Способ оценки антибактериальной активности крови пациента in vitro при лечении инфекционного эндокардита

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии. Способ заключается в следующем: в газон с культурой St. aureus, E. Coli вносят плазму крови, содержащую антибиотик, в количестве 0,03 мл, полученную спустя 2 часа после введения больному очередной дозы антибиотика. Затем определяют чувствительность к антибиотикам возбудителей инфекционного процесса по зоне задержки роста. Изобретение обеспечивает сокращение времени исследования.

 

Изобретение относится к медицине, а именно микробиологии и химиотерапии.

В клинической практике для проведения качественной антимикробной химиотерапии при лечении инфекционного эндокардита используется способ определения чувствительности идентифицированных возбудителей к антибиотикам in vitro методом диффузии в агар с помощью дисков (Методические указания по определению чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом диффузии в агар с использованием дисков Минздрав. СССР (1983); Решедько Г.К., Стецюк О.У. Особенности определения чувствительности микроорганизмов диско-диффузионным методом \\ Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия Том 3, № 4, 2001). Как известно, окончательные результаты посевов крови становятся известны не ранее 11 суток. С учетом этого превентивную антибиотикотерапию начинают с момента поступления больного с инфекционным процессом, не дожидаясь ответа на чувствительность. В то же время эффективность превентивной антибиотикотерапии оценивается лишь по косвенным клиническим признакам.

Известен способ определения чувствительности гонококков к антибиотику, включающий выделение аутокультуры гонококков, инкубирование на плотной питательной среде в присутствии сыворотки крови больного, содержащей антибиотик, и определение чувствительности по наличию или отсутствию роста (А.С. № 1565892, 1990 г.). Данный способ достаточно трудоемок.

Прототипом является способ определения чувствительности микроорганизмов, в частности стрептококков, к антибиотикам, включающий выделение их из крови больного инфекционным эндокардитом, окрашивание кристалл виолетом, определение их оптической плотности для количественного определения чувствительности к антибиотикам // Presteri E., Grisold A.J., Reichmann S., Hirschi A.M., Georgopoulos A., Grsninger W. "Viridans streptococci in endocarditis and neutropenic sepsis: Biofilm formation and effects of antibiotics". J Antimicrob, Chemother, 2005 Jan; 55 (1), 45-50. Однако данная методика достаточно трудоемка, так как для определения чувствительности проводят разведение, культивирование и окрашивание микроорганизмов, определение оптической плотности.

Технический результат - упрощение методики.

Способ заключается в следующем. После назначения антибиотикотерапии через 2 часа после введения очередной дозы антибиотиков проводят забор крови из вены в количестве 2 мл. Центрифугированием получают плазму. Одновременно готовят газоны из двух культур - высевают наиболее часто встречающиеся штаммы грамположительной и грамотрицательной флоры из числа возбудителей инфекции крови - St aureus и E.coli. На газон наносят плазму в количестве 0,03 мл. Газон выдерживают в термостате в течение суток. По зоне задержки роста микроорганизмов определяют чувствительность к исследуемым микроорганизмам и оценивают эффективность проводимой антибиотикотерапии. Исследование проводят однократно.

Данная методика использована у 11 пациентов. По результатам исследования больные отнесены в две группы. У больных первой группы (n=6) на фоне проводимой антибиотикотерапии зона задержки роста (ЗЗР) составила более 1,2±0,2 см. В данной группе отмечен положительный эффект от проводимой терапии. Наступила нормализация температуры тела, снижение лейкоцитоза и СОЭ в динамике.

