Производные 4-(фенил-пиперазинил-метил)-бензамида, способ их получения и фармацевтическая композиция на их основе

Настоящее изобретение относится к производным 4-(фенил-пиперазинил-метил)-бензамида общей формулы 1 или их соли, или отдельные энантиомеры и их соли,

в которой R¹ - фенил, пиридинил, тиенил, фуранил, имидазолил, возможно замещенные, R² - этил и изопропил, R³ - водород, фтор, R⁴ - NH₂, NHSO₂R⁵, R⁵ С₁-С₆-алкил. Соединения являются полезными в терапии и, в частности, для лечения боли. Описаны также способы получения соединений формулы 1 и фармацевтическая композиция на их основе. 5 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к новым соединениям, к способу их получения, их применению и фармацевтическим композициям, содержащим эти новые соединения. Эти новые соединения являются полезными в терапии и, в частности, для лечения боли, тревоги и функциональных желудочно-кишечных расстройств.

Предшествующий уровень техники

δ-Рецептор идентифицирован как рецептор, играющий роль во многих функциях организма, таких как сердечно-сосудистая и лимфатическая и болепроводящая системы. Следовательно, лиганды для δ-рецептора могут найти потенциальное применение в качестве анальгетиков и/или в качестве гипотензивных агентов. Показано также, что лиганды для δ-рецептора обладают иммуномодулирующей активностью.

Идентификация по меньшей мере трех различных групп опиоидных рецепторов (μ, δ и к) в настоящее время четко установлена, и очевидно, что все три находятся как в центральной, так и в периферической нервных системах многих видов, включая человека. Анальгезию наблюдали в различных животных моделях при активации одного или более чем одного из этих рецепторов.

За редким исключением, имеющиеся в настоящее время селективные δ-опиоидные лиганды являются пептидными по природе и не подходят для введения посредством системных путей. Одним из примеров непептидного δ-агониста является SNC80 (Bilsky E.J. et al., Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 273 (1) pp.359-366 (1995)). Однако все еще существует необходимость в селективных δ-агонистах, обладающих не только повышенной селективностью, но также улучшенным профилем побочных эффектов.

Таким образом, задачей, лежащей в основе настоящего изобретения, являлся поиск новых анальгетиков, обладающих улучшенными болеутоляющими эффектами, а также с улучшенным профилем побочных эффектов по сравнению с современными μ-агонистами, а также обладающих улучшенной системной эффективностью.

Анальгетики, которые идентифицированы и имеются в уровне техники, имеют много недостатков, заключающихся в том, что они обладают неудовлетворительной фармакокинетикой и не оказывают болеутоляющего действия при введении посредством системных путей. Также документально подтверждено, что предпочтительные соединения δ-агонисты, описанные в данном уровне техники, проявляют значительные судорожные эффекты при системном введении.

Авторами изобретения в настоящее время обнаружены некоторые соединения, которые демонстрируют неожиданно улучшенные свойства, среди прочего улучшенные δ-агонистическую эффективность, эффективность in vivo, фармакокинетику, биодоступность, стабильность in vitro и/или более низкую токсичность.

Краткое изложение сущности изобретения

Новые соединения по настоящему изобретению определены формулой I

где

R¹ выбран из любого из

(1) фенила

(2) пиридинила

(3) тиенила

(4) фуранила

(5) имидазолила

(6) триазолила

(7) пирролила

(8) тиазолила

(9) пиридил-N-оксида

где каждое гетероароматическое кольцо R¹ может быть возможно и независимо дополнительно замещено 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из прямого и разветвленного C₁-С₆алкила, галогенированного C₁-С₆алкила, NO₂, CF₃, C₁-С₆алкокси, хлоро, фторо, бромо и йодо,

R² независимо выбран из этила и изопропила;

R³ независимо выбран из водорода и фторо;

R⁴ независимо выбран из -ОН, -NH₂ и -NHSO₂R⁵; и

R⁵ независимо выбран из водорода, -CF₃ и C₁-С₆алкила,

при условии, что, когда R² представляет собой этил, и R³ представляет собой водород, тогда R⁴ не может представлять собой -ОН.

Замещения на гетероароматическом кольце могут иметь место в любом положении на указанных кольцевых системах.

Когда фенильное кольцо R¹ и гетероароматическое(ие) кольцо(а) R¹ замещены, предпочтительные заместители выбраны из любого из: CF₃, метила, йодо, бромо, фторо и хлоро, из которых наиболее предпочтителен метил.

