Блок-сополимер с пониженным содержанием примесей, полимерный носитель, фармацевтические препараты в полимерной форме и способы их получения

Изобретение относится к блок-сополимеру полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) или его соли. Блок-сополимер получают способом, включающим очистку полиэтиленгликоля с помощью ионообменной смолы с получением блок-сополимера очищенного полиэтиленгликоля и поли(кислой аминокислоты). После удаления защитной группы при необходимости, осуществляют процесс очистки, используя разделительную/адсорбционную смолу, где примеси, содержащие полиэтиленгликоль и поли(кислые аминокислоты), содержатся в количестве, не превышающем 10 мас.% очистки. Также изобретение относится к полимерному носителю, способу его получения, полимерному фармацевтическому препарату и способу количественного определения содержания примесей. Изобретение позволяет удовлетворительно удалять примеси из блок-сополимера, состоящего в основном из полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), и который пригоден для получения полимерного носителя, обладающего фармацевтически приемлемой степенью чистоты. 5 н. и 12 з.п. ф-лы.

 

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к блок-сополимеру высокой степени чистоты, который можно использовать в качестве носителя для транспортировки лекарств или т.п., к полимерному носителю, который образован в результате конденсации блок-сополимера с антрациклиновым противораковым агентом, и используется в качестве носителя лекарств, к полимерному фармацевтическому препарату, полученному с использованием полимерного носителя, и к способу их получения. Кроме того, настоящее изобретение относится также к способу количественного определения примесей, содержащихся в блок-сополимере.

ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Известен подход, с помощью которого, используя полимерный носитель, который образует мицеллы, лекарства, гены и т.п., доставляют в нужный участок живого организма; однако в том, что касается используемого для этой цели блок-сополимера, то содержащиеся в нем примеси не были удалены из него в достаточной степени.

Обычно процессы очистки синтетических высокомолекулярных соединений, таких как блок-сополимеры, осуществляли, используя методы, такие как диализ, ультрафильтрация и осаждение. В способах очистки с использованием диализа и ультрафильтрации процессы разделения и очистки осуществляют на основе различий в молекулярных массах. Обычно мембраны для диализа и ультрафильтрационные пленки классифицируют на группы в зависимости от максимальной молекулярной массы, которую они пропускают; однако наблюдаются большие расхождения в точности молекулярных масс фракций. Соответственно, способы очистки синтетических высокомолекулярных соединений, таких как блок-сополимеры, с помощью диализа и ультрафильтрации, не могут обеспечить достаточной степени очистки в тех случаях, когда нет значительных различий между молекулярной массой целевого синтетического высокомолекулярного соединения и молекулярными массами примесей. Кроме того, эти способы не пригодны для промышленного использования и в большинстве случаев используются в качестве лабораторных способов очистки.

Напротив, способ очистки, в котором используют процесс осаждения, широко использовался как способ, который пригоден также и для промышленного применения. В этом способе, используя различия в растворимости, примеси удаляют таким образом, чтобы осуществить процесс очистки, и этот способ превосходен для удаления низкомолекулярных компонентов из синтетического высокомолекулярного соединения, такого как блок-сополимер. Однако, в том случае, когда молекулярные массы примесей, таких как полиэтиленгликоли и поли(кислые аминокислоты), велики, существует лишь небольшое различие в растворимостях синтетических высокомолекулярных соединений, таких как блок-сополимеры, и в растворимостях примесей; в результате высокомолекулярные соединения, такие как блок-сополимеры, не удается очистить в достаточной степени, используя процесс осаждения.

Как было описано выше, примеси с высокой молекулярной массой, содержащиеся в блок-сополимере, не удавалось удалить в достаточной степени, и до сих пор не известен способ очистки, который удобно использовать для получения блок-сополимера, который применим также для фармацевтических препаратов и т.п. Кроме того, что касается образующего мицеллы блок-сополимера, обладающего амфипатическими свойствами, обычный способ количественного определения содержания примесей в блок-сополимере не дает удовлетворительных аналитических результатов.

В обычном способе синтетическое высокомолекулярное соединение, такое как блок-сополимер, растворяют в растворителе и анализируют, используя высокоскоростную жидкостную хроматографию, совмещенную с гель-фильтрационной колонкой (гель-проникающая хроматография: GPC).

Однако в том случае, когда существует лишь небольшое различие в молекулярных массах блок-сополимера и содержащихся в нем примесей, оказывается затруднительным разделить их до чистых пиков, и не представляется возможным получить достаточные характеристики для количественного определения содержания примесей.

Кроме того, даже в том случае, когда существует достаточное различие в их молекулярных массах, если количество примесей мало, не удается получить чистые пики. Это связано с тем, что, так как механизм гель-проникающего разделения использует молекулярную диффузию, пики имеют тенденцию к уширению на хроматограмме, что приводит к недостаточным высотам пиков для компонент, содержащихся в малых количествах. Соответственно, обычные методы не могли обеспечить достаточно эффективного способа количественного определения.

Кроме того, так как при использовании обычного способа разделяют и количественно определяют основной компонент и примеси на основании только различия в молекулярных массах, при этом не получают качественной информации, например относительно строения и происхождения примесей.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторы настоящего изобретения предприняли обширные исследования с целью решения вышеуказанных задач, результатом чего явилось настоящее изобретение.

Другими словами, настоящее изобретение относится к:

1) Блок-сополимеру полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), или его соли, где содержание в нем примесей не превышает 10 мас.%.

2) Блок-сополимеру или его соли по п.1, где примесями являются полиэтиленгликоли и поли(кислые аминокислоты).

3) Блок-сополимеру или его соли по п.1 или 2, где поли(кислая аминокислота) является полиаспарагиновой кислотой.

4) Блок-сополимеру или его соли по п.1 или 2, где блок-сополимер является сополимером, представленным формулой (I):

(где R1 представляет атом водорода или низшую алкильную группу, R2 представляет связующую группу, R3 представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R4 представляет атом водорода или защитную группу аминогруппы, и n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х является целым числом от 0 до 300; однако х не может быть больше, чем m).

5) Блок-сополимеру или его соли по п. 4, где R1 представляет алкильную группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, R2 представляет алкиленовую группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, R3 представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R4 представляет атом водорода или ацильную группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х является целым числом от 0 до 300, однако х не может быть больше, чем m в формуле (1).

6) Блок-сополимеру или его соли по п. 4, где R1 представляет метильную группу, R2 представляет триметиленовую группу, R3 представляет метиленовую группу, и R4 представляет ацетильную группу, n является целым числом от 20 до 500, m является целым числом от 10 до 100, и х является целым числом от 0 до 100, однако х не может быть больше, чем m в формуле (1).

7) Способу получения блок-сополимера или его соли по любому из пп.1-6, в котором производное полиэтиленгликоля очищают с помощью ионообменной смолы для получения блок-сополимера, и, при необходимости, после удаления защитной группы, осуществляют процесс очистки, используя разделительную/адсорбционную смолу.

8) Полимерному носителю, где поли(кислую аминокислоту) блок-сополимера по любому из пп.1-6 конденсируют с остатком антрациклинового противоракового агента.

9) Полимерному носителю по п. 8, где конденсация поли(кислой аминокислоты) и остатка антрациклинового противоракового агента является конденсацией карбоновой кислоты боковой цепи поли(кислой аминокислоты) и остатка антрациклинового противоракового агента.

