Способ получения средства на основе сахаров, обладающего противовирусной и гепатопротекторной активностью

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может быть использовано для получения из сахаров лечебно-профилактических препаратов медицинского и ветеринарного назначения. Сущность способа: на водный изотонический раствор сахаросодержащего сырья, в качестве которого используют смесь глюкозы и фруктозы в соотношении 1:1 по массе, воздействуют гамма-облучением при поглощенной дозе 25-40 кГр. Способ позволяет получить вещество стандартного состава, обладающее высокой противовирусной и гепатозащитной активностью. 2 табл.

 

Изобретение относится к медицине и биотехнологии и может быть использовано для получения из сахаров лечебно-профилактических препаратов медицинского и ветеринарного назначения.

Известно получение биостимулятора путем выделения антигена из бактериальных клеток или продуктов их жизнедеятельности, содержащих структуры, относящиеся к группе сахаров (патенты по заявкам Франции №2399845, опубл. 13.06.79, МКИ A 61 K 39; ЕПВ №0045718, опубл. 02.10.82, МКИ А 61 К 9/06).

Эти способы нетехнологичны, поскольку требуют высокой степени очистки выделяемых активных компонентов и их последующее связывание с фармацевтическим носителем. При этом снижается также биологическая активность целевого продукта.

Известен также способ получения биостимулирующего средства из сахаросодержащего сырья путем растворения меда в воде до гипертонической концентрации (Иойриш М.П. Лечебные свойства меда и пчелиного яда, М., "Медгиз", 1956, с.135-136; Кузьмина К.А. Лечение пчелиным медом и ядом, изд-во Саратовского унив-та, 1983).

Целевой продукт, полученный известным способом, обладает низкой биологической активностью. Кроме того, он нестандартен, что объясняется сложностью и многокомпонентностью различных сортов меда.

Наиболее близким к заявляемому по технической сущности является способ получения лекарственного средства, обладающего антивирусной, гепатозащитной и иммуномодулирующей активностью (Патент РФ №2155051, опубл.27.08.2000. БИ №24 - прототип), путем фракционирования раствора цветочного меда кристаллизацией во льду, инкубирования в течение 3-30 дней при температуре 4-30°С соответственно, с последующим осветлением с помощью фильтрования или центрифугирования, замораживанием и радиационной обработкой до поглощенной дозы 0,1-100 кГр.

Известный способ позволяет получить биологически активный препарат, обладающий комплексом лечебных свойств, но имеющий нестандартный состав ввиду использования в качестве сырья нестандартного многокомпонентного вещества, а именно - цветочного меда. Кроме того, способ многостадиен и продолжителен по времени.

Задачей предлагаемого технического решения является обеспечение стандартизации целевого продукта при сохранении его биологической активности и упрощение способа его получения.

Поставленная задача решается путем воздействия ионизирующего излучения (поглощенная доза составляет 10-40 кГр) на водный изотонический раствор сахаросодержащего сырья, в качестве которого используют глюкозу и/или фруктозу.

Заявляемый способ позволяет получить вещество стандартного состава, обладающее высокой протвовирусной и гепатопротекторной активностью из глюкозы и/или фруктозы. По сравнению со способом-прототипом, предлагаемый способ является более простым и доступным.

Нами обнаружено, что продукты радиолиза глюкозы и фруктозы или их смеси обладают протвовирусной и гепатопротекторной активностью при величинах поглощенной дозы гамма-излучения 10-40 кГр, а также установлено, что при использовании в способе получения вещества, обладающего указанными видами биологической активности смеси двух сахаров: глюкозы и фруктозы, наблюдается синергетический эффект повышения этой активности.

При исследовании известного уровня техники заявителями не было обнаружено аналогичного способа, имеющего вышеупомянутые отличия от прототипа с достижением такого же технического результата, какой получается в заявляемом способе. Это позволяет сделать вывод о соответствии предлагаемого изобретения критерию "новизна" и "изобретательский уровень".

Заявляемый способ соответствует также критерию "промышленная применимость", так как предлагает использование известных материалов и технических средств.

Способ поясняется следующими примерами.

ПРИМЕР 1. На дистиллированной воде готовят изотонические растворы глюкозы, фруктозы и их смеси. Навески ингредиентов берут из расчета 0,29 грамм-молекулы на 1 л раствора (Белова О.И., Карчевская В.В., Рудакова Н.А., Соколова Л.Ф. Технология изготовления стерильных растворов в условиях аптек. М., "Медицина", 1982, с.51). Так, исходя из молекулярной массы безводной глюкозы (фруктозы) 180,18, количество глюкозы (фруктозы) на 1 л изотонического раствора составляет: 0,29х180,18=52,25 г. Поэтому изотоническая концентрация глюкозы (фруктозы или их смеси) равна 5,2 мас.%. Здесь и далее берут равные навески сахаров в смеси. Аналогично готовят контрольные растворы, дополнительно включающие сахар ксилозу. Другим контролем служит изотонический раствор меда (прототип).