Еще одним воплощением настоящего изобретения, таким образом, является соединение формулы I, где R¹ является таким, как определено выше, и каждое фенильное кольцо R¹ и гетероароматическое кольцо R¹ может быть независимо дополнительно замещено метильной группой.

Еще одним воплощением настоящего изобретения является соединение формулы I, где R¹ представляет собой фенил, пирролил, фуранил, тиенил или имидазолил: R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород или фторо; R⁴ представляет собой -NH₂ или -NHSO₂R⁵; и R⁵ представляет собой C₁-С₆алкил, возможно с 1 или 2 из предпочтительных заместителей на фенильном кольце R¹ или на гетероароматическом кольце R¹.

Дополнительным воплощением настоящего изобретения является соединение формулы I, где R¹ представляет собой фенил, пирролил, фуранил, тиенил или имидазолил; R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород; R⁴ представляет собой -NHSO₂R⁵; и R⁵ представляет собой С₁-С₆алкил, возможно с 1 или 2 из предпочтительных заместителей на фенильном кольце R¹ или на гетероароматическом кольце R¹.

Другими воплощениями настоящего изобретения являются соединения формулы I, где a) R¹ представляет собой фенил, пирролил или фуранил; R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород или фторо; и R⁴ представляет собой -NH₂; б) R¹ представляет собой тиенил или имидазолил: R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород или фторо, и R⁴ представляет собой -NH₂; в) R¹ представляет собой фенил, пирролил, фуранил, тиенил или имидазолил; R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород или фторо; R⁴ представляет собой -NHSO₂R⁵; и R⁵ представляет собой С₁-С₆алкил; и г) R¹ представляет собой фенил, пирролил, фуранил, тиенил или имидазолил; R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород или фторо; R⁴ представляет собой -NHSO₂R⁵; и R⁵ представляет собой C₁-С₆алкил, где все воплощения а)-г) могут быть возможно замещены 1 или 2 из предпочтительных заместителей на фенильном кольце R¹ или на гетероароматическом кольце R¹.

В объем настоящего изобретения также входят отдельные энантиомеры и соли соединений формулы I, включая соли энантиомеров. Также в объем настоящего изобретения входят смеси отдельных энантиомеров, такие как рацемическая смесь, а также соли смесей отдельных энантиомеров.

Разделение рацемических смесей на отдельные энантиомеры хорошо известно в данной области техники и может быть осуществлено, например, путем разделения на подходящей хиральной хроматографической колонке.

Получение солей хорошо известно в данной области техники и может быть осуществлено, например, путем смешивания соединения формулы I в подходящем растворителе с желаемой протонной кислотой и выделения способами, стандартными в данной области техники. Соли соединений формулы I включают в себя фармацевтически приемлемые соли, а также фармацевтически неприемлемые соли.

Новые соединения по настоящему изобретению являются полезными в терапии, особенно для лечения различных болевых состояний, таких как хроническая боль, невропатическая боль, острая боль, раковая боль, боль, вызванная ревматоидным артритом, мигрень, висцеральная боль и так далее. Этот перечень, однако, не следует интерпретировать как исчерпывающий.

Соединения по настоящему изобретению являются полезными в качестве иммуномодуляторов, особенно при аутоиммунных заболеваниях, таких как артрит, для кожных трансплантатов, трансплантатов органов и подобных хирургических нужд, при коллагенозах, различных аллергиях, для применения в качестве противоопухолевых агентов и противовирусных агентов.

Соединения по настоящему изобретению являются полезными при болезненных состояниях, при которых имеется дегенерация или дисфункция опиоидных рецепторов, либо дегенерация или дисфункция опиоидных рецепторов вовлечена в процесс. В диагностические методики и в применения, связанные с визуализацией, такие как позитронная эмиссионная томография (ПЭТ), может быть также вовлечено использование меченых изотопами вариантов соединений по настоящему изобретению.

Соединения по настоящему изобретению являются полезными для лечения диареи, депрессии, тревоги и расстройств, связанных со стрессом, таких как расстройства, связанные с посттравматическим стрессом, паническое расстройство, генерализованное тревожное расстройство, социальная фобия и обсессивно-компульсивное расстройство; недержания мочи, различных психических заболеваний, кашля, отека легких, различных желудочно-кишечных расстройств, например запора, функциональных желудочно-кишечных расстройств, таких как синдром раздраженной кишки и функциональная диспепсия, болезни Паркинсона и других двигательных расстройств, травматического повреждения головного мозга, удара, кардиопротекции после инфаркта миокарда, повреждения спинного мозга и привыкания к чрезмерному употреблению лекарств, включая лечение злоупотребления алкоголем, никотином, опиоидами и другими лекарствами, а также для лечения расстройств симпатической нервной системы, например гипертензии.