10) Полимерному носителю по п. 8 или 9, где остаток антрациклинового противоракового агента является остатком доксорубицина.

11) Полимерному носителю по п. 8 или 9, где остаток антрациклинового противоракового агента в поли(кислой аминокислоте) характеризуется степенью связывания от 30 до 55%.

12) Способу получения полимерного носителя по любому из пп.8-11, где после выделения продукта конденсации блок-сополимера, раскрытого в любом из пп.1-6, и вспомогательного агента реакции, продукт конденсации взаимодействует с антрациклиновым противораковым агентом.

13) Способу получения полимерного носителя по п.12, где антрациклиновый противораковый агент является доксорубицином или его солью.

14) Полимерному фармацевтическому препарату, содержащему комплекс блок-сополимер - лекарство, в котором антрациклиновый противораковый агент содержится во внутреннем ядре мицеллы, образованной полимерным носителем по любому из пп.8-11.

15) Полимерному фармацевтическому препарату по п.14, где антрациклиновый противораковый агент является доксорубицином или его солью.

16) Полимерному фармацевтическому препарату по пп.14 или 15, где комплекс блок-сополимер - лекарство находится в форме высушенного вымораживанием вещества.

17) Способу количественного определения содержания примесей, содержащихся в блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) по п.1, включающий стадии:

растворения блок-сополимера в растворителе;

обработки раствора смолой и

обработки обработанного раствора с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии, с использованием колонки для гель-проникающей хроматографии.

18) Способу количественного определения по п.17, в котором растворителем является вода, которая может содержать органический растворитель, который смешан с водой, смола является ионообменной смолой, и примесями являются полиэтиленгликоли.

19) Способу количественного определения по п.17, в котором растворителем является вода, которая может содержать органический растворитель, который смешан с водой, смола является разделительной/адсорбционной смолой, которая адсорбирует соединение, содержащее простую эфирную связь, и примесями являются поли(кислые аминокислоты).

ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Далее следует описание с более подробным обсуждением деталей изобретения.

Первый аспект настоящего изобретения относится к блок-сополимеру полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), или его соли, в котором содержание примесей не превышает 10 мас.%. В результате анализа примесей, содержащихся в блок-сополимере, было обнаружено, что эти примеси состоят из полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), то есть полиаминокислоты, содержащей карбоновую кислоту в своей боковой цепи. Примеры полиэтиленгликолей включают полиэтиленгликоль и полиэтиленгликоль с одной концевой алкоксигруппой. Примеры поли(кислой аминокислоты) включают полиглутаминовую кислоту и полиаспарагиновую кислоту.

В настоящем изобретении, что касается поли(кислой аминокислоты) в блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), примеры ее включают полимер α- и/или β-аминокислоты, содержащей карбоксильную группу в боковой цепи, предпочтительно, полиглутаминовую или полиаспарагиновую кислоту, и что касается блок-сополимера, то его примеры включают блок-сополимеры, представленные вышеуказанными формулами (1) или (2), или их солями.

(где R1 представляет атом водорода или низшую алкильную группу, R2 представляет связующую группу, R3 представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R4 представляет атом водорода или защитную группу аминогруппы, и n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х является целым числом от 0 до 300; однако х не может быть больше, чем m).

Здесь, примеры R1 включают атом водорода или низшую алкильную группу, и предпочтительно используют низшую алкильную группу, конкретные примеры которой включают метильную группу, этильную группу, н-пропильную группу и изопропильную группу; в частности, более предпочтительно используют метильную группу. Что касается связующей группы R2, то ее примеры включают углеводородную группу, которая может быть разветвленной, и предпочтительно алкиленовую группу, и ее конкретные примеры включают этиленовую группу, триметиленовую группу и тетраметиленовую группу; в частности, наиболее предпочтительно используют этиленовую группу и триметиленовую группу. Что касается R3, то используют метиленовую группу или этиленовую группу, и более предпочтительно используют метиленовую группу.

Что касается R4, то используют атом водорода или защитную группу аминогруппы, а что касается защитной группы аминогруппы, то она конкретно не ограничена, и можно использовать любую группу, если она является обычно используемой защитной группой для аминогруппы; в частности, предпочтительно используют низшую ацильную группу, и ее конкретные примеры включают формильную группу, ацетильную группу, пропионильную и бутироильную группу, и более предпочтительно используют ацетильную группу. Здесь n является целым числом от 5 до 1000, более предпочтительно, от 20 до 500, наиболее предпочтительно, 80 до 300, m является целым числом от 2 до 300, более предпочтительно, от 10 до 100, наиболее предпочтительно от 20 до 50, и х является целым числом от 0 до 300, более предпочтительно, от 0 до 100, наиболее предпочтительно, от 0 до 50; однако х не может быть больше, чем m.

Что касается солей блок-сополимера настоящего изобретения, то их конкретные примеры включают соли щелочных металлов, соли щелочноземельных металлов, аммонийные соли и органические аммонийные соли, и предпочтительными солями являются натриевая соль, калиевая соль, кальциевая соль, аммонийная соль и соль триэтиламмония.

Считают, что примеси, содержащиеся в блок-сополимере, не образуют мицелл и не имеют функций служения в качестве полимерного носителя для лекарства, гена или т.п.; поэтому для целей использования в медицине содержание примесей предпочтительно снижают до величины, не превышающей 10%, более предпочтительно, не превышающей 5%.

Кроме того, второй аспект настоящего изобретения относится к способу получения блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) или его соли, где полиэтиленгликоли очищают, используя ионообменную смолу, с последующим образованием блок-сополимера с поли(кислой аминокислотой), и после удаления при необходимости защитной группы; блок-сополимер очищают, используя разделительную/адсорбционную смолу. Что касается блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), то предпочтительно используют тот же блок-сополимер полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты). В тех случаях, когда блок-сополимер защищен защитной группой, то, что касается защитных групп, хотя нет конкретных ограничений, если только они нормально защищают карбоксильную группу в боковой цепи кислой аминокислоты, примеры их включают сложный эфир с низшим спиртом и сложный эфир с низшим спиртом, замещенным арильной группой, которая может иметь заместитель. Конкретными примерами являются метиловый сложный эфир, этиловый сложный эфир, пропиловый сложный эфир, бутиловый сложный эфир, бензиловый сложный эфир, фенэтиловый сложный эфир, n-метоксибензиловый сложный эфир и n-нитробензиловый сложный эфир. Что касается способа удаления защитной группы, то подходящий способ выбирают из обычно используемых способов в зависимости от характера защитной группы, и можно использовать, например, гидролитический способ с применением кислоты или щелочи, и способ гидрогенолиза с использованием катализатора, или т.п.

Что касается блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) настоящего изобретения с пониженным содержанием примесей, то в последующем описании будет обсужден способ очистки, например, соединения, представленного формулой (1).

Что касается способа получения блок-сополимера, то предложены различные способы; например, в выложенной японской патентной заявке (Japanese Patent Application Laid-Open) № 6-206832 раскрыт способ, в котором материал, полученный в результате модификации гидроксидной группы полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу, подвергают реакции полимеризации с производными аспарагиновой кислоты с последующей защитой аминогруппы, затем сложноэфирную связь гидролизуют для получения блок-сополимера; однако до сих пор не было известно какого-либо способа очистки для получения блок-сополимера высокой степени чистоты.