У больных второй группы (n=5), у которых ЗЗР не превышала 0,6±0,08 см, проводимая антибиотикотерапия клинически оказалась недостаточно эффективной. Сохранялось повышение температуры, количества лейкоцитов и показателя СОЭ. На основании результатов оценки антибактериальной активности крови пациента in vitro своевременно произведена ранняя смена антибиотиков, что позволило повысить эффективность антибиотикотерапии.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной Ш., 46 лет (и/б № 7643), поступил с лихорадкой, с повышением температуры тела до 39,9 градусов по Цельсию, потливостью, общей слабостью. В анамнезе операция (2002 год) протезирования митрального и трикуспидального клапанов, имплантации двухкамерной ЭКС с эндокардиальными электродами. На ЭхоКГ обнаружены две вегетации на аортальном клапане, рыхлые, размерами до 7 мм. Функции протезов митрального и трикуспидального клапанов не нарушены. Больному начата антибиотикотерапия: ципринол по 400 мг×3 раза в сутки, внутривенно, гентамицин по 80 мг×3 раза внутримышечно. На вторые сутки после начала лечения антибиотиками через 2 часа после введения очередной дозы антибиотиков проведен забор крови из вены в количестве 2 мл. Центрифугированием получили плазму. Плазму в количестве 0,03 мл наносили на газон с исследуемой культурой St aureus и E.coli. При оценке результатов на вторые сутки зона задержки роста микроорганизмов с культурой St aureus составила 1,5 см, с E.coli. 0,9 см. На фоне назначенной антибиотикотерапии на второй день отмечено снижение температурной реакции до субфебрильных значений, снижение лейкоцитоза с 13,2×10⁹ до 10,1×10⁹ и СОЭ с 49 до 42 мм/час. Через 5 дней на контрольной ЭхоКГ обнаружено уменьшение размеров вегетации на аортальном клапане до 4-5 мм. Выраженная ЗЗР на фоне проводимой антибиотикотерапии свидетельствовала о высокой бактерицидности плазмы больного, соответственно об эффективности проводимой антибиотикотерапии, что в последующем получило клиническое подтверждение. Больной выписан с выздоровлением.

Пример 2. Больная К., 39 лет (и/б 6267). После операции протезирования митрального клапана на седьмые сутки отмечены эпизоды повышения температуры тела, сопровождающиеся ознобами, потливостью на фоне проводимой терапии двумя антибиотиками (максипим, гентамицин). На восьмые сутки проведена смена антибиотиков. На 12 сутки при ЭхоКГ обнаружены вегетации на манжете протеза митрального клапана. В тот же день через 2 часа после введения очередной дозы антибиотиков проведен забор крови из вены в количестве 2 мл. Центрифугированием получена плазма. Плазму в количестве 0,03 мл наносили на газоны с исследуемыми культурами St aureus и E.coli. При оценке результатов на вторые сутки зона задержки роста микроорганизмов с культурой St aureus составила 0,9 см, с E.coli. 0,5 см. На фоне проводимой антибиотикотерапии сохранялось повышение температуры до субфебрильных значений, лейкоцитоза (14,4×10⁹ ) и СОЭ на уровне 59 мм/час. Через 7 дней на контрольной ЭхоКГ отмечена тенденция к росту вегетации. Слабо выраженная ЗЗР на фоне проводимой антибиотикотерапии подтвердила недостаточную бактерицидность плазмы больного, соответственно о малой эффективности проводимой антибиотикотерапии. Проведена повторная смена антибиотиков (лендацин, ципринол). На вторые сутки после смены антибиотиков проведено исследование бактерицидных свойств плазмы крови пациента с культурами St aureus и E.coli. При оценке результатов на вторые сутки зона задержки роста микроорганизмов с культурой St aureus составила 1,3 см, с E.coli. 0,8 см. На фоне назначенной антибиотикотерапии на второй день отмечено снижение температурной реакции до субфебрильных значений, снижение лейкоцитоза и СОЭ. Через 7 дней на контрольной ЭхоКГ обнаружено уменьшение и уплотнение вегетации на митральном клапане. Выраженная ЗЗР на фоне проводимой антибиотикотерапии свидетельствовала о высокой бактерицидности плазмы больной, соответственно об эффективности проводимой антибиотикотерапии, что в последующем получило клиническое подтверждение. Больная выписана с эффективным подавлением инфекционного процесса на манжете протеза клапана. Контрольное исследование больной через месяц после выписки показало отсутствие признаков активации инфекционного процесса. Данных за нарушение функции протеза не выявлено.

Способ определения чувствительности к антибиотикам in vitro возбудителей инфекционного процесса при лечении инфекционного эндокардита, отличающийся тем, что в газон с культурой St. aureus, E. Coli вносят плазму крови больного, содержащую антибиотик, в количестве 0,03 мл, полученную спустя 2 ч после введения больному очередной дозы антибиотика, и по зоне задержки роста судят о чувствительности микроорганизма к антибиотикам.