Соединения по настоящему изобретению являются полезными в качестве анальгетического агента для применения во время общей анестезии и контролируемой коррекции анестезии. Комбинации агентов с различными свойствами часто применяют для достижения баланса эффектов, необходимого для поддержания состояния анестезии (например, амнезии, анальгезии, мышечной релаксации и седативного эффекта). В данную комбинацию включены ингаляционные анестетики, снотворные средства, анксиолитики, нейромышечные блокаторы и опиоиды.

В объем настоящего изобретения также входит применение любого из соединений формулы I, указанной выше, для производства лекарства для лечения любого из состояний, обсуждаемых выше.

Следующим аспектом настоящего изобретения является способ лечения субъекта, страдающего любым из состояний, обсуждаемых выше, при котором пациенту, нуждающемуся в таком лечении, вводят эффективное количество соединения формулы I, приведенной выше.

Способы получения

Соединения по настоящему изобретению можно получить, используя следующую общую методику.

Получение фенолов. Примеры 1-3

Соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -ОН, получают путем осуществления взаимодействия соединения общей формулы II

где R² и R³ являются такими, как определено в формуле I, a R⁴ представляет собой ОМе, с Вос-пиперазином в ацетонитриле в присутствии триэтиламина в стандартных условиях с последующим удалением защитной группы Вос в стандартных условиях с получением соединения формулы III

которое затем подвергают алкилированию в восстановительных условиях соединением формулы R¹-CHO с последующим расщеплением метилового эфира с использованием BBr₃ в дихлорметане с получением соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -ОН.

Получение анилинов. Примеры 4-6

Соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -NH₂, получают путем осуществления взаимодействия соединения общей формулы IV

где R² и R³ являются такими, как определено в формуле I, a R⁴ представляет собой NO₂, с Вос-пиперазином в ацетонитриле в присутствии триэтиламина в стандартных условиях с последующим удалением защитной группы Вос в стандартных условиях с получением соединения формулы V

которое затем подвергают алкилированию в восстановительных условиях соединением формулы R¹-CHO с последующим восстановлением нитрогруппы с использованием водорода и палладия на угле с получением соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -NH₂.

Получение метилсульфонанилидов. Примеры 7-8

Соединение формулы I, где R⁴ представляет собой -NHSO₂R⁵, получают путем осуществления взаимодействия соединения общей формулы VI

где R² и R³ являются такими, как определено в п.1, a R⁴ представляет собой NO₂, с Вос-пиперазином в ацетонитриле в присутствие триэтиламина в стандартных условиях с последующими восстановлением нитрогруппы путем гидрогенолиза с использованием палладия на угле в качестве катализатора, метансульфонилированием с использованием метансульфонилангидрида в дихлорметане в присутствии триэтиламина, а затем удалением защитной группы Вос в стандартных условиях с получением соединения формулы VII

которое затем подвергают алкилированию в восстановительных условиях соединением формулы R¹-CHO с последующим восстановлением нитрогруппы с использованием водорода и палладия на угле с получением соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -NHSO₂R⁵.

В объем настоящего изобретения также входят отдельные энантиомеры и соли соединений формулы I, включая соли энантиомеров. Соединения формулы I являются хиральными соединениями с диарилметилпиперазиновой группой в качестве хирального центра, смотри формулу I* ниже.

Следующим воплощением настоящего изобретения, таким образом, является (-)-энантиомер соединения формулы I, а также соль указанного соединения.

Еще одним воплощением настоящего изобретения, таким образом, является (+)-энантиомер соединения формулы I, а также соль указанного соединения.

ПРИМЕРЫ

Далее изобретение будет описано более подробно с помощью следующих Примеров, которые не следует рассматривать как ограничивающие изобретение.