Способ модификации гидроксидной группы полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу, можно осуществить способом, в котором используют реакции, известные специалистам в этой области; например, были предложены следующие способы:

способ, где в реакции участвует этиленимин или т.п., способ, где, после осуществления реакции присоединения Михаэля для акрилонитрила, метакрилонитрила или т.п. нитрильную группу восстанавливают, превращая в аминогруппу, способ, где, после замещения группы гидроксида группой галогена, осуществляют реакцию с аминоспиртом, таким как этаноламин, и способ, где гидроксидную группу непосредственно превращают в нитрильную группу, а затем восстанавливают до аминогруппы.

Полиэтиленгликоли, концевая группа которых модифицирована до аминогруппы, включают полиэтиленгликоли, содержащие на одном конце неполную модификацию, например, полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце гидроксидную группу, и полиэтиленгликоль, к концевой группе которого присоединен акрилонитрил.

Такие полиэтиленгликоли, с неполной модификацией можно удалить отдельно, используя ионообменные материалы, содержащие кислотную функциональную группу. Хотя и без конкретных ограничений, если они только содержат кислотную функциональную группу, примеры ионообменных материалов, которые можно использовать, включают: Diaion SKIB (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion PK-216 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WK-10 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WK20 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Amberlite 120В (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite 200C (продукт Rohm and Haas Japan Co.) / Amber lite IRC-50 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRC-76 (продукт Rohm and Haas Japan Co.) и DowexSOW (продукт Dow Chemical Corp.), которые служат в качестве ионообменных смол; и также включают SP-Sephadex C-25 (продукт Pharmacia Biotech), SP-Sephadex С-50 (продукт Pharmacia Biotech), CM-Sephadex C-25 (продукт Pharmacia Biotech), CM-Sephadex С-50 (продукт Pharmacia Biotech), SP-Toyopearl 550 (продукт Toso К.К.), SP-Toyopearl 650 (продукт Toso К.К.), CM-Sephadex 550 (продукт Pharmacia) и CM-Sephadex 650 (продукт Pharmacia), которые служат в качестве ионообменных гелей, и, в частности, предпочтительно используют SP-Toyopearl 650 и CM-Sephadex 650.

Способ очистки полученного полиэтиленгликоля может быть либо порционным способом, либо способом с использованием колонки; причем более предпочтительно использовать способ с использованием колонки. Другими словами, полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце метоксигруппу, содержащий модифицированную концевую группу, растворяют в растворителе. Растворитель, который можно использовать, конкретно не ограничен, если только его можно использовать в способе ионообмена, и предпочтительно используют воду или смешанный растворитель вода/органический растворитель, такой как вода/метанол и вода/ацетонитрил. Затем полученный раствор пропускают через колонку, в которую был загружен вышеуказанный ионообменный материал, восстановленный в H+ форме, и затем колонку промывают водой или смешанным растворителем вода/органический растворитель, с тем чтобы полиэтиленгликоли, которые были не полностью модифицированы, были удалены из нее. После этого, полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце метоксигруппу, с концевой группой, модифицированной до аминогруппы, который был адсорбирован, элюируют, используя растворитель, к которому добавлено основное вещество, такое как водный аммиак или смешанный растворитель водный аммиак/органический растворитель. Элюированный таким образом раствор обрабатывают соответствующим способом, таким как конденсирование или сушка вымораживанием, с тем, чтобы получить полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце метоксигруппу, где концевая группа модифицирована до аминогруппы, с высокой степенью чистоты.

Затем осуществляют взаимодействие полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу, где концевая группа модифицирована до аминогруппы, например, с N-карбоновым ангидридом аминокислоты, в которой карбоксильная группа боковой цепи была защищена, с тем, чтобы получить блок-сополимер, и, при необходимости, концевую аминогруппу затем ацетилируют, используя уксусный ангидрид или т.п. После этого, при необходимости, удаляют защитные группы на боковых цепях, с тем, чтобы получить блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота).

Полученный таким образом блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) содержит в качестве примеси поли(кислую аминокислоту); однако, его можно очистить, используя разделительную/адсорбционную смолу. Что касается разделительной/адсорбционной смолы, то ее примеры включают силикагель, силикатные порошки, силикагель, модифицированный углеводородами, и смолу стирол/дивинилбензол, и предпочтительно используют смолу стирол/дивинилбензол; кроме того, более предпочтительно используют HP-20 SS (продукт Mitsubishi Chemical Corporation).

Способ очистки полученного сополимера полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) может быть либо порционным, либо способом с использованием колонки; и более предпочтительно используют способ с использованием колонки. Другими словами, блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) растворяют в растворителе. Растворитель, который можно использовать, конкретно не ограничен, если только он обладает достаточными основными свойствами для диссоциации поли(кислой аминокислоты), и применим в отношении разделительной/адсорбционной смолы; и предпочтительные примеры включают водный раствор гидроксида щелочного металла или смешанный раствор водного раствора гидроксида щелочного металла и органического растворителя, такой как водный раствор гидроксид натрия/метанол и водный раствор гидроксид натрия/ацетонитрил. Раствор блок-сополимера полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) в растворителе пропускают через колонку, в которую помещена разделительная/адсорбционная смола, и затем через колонку пропускают водный раствор гидроксида натрия или смешанный растворитель, состоящий из водного раствора гидроксида натрия/органического растворителя, для того, чтобы удалить поли(кислую аминокислоту). После этого, адсорбированный блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) элюируют, используя менее полярный растворитель, такой как смешанный растворитель, состоящий из воды/органического растворителя с возрастающим содержанием органического растворителя. Элюированный таким образом раствор подвергают соответствующей последующей обработке, такой как конденсирование, сушка вымораживанием или осаждение, с тем, чтобы получить блок-сополимер полиэтиленгликоль - поли(кислая аминокислота) с высокой степенью чистоты.

Третий аспект настоящего изобретения относится полимерному носителю, который получен путем конденсирования очищенного блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), вместе с антрациклиновым противораковым агентом. Что касается полимерного носителя, то предложены высокомолекулярные соединения, представленные следующими формулами (3) или (4). Настоящее изобретение включает также их соли.

(где R представляет гидроксидную группу или остаток антрациклинового противоракового агента, R1 представляет атом водорода или низшую алкильную группу, R2 представляет связующую группу, R3 представляет метиленовую группу или этиленовую группу, и R4 представляет атом водорода или защитную группу аминогруппы, и n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300, и х + у является целым числом от 0 до 300; однако х + у не может быть больше, чем m).

