Вакцина против сальмонеллеза нутрий

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается, в частности, вакцины против сальмонеллеза нутрий, содержащей суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium, полученной путем отбора патологического материала от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделение чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium и выращивания на мясо-пептонном бульоне, с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³, глюкозу, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium, выделенная из пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³ 83,0-86,0, глюкоза 1,0-2,0, формалин 1,0-2,0, гидроокись алюминия остальное. Заявленное изобретение позволяет получить не токсичную, обрадающую высокой реактогенностью вакцину. 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна вакцина против сальмонеллеза кур и способ профилактики сальмонеллеза кур, содержащая суспензию клеток вакцинного штамма Salmonella enteritidis ВГНКИ 204 с концентрацией живых микробных клеток 175-250 млрд в 1 см³ при следующем соотношении компонентов, об.%:

суспензия клеток штамма Salmonella enteritidis
ВГНКИ 204 с концентрацией живых
микробных клеток 175-250 млрд в 1 см3	42,0-55,0
сахароза	5,0-7,5
желатин	1,5-2,0
дистиллированная вода	остальное

Для профилактики сальмонеллеза кур эту вакцину вводят цыплятам 2-3 дневного возраста с водой путем выпаивания из расчета 0,5-1,0 млрд микробных клеток на одного цыпленка, двукратно с интервалом 48 ч после 18-24 часовой голодной выдержки (патент РФ №2030916 от 07.04.92, МКИ А 61 К 39/125, 39/135).

Известна инактивированная вакцина против сальмонеллеза овец, содержащая иммуностимулятор в виде суспензии клеток штамма Rodococcus equi ВИЭВ №2 в физиологическом растворе с концентрацией 150 млрд микробных клеток, адъювант - маслоланолиновую смесь в соотношении 83-87:17-13, штаммы серовара Salmonella abortusovis ВИЭВ №876, серовара Salmonella typhimurium ВИЭВ №159, серовара Salmonella dublin ВИЭВ №1449, при следующем соотношении компонентов, мл/л:

формалинизированная суспензия клеток штаммов
Salmonella abortusovis ВИЭВ №876 с
концентрацией 100 млрд. микробных клеток в 1 мл	190-210
формалинизированная суспензия клеток штаммов
Salmonella typhimurium ВИЭВ №159
с концентрацией 100 млрд. микробных клеток в 1 мл	95-105
формалинизированная суспензия клеток штаммов
Salmonella dublin ВИЭВ№1449
с концентрацией 100 млрд. микробных клеток в 1 мл	95-100
суспензии клеток штамма Rodococcus equi
ВИЭВ №2 в физиологическом растворе с концентрацией
150 млрд. микробных клеток в 1мл	95-105

маслоланолиновая смесь в соотношении 83-87:17-13 остальное (патент РФ №2092187 от 30.09.94, МКИ А 61 К 39/125, 39/135).

Технология данной вакцины сложная, и эта вакцина для профилактики сальмонеллеза у нутрий не применяется.

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности, иммуногенности и эффективности вакцины против сальмонеллеза у нутрий, путем введения новой культуры возбудителя, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияния.

Решение задачи достигается тем, что вакцина против сальмонеллеза нутрий, включающая инактивированный антиген, адъювант, в качестве антигена содержит: суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium, полученной путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium и выращивание проводят в мясо-пептонном бульоне с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³, вносят глюкозу, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
Salmonella typhimurium, выделенной из
пораженных органов от павших нутрий из
местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром
4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3	83,0-86,0
глюкоза	1,0-2,0
формалин	1,0-2,0
гидроокись алюминия	остальное

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium, затем при выращивании на питательных средах используют чистую культуру возбудителя Salmonella typhimurium, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины. При культивировании чистой культуры Salmonella typhimurium в мясо-пептонной питательной среде с добавлением глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд в 1 см³ в течение 12-14 часов инкубирования. Инактивирование чистой культуры формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителя и сохранить его иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Внесение 3%-ного раствора гидроокиси алюминия в количестве 15% к объему культуры и тщательное перемешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium, выделенной от павших нутрий из местного эпизоотического очага при сальмонеллезе, позволяет значительно повысить специфичность и иммуногенность вакцины, после однократной вакцинации обеспечивает надежную защиту животных от сальмонеллеза (таблица 1).