Схема 1: Получение фторфенолов. Примеры 1-3

Промежуточное соединение 1: 4-[(4-Фтор-3-метоксифенил)(гидрокси)-метил]-N,N-диизопропил-бензамид

N,N-Диизопропил-4-йодбензамид (6,0 г, 18 ммоль) растворяли в ТГФ (200 мл) и охлаждали до -78°С в атмосфере азота. N-BuLi (14 мл, 1,3 М раствор в гексане, 18 ммоль) добавляли по каплям в течение 10 мин при температуре от -65°С до -78°С. Добавляли по каплям 4-фтор-3-метоксибензальдегид (2,8 г, 18 ммоль), растворенный в ТГФ (5 мл). Через 30 мин добавляли NH₄Cl (водн.). Остаток после концентрирования в вакууме, экстракции EtOAc/водой, высушивания (MgSO₄) и упаривания органической фазы очищали хроматографией на диоксиде кремния (0-75% EtOAc/гептан) с получением желаемого продукта (3,9 г, 60%). ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 1.0-1.6 (m, 12H), 2.65 (d, J=4 Гц, 1H), 3.4-3.9 (m, 2H), 3.80 (s, 3Н), 6.10 (d, J=4 Гц, 1H), 6.76 (m, 1H), 6.95 (m, 1H), 7.04 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 7.25, 7.40 (2d, J=7.5 Гц, 4Н).

Промежуточное соединение 2: 4-Г(4-Фтор-3-метоксифенил)(1-пиперазинил)метил]-N,N-диизопропил-бензамид.

Промежуточное соединение 1 (3,9 г, 11 ммоль) растворяли в безводном СН₂Cl₂ (50 мл) и обрабатывали SOBr₂ (0,88 мл, 11 ммоль) при температуре от 0 до 25°С в течение 30 мин. После нейтрализации КНСО₄ (водн.) и высушивания (К₂CO₄) органической фазы растворитель выпаривали в вакууме. Остаток и Et₃N (1,8 мл, 13 ммоль) растворяли в MeCN (50 мл) и перемешивали с Вос-пиперазином (2,1 г, 11 ммоль) при 25°С в течение 12 ч. После концентрирования в вакууме и хроматографии на диоксиде кремния (от 0 до 50% EtOAc в гептане) получили 4,6 г. 1,6 г обрабатывали ТФУ в СН₂Cl₂ (1:1), концентрировали в вакууме, экстрагировали СН₂Cl₂/K₂CO₄ (водн.), высушивали (K₂CO₄) и упаривали в вакууме с получением промежуточного соединения 2 (1,3 г, 81% от промежуточного соединения 1). МС (ЭР; электрораспыление) 428,21 (МН+).

Пример 1: 4-[1-(4-Бензил-пиперазин-1-ил)-1-(4-фтор-3-гидрокси-фенил)-метил]-N,N-диизопропил-бензамид

Промежуточное соединение 2 (0,41 г, 0,96 ммоль) и триэтиламин (0,20 мл, 1,4 ммоль) растворяли в MeCN (10 мл). Бензилбромид (0,14 мл, 1,1 ммоль) добавляли при перемешивании при 25°С. Через 12 ч этот раствор концентрировали и очищали хроматографией с обращенной фазой (LiChroprep RP-18, 10-80% MeCN в воде, 0,1% ТФУ). Получили 0,53 г свободного основания после экстракции СН₂Cl₂/K₂CO₄ (водн.), высушивания (K₂CO₄) и упаривания в вакууме. После обработки трибромидом бора (4 экв., 1 М раствор в СН₂Cl₂) в СН₂Cl₂ при -78°С, добавления воды, концентрирования в вакууме и хроматографии с обращенной фазой получили соединение Примера 1 в виде трифторацетата (0,35 г, 50%). МС (ЭР) 504.22 (МН+). ИК (NaCl) 3222, 1677, 1592, 1454, 1346, 1201, 1135 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.3 (m, 3Н), 2.9-3.8 (m, 7H), 4.33 (s, 2H), 4.75 (s, 1H), 6.60 (m, 1H), 6.83 (m, 1H), 6.94 (m, 1Н), 7.24 (d, J=8 Гц, 2Н), 7.47 (m, 7H). Аналитически вычислено для C₃₁H₃₈FN₃O₂×0,8С₄Н₂F₆O₄ С: 59,87, Н: 5,82, N: 6,12. Обнаружено: С: 60,06, Н: 5,83, N: 6,19.