Что касается R в соединениях, представленных формулами (3) или (4) настоящего изобретения, примеры его включают гидроксидную группу или остаток антрациклинового противоракового агента. В поли(кислой аминокислотной) части блок-сополимера порядок связывания соответствующих составляющих частей конкретно не ограничен и может быть случайным или упорядоченным набором. Тип связи между остатком карбоновой кислоты в боковой цепи поли(кислой аминокислоты) блок-сополимера и остатком антрациклинового противоракового агента конкретно не ограничен, и предпочтительно используют амидную связь с аминогруппой остатка антрациклинового противоракового агента. В частности, предпочтительно используют амидную связь, образованную первичной аминогруппой аминосахарной части остатка антрациклинового противоракового агента. Доля антрациклинового противоракового агента, связанного с остатками карбоновой кислоты боковых цепей поли(кислой аминокислотной) части, составляет от 1 до 100%, и если принять во внимание способность образовывать мицеллы, эта доля должна предпочтительно находиться в интервале значений от 10 до 60%, более предпочтительно от 30 до 55%. Примеры остатков антрациклинового противоракового агента включают остатки, такие как даунорубицин, доксорубицин, акрарубицин, эпирубицин и пирарубицин, и более предпочтительно использовать доксорубициновые остатки.

R1, R2, R3, R4, n и m имеют предпочтительно указанные выше значения.

Здесь, х + у является целым числом от 0 до 300, предпочтительно от 0 до 100, более предпочтительно от 0 до 50, и х и у могут принимать любые значения, включая 0, если только каждый из них является целым числом, удовлетворяющим вышеуказанным условиям.

Кроме того, четвертый аспект настоящего изобретения относится к способу получения полимерного носителя, который получают таким способом, где: очищенный блок-сополимер полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) конденсируют со вспомогательным реакционным агентом, и, после выделения полученного в результате конденсации соединения, осуществляют реакцию с антрациклиновым противораковым агентом. Полимерный носитель получают способом, раскрытым в брошюре международной публикации № W097/12895, то есть способом, где блок-сополимер и антрациклиновый противораковый агент конденсируют, используя дегидратирующий конденсирующий агент типа карбодиимида; однако, при этом ацилизомочевина, которая является активным промежуточным соединением, за счет внутримолекулярной перегруппировки превращается в ацилмочевину в качестве побочного продукта, что приводит к получению полимерного носителя с примесью ацилмочевины. Выделяя соединение, полученное в результате конденсирования блок-сополимера и вспомогательного реакционного агента, оказывается возможным уменьшить содержание побочного продукта - ацилмочевины, и соответственно получить полимерный носитель с меньшей примесью ацилмочевины. Температура отверстия для ввода газового хроматографа должна быть доведена до достаточно высокого значения, тогда количество примеси побочного продукта ацилмочевины количественно измеряют, определяя количество изоцианатных производных, которые образовались при термическом разложении ацилмочевины.

Приводимое далее описание разъясняет вышеуказанный способ получения более конкретно: очищенный блок-сополимер растворяют в органическом растворителе, и к этому добавляют дегидратирующий конденсирующий агент и вспомогательный реакционный агент, с тем, чтобы осуществилась реакция, и производные алкилмочевины, образующиеся в этой реакции, отфильтровывают, с тем чтобы выделить из фильтрата активный сложноэфирный материал. Затем, после того как к полученному активному сложноэфирному материалу в органическом растворителе добавляют антрациклиновый противораковый агент или его соль, к этому добавляют основание, и полимерный носитель выделяют из реакционного раствора. Что касается органического растворителя, то хотя нет конкретных ограничений, если только реакционный материал в нем растворяется, предпочтительно используют неводный полярный растворитель, и его примеры включают диметилформамид, диметилацетамид и 1,3-диметил-2-имидазолидинон, и более предпочтительно используют диметилформамид. Что касается дегидратирующего конденсирующего агента, который можно использовать для конденсации блок-сополимера и вспомогательного реакционного агента, то используют конденсирующий агент, который обычно используют для пептидного синтеза, и предпочтительно используют такой как дициклогексилкарбодиимид (DCC) и 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC). Что касается вспомогательного реакционного агента, то используют реакционный вспомогательный агент такой, который обычно используют для пептидного синтеза. Примеры его включают N-гидроксисоединения, и предпочтительно используют N-гидроксисукцинимид, N-гидроксибензотриазол и т.п. Что касается основания, которое можно использовать, то хотя нет конкретных ограничений, предпочтительно используют органическое основание, такое как триэтиламин. Что касается антрациклинового противоракового агента, то используют соединения на основе антрациклина, которые обеспечивают вышеуказанный остаток антрациклинового противоракового агента.

Кроме того, пятый аспект настоящего изобретения относится к полимерному фармацевтическому препарату, который содержит комплекс блок-сополимер - лекарство, где антрациклиновый противораковый агент заключен в ядра мицелл, образованных полимерным носителем, который получен в результате очистки блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты). Примеры антрациклиновых противораковых агентов включают соединения, такие как даунорубицин, акрарубицин, эпирубицин и пирарубицин, или их соли, и наиболее предпочтительно использовать доксорубицин или его соли. Кроме того, следующий аспект настоящего изобретения относится также к полимерному фармацевтическому препарату, в котором комплекс блок-сополимер - лекарство находится в форме высушенного вымораживанием вещества. Способ получения вышеуказанного полимерного фармацевтического препарата конкретно не ограничен, и при необходимости можно использовать способ, раскрытый в открытой японской патентной заявке № 7-69900, который представляет способ, где смешанный растворитель, состоящий из диметилформамида и воды, в котором растворены блок-сополимер и антрациклиновый противораковый агент, подвергают диализу, используя мембрану для диализа, и осуществляют ультрафильтрации с использованием ультрафильтрационной пленки, и при необходимости сушат вымораживанием.

Кроме того, можно использовать другой способ, в котором блок-сополимер и антрациклиновый противораковый агент растворяют в смешанном растворителе, состоящем из смешанного с водой низкокипящего органического растворителя, такого как этанол и вода, и полученный раствор конденсируют, чтобы отогнать низкокипящий органический растворитель, и при необходимости сушат вымораживанием.

Шестой аспект настоящего изобретения относится к способу количественного определения, в котором после количественного определения содержания примесей, содержащихся в вышеуказанном блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), блок-сополимер растворяют в растворителе, и раствор обрабатывают смолой, затем обработанный раствор обрабатывают с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии, используя колонку для гель-проникающей хроматографии. Что касается блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) и примесей, содержащихся в блок-сополимере, то их примеры те же, что были раскрыты выше.

Что касается растворителя, используемого в настоящем изобретении для растворения блок-сополимера полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) после количественного определения содержания полиэтиленгликолей, содержащихся в качестве примесей, можно использовать любой растворитель, который способен растворить блок-сополимер; и предпочтительно использовать, водный раствор, рН которого устанавливают, используя соответствующую соль, или смешанный растворитель, состоящий из этого водного раствора и органического растворителя, такого как метанол, этанол, ацетонитрил и тетрагидрофуран. Что касается солей, которые можно использовать для установления нужного значения рН, то можно использовать обычно используемые соли, обладающие буферирующей функцией, и предпочтительно используют фосфаты, бораты, гидрокарбонаты натрия, фталаты, трис-гидрохлориды и т.п.

Кроме того, что касается растворителей, используемых для количественного определения полиаминокислот, содержащихся в качестве примесей, можно использовать любой растворитель, который способен растворить блок-сополимер полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) и обеспечить диссоциацию карбоновых кислот в боковых цепях, после количественного определения полиэтиленгликолей; и предпочтительно использовать водный раствор, рН которого устанавливают, используя подходящую соль или смешанный растворитель, состоящий из такого водного раствора и органического растворителя, такого как метанол, этанол, ацетонитрил и тетрагидрофуран. Для того, чтобы должным образом обеспечить диссоциацию карбоновой кислоты в боковых цепях, рН растворителя предпочтительно устанавливают в интервале значений от 5 до 13, и, что касается соли, которую можно использовать для этой цели, то используют вышеуказанные фосфаты, бораты, гидрокарбонат натрия, фталаты, трис-гидрохлориды и т.п.

