"защитная группа" относится к группировке атомов, которая, когда она связана с реакционноспособной группой в молекуле, маскирует, уменьшает или подавляет эту реакционную способность; примеры защитных групп можно найти в работах T.W. Greene and P.G. Futs, Protective Groups in Organic Chemistry (Wiley, издание 2-е, 1991) и Harrison, Harrison и др., Compendium of Synthetic Organic Methods, тома 1-8 (John Wiley and Sons, 1971-1996); типичные аминозащитные группы включают формильную, ацетильную, трифторацетильную, бензильную, бензилоксикарбонильную (БЗК), трет-бутоксикарбонильную (БОК), триметилсилильную (ТМС), 2-триметилсилилэтансульфонильную (СЭС), тритильную к замещенную тритильную группы, аллилоксикарбонил, 9-флуоренилметилоксикарбонил (ФМОК), нитровератрилоксикарбонил (НВОК) и т.п.; типичные гидроксилзащитные группы включают те, у которых гидроксильиая группа либо ацилирована, либо алкилирована, такие как остатки бензилового и тритилового эфиров, равно как и остатки алифатических эфиров, тетрагидропираниловых эфиров, триалкилсилиловых эфиров и аллиловых эфиров;

"лечение" или "излечение" заболевания включает:

(1) профилактику заболевания, то есть предотвращение развития клинических симптомов заболевания у млекопитающих, которые могут подвергаться воздействию или оказаться предрасположенными к заболеванию, но еще не подвержены и не проявляют симптомов заболевания;

(2) ингибирование заболевания, т.е. задержку или ослабление развития заболевания или его клинических симптомов, или

(3) ослабление заболевания, т.е. мероприятие, вызывающее регрессию заболевания или его клинических симптомов;

"терапевтически эффективное количество" означает то количество соединения, которого, когда его вводят в организм млекопитающего для лечения заболевания, достаточно для эффекта такого лечения заболевания;

"терапевтически эффективное количество" обычно варьируется в зависимости от соединения, конкретного заболевания, его серьезности, возраста, веса и т.д. млекопитающего, которого необходимо лечить.

По одному из объектов настоящего изобретения предлагаются соединения, отвечающие формуле

в которой

подстрочный символ n обозначает целое число от 0 до 3;

R¹ обозначает водородный атом, алкил, алкенил, алкинил, алкилкарбонил, циклоалкил, циклоалкенил, циклоалкилалкил, циклоалкилалкенил, циклоалкилалкинил или аралкил; значения каждого R² независимо выбирают из ряда, включающего алкил, гало, гетероалкил и винил;

R³ обозначает гетероалкил, гетероалкенил, гетероалкинил, гетероалкилкарбонил, гетерозамещенный циклоалкил, гетерозамещенный циклоалкилалкил, гетерозамещенный циклоалкилалкенил, гетерозамещенный циклоалкилалкинил, гетероалкилзамещенный циклоалкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, арилгстероалкил, гетероарилгетероалкил, -(алкилен)-С(O)R³¹ или -(гетероалкилен)-С(O)R³¹;

где

R³¹ обозначает алкил, галоалкил, гидрокси-, алкокси, амино-, монозамещенную амино-, дизамещенную аминогруппу, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, гетероарил или гетероаралкил;

и их фармацевтически приемлемые соли.

В формуле (I) символ R¹ обозначает водородный атом, алкил, алкенил, алкинил, алкплкарбонил, циклоалкил, циклоалкилалкил, циклоалкилалкенил, циклоалкилалкинил или аралкильную группу.

Более предпочтительный R¹ обозначает водородный атом, алкил, алкенил, алкинил, алкилкарбонил, циклоалкил, циклоалкилалкил, циклоалкилалкенил, циклоалкилалкинил или аралкильную группу.

В другом предпочтительном варианте R¹ обозначает водородный атом, алкил, циклоалкил или аралкил. Более предпочтительный R¹ обозначает алкил или циклоалкил. В предпочтительных вариантах, где R¹ является алкилом, R¹ обозначает разветвленную алкильную группу, в которой углеродный атом, связанный с азотным атомом, представляет собой тетраэдрический углеродный атом, предпочтительно обладающий 0 или 1 связанным водородным атомом. Более предпочтительный R¹ обычно обозначает 2-пропил, циклогексил или 1-метилциклогексил, наиболее предпочтительно 2-метил-2-пропил.

В формуле I символ R² обозначает алкил, гало, гетероалкил или винил. R² может быть связанным с фенильным кольцом любой из оставшихся пяти свободных связей, в противном случае насыщенных водородными атомами. Подстрочным символ n обозначает целое число от 0 до 3, показывающее, что фенильное кольцо замещено, включая от нуля до трех групп R², предпочтительно 1 или 2 группами R². В тех вариантах, в которых имеются две или три группы R², каждая может быть независимой от другой (других). В предпочтительном варианте для R² в соединениях формулы (I) n обозначает 1 или 2, а каждый R² обозначает гало или алкил, более предпочтительно R² обозначает гало. Другими предпочтительными являются те варианты, в которых -(R²)_n обозначает 2-гало или 2,6-дигало, более предпочтительно 2-хлор или 2,6-дихлор.

Как упомянуто выше, символ R³ обозначает гетероалкил, гетероалкенил, гетероалкинил, гетероалкилкарбонил, гетерозамещенный циклоалкил, гетерозамещенный циклоалкилалкил, гетерозамещенный циклоалкилалкенил, гетерозамещенный циклоалкилалкинил, гетероалкилзамещенный циклоалкил, гетероциклил, гетероциклилалкил, арилгетероалкил, гетероарилгетероалкил, -(алкилен)-С(O)R³¹, или -(гетероалкилен)-С(O)R³¹, где R³¹ обозначает алкил, галоалкил, гидрокси-, алкокси, амино-, монозамещенную амино-, дизамещенную аминогруппу, циклоалкил, циклоалкилалкил, арил, аралкил, гетероарил или гетероаралкил.

В предпочтительном варианте R³ в соединениях формулы (I) значения R³ выбирают из гетероалкила, гетероциклила и гетерозамещенного циклоалкила. В одном ряду, к котором значения R³ особенно предпочтительны, R³ обозначает гетероалкил, более предпочтительно гидроксиалкил или алкоксиалкил. Конкретными гидроксиалкильными и алкоксиалкильными группами являются 2-метоксиэтил, 2-гидроксиэтил, 1-гидрокси-2-пропил, 2-гидрокси-1-пропил, 1-гидрокси-2-(гидроксиметил)-3-пропил, 1,3-дигидрокси-2-пропил, 1,3-диметокси-2-пропил, 1-метокси-2-(метоксиметил)-3-пропил, 3,4-дигидрокси-1-циклопентил, более конкретно 2,3-дигидрокси-1-пропил и 2-метоксиэтил.

В другом ряду, в котором значения R³ особенно предпочтительны, R³ обозначает гетероциклилалкил. Конкретные гетероциклилалкильные группы включают 2-(N-пиперидинил)этил и 2-(N-(2-пирролидинонил))этил.

В еще одном ряду особенно предпочтительных вариантов R³ обозначает -(алкилен)-С(O)R³¹, где R³¹ обозначает гидрокси-, амино-, метиламино-, диметиламиногруппу, метил или этил. Более предпочтительный алкиленовый фрагмент представляет собой метилен, этилен или пропилен.

В дополнение к вышеописанным соединениям настоящее изобретение включает все фармацевтически приемлемые соли этих соединений вместе с пролекарственными формами этих соединений и всеми изомерами, находятся ли они в чистой хиральной форме, или в виде рацемической смеси, или смеси другой формы.

Более того, сочетания предпочтительных групп, описанных выше для соединений формулы (I), образуют другие предпочтительные варианты. В одном ряду особенно предпочтительных вариантов R¹ обозначает алкил или циклоалкил, R² обозначает гало, R³ обозначает гетероалкил или -(алкилен)-C(O)R³¹, a n обозначает 1 или 2. В других вариантах R¹ обозначает алкил или циклоалкил, R² обозначает гало, R³ обозначает гетероалкил, а n обозначает 1 или 2; или R¹ обозначает алкил или циклоалкил, R² обозначает гало, R³ обозначает гетероциклил, а n обозначает 1 или 2; или R¹ обозначает алкил или циклоалкил,

R² обозначает гало, R³ обозначает гетерозамещенный циклоалкил, а n обозначает 1 или 2; или R¹ обозначает изопропил, R² обозначает гало, а n обозначает 1 или 2.