Пример 2: 4-[1-(4-Фтор-3-гидрокси-фенил)-1-(4-тиофен-3-илметил-пиперазин-1-ил)-метил]-N,N-диизопропил-бензамид

Промежуточное соединение 2 (0,43 г, 1,0 ммоль) растворяли в МеОН (5 мл) с 3-тиофен-карбоксальдегидом (0,11 мл, 1,2 ммоль) и НОАс (57 мкл, 1,0 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч. Цианоборгидрид натрия (63 мг, 1,0 ммоль) добавляли порциями в течение 6 ч, и эту реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение дополнительных 12 ч, после чего подвергали обработке концентрированием в вакууме и экстракцией (СН₂Cl₂/K₂CO₄ (водн.)). После очистки хроматографией с обращенной фазой, как для Примера 1, получили 0,32 г (0,62 ммоль) в виде свободного основания. После обработки трибромидом бора, как для Примера 1, и хроматографии получили соединение Примера 2 (0,20 г, 26%) в виде трифторацетата. МС (ЭР) 510,17 (МН+). ИК (NaCl) 3281, 1674, 1606, 1454, 1346, 1200, 1135 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.30 (m, 2Н), 2.9-3.7 (m, 10H), 4.37 (s, 2H), 4.75 (s, 1Н), 6.60 (m, 1Н), 6.84 (m, 1Н), 6.94 (m, 1Н), 7.18 (m, 1H), 7.25, 7.48 (2d, J=8 Гц, 4Н), 7.55 (m, 1Н), 7.65 (m, 1Н). Аналитически вычислено для С₂₉Н₃₆FN₃O₂S×0,8С₄Н₂F₆O₄ С: 55,16, Н: 5,55, N: 5,99. Обнаружено: С: 55,12, Н: 5.39, N: 6.07.

Пример 3: 4-{1-(4-Фтор-3-гидрокси-фенил)-1-[4-(1Н-имидазол-2-илметил)-пиперазин-1-ил]-метил}-N,N-диизопропил-бензамид

Используя такую же методику, как для Примера 2, для взаимодействия с 2-имидазол-карбоксальдегидом (0,10 г, 1,1 ммоль) с последующей обработкой трибромидом бора (6 экв.) получили соединение Примера 3 (0,18 г, 25%) в виде трифторацетата. МС (ЭР) 494,23 (МН+). ИК (NaCl) 3123, 1673, 1592, 1454, 1350, 1201, 1135 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.7-3.8 (m, 10Н), 3.95 (s, 2Н), 5.20 (m, 1Н), 6.70 (m, 1Н), 6.94 (m, 1Н), 7.02 (m, 1Н), 7.32, 7.58 (2d, J=8.0 Гц, 4Н), 7.46 (s, 1Н). Аналитически вычислено для С₂₈Н₃₆FN₅O₂×1,2С₄Н₂F₆O₄×0,7Н₂O С: 50,51, Н: 5,14, N: 8,98. Обнаружено: С: 50,44, Н: 5,18, N: 9,11.

Схема 2: Получение анилинов. Примеры 4-6

Промежуточное соединение 3: 4-[Гидрокси(3-нитрофенил)метил]-N,N-диизопропил-бензамид

Методика как для промежуточного соединения 1, но после добавления n-BuLi раствор канюлировали в раствор 3-нитробензальдегида (2,7 г, 18 ммоль) в толуоле/ТГФ (примерно 1:1, 100 мл) при -78°С. Обработкой и хроматографией получили промежуточное соединение 3 (2,4 г, 37%). ¹Н ЯМР (CDCl₃) δ 1.1-1.7 (m, 12Н), 3.90 (d, J=3.5 Гц, 1H), 3.4-3.9 (m, 2H), 5.91 (s, J=3.5 Гц, 1Н), 7.27, 7.35 (2d, J=8 Гц, 4Н), 7.51 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 8.13 (m, 1H), 8.30 (s, 1H).

Промежуточное соединение 4: N,N-Диизопропил-4-[(3-нитрофенил)(1-пиперазинил)метил]бензамид

Используя такую же методику, как для промежуточного соединения 2, из промежуточного соединения 3 (2.4 г, 6,7 ммоль) получили Вос-защищенное промежуточное соединение 4 (2,83 г, 81%). В результате обработки ТФУ количественно получили промежуточное соединение 4, МС (ЭР) 425,23 (МН+).

Пример 4: 441-(3-Амино-фенил)-1-(4-бензил-пиперазин-1-ил)-метил]-N,N-диизопропил-бензамид

После реакции 7 (0,40 г, 0,94 ммоль) с бензилбромидом, как для Примера 1, осуществляли гидрирование (H₂, 40 фунт/кв. дюйм (275,79 кПа)) с 10% Pd/C (50 мг) в EtOH (25 мл) и 2 н. HCl (1,2 мл, 2,4 ммоль) в течение 2 ч. Очисткой хроматографией с обращенной фазой, используя такие же условия, как для Примера 1, получили соединение Примера 4 (0,20 г, 30%) в виде трифторацетата. МС (ЭР) 485.40 (МН+). ИК (NaO) 3414, 1673, 1605, 1455, 1345, 1201, 1134 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.3 (m, 2H), 2.9-3.8 (m, 8H). 4.31 (s, 2H), 4.47 (s, 1H), 7.02 (m, 1H), 7.21-7.52 (m, 12H). Аналитически вычислено для C₃₁H₄₀N₄O×1,2C₄H₂F₆O₄×0,5Н₂O С: 56,04, Н: 5,70, N: 7,30. Обнаружено: С: 56,06, Н: 5,67, N: 7,41.