В настоящем изобретении, что касается смолы, которую используют для обработки раствора блок-сополимера после количественного определения содержания полиэтиленгликолей, содержащихся в блок-сополимере в качестве примесей, предпочтительно использовать ионообменную смолу, которая может образовывать противоион для иона диссоциированной группы блок-сополимера, то есть, анионообменноую смолу; и без конкретных ограничений можно использовать любую ионообменную смолу, такую как диалкиламин, триалкиламин и диалкилэтаноламин, если только она содержит основную функциональную группу.

Что касается способа анализа, то можно использовать либо порционный способ, либо способ, включающий использование колонки; причем более предпочтительно использовать способ с использованием колонки.

В способе с использованием колонки предложен способ, где: в открытую колонку загружают ионообменную смолу, такую как Diaion SA10A (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion PA318 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion SA20A (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WA30 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Diaion WA10 (продукт Mitsubishi Chemical Corporation), Amberlite IRA402 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite MR904 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRA410 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRA93 (продукт Rohm and Haas Japan Co.), Amberlite IRA68 (продукт Rohm and Haas Japan Co.) и Dowex66 (продукт Dow Chemical Japan Corp.); целлюлозный ионообменный материал, такой как Cellex QAE (продукт Bio-Rad Co., Ltd.), Cellex PEI (продукт Bio-Rad Co., Ltd.), Cellex D (продукт Bio-Rad Co., Ltd.) и Cellex DE52 (продукт Bio-Rad Co., Ltd.); или гелевый ионообменный материал, такой как QAE-Sephadex A25 (продукт Pharmacia Biotech), QAE-Sephadex A50 (продукт Pharmacia Biotech), DEAE-Sephadex A25 (продукт Pharmacia Biotech), DEAE-Sephadex A50 (продукт Pharmacia Biotech), DEAE-Separose CL-6B (продукт Pharmacia Biotech) и DEAE-Bio Gel А (продукт Pharmacia Biotech); или предложен другой способ, в котором коммерческий картридж, который заранее заправлен ионообменной смолой, используют для предварительной обработки с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии, такие как Sep-Pak QMA (продукт Waters Co., Ltd.), Sep-Pak NH2 (Waters Co., Ltd.), Bond Elut PSA (продукт Barian Co., Ltd.), Bond Elut DMA (продукт Barian Co., Ltd.) и Bond Elut SAX (продукт Barian Co., Ltd.). С точки зрения простоты анализов более предпочтительно использовать способ, в котором используют картриджи. В частности более предпочтительно использовать Sep-Pak QMA.

В случае количественного анализа полиэтиленгликолей, содержащихся в блок-сополимере в качестве примесей, некоторые полиэтиленгликоли, которые были подвергнуты вышеуказанной обработке на смоле и были элюированы без того, чтобы быть адсорбированными на смоле, анализируют, используя колонку для гель-проникающей хроматографии, для получения результатов анализа. В этом способе, так как элюированный раствор можно сконденсировать до высоких концентраций, оказывается возможным количественно анализировать полиэтиленгликоли с высокой степенью чувствительности.

В настоящем изобретении, что касается носителя для колонки для гель-проникающей хроматографии, используемой для количественного определения примесей, нет конкретных ограничений, и можно использовать любой носитель, если только его используют для высокоскоростной жидкостной хроматографии;

однако, в зависимости от соответствующих молекулярных масс примесей в блок-сополимере, используют носители, обладающие соответствующими пределами исключения по молекулярным массам. Что касается количественных измерений в случае полиэтиленгликолей, можно, например, использовать следующие носители: ShodexOHpakSB-803 HQ (продукт Showa Denko К.К.), Shodex OHpak SB-802.5 HQ (продукт Showa Denko К.К.), Shodex OHpak SB-804 HQ (продукт Showa Denko K.K.), и что касается количественных измерений поли(кислых аминокислот), можно, например, использовать следующие носители: Asahipak GF-310 HQ (продукт Asahi Kasei Corporation) и Asahipak GF-510 HQ (продукт Asahi Kasei Corporation). Кроме них можно также использовать Asahipak GS-320 HQ (продукт Asahi Kasei Corporation) и Shodex OHpak Q-802 (продукт Showa Denko K.K.). Что касается использования в настоящем изобретении высокоскоростной жидкостной хроматографии, то можно использовать коммерческие приборы для высокоскоростной жидкостной хроматографии.

Кроме того, что касается смолы, которую используют для обработки раствора блок-сополимера таким образом, чтобы провести количественные измерения поли(кислых аминокислот), содержащихся в блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) настоящего изобретения в качестве примесей, предпочтительно используют смолу, которая адсорбирует блок-сополимер, содержащий эфирные связи, то есть, разделительную/адсорбционную смолу; и ее примеры включают силикагель, силикатный порошок, силикагель, модифицированный углеводородами, и стирол/дивинилбензольную смолу. Что касается силикагеля, модифицированного углеводородом, то предпочтительно используют силикагель, модифицированный углеводородами, содержащими от 1 до 30 атомов углерода, и в частности, более предпочтительно использовать силикагель, модифицированный углеводородами, содержащими от 4 до 18 атомов углерода.

Что касается способа анализа, то можно использовать либо порционный способ, либо способ с использованием колонки; причем более предпочтительно использовать способ с использованием колонки. Кроме того, можно использовать колонку, набитую коммерческой разделительной/адсорбционной смолой, и при этом желательно установить ее нужный размер. Кроме того, можно также использовать коммерческие аналитические экстракционные колонки с твердым носителем, такие как Sep-Pak C18 (продукт Waters Co., Ltd.), Sep-Pak tC18 (продукт Waters Co., Ltd.), Sep-Pak C8 (продукт Waters Co., Ltd.), Bond Elut C18 (продукт Barian Co., Ltd.) и Bond Elut C8 (продукт Barian Co., Ltd.), и более предпочтительно использовать Sep-Pak C18.

Что касается поли(кислых аминокислот), содержащихся в блок-сополимере в качестве примесей, то их количественное определение осуществляют следующим образом: раствор, в котором были растворены поли(кислые аминокислоты) таким растворителем, который диссоциирует карбоновую кислоту, обрабатывают на вышеуказанной смоле, и поли(кислые аминокислоты), которые были элюированы без адсорбирования на смоле, количественно определяют с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии, используя колонку для гель-проникающей хроматографии. В этом способе, так как элюированный раствор можно сконденсировать до высокой концентрации, становится возможным осуществить количественный анализ поли(кислых аминокислот) с высокой степенью чувствительности.