По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин (инструкция по изготовлению и контролю формолвакцины против паратифа поросят, утвержденная ГУВ МСХ СССР 23.10.1996 г.; инструкция по изготовлению и контролю вакцины концентрированной формол-квасцовой против сальмонеллеза (паратифа) телят, утвержденная Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 28.03.1980 г.). Предложенная вакцина против сальмонеллеза нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина против сальмонеллеза нутрий содержит инактивированную формалином чистую культуру возбудителя Salmonella typhimurium, адсорбированную на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина против сальмонеллеза нутрий предназначена для профилактики опасного инфекционного заболевания нутрий сальмонеллезом. Она вызывает образование специфического иммунитета против сальмонеллеза нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против сальмонеллеза, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по сальмонеллезу нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по сальмонеллезу хозяйствах вакцину вводят однократно внутримышечно в область бедра молодняку с 2-месячного возраста по 1,0 см³, а взрослым животньм по 1,5 см³. В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с 2-месячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см³, вторая - в дозе 1,5 см³. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат. Приведено пять примеров содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 см³ вакцины.

Пример 1.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Salmonella typhimurium, заражают мясо-пептонную питательную среду, культивируют, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium 83,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия, остальное тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
Salmonella typhimurium, выделенная из пораженных
органов от павших нутрий из местного
эпизоотического очага при сальмонеллезе
в питательной среде с титром
4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3	83,0
глюкоза	1,0
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против сальмонеллеза обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример 2.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Salmonella typhimurium, заражают мясо-пептонную питательную среду, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium 84,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,5, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
Salmonella typhimurium, выделенная из пораженных органов
от павших нутрий из местного эпизоотического очага
в питательной среде с титром 4-5 млрд.
микробных клеток в 1 см3	84,0
глюкоза	1,5
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против сальмонеллеза нутрий обладает незначительной иммуногенной эффективностью.

Пример 3.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на мясо-пептонный бульон и дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Salmonella typhimurium, заражают мясо-пептонную питательную среду, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium 85,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
Salmonella typhimurium, выделенная из
пораженных органов от павших нутрий из местного
эпизоотического очага в питательной среде
с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3	85,0
глюкоза	1,0
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против сальмонеллеза нутрий обладает слабой иммуногенной активностью.

Пример 4.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Salmonella typhimurium, заражают мясо-пептонную питательную среду, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium 85,5 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
Salmonella typhimurium, выделенная из пораженных
органов от павших нутрий из местного
эпизоотического очага в питательной среде
с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3	85,5
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против сальмонеллеза нутрий обладает высокой иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет.

Пример 5.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Salmonella typhimurium, заражают мясо-пептонную питательную среду, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium 86,0 с титром 4-5 млрд и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 2,0, затем добавляют гидроокись алюминия -остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя
Salmonella typhimurium, выделенная из
пораженных органов от павших нутрий из местного
эпизоотического очага в питательной среде
с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3	86,0
глюкоза	2,0
формалин	2,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против сальмонеллеза нутрий обладает иммуногенной активностью, вызывает незначительные поствакцинальные осложнения.

Таблица 1 Сравнительная оценка эффективности вакцины
Вакцина	Доза вакцины в см3	Метод введения	Иммунобиологические свойства
			Кол-во нутрий в опыте (гол)	Наличие поствакцинальных осложнений	Длительность иммунитета (мес)	Защита в (%)
по		Внутри мышечно		Угнетение,
прототипу	двукратно			хромата, отказ
	1-ая доза			от корма в
	1,0 см3;		500	течение 2-3	6	60-70
	2-ая доза			суток
	2,0 см3
по		Внутри мышечно
предлагае			1500	нет	9	90-100
мому
способу	1,0 см3

Вакцина против сальмонеллеза нутрий, содержащая инактивированный антиген, адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигена содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium, полученной путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделение чистой культуры возбудителя Salmonella typhimurium и выращивание проводят в мясо-пептонном бульоне с титром 4-5 млрд микробных клеток в 1 см³, вносят глюкозу, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия клеток чистой культуры
возбудителя Salmonella typhimurium,
выделенная из пораженных органов
от павших нутрий из местного
эпизоотического очага в питательной
среде с титром 4-5 млрд микробных
клеток в 1 см3	83,0-86,0
Глюкоза	1,0-2,0
Формалин	1,0-2,0
Гидроокись алюминия	Остальное