Пример 5: 4-[1-(3-Амино-фенил)-1-(4-тиофен-3-илметил-пиперазин-1-ил)-метил]-N,N-диизопропил-бензамид

После реакции промежуточного соединения 4 (0,40 г, 0,94 ммоль) с 3-тиофен-карбоксальдегидом, как для Примера 2, осуществляли гидрирование (Н₂, 30 фунт/кв. дюйм (206.84 кПа)) с 10% Pd/C (50 мг) в EtOH (25 мл) и 2 н. HCl (1,0 мл, 2,0 ммоль) в течение 12 ч. Очисткой хроматографией с обращенной фазой, используя такие же условия, как для Примера 1, получили соединение Примера 5 (0,13 г, 20%) в виде дитрифторацетата. МС (ЭР) 491,28 (МН+). ИК (NaCl) 3408, 1673, 1605, 1455, 1345, 1201, 1134 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.3 (m, 2H), 2.9-3.8 (m, 8H), 4.35 (s, 2H), 4.44 (s, 1H), 6.98 (m, 1H), 7.16-7.32 (m. 6H), 7.49 (d, J=8 Гц, 2H), 7.55 (m, 1H), 7.64 (m, 1H). Аналитически вычислено для C₂₉H₃₈N₄OS×1,3С₄Н₂F₆O₄×0,6Н₂O С: 51,48, Н: 5,28, N: 7,02. Обнаружено: С: 51,51, Н: 5,20, N: 7,01.

Пример 6, 4-{1-(3-Амино-фенил)-1-[4-(1Н-имидазол-2-илметил)-пиперазин-1-ил]-метил}-N,N-диизопропил-бензамид

Используя такую же методику, как для Примера 2, путем осуществления взаимодействия промежуточного соединения 4 с 2-имидазол-карбоксальдегидом (0,10 г, 1,1 ммоль) с последующим гидрированием получили соединение Примера 6 (45 мг, 7%) в виде соли дитрифторацетата. МС (ЭР) 475,30 (МН+). ПК (2хТФУ, NaCl) 3351, 1674, 1621, 1455, 1349, 1202, 1134 (см^-1). ¹Н ЯМР (2хТФУ, CD₃OD) δ=1.1, 1.5 (m, 12H), 2.9-3.8 (m, 8H), 4.35 (s, 2H), 4.44 (s, 1H), 6.98 (m, 1H), 7.16-7.32 (m, 6H), 7.49 (d, J=8 Гц, 2H), 7.55 (m, 1H), 7.64 (m, 1H). Аналитически вычислено для C₂₈H₃₈N₆O×1,6С₄Н₂F₆O₄×0,8Н₂O С: 48,39, Н: 5,05, N: 9,84. Обнаружено: С: 48,43, Н: 5,06, N: 9,85.

Схема 3: Получение метилсульфонанилидов. Примеры 7-8

Промежуточное соединение 5: N,N-Диизопропил-4-[{3-[(метилсульфонил)-амино]фенил}(1-пиперазинил)метил]бензамид

Из промежуточного соединения 3 получили Вос-защищенное промежуточное соединение 4, как описано выше для промежуточного соединения 4. Вос-защищенное промежуточное соединение 4 (1,21 г, 2,3 ммоль) гидрировали в атмосфере H₂ при 30 фунт/кв. дюйм (206,84 кПа) с 10% Pd/C (150 мг) в АсОН (25 мл) в течение 12 ч. После упаривания в вакууме и экстракции CH₂Cl₂/K₂CO₄ (водн.) получили 1,1 г (2,3 ммоль) промежуточного анилина, который растворяли в MeCN/CH₂Cl₂ (1:1, 10 мл). Et₃N (0,48 мл, 3,4 ммоль), затем метансульфонилангидрид (0,41 г, 2,4 ммоль) добавляли при 0°С. После нагревания до комнатной температуры эту реакционную смесь обрабатывали экстракцией CH₂Cl₂/рассол. Очисткой хроматографией на диоксиде кремния (0-5% MeOH/CH₂Cl₂) получили Вос-защищенное промежуточное соединение 5 (1,3 г, 97%). Обработкой ТФУ в CH₂Cl₂ количественно получили промежуточное соединение 5. МС (ЭР) 473,16 (МН+).