Используя эти способы анализа, измеряют количества полиэтиленгликолей и полиаспарагиновых кислот, которые соответственно содержатся в блок-сополимере полиэтиленгликолей и полиаспарагиновой кислоты, полученном с помощью вышеуказанного способа очистки, а также в обычном блок-сополимере полиэтиленгликолей и полиаспарагиновой кислоты, и полученные результаты представлены далее:

Количества примесей, содержащиеся в блок-сополимере
Примесибез очисткис очисткой
Полиэтиленгликоли6,0 мас.%1,3 мас.%
Полиаспарагиноваякислота7,5 мас.%2,4 мас.%

ПРИМЕРЫ

В нижеследующем описании подробно обсуждается настоящее изобретение со ссылкой на примеры. Однако эти примеры не ограничивают настоящее изобретение. В примерах среднее значение n равно 113 и среднее значение m равно 30.

Пример получения 1

Toyopearl 650 M (900 мл), восстановленный в Н+ форму, загружают в стеклянную колонку.

Полиэтиленгликоль с метоксигруппой/3-аминопропоксигруппой на одном конце (29,97 г) (средняя молекулярная масса 5287) растворяют в 1,98 л 10% водного раствора ацетонитрила, и этот раствор пропускают через колонку. После того, как колонку промывают 1,6 л 10% водного раствора ацетонитрила, колонку проявляют, используя 0,4 М водный аммиак, содержащий 10% ацетонитрила. Фракции, содержащие целевое соединение, собирают, и, после того, как их конденсируют при пониженном давлении, осуществляют сушку вымораживанием, получая 25,71 г очищенного полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу/на одном конце 3-аминопропоксигруппу.

Пример получения 2

Очищенный полиэтиленгликоль, содержащий на одном конце метоксигруппу/на одном конце 3-аминопропоксигруппу (23,32 г), полученный в примере получения 1, растворяют в 466 мл диметилсульфоксида (ДМСО) и нагревают до 35°С. К этому добавляют 42,87 г β-бензилового L-аспартат-N-карбонового ангидрида (BLA-NCA), и оставляют реагировать в течение 22 часов. Реакционную смесь добавляют по каплям в смешанный растворитель, содержащий 3,73 л диизопропилового эфира (IPE) и 0,93 л этанола (EtOH), и выпавший осадок отфильтровывают, промывают смешанным раствором (4:1) IPE и EtOH, затем IPE, и затем сушат в вакууме, получая 54,29 г (количество звеньев аспарагиновой кислоты: 29,0) сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - поли (β-бензилового L-аспартата).

Пример получения 3

Сополимер полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - поли β-бензилового L-аспартата (52,85 г), полученный в примере получения 2, растворяют в 529 мл диметилформамида и нагревают до 35°С. К этому добавляют 2,50 мл уксусного ангидрида, и реакции предоставляют протекать в течение 3 часов. Реакционную смесь добавляют по каплям в смешанный растворитель, содержащий 4,76 л диизопропилового эфира (IPE) и 0,53 л этанола (EtOH), и выпавший осадок отфильтровывают и промывают смешанным раствором (9:1) IPE и EtOH, затем IPE, и затем сушат в вакууме, в результате чего получают 51,67 г N-ацетилированного соединения сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - поли (β-бензилового L-аспартата).

Пример получения 4

N-ацетилированное соединение сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - поли β-бензилового L-аспартата (50,19 г), полученное в примере получения 3, оставляют реагировать с 753 мл ацетонитрила и 2,16 л 0,2 н. раствора гидроксида натрия в течение 5 часов. После того, как реакционную смесь нейтрализуют 2 н. хлористоводородной кислотой, ее конденсируют при пониженном давлении для удаления из нее ацетонитрила и затем трижды экстрагируют, используя 1,2 л этилацетата. После того, как сконденсирован водный слой, количество раствора доводят до 1,3 л, и затем к этому добавляют 11 мл 6 н. гидроксида натрия для получения щелочного водного раствора, и этот раствор пропускают через HP-20 SS колонку (2 л), которая была предварительно хорошо промыта. После промывки 0,01 н. водным раствором гидроксида натрия (8 л) и водой (3 л), осуществляют элюирование 50% смесью ацетонитрил-вода (6 л). Фракции, содержащие целевое соединение, собирают и конденсируют при пониженном давлении, и полученный раствор пропускают через Dowex 50W8 (520 мл), который был воспроизведен в Н4' форме, и промывают 50% смесью ацетонитрил-вода (1 л). Затем полученный после элюирования раствор конденсируют при пониженном давлении, затем сушат вымораживанием. Полученный в результате высушенный вымораживанием продукт растворяют в 320 мл диметилформамида (ДМФ), и полученный раствор добавляют по каплям в смешанный растворитель, состоящий из 2,56 л гексана и 0,64 л этилацетата. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают смешанным раствором (4:1) гексана и этилацетата, затем гексаном и затем сушат в вакууме, получая 33,20 г N-ацетилированного соединения сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты.

Пример получения 5

N-ацетилированное соединение сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты (28,85 г), полученное в примере получения 4, растворяют в 577 мл диметилформамида и нагревают до 35°С. К этому добавляют 19,75 г дициклогексилкарбодиимида (DCC) и 11,01 г N-гидроксисукцинимида (HOSu), и оставляют реагировать в течение 1 часа. Полученную дициклогексилмочевину фильтруют через слой ваты. Полученный таким образом фильтрат разбавляют 2,3 л этилацетата, к этому добавляют 3,5 л гексана. Выпавший осадок отфильтровывают и промывают смесью гексан:этилацетат (3:1), и затем сушат в вакууме, получая 33,82 г N-ацетилированного соединения сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты - HOSu активного сложноэфирного материала.

Пример получения 6

N-ацетилированное соединение сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты - HOSu активный сложноэфирный материал, (33,73 г) полученное в примере получения 5, растворяют в 1,35 л диметилформамида и нагревают до 35°С. К этому добавляют 26,13 г гидрохлорида доксорубицина в порошке, и после того, как суспендируют в реакционном растворе, к этому добавляют далее 8,16 мл триэтиламина, и оставляют реагировать в течение 1 часа.

Реакционную смесь добавляют по каплям в смешанный растворитель, содержащий 4,0 л этилацетата и 16,0 мл гексана, и выпавший осадок отфильтровывают и промывают смесью гексан:этилацетат (3:1), и затем сушат в вакууме. Затем, полученный осадок суспендируют в 590 мл ацетонитрила, затем к этому добавляют 1780 мл воды и нагревают при перемешивании до 35°С. После подтверждения того, что весь осадок растворился, перемешивание продолжают в течение 1 часа, реакционный раствор конденсируют при пониженном давлении для удаления из него ацетонитрила, и сушат вымораживанием. Полученный в результате сушки вымораживанием продукт снова растворяют в 1,074 л диметилформамида, и полученный раствор добавляют по каплям в смешанный растворитель, содержащий 2,15 л этилацетата и 8,60 л гексана. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают смесью гексан:этилацетат (3:1) и затем сушат в вакууме. Наконец, полученный осадок суспендируют в 1074 мл безводного этанола, и после перемешивания в течение 2 часов при 35°С, суспензию фильтруют и промывают безводным этанолом, затем сушат в вакууме, получая 45,39 г продукта конденсации N-ацетилированного соединения сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты и доксорубицина. Количество доксорубицина, связанного с остатками карбоновой кислоты в боковых цепях части полиаспарагиновой кислоты блок-сополимера, составляет примерно 47%.