Приготовленные растворы подвергают γ-облучению дозой 10 кГр и 25 кГр. При этом раствор меда и растворы смеси сахаров делят на две части, одну из которых оставляют необлученной (для контроля). Биологическую активность препаратов исследуют на белых мышах (по 10-14 особей в группе). Приготовленные растворы вводят интраназально по 50 мкл в течение 10 дней, затем проводят однократную затравку мышей внутрибрюшинно по 0,2 мл 25% масляного раствора CCI₄. Действие препаратов оценивают по выживаемости мышей в течение 4 суток. Результаты приведены в табл.1.

Из таблицы видно, что:

1) сахар ксилоза выраженным гепатозащитным действием не обладает;

2) из испытанных сахаров наиболее сильным гепатозащитным действием обладает фруктоза (гибель мышей 20%);

3) действие фруктозы усиливается в присутствии глюкозы (при адекватной изотонической концентрации смеси ингредиентов гибель мышей всего 7,7%);

4) γ-облучение приводит к усилению гепатозащитных свойств получаемых препаратов в 2-3 раза;

5) облученный смешанный раствор глюкозы и фруктозы обладает более выраженными гепатопротекторными свойствами, чем прототип.

ПРИМЕР 2. Испытуемые и контрольные препараты готовят как в примере 1 при поглощенной дозе гамма-излучения 40 кГр. Их испытывают на противовирусное действие на модели переживающих фрагментов хорионаллантоисной оболочки (ФХАО) куриных эмбрионов. Для этого вирус гриппа А/Гонконг/1/68 (H3N2) с инфекционной активностью 100 ЭИД₅₀/0,2 мл вносят в лунки планшетки с ФХАО в культуральной среде 199 и инкубируют 1 ч при 37°С для адсорбирования вируса. Далее в лунки вносят испытуемые и контрольные препараты в 20-кратном разведении (по 10 лунок на препарат) и выдерживают при 37°С в течение 3 суток, после чего определяют остаточную инфекционную активность (ИА) вируса титрованием на куриных эмбрионах. Результаты приведены в табл.2.

Как видно из таблицы 2, облученные растворы глюкозы и фруктозы обладают противовирусным действием, при этом наиболее эффективно использование их облученной смеси, действие которой несколько превосходит прототип (препарат раствора меда).

Как пояснено приведенными примерами, использование предлагаемого способа по сравнению с прототипом позволяет сохранить биологическую активность целевого продукта на высоком уровне, а, в случае использования смеси глюкозы и фруктозы, даже несколько ее повысить. Заявляемый способ приводит к обеспечению стандартности целевого продукта и является более простым по сравнению со способом-прототипом.

Таблица 1 Гепатозащитное действие препаратов после затравки мышей CCI4
Ингредиенты препарата*	Поглощенная доза, кГр	Процент гибели на:
глюкоза	фруктоза	ксилоза	мед	1 сутки	4 сутки
+	-	-	-	25	50,0	60,0
-	+	-	-	25	20,0	20,0
-	-	+	-	25	85,7	92,9
+	+	-	-	25	7,7	7,7
+	+	-	-	10	14,3	21,4
+	+	-	-	0	20,0	20,0
+	+	+	-	25	8,3	8,3
-	-	-	+	0	42,0	42,0
-	-	-	+	25	8,0	8,0
(контроль: мышей не защищают)	100,0	-
* Наличие -(+), отсутствие -(-).

Таблица 2 Противовирусная активность препаратов на модели ФХАО
Ингредиенты препарата*	Поглощенная доза 40 кГр	Остаточная ИА, lg ЭИД50	Индекс снижения ИА, lg ЭИД50
глюкоза	фруктоза	ксилоза	мед
+	-	-	-	+	3,0±0,05	2,5±0,03
-	+	-	-	+	3,3±0,07	2,2±0,04
-	-	+	-	+	5,0±0,05	0,5±0,02
+	+	-	-	+	2,3±0,06	3,2±0,02
+	+	-	-	-	4,2±0,06	1,3±0,03
+	+	+	-	+	2,6±0,05	2,9±0,07
-	-	-	+	-	3,7±0,04	1,8±0,07
-	-	-	+	+	2,5±0,05	3,0±0,01
(контроль: зараженные клетки, не обработанные защитным средством)	5,5±0,03	-
* Наличие -(+), отсутствие -(-).

Способ получения средства на основе сахаров, обладающего антивирусной и гепатозащитной активностью, путем воздействия гамма-облучения при поглощенной дозе 25-40 кГр на водный изотонический раствор сахаросодержащего сырья, отличающийся тем, что в качестве сахаросодержащего сырья, используют глюкозу и фруктозу в соотношении 1:1 по массе.