В частности, соединение формулы (I) выбирают из группы, включающей

3-(2-хлорфенил)-1-этоксикарбонилметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-карбоксиметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-(2-метоксиэтил)-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-7-изопропиламино-1-(2-метилсульфонилэтил)-3,4-дигидропирнмидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-(2-гидроксиэтил)-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-[(2S)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-[(2R)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он и 7-изопропиламино-3-(2-хлорфенил)-1-(2-пиперидинилэтил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он;

а также их фармацевтически приемлемые соли.

По другому объекту настоящего изобретения предлагаются способы получения описанных выше соединений формулы (I). Вкратце эти способы включают либо

(а) обработку соединения формулы II

в которой n, R² и R³ имеют значения, представленные со ссылкой на приведенную выше формулу I, при условии, что любая имеющаяся препятствующая реакционноспособная группа находится в необязательно защищенной форме, a L обозначает уходящую группу, амином формулы III

в которой R¹ имеет значения, представленные со ссылкой на приведенную выше формулу I,

при условии, что любая имеющаяся препятствующая реакционноспособная группа находится в необязательно защищенной форме, и, когда это необходимо, деблокирование всех защищенных реакционноспособных групп, либо

(б) обработку соединения формулы IV

в которой R¹, n и R² имеют значения, приведенные для формулы I, при условии, что любая имеющаяся препятствующая реакционноспособная группа находится в необязательно защищенной форме,

алкилирующим агентом формулы V

в которой R имеет значения, приведенные со ссылкой на формулу I, a X обозначает уходящую группу или гидроксильную группу, которая активируется во время реакции, при условии, что любая имеющаяся препятствующая реакционноспособная группа находится в необязательно защищенной форме, и, когда это необходимо, деблокирование всех защищенных реакционноспособных групп и необязательное превращение соединения формулы I в фармацевтически приемлемую соль.

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены по самым разнообразным способам с применением методов, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. Так, например, по одному варианту соединения получают с применением методов, аналогичных тем, которые в общих чертах представлены на схеме 1.

Схема 1

Обработкой соединения формулы Ia первичным амином (R³-NH₂) получают соединения формулы Ib. Эту реакцию удобно проводить в растворителе, который в реакционных условиях инертен, предпочтительно в ациклическом или циклическом простом эфире (таком, как тетрагидрофуран), галоидированном алифатическом углеводороде, в частности в дихлорметане, необязательно галоидированном ароматическом углеводороде, формамиде или низшем алканоле. Реакцию целесообразно проводить при температуре от примерно -20 до примерно 120°С.

В результате восстановления соединения формулы Ib получают спирт формулы Ic. Это восстановление как правило проводят с использованием алюмогидрида лития по методу, который хорошо известен специалистам в данной области техники (например, в растворителе, который инертен в условиях восстановления, предпочтительно в ациклическом или циклическом простом эфире, в частности в тетрагидрофуране, при температуре от примерно -20 до примерно 70°С, предпочтительно при температуре от примерно 0°С до примерно комнатной температуры).

Окисление спирта формулы Ic на следующей стадии обеспечивает возможность получения карбоксальдегида формулы Id. Окисление как правило проводят с использованием диоксида марганца, хотя можно также применять множество других методов [см., например, Advanced Organic Chemistry, изд. 4-е, March, John Wiley & Sons, New York (1992)]. В зависимости от используемого окислителя реакцию удобно проводить в растворителе, который инертен в данных конкретных условиях окисления, предпочтительно в галоидированном алифатическом углеводороде, в частности в дихлорметане, или в необязательно галоидированном ароматическом углеводороде. Окисление целесообразно проводить при температуре от примерно 0 до примерно 60°С.

Реакция карбоксальдегида формулы Id с замещенным анилином дает возможность получить соединение формулы Ie. Эту реакцию можно проводить в присутствии кислоты, например ароматической сульфоновой кислоты, предпочтительно 4-толуолсульфоновой кислоты, с азеотропным удалением воды, образующейся во время реакции. Такую реакцию удобно проводить в растворителе, который в реакционных условиях инертен, предпочтительно в ароматическом углеводороде, в частности в толуоле, или в необязательно галоидированном ароматическом углеводороде и при температуре от примерно 70 до примерно 150°С, преимущественно при температуре кипения растворителя, для содействия упомянутому азеотропному удалению воды.

Восстановление соединения формулы Ie с получением соединения формулы If можно проводить с использованием, например, боргидрида натрия, алюмогидрида лития или триацетоксиборгидрида натрия в условиях, которые хорошо известны специалистам в данной области техники. В предпочтительном варианте соединение формулы Ie не очищают, а реакционную смесь, в которой его получают, преимущественно концентрируют и полученный концентрат растворяют в растворителе, который в условиях восстановления инертен, предпочтительно в ациклическом или циклическом простом эфире, в частности в тетрагидрофуране, или необязательно галоидированном ароматическом углеводороде, или низшем алканоле, а затем обрабатывают вышеупомянутыми восстановителями. Восстановление целесообразно проводить при температуре от примерно 0 до примерно 100°С, предпочтительно при примерно от 0 до 25°С.

Циклизацией соединения формулы If получают бициклический азотсодержащий гетероцикл формулы Ig. Циклизацию можно проводить реакцией соединения If с фосгеном или трихлорметилхлорформиатом (или эквивалентом фосгена), целесообразно в присутствии третичного органического основания, предпочтительно три(низший)алкиламина, в частности триэтиламина. Более конкретно циклизацию проводят в растворителе, который в реакционных условиях инертен, предпочтительно в ациклическом или циклическом простом эфире, в частности в тетрагидрофуране, необязательно галоидированном ароматическом углеводороде или галоидированном алифатическом углеводороде. Эту реакцию удобно проводить при температуре от примерно -20 до примерно 50°С, предпочтительно при температуре от примерно 0°С до примерно комнатной температуры.

Окисление соединения Ig 3-хлорпербензойной кислотой обеспечивает возможность получения сульфона (Ih), который можно превращать в самые разнообразные целевые соединения. Как правило окисление соединения Ig проводят в растворителе, который в условиях окисления инертен, предпочтительно в галоидированном алифатическом углеводороде, в частности в хлороформе или дихлорметане, и при температуре от примерно -20 до примерно 50°С, предпочтительно от примерно 0°С до примерно комнатной температуры.

Наконец, обработка соединения Ih амином (R¹-NH₂) обеспечивает возможность получения целевого соединения формулы I. Реакцию можно проводить в присутствии или отсутствии растворителя. Эту реакцию удобно проводить при температурах от примерно 0 до примерно 200°С, более предпочтительно от примерно комнатной температуры до примерно 150°С.

Таким образом, по настоящему изобретению предлагается способ получения соединения формулы I обработкой соединения общей формулы Ii амином (R¹-NH₂).

У соединения Ii символы R² и R³ и подстрочный символ n имеют значения, приведенные выше со ссылкой на формулу I. Литера L обозначает уходящую группу, которой может быть атом галогена, низшая алкенсульфонильная группа (например, метансульфонил или трифторметансульфонил) или ароматическая сульфонильная группа (например, бензолсульфонил или 4-толуолсульфонил). Другие приемлемые уходящие группы специалистам в данной области техники известны, их можно найти, например, в Advanced Organic Chemistry, изд. 4-е, March, John Wiley & Sons, New York (1992). Приемлемыми аминами (R¹ -NH₂) являются те, у которых R обозначает любую из групп, приведенных для R в описании формулы I.

В предпочтительном варианте может быть получен бициклический азотсодержащий гетероцикл, а R³ может быть введен на более поздней стадии синтеза, как показано на схеме 2.