Пример 7: N,N-Диизопропил-4-[1-(3-метансульфониламино-фенил)-1-(4-тиофен-3-илметил-пиперазин-1-ил)-метил]-бензамид

Методикой восстановительного аминирования, как для Примера 2, из промежуточного соединения 5 (0,20 г, 0,43 ммоль) получили соединение Примера 7 (90 мг, 26%) в виде соли дитрифторацетата. Соль дигидрохлорид получили после экстракции свободного основания CH₂Cl₂/K_zCO₄ (водн.) и обработки 2 экв. HCl (водн.). МС (ЭР) 569,21 (МН+). ПК (свободное основание, NaCl) 1604, 1455, 1340, 1151 (см^-1). ¹Н ЯМР (свободное основание. CDCl₃) δ=0.9-1.7 (m, 12Н), 2.5 (m, 8H), 2.85 (s, 3Н), 3.55 (s, 2H), 3.8 (m, 2H), 4.22 (s, 1H), 7.00-7.40 (m, 12Н). Аналитически вычислено для C₃₀H₄₀N₄O₃S₂×2,6 HCl С: 54,30, Н: 6,47, N: 8.44. Обнаружено: С: 54,33, Н: 6,20, N: 8,32.

Пример 8: 4-([4-(3-Фурилметил)-1-пиперазинил]{3-[(метилсульфонил)-амино]фенил}-N,N-диизопропил-бензамид

Используя такую же методику, как для промежуточного соединения 7, из промежуточного соединения 5 (0,21 г, 0,45 ммоль) получили соединение Примера 8 (80 мг, 32%) в виде свободного основания. МС (ЭР) 553,23 (МН+). ИК (свободное основание, NaCl) 1604, 1455, 1340, 1151 (см^-1). ¹Н ЯМР (свободное основание, CDCl₃) δ=1.0-2.6 (m, 20H), 2.91 (s, 3Н), 3.40 (s, 2H), 4.22 (s, 1Н), 6.39 (s, 1H), 7.06-7.42 (m, 11H). Аналитически вычислено для C₃₀H₄₀N₄O₄S×2,8HCl С: 55,03, Н: 6,59, N: 8,56. Обнаружено: С: 54.93, Н; 5,93, N: 8,49.

Схема 4: Получение соединений Примеров 9-11

Пример 9: 4-{(3-Аминофенил)[4-(3-тиенилметил)-1-пиперазинил]метил}-N,N-диэтилбензамид. N,N-Диэтил-4-{(3-нитрофенил)(1-пиперазинил)метил]бензамид (получен аналогично промежуточному соединению (4) на Схеме 2) (0,85 г, 2,1 ммоль) растворяли в MeOH (5 мл) с 3-тиофенкарбоксальдегидом (0,40 мл, 4,3 ммоль) и HOAc (60 мкл, 1,0 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч. Цианоборгидрид натрия (135 мг, 2,1 ммоль) добавляли порциями в течение 6 ч, и эту реакционную смесь перемешивали при 25°С в течение дополнительных 12 ч, после чего подвергали обработке концентрированием в вакууме и экстракцией (СН₂Cl₂/K₂CO₄ (водн.)). После очистки хроматографией на диоксиде кремния получили 3-тиенилметильное производное (0,45 г, 43%). После гидрирования этого продукта (0,30 г, 0,61 ммоль) и хроматографии с обращенной фазой получили соединение, указанное в заголовке (0,17 г, 35%) в виде трис-трифторацетата. МС (ЭР) 463,34 (МН+). ИК (NaCl) 3418, 1673, 1600, 1461, 1200, 1135 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.17, 1.31 (m, 6H), 2.45 (m, 2H), 3.11 (m, 2H), 3.24-3.66 (m, 10Н), 4.47 (s, 2H), 4.62 (s, 1H), 7.21 (m, 1H), 7.31 (m, 1H), 7.39-7.56 (m, 5H), 7.61-7.68 (m, 3H), 7.77 (m, 1H).

Пример 10: 4-[(3-Аминофенил)(4-бензил-1-пиперазинил)метил]-N,N-диэтилбензамид.