Пример получения 7

К продукту конденсации N-ацетилированного соединения сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты и доксорубицина (20,00 г), полученному в примере получения 6, добавляют 100 мл воды, используемой для инъекций, все это нагревают до 35°С и добавляют 6,0 мл 0,5 н. раствора гидроксида натрия, перемешивают и затем добавляют еще 100 мл безводного этанола. После подтверждения того, что блок-сополимер растворился, к раствору добавляют 3,906 г гидрохлорида доксорубицина и растворяют в нем. К этому добавляют 5,9 мл 0,5 н. гидроксида натрия, чтобы довести значение рН до 6, и затем добавляют 188 мл воды для инъекций. Через 1 час раствор фильтруют, используя мембранный фильтр (Millipore; GV тип 0,22 pm), и растворитель затем отгоняют при пониженном давлении, получая раствор комплекса блок-сополимер - лекарство, который сушат вымораживанием, получая 22,96 г высушенного вымораживанием вещества комплекса блок-сополимер - лекарство.

Пример 1

Блок-сополимер (10,3 мг), полученный в примере получения 4, растворяют в 10 мМ буферном растворе уксусной кислоты (рН 7,0, 1 мл), получая 1,0043 г раствора блок-сополимера. Одну порцию (0,7491 г) этого раствора пропускают через колонку Sep-Pak QMA (продукт Waters Co., Ltd.), через которую пропущены метанол, вода и 10 мМ буферный раствор уксусной кислоты (по 5 мл каждого), и затем промывают буферным раствором 10 мМ уксусной кислоты (3 мл). Всего получают 4,1171 г раствора, включая свободно прошедшие фракции и промывочные фракции. Полученный раствор анализируют количественно с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии в следующих условиях, с присоединенной последовательно колонкой для гель-проникающей хроматографии.

Количество полиэтиленгликолей, содержащихся в растворе,

составляет 0,1005 мг (1,3 мас.%).

Колонка: Shodex OHpak SB803 + SB-G (производитель Showa Denko

К.К. )

Температура в колонке: 40°С

Подвижная фаза: 100 мМ водный раствор хлорида натрия

Скорость потока: 0,5 мл/мин

Детектор: дифференциальный рефрактометр

Вводимое количество: 50 мкл

Пример 2

Блок-сополимер (10,3 мг), полученный в примере получения 4, растворяют в 100 мМ буферном растворе фосфорной кислоты (рН 7,0, 1 мл), получая раствор блок-сополимера. Его пропускают через колонку Sep-Pak C18 (Производитель Waters Co., Ltd.), через которую предварительно пропускают метанол, воду и 100 мМ буферный раствор фосфорной кислоты (по 5 мл каждого), и затем промывают 100 мМ буферным раствором фосфорной кислоты (3 мл). Всего получают 4,1735 г раствора, включая свободно прошедшие фракции и промывочные фракции. Полученный раствор количественно анализируют с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии в следующих условиях, используя присоединенную последовательно колонку для гель-проникающей хроматографии. Количество содержащейся в нем полиаспарагиновой кислоты составляет 0,250 мг (2,4 мас.%).

Колонка: Asahipack GF310 HQ + Asahipak GF-1B (производитель Asahi Kasei Corporation)

Температура в колонке: 40°С

Подвижная фаза: 100 мМ буферный раствор фосфорной кислоты (рН 7,0)

Скорость потока: 0,5 мл/мин

Детектор: дифференциальный рефрактометр (или УФ детектор). Вводимое количество: 50 мкл

Пример 3

Продукт конденсации N-ацетилированного соединения сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты и доксорубицина (50 мг), полученный в примере получения 6, прецизионно взвешивают, и растворяют в 25 мл 4% раствора SDS:ацетонитрил (1:1). Полученный раствор анализируют с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии в следующих условиях, и оказывается, что содержание выделенного гидрохлорида доксорубицина составляет 1,29 мас.%, а содержание примесей, полученных из доксорубицина, составляет 0,15 мас.% (выражено в единицах эквивалента гидрохлорида доксорубицина на основании измерений поглощения света).

Колонка: Capsule pack C18UG80 5 мкм (производство Shiseido Co., Ltd.)

Внутренний диаметр: 4,6 мм х 150 мм. Температура в колонке: 40°С Подвижная фаза: (А) 0,2% фосфорная кислота, 0,15% SDS/H20: CH3CN =7:3

(В) 0,2% фосфорная кислота, 0,15% SDS/H2O: CHaCN =3:7 Градиент: В% (мин); 25 (0), 25 (13), 100 (30), 100 (40)

Скорость потока: 1,0 мл/мин Детектирование: УФ (254 нм) Вводимое количество: 20 мкл

Пример 4

Продукт конденсации N-ацетилированного соединения сополимера полиэтиленгликоля, содержащего на одном конце метоксигруппу - полиаспарагиновой кислоты и доксорубицина (30 мг), полученный в примере получения 6, прецизионно взвешивают и растворяют в 1 мл диметилформамида. Полученный раствор анализируют с помощью газовой хроматографии в следующих условиях. Количество перенесенных и связанных производных дициклогексилмочевины не превышает 0,08% (не более пределов определения).

Колонка: ТС-1 (производство GL Science Co., Ltd.), 30 мм х 0,25 мм внутренний диаметр, толщина пленки 0,25 мкм. Подвижная фаза: гелий 0,8 мл/мин

Температура в колонке: 70°С, 3°С/мин, 88°С, 15°С/мин, 180°С (5 мин)

Температура на входе: 290°С. Детектор: FID (290°C). Вводимое количество: расщепление (20:1), 1 мкл

ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение обеспечило возможность получения блок-сополимера высокой степени чистоты, из которого были удалены полиэтиленгликоли и поли(кислые аминокислоты), содержащиеся в блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) в качестве примесей, для получения полимерного носителя, который получают в результате конденсирования сополимера и антрациклинового противоракового агента и который можно использовать для медицинских целей в качестве носителя для лекарств и генов, а также для получения полимерного фармацевтического препарата, который содержит антрациклиновый противораковый агент во внутреннем ядре мицелл, образованных полимерным носителем.

Очевидно, что примеси, которые содержатся в блок-сополимере и которые удаляют, используя способ настоящего изобретения, не оказывают влияния на образование мицелл и т.п., и считают, что полимерный носитель, из которого примеси были удалены, обладает улучшенными характеристиками. Кроме того, полимерные фармацевтические препараты, полученные при использовании такого полимерного носителя высокой степени чистоты, позволяют получать фармацевтические препараты высокой степени чистоты, которые используют в клинической медицине.

Кроме того, настоящее изобретение делает также возможным определять количества полиэтиленгликолей и поли(кислых аминокислот), содержащих карбоновые кислоты в своих боковых цепях, которые являются примесями в вышеуказанных блок-сополимерах, и соответственно, предоставляют информацию, которая полезна для усовершенствования способа получения блок-сополимера, планирования стандартов его получения и управления процессами его получения.

1. Блок-сополимер полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) или его соль, полученный способом, включающим очистку полиэтиленгликоля с помощью ионообменной смолы с получением блок-сополимера очищенного полиэтиленгликоля и поли(кислой аминокислоты), и после удаления защитной группы, при необходимости, осуществляют процесс очистки, используя разделительную/адсорбционную смолу, где примеси, содержащие полиэтиленгликоль и поли(кислые аминокислоты), содержатся в количестве, не превышающем 10 мас.%.