Схема 2

Соединение IIa, исходный материал на схеме 2, может быть получено из технически доступного этил-4-амино-2-меркаптопиримидин-5-карбоксилата. Вкратце, обработка меркаптосоединения приемлемым алкилирующим агентом (R-X) обеспечивает возможность получения соединения формулы Ib (R³ обозначает H). За стадиями, приведенными на схеме 1, может следовать превращение соединения Ib (R³ обозначает Н) в соединение IIa.

В результате циклизации соединения IIa получают бициклический азотсодержащий гетероцикл формулы IIb. Эту циклизацию можно проводить реакцией соединения IIa с фосгеном или трихлорметилхлорформиатом (или эквивалентом фосгена), как правило в присутствии третичного органического основания, предпочтительно три(низший)алкиламина, в частности триэтиламина. Более конкретно циклизацию проводят в растворителе, который в реакционных условиях инертен, предпочтительно в ациклическом или циклическом простом эфире, в частности в тетрагидрофуране, необязательно галоидированном ароматическом углеводороде или галоидированном алифатическом углеводороде. Обычно реакцию проводят при температуре от примерно -20 до примерно 50°С, предпочтительно при температуре от примерно 0°С до примерно комнатной температуры.

Введение группы R³ с целью получить соединение формулы IIc может быть осуществлено в самых разнообразных условиях. Так, например, соединение IIb можно обрабатывать гидридом щелочного металла, в частности гидридом натрия, с последующей реакцией с соединением общей формулы R³-L, в которой R³ имеет любые из значений в соответствии с указанными выше в настоящем описании для R³, за исключением водородного атома, арила или гетероарила, а L обозначает уходящую группу (например, гало, метансульфонатную, толуолсульфонатную, трифторметансульфонатную и т.п.). N-замещение обычно осуществляют в растворителе, который в реакционных условиях инертен, предпочтительно в формамиде, в частности в N-метилпирролидиноне или диметилформамиде, в ациклическом или циклическом простом эфире или необязательно галоидированном ароматическом углеводороде. Эту реакцию целесообразно проводить при температуре от примерно 50 до примерно 200°С, предпочтительно при температуре от примерно 50 до примерно 150°С. По другому варианту алкилирование можно проводить с неорганическим основанием, таким как карбонат калия, в формамидном растворителе, таком как N-метилпирролидинон, при температурах от примерно 0 до примерно 25°С.

Альтернативный и предпочтительный метод введения R³ включает алкилирование по пиримидиноновому азотному атому в условиях реакции Mitsonobu. В этом методе спирт общей формулы R³-ОН совмещают с соединением общей формулы IIb в присутствии, например, трифенилфосфина и диэтилазодикарбоксилата или дифенилпиридилфосфина и трет-бутилазодикарбоксилата (см.. Tetrahedron Lett., 40: 4497-4500 (1999)).

Алкилирование обычно проводят в растворителе, который в реакционных условиях инертен, предпочтительно в ациклическом или циклическом простом эфире, при температурах от примерно -20 до примерно 100°С, предпочтительно при температурах от примерно 0 до примерно 30°С (или при комнатной температуре). Что касается других методов алкилирования, то для реакции в этих условиях наиболее приемлемы первичные и вторичные спирты.

После введения R³ с целью получить целевые соединения формулы I могут быть осуществлены стадии окисления и замещения (для введения R¹-NH-), как в общих чертах представлено выше.

В альтернативных вариантах соединение IIb можно превращать в соединение IId вначале алкилированием соединения IIb в условиях реакции Mitsonobu с целью введения R³ с последующим окислением сульфида до соответствующего сульфона IId.

Тем не менее по другим вариантам эти соединения могут быть получены изменением на обратный порядка осуществления стадий алкилирования и замещения, благодаря чему меняется на обратный порядок введения -R³ и -NH-R¹, показанный на схеме 3.

Схема 3

Следовательно, соединение формулы IIa может быть циклизовано с получением соединения IIb (как первоначально показано на схеме 2). Окисление соединения IIb до соединения IIIa обеспечивает возможность получения шаблона для последующих стадий замещения и алкилирования. Таким образом, обработка соединения IIIa с использованием R¹-NH₂ в условиях, описанных выше, дает возможность получить соединение IIIb, которое можно алкилировать с использованием соединения R³-L (у которого L имеет значения, упомянутые выше) или R³-OH в условиях реакции Mitsunobu, получая целевые соединения формулы I.

Специалисту в данной области техники понятно, что предусмотрена возможность внесения в вышеприведенные схемы некоторых модификаций, которые включены в объем настоящего изобретения. Так, например, некоторые стадии включают защиту и деблокирование реакционноспособных функциональных групп, которые несовместимы с данными конкретными реакционными условиями.

По другому объекту настоящего изобретения предлагаются композиции, включающие фармацевтически приемлемый наполнитель и соединение формулы I, как они описаны выше.

Соединения формулы I и фармацевтически приемлемые соли основных соединений формулы I с кислотами могут быть использованы как лекарственные средства, например, в форме фармацевтических препаратов. Фармацевтические препараты можно вводить в организм энтерально, например перорально в форме таблеток, таблеток с покрытием, драже, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий или суспензий, интраназально, например в форме интраназального спрея, или ректально, например в форме суппозиториев. Однако их можно также вводить парентерально, например, в форме растворов для инъекций.

При приготовлении фармацевтических препаратов соединения формулы I и их фармацевтически приемлемые соли можно совмещать с фармацевтически инертными органическими или неорганическими носителями. В качестве таких носителей при изготовлении таблеток, таблеток с покрытием, драже и твердых желатиновых капсул могут быть использованы, например, лактоза, кукурузный крахмал и его производные, тальк, стеариновая кислота и ее соли и т.п. Приемлемыми носителями для изготовления мягких желатиновых капсул являются, например, растительные масла, воски, твердые жиры, полутвердые и жидкие полиолы и т.п., однако в случае мягких желатиновых капсул в зависимости от природы действующего вещества обычно никакие носители не требуются. При приготовлении растворов и сиропов приемлемыми носителями являются, например, вода, полиолы, сахароза, инвертный сахар, глюкоза и т.п. Приемлемыми для изготовления суппозиториев носителями являются, например, натуральные или отвержденные масла, воски, твердые жиры, полужидкие и жидкие полиолы и т.п.

Кроме того, фармацевтические препараты могут включать консерванты, солюбилизаторы, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, подслащивающие вещества, красители, корригенты, соли для варьирования осмотического давления, буферы, маскирующие добавки и антиоксиданты. Они могут также включать другие терапевтически ценные вещества и их вышеупомянутые фармацевтически приемлемые соли.

Лекарственные средства, которые включают соединение формулы I или фармацевтически приемлемую соль основного соединения формулы I и кислоты в сочетании с совместимым фармацевтически приемлемым материалом-носителем, также являются объектом настоящего изобретения. Тем не менее другим объектом настоящего изобретения являются способы приготовления лекарственных средств, которые могут быть использованы для лечения заболеваний и состояний, медиированных р38. Такой способ включает придание одному или нескольким из этих соединений или солям и, если необходимо, одному или нескольким другим терапевтически ценным веществам формы дозированного галенова препарата вместе с совместимым фармацевтически приемлемым носителем.

Как сказано выше, соединения формулы I и их вышеупомянутые фармацевтически приемлемые соли могут быть использованы в соответствии с изобретением в качестве терапевтически активных веществ, в частности в качестве противовоспалительных средств или для профилактики отторжения имплантата после хирургической операции по трансплантации. Дозу можно варьировать и широких интервалах, и в каждом конкретном случае она, что очевидно, должна соответствовать индивидуальным потребностям. Обычно ежедневная доза для взрослого человека в случае перорального введения должна составлять от примерно 0,1 до примерно 100 мг/кг, предпочтительно от примерно 0,5 до примерно 5 мг/кг. Ежедневную дозу можно вводить в виде дозы на один прием или в виде дробных доз. Кроме того, когда для этого существуют показания, приведенный выше верхний предел может быть превышен.

