Вакцина против колибактериоза нутрий

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Вакцина в качестве антигена содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, полученной путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистой культуры возбудителя. Выращивание чистой культуры проводят в мясопептонном бульоне с глюкозой в титре 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³. Затем вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli в мясопептонном бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³ 83,0-85,5, глюкоза 1,0-2,0, формалин 1,0-2,0, гидроокись алюминия остальное. Вакцина безвредна, высокоиммуногенна, стабильна при хранении. 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.

Известна вакцина против эшерихиоза животных (патент РФ на изобретение №2043771, 25.02.93, МКИ А 61 К 39/125, 39/135). Вакцина включает различные антигены эшерихий: соматические - 078, 0141, белковые адгезивные - К88, К99, 987Р, F41, капсульные полисахаридные - К80, К87, ТЛ, ТС - анатоксины. Авторы считают, что компоненты вакцины обеспечивают в крови иммунизированных животных синтез специфических антител, ингибирующих основные процессы развития колиинфекции - колонизацию возбудителя в кишечнике животных и нейтрализацию эндо- и энтеротоксинов. Для профилактики эшерихиоза новорожденных вакцину вводят беременным животным двукратно с интервалом 12-14 дней за 1,5-2 месяца до родов, а также поросятам и ягнятам перед отъемом. Однако технология такой вакцины очень сложна. Необходимо выращивать отдельные штаммы эшерихий, выделять из них нужные компоненты, обрабатывать их, затем смешивать в определенном соотношении. Для нутрий эта вакцина не применяется.

Известна вакцина против эшерихиоза телят (патент РФ на изобретение №2070819, 20.04.93, МКИ А 61 К 39/125, 39/135). Данная вакцина против эшерихиоза телят предусматривает культивирование токсигенных штаммов Escherichia coli на среде Хоттингера в течение 5-7 дней, микробную массу отделяют от токсина на фильтрах со стерилизующими пластинами, затем токсин инактивируют добавлением формалина до 0,3-0,4% при температуре 37°С в течение 10-12 дней, полученный анатоксин осаждают 10%-ным раствором алюмокалиевых квасцов из расчета 1% на весь объем, затем после отстаивания в течение 2-3 дней надосадочную жидкость удаляют, полученный комплексный анатоксин смешивают в равных пропорциях с антигеном, полученным из штаммов Escherichia coli после выращивания суточных бульонных культур при 37°С в течение двух суток и смыва микробной массы физраствором, содержащим 0,3-0,4% формалина с доведением до концентрации 50-60 млрд. микробных клеток в 1 мл и добавлением к смыву перекиси водорода до содержания ее до 0,15-0,25%, причем смесь анатоксина и антигена разбавляют стерильной дистиллированной водой до концентрации 5 млрд. микробных клеток в 1 мл.

Эта вакцина против эшерихиоза телят применяется только для профилактики эшерихиоза у телят, сырье получают путем культивирования токсигенных штаммов эшерихий, длительный период инактивирования антигенов может снизить иммуногенную активность препарата.

Использование алюмокалиевых квасцов, перекиси водорода в вакцине может вызывать у привитых животных поствакцинальные осложнения. Многочисленные технологические приемы, используемые при получении вакцины, усложняют технологию изготовления и стоимость конечной продукции.

Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности повышение специфичности и иммуногенности вакцины против колибактериоза нутрий, стабильной при хранении, путем введения новой культуры возбудителя и эффективных компонентов.

Решение задачи достигается тем, что вакцина против колибактериоза нутрий, включающая инактивированный антиген, адъювант, в качестве антигена содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, полученной путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистой культуры возбудителя и выращивания, которое проводят в мясопептонном бульоне с глюкозой в титре 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³, вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli в мясопептонном
бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см3	83,0-85,5
глюкоза	1,0-2,0
формалин	1,0-2,0
гидроокись алюминия	остальное

Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистой культуры возбудителя Escherichia coli и выращивание его в мясопептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины. Добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 5-6 млрд. в 1 см³. Инактивирование баксырья формалином в 0,5-0,6%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов при периодическом перемешивании позволяет подавить патогенность возбудителя и сохранить иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Использование 3%-ного раствора гидроокиси алюминия в количестве 15% к объему и тщательное смешивание не вызывает у привитых нутрий поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после однократного внутримышечного или подкожного введения продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения).

По данным научно-технической и патентной литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.

Что касается критерия "промышленная применимость", то компоненты, входящие в состав вакцины, известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин (инструкция по изготовлению и контролю формолвакцины поливалентной гидроокисьалюминиевой против колибактериоза (эшерихиоза) поросят, телят и ягнят, утвержденная ГУВ МСХ СССР 26.04.1984 г.; инструкция по изготовлению и контролю вакцины против брадзота, инфекционной энтеротоксемии, злокачественного отека овец и дизентерии ягнят, поливалентная концентрированная гидроокисьалюминиевая, утвержденная Главным управлением ветеринарии с государственной ветеринарной инспекцией 10.10.1991 г.). Предложенная вакцина против колибактериоза нутрий проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.