2. Блок-сополимер или его соль по п.1, где поли(кислая аминокислота) является полиаспарагиновой кислотой.

3. Блок-сополимер или его соль по п.1, где блок-сополимер является сополимером, представленным формулой (1)

где R1 представляет атом водорода или низшую алкильную группу, R2 представляет алкиленовую группу, R3 представляет метиленовую группу или этиленовую группу и R4 представляет атом водорода или защитную группу аминогруппы, n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300 и х является целым числом от 0 до 300, однако х не может быть больше, чем m.

4. Блок-сополимер или его соль по п.3, где R1 представляет алкильную группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, R2 представляет алкиленовую группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, R3 представляет метиленовую группу или этиленовую группу и R4 представляет атом водорода или ацильную группу, содержащую от 1 до 5 атомов углерода, n является целым числом от 5 до 1000, m является целым числом от 2 до 300 и х является целым числом от 0 до 300, однако х не может быть больше, чем m в формуле (1).

5. Блок-сополимер или его соль по п.3, где R1 представляет метильную группу, R2 представляет триметиленовую группу, R3 представляет метиленовую группу и R4 представляет ацетильную группу, n является целым числом от 20 до 500, m является целым числом от 10 до 100 и х является целым числом от 0 до 100, однако х не может быть больше, чем m в формуле (1).

6. Полимерный носитель, где участок поли(кислой аминокислоты) блок-сополимера по любому из пп.1-5 конденсируют с остатком антрациклинового противоракового агента.

7. Полимерный носитель по п.6, где конденсация участка поли(кислой аминокислоты) и остатка антрациклинового противоракового агента представляет собой конденсацию карбоновой кислоты боковой цепи участка поли(кислой аминокислоты) и остатка антрациклинового противоракового агента.

8. Полимерный носитель по п.6 или 7, где остаток антрациклинового противоракового агента является остатком доксорубицина.

9. Полимерный носитель по п.6 или 7, где остаток антрациклинового противоракового агента в участке поли(кислой аминокислоте) характеризуется степенью связывания от 30 до 55%.

10. Способ получения полимерного носителя по любому из пп.6-9, где после разделения продукта конденсации блок-сополимера, раскрытого в любом из пп.1-5, и вспомогательного агента реакции, в качестве которого используют N-гидроксисоединение, продукт конденсации взаимодействует с антрациклиновым противораковым агентом.

11. Способ получения полимерного носителя по п.10, где антрациклиновый противораковый агент является доксорубицином или его солью.

12. Полимерный фармацевтический препарат, содержащий комплекс блок-сополимер - лекарство, в котором антрациклиновый противораковый агент содержится во внутреннем ядре мицеллы, образованной полимерным носителем по любому из пп.6-9.

13. Полимерный фармацевтический препарат по п.12, где антрациклиновый противораковый агент является доксорубицином или его солью.

14. Полимерный фармацевтический препарат по п.12 или 13, где комплекс блок-сополимер - лекарство находится в форме высушенного вымораживанием вещества.

15. Способ количественного определения содержания примесей, состоящих из полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты), содержащихся в блок-сополимере полиэтиленгликолей и поли(кислой аминокислоты) по п.1, включающий стадии:

растворения блок-сополимера в растворителе;

обработки раствора смолой и

обработки обработанного раствора с помощью высокоскоростной жидкостной хроматографии с использованием колонки для гель-проникающей хроматографии.

16. Способ количественного определения по п.15, в котором растворителем является вода, которая может содержать органический растворитель, который смешан с водой, смола является ионообменной смолой и примесями являются полиэтиленгликоли.

17. Способ количественного определения по п.15, в котором растворителем является вода, которая может содержать органический растворитель, который смешан с водой, смола является разделительной/адсорбционной смолой, которая адсорбирует соединение, содержащее простую эфирную связь, и примесями являются поли(кислые аминокислоты).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к термопластичному полимеру, включающему блок термопластичного полимера, и, по меньшей мере, один блок полиалкиленоксида. .

Изобретение относится к получению блок-сополимеров, которые можно использовать для формирования волокон из расплава. .

Изобретение относится к составу для изготовления формованных изделий, в частности волокон. .
Изобретение относится к области фармацевтики и касается средства, используемого для лечения ревматоидных артрозов, остеоартрозов. .

Изобретение относится к области молекулярной токсикологии и экстракорпоральной терапии. .

Изобретение относится к биотехнологии и медицине. .

Изобретение относится к фармацевтике, в частности к иммобилизованной форме цефазолина. .

Изобретение относится к области медицины и касается конъюгатов, состоящих из транспортируемой через биологические мембраны молекулы, представляющей собой биополимер, пептид-нуклеиновую кислоту или полиамид, и арильного остатка, используемых для лечения заболеваний, обусловленных сверхпродуцированием определенных генов, способа их получения, способа транспорта молекулы через биологическую мембрану, лекарственного средства, способа получения лекарственного средства, диагностического средства и тест-набора на основе указанного конъюгата.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фармацевтическим композициям для ингибирования метастазов или предотвращения рецидива злокачественной опухоли после местной терапии, содержащим в качестве активного ингредиента производное полисахарида, включающее полисахарид с карбоксильной группой, связанной с обладающим противоопухолевой активностью активным веществом через аминокислоту, или пептид, состоящий из от 2 до 8 аминокислот, которые являются одинаковыми или различными, или его соль, где указанным активным веществом, обладающим противоопухолевой активностью, является производное камптотецина формулы (I) по п.1 или соединение формулы (II) по п.1, при этом местная терапия представляет собой хирургию, лучевую терапию, термотерапию, криотерапию или лазер-сжигающую терапию.
Изобретение относится к области иммунологии. .

Изобретение относится к химии высокомолекулярных соединений, более точно к полимерным водорастворимым производным тритерпеноидов общей формулы I [фиг.I], где в качестве полимера-носителя берут водорастворимые сополимеры N-винилпирролидона с алкиловыми эфирами ,-(метил)акриловых кислот и их четвертичными аммониевыми солями общей формулы II [фиг.II], при этом А - остаток тритерпеноида из ряда, содержащего бетулиновую {1}, бетулоновую {2}, глицирретовую {3}, глицирризиновую {4}, урсоловую {5}, урсоновую {6} [фиг.III], олеаноловую {7}, олеаноновую {8}, меристотроповую {9}, дикетомеристотроповую {10}, мацедониковую {11}, дикетомацедониковую {12}, эхиноцистовую {13} кислоты [фиг.III] или другой карбоксилсодержащий тритерпеноид или смесь карбоксилсодержащих тритерпеноидов; при этом - R 1-Н, СН3; R2-Н, СН3; R 3-СН3, С2Н5; R 4 - алкил из ряда С6Н13-С16 Н33; Hal-J, Br или Сl; k=65-95 мол.%; l=0,1-34 мол.%, m=0,1-33,9 мол.%, n=0,5-5,4 мол.%; молекулярная масса (ММ)=(7-100).10 3D.

Изобретение относится к композиции амфотерицина В с низкой токсичностью. .

Изобретение относится к блок-сополимеру полиэтиленгликолей и поли или его соли

Наверх