Наконец, объектом изобретения является также применение соединений формулы I и их вышеупомянутых фармацевтически приемлемых солей для приготовления лекарств, преимущественно для лечения и профилактики воспалений, иммунологических, онкологических, бронхолегочных, дерматологических и сердечно-сосудистых заболеваний, для лечения астмы, расстройств центральной нервной системы или диабетических осложнений, или для предотвращения отторжения трансплантата после хирургической операции по трансплантации.

Соединения формулы I могут быть использованы, хотя ими их список не ограничивается, для лечения у человека или других млекопитающих любых расстройств или болезненных состояний, которые у таких млекопитающих обостряются или вызваны чрезмерным или нерегулированным продуцированном TNF и/или IL-1, или р38 киназы. Поэтому по настоящему изобретению предлагается способ лечения цитокин-медиированных заболеваний, который включает введение в организм эффективного количества соединения формулы I или фармацевтически приемлемой соли, или его таутомера, подавляющего активность цитокина.

Соединения формулы I могут быть использованы, хотя ими их список не ограничивается, для лечения у субъекта воспаления или как жаропонижающее средство при лечении лихорадки. Соединения по настоящему изобретению могут быть использованы для лечения артрита, включая, хотя ими их список не ограничивается, ревматоидный артрит, спондилоартропатию, подагрический артрит, остеоартрит, системную красную волчанку и подростковый артрит, остеоартрит, подагрический артрит и другие артритные состояния. Такие соединения могут быть использованы для лечения легочных заболеваний или воспаления легкого, включая респираторный дистресс-синдром взрослых, легочный саркоидоз, астму, силикоз и хроническое воспаление легких. Эти соединения также могут быть использованы для лечения вирусных и бактериальных инфекций, включая сепсис, септический шок, грамотрицательный сепсис, малярию, менингит, вторичную кахексию как результат инфекции или злокачественного заболевания, вторичную кахексию к синдрому приобретенного иммунодефицита (СПИД), СПИД, предСПИД (состояние, предшествующее синдрому приобретенного иммунодефицита, ARC (СПИД-связанный комплекс), пневмонию и вирус герпеса. Соединения могут быть также использованы для лечения заболеваний, связанных с резорбцией костной ткани, таких как остеопороз, а также эндотоксического шока, синдрома токсического шока, повреждение от повторных переливаний, аутоиммунных заболеваний, включая реакцию трансплантат против хозяина и отторжение аллотрансплантата, сердечно-сосудистые заболевания, включая атеросклероз, тромбоз, застойную сердечную недостаточность и кардиальное повреждение от повторных переливаний, почечное повреждение от повторных переливаний, заболевания печени и нефрит, и миалгию как результат инфекции.

Соединения могут быть также использованы для лечения гриппа, рассеянного склероза, рака, диабета, системной красной волчанки (СКВ), состояний, связанных с кожными заболеваниями, такими как псориаз, экзема, ожоги, дерматит, келоидные образования и рубцовые образования на ткани. Соединения по изобретению могут быть также использованы для лечения желудочно-кишечных заболеваний, таких как воспаление кишечника, болезнь Крона, гастрит, синдром раздраженной толстой кишки и неспецифический язвенный колит. Эти соединения можно применять, по-видимому, при лечении офтальмологических заболеваний, таких как ретинит, ретинопатия, увеит, фотофобия глаз и острые повреждения глазной ткани. Соединения по изобретению могут быть также использованы для лечения ангиогенезиса, включая неоплазию; метастаз; офтальмологических заболеваний, таких как отторжение роговичного имплантата, глазная реваскуляризация, почечная реваскуляризация, включая реваскуляризацию в результате травмы или инфекции, диабетическую ретинопатию, ретролентальную фиброплазию и реваскулярную глаукому; язвенные заболевания, такие как язва желудка; патологические, но не злокачественные заболевания, такие как гемагиомы, включая инвантильные гемагиомы, ангиофиброму носоглотки и бессосудистый некроз кости, диабетическую нефропатию и кардиомиопатию; и заболевания женской репродуктивной системы, такие как эндометриоз. Соединения по изобретению могут быть также использованы для предотвращения продуцирования циклооксигеназы-2 и, как полагают, соединения по настоящему изобретению могут быть также использованы для профилактики и лечения рака, преимущественно рака толстой кишки. Предполагают, что соединения по настоящему изобретению могут быть эффективными при профилактики и лечении болезни Альцгеймера.

Помимо применения этих соединений при лечении человека они эффективны также в ветеринарии при лечении домашних животных, экзотических животных, сельскохозяйственных животных, включая млекопитающих, грызунов и т.п. Более предпочтительно для лечения таких животных, как лошади, собаки и кошки.

Предлагаемые соединения могут быть также использованы в совместной терапии (частично или полностью вместо других традиционных противовоспалительных средств), в частности вместе со стероидами, ингибиторами циклооксигеназы-2, НСПВС (нестероидные противовоспалительные средства), DMARDS, иммуносупрессивными средствами, ингибиторами 5-липоксигеназ, антагонистами лейкотриена В₄ и ингибиторами гидролаз лейкотриена А₄.

Понятие "расстройство, медиированное TNF", используемое в данной работе, относится к любым или ко всем расстройствам или болезненным состояниям, в которых участвует TNF, причем либо сам TNF контролирует процесс, либо с помощью TNF высвобождаются другие монокины, такие как, например, IL-1, IL-6 или IL-8, хотя ими их список не ограничивается. Поэтому болезненное состояние, при котором, например, IL-1 является главным компонентом и продуцирование которого или активность усиливается и секретируется в ответ на TNF, должно рассматриваться как расстройство, медиированное TNF.

Понятие "расстройство, медиированное р38", используемое в настоящей заявке, относится к любым или ко всем расстройствам или болезненным состояниям, в которых участвует р38, когда либо сам р38 контролирует процесс, либо с помощью р38 высвобождаются другие факторы, такие как, например, IL-1, IL-6 и IL-8, хотя ими их список не ограничивается. Поэтому болезненное состояние, при котором, например, IL-1 является главным компонентом и продуцирование которого или активность резко усиливается и секретируется в ответ на р38, следует рассматривать как расстройство, медиированное p38.

Так как TNF-β является близким структурным гомологом TNF-α (также известным как кахектин) и так как каждый из них вызывает подобные биологические ответы и связывается с теми же самыми рецепторами клеток, соединениями по настоящему изобретению ингибируюется синтез как TNF-α, так и TNF-β, которые, таким образом, во всех случаях, если не указано иное, в настоящем описании упоминаются собирательно как "TNF".

ПРИМЕРЫ

Во всех случаях, если не указано иное, в приведенных ниже примерах температура приведена в градусах Цельсия (°С); процессы проводили при комнатной температуре или температуре окружающей среды (как правило в интервале примерно от 18 до 25°С); выпаривание растворителя проводили с использованием роторного испарителя под пониженным давлением (как правило от 4,5 до 30 мм рт.ст.) при температуре бани вплоть до 60°С; за ходом реакций как правило следили по результатам ТСХ, а продолжительность реакции указана только для иллюстративных целей; точки плавления не корректировали; продукты демонстрировали удовлетворительные данные ¹Н-ЯМР- и/или микроаналитов; выход продуктов указан только для иллюстративных целей; также использованы следующие общепринятые аббревиатуры: t_пл (температура плавления): л (литр, литры), мл (миллилитры), ммоль (миллимоль), г (граммы), мг (миллиграммы), мин (минуты) и ч (часы).

ДЭАД обозначает диэтилазодикарбоксилат

ДИАД обозначает диизопропилазодикарбоксилат

Пример 1

Данный пример иллюстрирует получение 3-(2-хлорфенил)-1-этоксикарбонилметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она и 3-(2-хлорфенил)-1-карбоксиметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она, используя в качестве исходного соединения 7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он.