Вакцина против колибактериоза нутрий содержит инактивированную формалином чистую культуру возбудителя Escherichia coli, адсорбированную на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина против колибактериоза нутрий предназначена для профилактики инфекционного заболевания нутрий. Она вызывает образование специфического иммунитета против колибактериоза нутрий. Вакцина безвредна и ареактогенна. Иммунитет у нутрий, привитых вакциной против колибактериоза, формируется через 12-15 суток после вакцинации и сохраняется не менее 9 месяцев. Вакцину применяют в благополучных, неблагополучных и угрожаемых по колибактериозу нутрий хозяйствах. В благополучных и угрожаемых по колибактериозу хозяйствах вакцину вводят однократно внутримышечно в область бедра молодняку с 2-месячного возраста по 1,0 см³, а взрослым животным по 1,5 см³. В неблагополучных хозяйствах вакцину вводят внутримышечно в область бедра с 2-месячного возраста двукратно с интервалом 7-10 дней: первая вакцинация в дозе 1,0 см³, вторая - в дозе 1,5 см³. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.

К факторам, обусловливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат. Приведено пять примеров, содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 см³ вакцины.

Пример 1.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Escherichia coli, заражают мясопептонный бульон, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию клеток чистой культуры 82,0 с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³ и содержанием глюкозы 0,9, инактивируют внесением формалина 0,9, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, выделенной из пораженных органов от павших нутрий из местного
эпизоотического очага при колибактериозе в мясопептонном бульоне с титром 5-6 млрд. в 1 см3	82,0
глюкоза	0,9
формалин	0,9
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против колибакериоза нутрий обладает незначительной эффективностью, может у отдельных животных вызывать слабое раздражение на месте введения.

Пример 2.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Escherichia coli, заражают мясопептонный бульон, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток чистой культуры 83,0 с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³ и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, выделенной из местного эпизоотического очага в мясопептонном
бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см3	83,0
глюкоза	1,0
формалин	1,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против колибактериоза нутрий обладает хорошей иммуногенной активностью, не вызывает у животных поствакцинальных осложнений.

Пример 3.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Escherichia coli, заражают мясопептонный бульон, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток чистой культуры 84,5 с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³ и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, выделенной из местного эпизоотического очага в мясопептонном
бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см3	84,5
глюкоза	1,0
формалин	1,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против колибактериоза нутрий обладает незначительной эффективностью, может у отдельных животных вызывать слабое раздражение на месте введения.

Пример 4.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Escherichia coli, заражают мясопептонный бульон, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток чистой культуры 85,5 с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³ и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 2,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, выделенной из местного эпизоотического очага в мясопептонном
бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см3	85,5
глюкоза	2,0
формалин	2,0
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против колибакериоза нутрий обладает выраженной эффективностью, не вызывает у животных воспалительных процессов на месте введения (таблица).

Пример 5.

Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготавливают суспензию из патологического материала, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистую культуру возбудителя Escherichia coli, заражают мясопептонный бульон, культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 86,5 с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³ и содержанием глюкозы 2,5, инактивируют внесением формалина 2,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину при следующем соотношении компонентов, мас.%:

суспензия клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, выделенной из местного эпизоотического очага в мясопептонном
бульоне с титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см3	86,5
глюкоза	2,5
формалин	2,5
гидроокись алюминия	остальное

При данном соотношении компонентов вакцина против колибактериоза нутрий обладает слабой иммуногенной активностью, не вызывает у животных поствакцинальных осложнений.

Таблица Сравнительная оценка эффективности вакцины
Вакцина	Доза вакцины, см3	Метод введения	Иммунобиологические свойства
Кол-во нутрий в опыте (гол.)	Наличие поствакцинальных осложнений	Длительность иммунитета	Защита, %
предлагаемая		Внутри- мышечно	1000	нет	9 мес.	100
	1,0
по прототипу		Внутри-	500	Угнетение,
	Двукратно: 1-ая доза-1,0; 2-ая доза -2,0	мышечно		хромота, отказ от корма в течение 1 -2 суток	6 мес.	60-70

Таким образом, предлагаемая вакцина против колибактериоза нутрий более специфична и эффективнее по сравнению с прототипом.

Вакцина против колибактериоза нутрий, содержащая инактивированный антиген, адъювант, отличающаяся тем, что в качестве антигена содержит суспензию клеток чистой культуры возбудителя Escherichia coli, полученной путем отбора пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистой культуры возбудителя и выращивания, которое проводят в мясопептонном бульоне с глюкозой в титре 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см³, затем вносят формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия клеток чистой культуры возбудителя
Escherichia coli в мясопептонном бульоне с
титром 5-6 млрд. микробных клеток в 1 см3	83,0-85,5
Глюкоза	1,0-2,0
Формалин	1,0-2,0
Гидроокись алюминия	Остальное