1.1 Алкилирование пиримидинона

1,5 г сульфида 1а, 7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она, (3,92 ммоля, полученного аналогично примеру 6), растворяли в 15 мл диметилформамида и добавляли гидрида натрия (60%-ный, 0,172 г, 4,31 ммоля). Образовавшуюся смесь перемешивали в течение двадцати минут, затем добавляли 0,87 мл этилбромацетата (7,84 ммоля). По прошествии 3 ч реакцию гасили водой и смесь три раза экстрагировали этилацетатом. Объединенные экстракты пять раз промывали водой, сушили над MgSO₄ и концентрировали под вакуумом. Остаток очищали хроматографией в колонке на силикагеле с использованием ацетона/гексана в соотношении 30:70, получая 1,283 г сложного эфира 1b.

1-2 Окисление бензилсульфида

0,600 г сложного эфира 1b (1,28 ммоля) растворяли в 15 мл хлороформа и при комнатной температуре добавляли 0,883 г 3-хлорпероксибензойной кислоты (50%-ная, 2,56 ммоля). Смесь перемешивали в течение 2 ч, затем промывали три раза водным сульфитом натрия концентрацией 10 мас.%, один раз насыщенным водным бикарбонатом натрия и один раз водой. Органический слой сушили над MgSO₄ и концентрировали под вакуумом с получением 0,670 г бензилсульфона 1с.

1,3 Замещение сульфона

0,520 г бензилсульфона 1с (1,04 ммоля) и 0,18 мл изопропиламина (2,08 ммоля) объединяли и выдерживали при 90-100°С в течение одного часа. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и смесь очищали хроматографией в колонке на силикагеле с использованием CH₂Cl₂/MeOH в соотношении 18:1. Фракции, включавшие продукт, объединяли и концентриронали с получением 0,366 г соединения 1d, 3-(2-хлорфенил)-1-этоксикарбонилметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидии-2(1Н)-она (масс-спектрограмма: МН⁺=404. t_пл.: 188,8-191,4°С).

1.4 Омыление этилового эфира

В раствор 0,266 г соединения 1d (0,66 ммоля) в 10 мл МеОН добавляли 0,026 г гидроксида натрия (0,66 ммоля) и 3 мл воды. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Смесь концентрировали под вакуумом и растирали в порошок в этилацетате, затем повторно растворяли в МеОН и концентрировали под вакуумом. Остаток растирали в порошок в диэтиловом эфире, фильтровали и сушили с получением 0,225 г соединения 1е, 3-(2-хлорфенил)-1-карбоксиметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она (масс-спектрограмма: МН=376, t_пл.: 172,0-188,0°С).

Пример 2

Данный пример иллюстрирует процесс получения 3-(2-хлорфенил)-1-(2-метоксиэтил)-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она, в котором алкилирование проводят с использованием условий реакции Mitsunobu.

В раствор 0,500 г пиримидинона 2а (1,57 ммоля, полученного обработкой 7-бензилсульфонил-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она изопропиламином в таких же условиях, как в вышеприведенном разделе 1.3) в 20 мл ТГФ добавляли 0,413 г трифенилфосфина (1,57 моля) и 0,12 мл 2-метоксиэтанола (1,57 ммоля). Смесь охлаждали до 0°С и добавляли 0,31 мл ДИАД (1,57 ммоля). Реакционной смеси давали нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение 12 ч. Добавляли в виде дополнительных порций 0,12 мл 2-метоксиэтанола (1,57 ммоля), 0,413 г трифенилфосфина (1,57 ммоля) и 0,31 мл ДИАД (1,57 ммоля) и смесь перемешивали в течение еще 12 ч при комнатной температуре, затем выдерживали при 55-60°С. По прошествии 2 ч смесь концентрировали под вакуумом и остаток очищали хроматографией в колонке на силикагеле с использованием гексана/этилацетата в соотношении 1:1 в качестве элюента. Фракции, включавшие продукт, объединяли и концентрировали до остатка в виде масла, которое повторно растворяли в этилацетате. Добавляли соляной кислоты (1,0 M/Et₂O, 0,6 мл) с получением соли. Смесь перемешивали в течение 12 ч, затем концентрировали под вакуумом. Остаток растирали в порошок в диэтиловом эфире над сухим льдом и давали медленно нагреться до комнатной температуры пока смесь перемешивали в течение 12 ч. Твердое вещество отфильтровывали с получением 0,139 г гидрохлоридной соли указанного в заглавии соединения, 2b (масс-спектрограмма: МН⁺=376, t_пл.: 126,0-131,6°С).

Пример 3

Данный пример иллюстрирует получение 3-(2-хлорфенил)-7-изопропиламино-1-(2-метилсульфонилэтил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она.

3.1 Алкплирование пиримидинона по Mitsunobu

500 мг бензилсульфида 1а (1,31 ммоля) растворяли в 2 мл ТГФ со 114 мкл 2-(метилтио)-этанола (1,31 ммоля), 343 мг трифенилфосфина (1,31 ммоля) и 0,21 мл ДЭАД (1,31 ммоля). Смесь перемешивали при КТ в течение 4 дней, выпаривали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле с использованием 5-20% ацетона/гексанов в качестве элюента, получая 529 мг соединения За (1,16 ммоля, 88%).

3.2 Окисление бензилсульфида

Окислекие 3а осуществляли с использованием 1,19 г м-ХПБК (мета-хлорпербензойная кислота) (5,8 ммоля) в CH₂Cl₂ с перемешиванием при КТ в течение 5 ч. Реакцию гасили 10%-ным Na₂SO₃ (водный, 50 мл) и три раза экстрагировали CH₂Cl₂. Объединенные экстракты промывали насыщенным NaHCO₃ и концентрировали под вакуумом с получением соединения 3b, которое использовали без очистки.

3.3 Замещение сульфона

Сырой продукт 3b растворяли в 5 мл изопропиламина (58 ммоля) и перемешивали при почти КТ в течение 2 дней. Смесь концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле с использованием 10-50% ацетона/гексанов в качестве элюента, получая 287 мг соединения 3с (0,732 ммоля, выход: 63% в пересчете на соединение 3а, 56% в пересчете на соединение 1а). Очищенный продукт растворяли в этилацетате и обрабатывали с использованием 1 экв. HCl/Et₂O, осаждая HCl соль соединения 3с (масс-спектрограмма: МН=424).

Пример 4

Данный пример иллюстрирует получение 3-(2-хлорфенил)-1-(2-гидроксиэтил)-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она.

4.1 Алкилирование пиримидона по Mitsunobu

500 мг бензилсульфида 1a (1,31 ммоля) растворяли в 7 мл ДМФ и обрабатывали с использованием 555 мг иодэтанола, защищенного триизопропилсилилом (1,57 ммоля, полученного в соответствии с методами, описанными в J.Am. Chem. Soc., 112(10), 4078-9 (1990) и J.Chem.Soc. Perkin Trans., 1(6), 1417-23, (1998)), и охлаждали до 0°С. Добавляли гидрида натрия (60%-ный, в масле, 63 мг, 1,57 ммоля) и реакционную смесь нагревали от 0 до 30°С, затем перемешивали в течение ночи при 30°С. Добавляли дополнительно 63 мг 60%-ного гидрида натрия. По прошествии еще 6 ч реакцию гасили добавлением 10 мл воды. Образовавшуюся смесь экстрагировали EtOAc и CH₂Cl₂ и объединенные экстракты сушили над MgSO₄, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле с использованием 10-20% ацетона/гексанов в качестве элюента, получая 430 мг 4а (0,738 ммоля, 56%).

4.2 Окисление бензилсульфида

Окисление соединения 4а осуществляли 500 мг м-ХПБК (2,46 ммоля) в СН₂Cl₂. После гашения реакции Na₂SO₃ (водный) сырой продукт 4b экстрагировали СН₂Cl₂, промывали насыщенным NaHCO₃, концентрировали под вакуумом и использовали без очистки.

4.3 Замещение сульфона

Сырой бензилсульфон 4b растворяли в 3 мл СН₂Cl₂, содержавшем 1 мл изопропиламина (11,7 ммоля), перемешивали при 80°С в течение ночи, концентрировали под вакуумом и очищали хроматографией на силикагеле с использованием 5-20% ацетона/гексанов в качестве элюента, получая 281 мг соединения 4с (0,542 ммоля, выход: 73% в пересчете на соединение 4а).

4.4 Деблокирование гидроксильной группы

Деблокирование соединения 4с осуществляли 0,54 мл тетрабутиламмонийфторида (1 М/ТГФ, 0,542 ммоля) в ТГФ с перемешиванием при КТ в течение 4 ч. Смесь выпаривали под вакуумом и очищали с помощью хроматографни на силикагеле с использованием 10-40% ацетона/гексанов в качестве элюента, получая 179 мг соединения 4d (0,495 ммоля). Очищенный продукт растворяли в этилацетате и обрабатывали с использованием 1 экв. HCl/Et₂O, осаждая HCl соль соединения 4d (масс-спектрограмма: МН⁺=362).

Пример 5

4-амино-2-бензилтиопиримидин-5-карбоксальдегид

а) 272 г (4,0 моля) этоксида натрия (фирмы Lancaster) перемешивали в 1 л этанола и обрабатывали 304 г (4,0 моля) тиомочевины (фирмы Avocado). Добавляли 676 г (4,0 моля) этилэтоксиметиленцианоацетата (фирмы Avocado) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 8 ч. После охлаждения до комнатной температуры и выдержки в течение ночи реакционную смесь последовательно обрабатывали 2 л воды и 400 мл уксусной кислоты. Реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение 30 минут, охлаждали до комнатной температуры и суспензию фильтровали. Твердое вещество промывали тремя 500-миллилитровыми порциями воды, двумя 500-миллилитровыми порциями ацетона и 500 мл диэтилового эфира. Продукт сушили с получением в виде кремового твердого вещества 473,3 г (выход: 60%) 4-амино-5-карбэтоксипиримидин-2-тиола с температурой плавления >250°С.

б) Перемешанную суспензию 473 г (2,377 моля) 4-амино-5-карбэтоксипиримидин-2-тиола в 3,5 л этанола обрабатывали 180,4 г (1,307 моля) карбоната калия и 447,1 г (2,615 моля) бензилбромида. Смесь кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч, затем ей давали остыть до комнатной температуры и выдерживали в течение ночи. Суспензию фильтровали и твердое вещество промывали двумя 500-миллилитровыми порциями этанола, 2 л воды и двумя 500-миллилитровыми порциями воды. Продукт сушили под вакуумом над пентоксидом фосфора при 50°С с получением в виде кремового твердого вещества 416 г (выход: 61%) этил-4-амино-2-бензилтиопиримидин-5-карбоксилата с температурой плавления 117-118°С.

в) Раствор 462,4 г (1,6 моля) этил-4-амино-2-бензилтиопиримидин-5-карбоксилата в 2,3 л высушенного над молекулярным ситом тетрагидрофурана в азотной атмосфере с охлаждением льдом медленно с перемешиванием вводили в 1,6 л (1,6 моля) 1 М раствора алюмогидрида лития в тетрагидрофуране. Раствор добавляли с такой скоростью, чтобы поддерживать температуру от 18 до 20°С. По завершении добавления смесь нагревали до 60°С и осторожно обрабатывали в течение 1,5 ч 60,8 мл воды. В течение 30 минут добавляли 60,8 мл 15%-ного водного гидроксида натрия, а затем в течение 30 минут вводили 182,5 мл воды. Суспензию перемешивали при 60°С в течение ночи, затем во все еще горячем состоянии фильтровали через вспомогательное вещество для фильтрования HyfLo и твердое вещество промывали двумя 1-литровыми порциями тетрагидрофурана. В результате выпаривания фильтрата досуха в виде не совсем белого твердого вещества получали 392,5 г (выход: 99%) 4-амино-2-бензилтиопиримидин-5-метанола, который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.

г) Суспензию 392,5 г (1,59 моля) 4-амино-2-бензилтиопиримидин-5-метанола в 7,75 л дихлорметана в азотной атмосфере обрабатывали 1,382 кг (15,9 моля) активированного диоксида марганца (фирма Acros). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем фильтровали через вспомогательное вещество для фильтрования HyfLo. Твердое вещество промывали тремя 1-литровыми порциями дихлорметана и объединенные фильтраты выпаривали с получением в виде бледно-желтого твердого вещества 340,5 г (выход: 88%) 4-амино-2-бензилтиопиримидин-5-карбоксальдегида с температурой плавления 136-139°С.

Пример 6

7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3.4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он

6.1 Получение 5-(2-хлорфенил)аминометил-4-амино-2-бензилтиопиримидина

Смесь 5 г (20,4 ммоля) 4-амино-2-бензилтиопиримидин-5-карбоксальдегида, 2,25 мл (21,4 ммоля) 2-хлоранилина и 0,1 г (0,5 ммоля) моногидрата 4-толуолсульфоновой кислоты в 60 мл толуола кипятили с азеотропным удалением воды в течение 3 ч. Смесь охлаждали до 0°С и осадок собирали фильтрацией под вакуумом, промывали гексанами и сушили на воздухе. Затем это твердое вещество растворяли в 100 мл ТГФ и реакционную смесь охлаждали до 0°С. Небольшими порциями в течение 45 минут добавляли 0,735 г алюмогидрида лития (18,8 ммоля). После того как добавление завершали, смесь перемешивали в течение еще 15 мин и осторожно последовательно обрабатывали 0,8 мл Н₂О, 0,8 мл 15%-ного водного NaOH и затем 2,4 мл Н₂О. Смесь перемешивали в течение 30 минут, фильтровали через броунмиллерит и фильтрат концентрировали под вакуумом. Твердое вещество перемешивали с диэтиловым эфиром, фильтровали и сушили на воздухе с получением в виде белого твердого вещества 6,1 г 5-(2-хлорфенил)аминометил-4-амино-2-бензилтиопиримидина.

6.2 Получение 3-(2-хлорфенил)-7-бензилтио-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она

В перемешанный раствор, охлажденный до -10°С, 4,3 г (12,1 ммоля) 5-(2-хлорфенил)аминометил-4-амино-2-бензилтиопиримидина в 100 мл тетрагидрофурана добавляли 3,1 мл (22,2 ммоля) триэтиламина. Затем этот раствор обрабатывали добавлением по каплям раствора 6,15 мл фосгена (20%-ный раствор в толуоле; 11,8 ммоля). После перемешивания в течение 30 мин добавляли дополнительно 1,0 мл триэтиламина (7,1 ммоля), а затем 2,0 мл фосгена (20%-ный раствор в толуоле, 3,8 ммоля). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры, обрабатывали 0,5 мл Н₂О и перемешивали в течение 30 мин. Далее реакционную смесь фильтровали и маточный раствор концентрировали и перемешивали с дихлорметаном. Затем продукт собирали фильтрацией под вакуумом и сушили под вакуумом с получением в виде белого твердого вещества 3,83 г 7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она.

Пример 7

7-бензилсульфонил-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он

Суспензию 1 г (2,61 ммоля) 7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропирпмидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она в 10 мл дихлорметана охлаждали на льду и обрабатывали 1,29 г (5,23 ммоля) 70%-ной 3-хлорпербензойной кислоты. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем обрабатывали 25 мл 10%-ного водного Na₂S₂О₃ и оставляли перемешиваться в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляли 100 мл дихлорметана и фазы разделяли. Органическую фазу промывали 10%-ным водным К₂СО₃, рассолом, а затем сушили над сульфатом магния и фильтровали. Концентрацией фильтрат под пониженным давлением в виде белого твердого вещества получали 0,73 г бензилсульфонил-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она.

Пример 8

3-(2-хлорфенил)-1-[(2S)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопропиламино-3.4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он

Стадия 1

Смесь 1,0 г (2,6 ммоля) 7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она, 1,5 г (5,2 ммоля) L-α, β-изопропилинденглицерин-γ-тозилата и 1,44 г (10,4 ммоля) карбоната калия перемешивали в 20 мл ДМФ и выдерживали при 80° в азотной атмосфере. По прошествии 16 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в раствор хлорида натрия, экстрагировали этилацетатом и сушили над сульфатом натрия. Раствор концентрировали под вакуумом, очищали экспресс-хроматографей (элюируя 40% EtOAc/гексана) с получением в виде масла 1,1 г изопропилинденкеталевого аддукта (масс-спектрограмма: МН⁺=496).

Стадия 2

В раствор 1,2 г (2,4 ммоля) изопропилинденкеталевого аддукта, полученного по вышеизложенному, в 25 мл метиленхлорида, охлажденный на мокрой ледяной бане в азотной атмосфере, отдельными порциями добавляли 1,8 г (9,6 ммоля) м-хлорпербензойной кислоты. Образовавшуюся суспензию перемешивали и давали ей нагреться до комнатной температуры. По прошествии 16 ч реакционную смесь охлаждали на мокрой ледяной бане и по каплям добавляли 50 мл 10%-ного водного раствора бисульфита натрия. Смесь перемешивали в течение 30 мин и слои разделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом и объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха. Остаток очищали экспресс-хроматографией (градиентное элюирование: 60-100% этилацетата/гексан). В виде пены выделяли 0,73 г сульфонового продукта (масс-спектрограмма: МН⁺=529).

Стадия 3

Раствор 0,7 г (1,3 ммоля) сульфона, полученного по вышеизложенному, в 10 мл изопропиламина выдерживали при 40° в азотной атмосфере. По прошествии 3 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, концентрировали досуха и очищали экспресс-хроматографией (элюирование 60% этилацетата/гексан) с получением в виде пены 0,42 г изопропиламинового аддукта.

Стадия 4

В раствор 0,4 г (0,93 ммоля) изопропиламинового аддукта, полученного по вышеизложенному, в 15 мл метанола и 7 мл воды добавляли 0,05 г п-толуолсульфоновой кислоты и смесь выдерживали при 50°. По прошествии 16 ч под пониженным давлением удаляли метанол и образовавшийся водный раствор экстрагировали этилацетатом. Органические фракции промывали 5%-ным водным растнором бикарбоната натрия и рассолом, затем сушили над сульфатом натрия, концентрировали и очищали экспресс-хроматографией (градиентное элюирование: 40-100% этилацетата/гексан) с получением 0,2 г продукта, 3-(2-хлорфенил)-1-[(2S)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопрониламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она (масс-спектрограмма: М⁺=391, t_пл.: 130,8-134,7).

Пример 9

3-(2-хлорфенил)-1-[(2R)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он

Стадия 1

Смесь 1,0 г (2,6 ммоля) 7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропирпмидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она, 1,5 г (5,2 ммоля) D-α,β-изопропилинденглицерин-γ-тозилата и 1,44 г (10,4 ммоля) карбоната калия перемешивали в 25 мл ДМФ и выдерживали при 80° в азотной атмосфере. По прошествии 16 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, выливали в раствор хлорида натрия, экстрагировали этилацетатом и сушили над сульфатом натрия. Раствор концентрировали под вакуумом, очищали экспресс-хроматографией (элюируя 40% EtOAc/гексаном) с получением в виде масла 1,2 г изопропилинденкеталевого аддукта.

Стадия 2

В раствор 1,2 г (2,4 ммоля) изопропилинденкеталевого аддукта, полученного по вышеизложенному, в 30 мл метиленхлорида, охлажденный на мокрой ледяной бане, в азотной атмосфере отдельными порциями добавляли 1,1 г (5,6 ммоля) м-хлорпербензойной кислоты. Образовавшуюся суспензию перемешивали и давали ей нагреться до комнатной температуры. По прошествии 6 ч реакционную смесь охлаждали на мокрой ледяной бане и по каплям добавляли 50 мл 10%-ного водного раствора бисульфита натрия. Смесь перемешивали в течение 30 мин и слои разделяли. Водный слой экстрагировали метиленхлоридом и объединенные органические фракции промывали рассолом, сушили над сульфатом натрия и концентрировали досуха. Остаток очищали экспресс-хроматографией (градиентное элюирование: этилацетат-10% метанола/этилацетат). В виде пены выделяли 1,1 г сульфонового продукта (масс-спектрограмма: МН⁺=529).

Стадия 3

Раствор 0,22 г (0,42 ммоля) сульфона, полученного по вышеизложенному, в 5 мл изопропиламина выдерживали при 40° в азотной атмосфере. По прошествии 3 ч реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, концентрировали досуха и очищали экспресс-хроматографией (элюирование этилацетатом) с получением и виде пены 0,088 г продукта, 3-(2-хлорфенил)-1-[(2R)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она (масс-спектрограмма: МН⁺=392).

Пример 10

7-изопропиламино-3-(2-хлорфенил)-1-(2-пиперидинилэтил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она

500 мг 7-бензилтио-3-(2-хлорфенил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она (1,31 ммоля) растворяли в 2 мл ТГФ с 0,173 мл 1-пиперидинэтанола (1,31 ммоля), 343 мг трифенилфосфина (1,31 ммоля) и 0,21 мл ДЭАД (1,31 ммоля) и перемешивали при КТ в течение 4 дней, затем очищали хроматографией на силикагеле с использованием 2-5% метанола/дихлорметана в качестве элюента, получая 350 мг N-(2-пиперидинилэтил)аддукта.

Окисление сульфида осуществляли с использованием 0,201 г м-ХПБК (0,708 ммоля) в дихлорметане с перемешиванием при КТ в течение 1 ч. Реакцию гасили 0,5 мл 25%-ного водного сульфита натрия и смесь экстрагировали дихлорметаном. Экстракт сушили сульфатом магния и концентрировали под вакуумом с получением сульфоксида, который использовали без очистки.

Сырой сульфоксид растворяли в 5 мл изопропиламина и перемешивали при 40°С в течение ночи, затем при 80°С в течение 4 дней. Смесь очищали хроматографчей на силикагеле с использованием 1-10% метанола/дихлорметана в качестве элюента с получением 48 мг амина (0,112 ммоля). Очищенный продукт растворяли в этилацетате и обрабатывали 1 экв. HCl/Et₂O, осаждая HCl соль 7-изопропиламино-3-(2-хлорфенил)-1-(2-пиперидинилэтил)-3,4-дигидропирпмидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-она.

Пример 11

Тест на ингибирование р38 MAP киназы in vitro

В этом примере проиллюстрирован метод определения in vitro активности р38 MAP киназы, применяемый для оценки соединений по настоящему изобретению.

С целью оценить ингибирующую активность соединений по настоящему изобретению в отношении MAP киназы р38 определяли in vitro перенос γ-фосфата от γ-³³ Р-АТР к основному белку миелина (ОБМ), катализируемый киназой р38, используя с некоторыми модификациями метод, описанный в работе Ahn и др., J.Biol.Chem. 266: 4220-4227 (1991).

Фосфорилированную форму рекомбинантной MAP киназы р38 коэкспрессировали с SEK-1 и МЕКК в E.Coli (см. Khokhlatchev и др., J.Biol.Chem. 272:11057-11062 (1997)) и затем очищали афинной хроматографией, используя никель-колонки.

Фосфорнлированную MAP киназу р38 разбавляли киназным буфером [20 мМ 3-(N-морфолино)пропансульфоновая кислота, рН 7,2, 25 мМ β-глицеринфосфат, 5 мМ этиленгликоль-бис-бета-аминоэтиловый эфир N,N,N',N'-тетрауксусний кислоты, 1 мМ ортованадат натрия, 1 мМ дитиотреит, 40 мМ хлорид магния]. Тестируемое соединение, растворенное в ДМСО, или только ДМСО (эталон) добавляли и образцы инкубировали в течение 10 мин при 30°С.

Киназную реакцию инициировали добавлением субстратного коктейля, содержавшего ОБМ и γ-³³ Р-АТР. После инкубирования в течение еще 20 мин при 30°С реакцию останавливали добавлением 0,75%-ной фосфорной кислоты. Затем фосфорилированный ОБМ отделяли от остаточного γ-³³ Р-АТР, используя фосфоцеллюлозную мембрану (фирма Millipore, Бедфорд, шт.Миннесота), и проводили количественные определения, используя сцинтилляционный счетчик (фирма Packard, Меридиэн, шт. Коннектикут).

Ингибирующая активность соединений по настоящему изобретению к р38 (выраженная как ИК₅₀, представляющая собой концентрацию соединения, вызывающего 50%-ное ингибирование используемого в тесте фермента р38), представленная в примерах 1-4, составляла меньше 10 мкМ.

Пример 12

Тест на ингибирование TNF in vitro

В этом примере проиллюстрирован in vitro метод оценки ингибирования продуцирования TNF-α, индуцированного LPS в клетках ТНР1.

Способность соединений по настоящему изобретению ингибировать высвобождение TNF-α определяли, применяя с незначительной модификацией метод, описанный в работе Blifeld и др. Transplantation, 51: 498-503 (1991).

а) Индукция биосинтеза TNF

Клетки ТНР1 суспендировали в культуральной среде [RPMI (Gibco-BRL, Gailthersburg, MD), содержала 15%-ную фетальную бычью сыворотку, 0,02 мМ 2-меркаптоэтанол] при концентрации 2,5×10⁶ клеток/мл и затем помещали в 96-луночный планшет (по 0,2 мл аликвоты в каждую лунку). Тестируемое соединение растворяли в ДМСО и затем разбавляли культуральной средой так, чтобы конечная концентрация ДМСО достигла 5%. В каждую лунку добавляли аликвоты по двадцать пять микролитров тестируемого раствора или только среды с ДМСО (эталон). Клетки инкубировали при 37°С в течение 37 мин. В лунки добавляли LPS (фирма Sigma, Сент-Луис, шт.Миссури) до конечной концентрации 0,5 мкг/мл и клетки инкубировали еще 2 ч. К концу инкубационного периода культуральную надосадочную жидкость собирали и количество присутствующего TNF-α определяли, используя описанный ниже метод ELISA.

б) ELISA метод

Количество присутствующего TNF-α человека определяли по специфическому связыванию согласно методу ELISA, используя два антитела к TNF-α (2TNF-H12 и 2TNF-H34), описанных в работе Reimund, J.M. и др., GUT, том 39 (5), 684-689 (1996).

В лунки полистирольного 96-луночного планшета сорбировали по 50 мкл антитела 2TNF-H12 в РФБ (раствор, содержавший фосфатный буфер) (10 мкг/мл) и инкубировали при 4°С в течение ночи в увлажненной камере. Планшет промывали РФБ и затем в течение 1 ч при комнатной температуре блокировали 5%-ным обезжиренным сухим молоком в РФБ и промывали 0,1%-ным БСА (бычий сывороточный альбумин) в РФБ.

Стандарты TNF готовили из запасного раствора рекомбинантного TNF-α человека (фирма R&D Systems, Миннеаполис, шт.Миннесота). Начальная концентрация стандартов в тестах составляла 10 нг/мл, а затем следовали 6 полулогарифмических серийных разбавлений.

Аликвоты объемом 25 мкл вышеуказанной надосадочной жидкости, или TNF стандартов, или только среды (эталон) смешивали с аликвотами в 25 мкл биотинилированного моноклонального антатела 2TNH-H34 (2 мкг/мл в РФБ, содержавшем 0,1%-ный БСА) и затем добавляли в каждую лунку. Образцы инкубировали с осторожным встряхиванием при комнатной темпратуре в течение 2 ч и затем промывали 3 раза 0,1%-ным БСА в РФБ. В каждую лунку вводили по 50 мкл раствора стрептавидинпероксидазы (фирма Zymed, S., Сан-Франциско, шт. Калифорния), содержавшего 0,416 мкг/мл стрептовидинпероксидазы и 0,1%-ный БСА в РФБ. Образцы дополнительно инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре и затем промывали 4 раза 0,1%-ным БСА в РФБ. В каждую вводили по пятьдесят микролитров раствора о-фенилендиамина (1 мкг/мл о-фенилендиамина и 0,03% перекиси водорода в 0,2 М цитратном буфере, рН 4,5) и образцы инкубировали в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте. Оптические плотности образца и сравнительной кюветы определяли при соответственно 450 нм и 650 нм. Уровни TNF-α определяли по кривой зависимости оптической плотности при 450 нм от используемой концентрации.

Значение ИК₅₀ определяли как концентрацию тестируемого соединения, соответствующую снижению вполовину максимальной адсорбции при 450 нм.

Пример 13

В этом примере проиллюстрирован in vivo метод, используемый для оценки ингибирования продуцирования у мышей (или крыс) TNF-α, индуцированного LPS.

Способность соединений по настоящему изобретению ингибировать выделение TNF-α in vivo определяли, используя с незначительной модификацией метод, описанный в работах Zanetti и др., J.Immunol., 148: 1890 (1992) и Sekut и др., J. Lab.Clin.Med., 124: 813 (1994).

Самок мышей линии BALB/c массой по 18-21 г (фирма Charles River, Холлистер, шт.Калифорния) акклиматизировали в течение одной недели. Животным групп, включавшим по 8 мышей, орально вводили либо тестируемое соединение в виде суспензии или растворенное в водном носителе, содержащем 0,9%-ный хлорид натрия, 0,5%-ную натрийкарбоксиметилцеллюлозу, 0,4%-ный полисорб 80, 0,9%-ный бензиловый спирт (носитель для КМЦ), либо только носитель (контрольная группа). Через 30 мин мышам внутрибрюшинными инъекциями вводили по 20 мкг LPS (фирма Sigma, Сент-Луис, шт.Миссури). По прошествии 1,5 ч мышей умерщвляли ингаляцией СО₂ и собирали кровь, производя пункцию сердца. Кровь осветляли, центрифугируя при 15600 g в течение 5 мин, сыворотку крови переносили в чистые пробирки, замораживали при -20°С и хранили до тех пор, пока не проводили анализ на TNF-α. по методу ELISA (фирма Biosource International, Камарилло, шт.Калифорния) в соответствии с инструкцией производителя.

Необходимо иметь в виду, что приведенные в настоящем описании примеры и варианты выполнения изобретения служат только иллюстративным целям, поэтому, принимая их во внимание, по предложениям специалистов в данной области техники в них можно вносить самые разнообразные модификации или изменения, которые не выходят за пределы сущности и рамок данной заявки и объема прилагаемой формулы изобретения.

1. Алкиламинозамещенные бициклические азотсодержащие гетероциклы общей формулы I

в которой подстрочный символ n обозначает целое число 1;

R¹ обозначает С₁-С₆-алкил;

R² обозначает гало;

R³ обозначает С₁-С₆-алкокси-С₁-С₆-алкил, С₁-С₆-алкилсульфонил-С₁-С₆-алкил, гидрокси-С₁-С₆-алкил, дигидрокси-С₁-С₆-алкил, N-гетероциклил-С₁-С₆-алкил или (С₁-С₆-алкилен)-С(O)R³¹, где R³¹ обозначает гидрокси или С₁-С₆-алкокси; и его фармацевтически приемлемые соли.

2. Соединение по п.1, в котором -(R²)_n обозначает 2-гало.

3. Соединение по п.1, в котором R³ обозначает С₁-С₆-алкокси-С₁-С₆-алкил.

4. Соединение по п.1, в котором R³ обозначает N-гетероциклил-С₁-С₆-алкил.

5. Соединение по п.1, в котором R¹ обозначает изопропил.

6. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей

3-(2-хлорфенил)-1-этоксикарбонилметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-карбоксиметил-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-(2-метоксиэтил)-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-7-изопропиламино-1-(2-метилсульфонилэтил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-(2-гидроксиэтил)-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

и его фармацевтически приемлемые соли.

7. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей

3-(2-хлорфенил)-1-[(2S)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

3-(2-хлорфенил)-1-[(2R)-2,3-дигидроксиэтил]-7-изопропиламино-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

7-изопропиламино-3-(2-хлорфенил)-1-(2-пиперидинилэтил)-3,4-дигидропиримидо[4,5-d]пиримидин-2(1Н)-он,

и его фармацевтически приемлемые соли.

8. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении протеинкиназы р38, включающая соединение по любому из пп.1-7 или его фармацевтически приемлемую соль и совместимый фармацевтически приемлемый носитель.