N,N-Диэтил-4-[(3-нитрофенил)(1-пиперазинил)метил]-бензамид (1,7 г, 4,3 ммоль) и триэтиламин (1,2 мл, 8,6 ммоль) растворяли в MeCN (10 мл). Бензилбромид (0,56 мл, 4,7 ммоль) добавляли при перемешивании при 25°С. Через 12 ч этот раствор концентрировали в вакууме. После экстракции (СН₂Cl₂/K₂CO₄ (водн.)) и очистки хроматографией на диоксиде кремния получили бензилированный продукт (1,4 г, 2,9 ммоль). После гидрирования (Н₂, 40 фунт/кв. дюйм (275,79 кПа)) с 10% Pd/C (100 мг) в EtOH (25 мл) и 2 н. HCl (2,5 мл, 5 ммоль) в течение 4 ч с последующими концентрированием в вакууме и хроматографией с обращенной фазой получили соединение, указанное в заголовке, в виде трис-трифторацетата (0,9 г, 26%). МС (ЭР) 457,26 (МН+). ИК (NaCl) 3422, 1672, 1603, 1458, 1209, 1133 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.1, 1.2 (m, 6H), 2.3 (m, 2H), 2.9-3.6 (m, 10Н), 4.33 (s, 2H), 4.49 (s, 1H), 5.48 (s, 2H), 7.01 (m, 1H), 7.24-7.34 (m, 5H), 7.47 (m, 5H), 7.52 (d, J=7.5 Гц, 2Н).

Пример 11: 4-((4-Бензил-1-пиперазинил){3-[(метилсульфонил)амино1-фенил}метил)-N,N-диэтилбензамид. Продукт Примера 10 (0,35 г, 0,76 ммоль) и триэтиламин (0,12 мл, 0,84 ммоль) растворяли в MeCN (10 мл) и добавляли метансульфоновый ангидрид (0,14 г, 0,84 ммоль) при 0°С. После перемешивания в течение 10 мин при 25°С этот раствор концентрировали в вакууме и очищали хроматографией с обращенной фазой с получением соединения, указанного в заголовке, в виде бис-трифторацетата (0,23 г, 40%). МС (ЭР) 535,21 (МН+). ИК(NaCl) 3479, 1673, 1604, 1458, 1337, 1200, 1150 (см^-1). ¹Н ЯМР (CD₃OD) δ=1.18, 1.31 (m, 6H), 2.41 (m, 2H), 2.98 (s, 3H), 3.13 (m, 2H), 3.28-3.65 (m, 8H), 4.44 (s, 2H), 4.57 (s, 1H), 5.57 (d, J=2 Гц, 2H), 7.15 (m, 1H), 7.30 (m, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.54-7.60 (m, 6H), 7.63 (m, 2H).

Фармацевтические композиции

Новые соединения согласно настоящему изобретению можно вводить перорально, внутримышечно, подкожно, местным путем, интраназально, внутрибрюшинно, интраторакально, внутривенно, эпидурально, внутриоболочечно, интрацеребровентрикулярно и путем инъекции в суставы.

Предпочтительным путем введения является пероральный, внутривенный или внутримышечный.

Дозировка будет зависеть от пути введения, тяжести заболевания, возраста и массы пациента и других факторов, обычно учитываемых лечащим врачом при определении индивидуального режима и уровня дозировки как наиболее подходящих для конкретного пациента.

Для изготовления фармацевтических композиций из соединений по данному изобретению инертные фармацевтически приемлемые носители могут быть либо твердыми, либо жидкими. Препараты твердых форм включают в себя порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы, крахмальные капсулы и суппозитории.

Твердым носителем может быть одно или более чем одно из веществ, которые могут также действовать в качестве разбавителей, корригирующих агентов, солюбилизирующих агентов, смазывающих агентов, суспендирующих агентов, связывающих агентов или разрыхляющих агентов для таблеток; он также может быть инкапсулирующим материалом.

В порошках носитель представляет собой тонкоизмельченное твердое вещество, которое находится в смеси с тонкоизмельченным активным компонентом. В таблетках активный компонент смешан с носителем, обладающим необходимыми связывающими свойствами в подходящих пропорциях, и спрессован в желаемую форму желаемого размера.

Для изготовления композиций в виде суппозиториев сначала плавят легкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот и масла какао, и активный ингредиент диспергируют в нем, например, путем перемешивания. Затем эту расплавленную однородную смесь заливают в формы удобного размера и оставляют охлаждаться и затвердевать.

Подходящими носителями являются карбонат магния, стеарат магния, тальк, лактоза, сахар, пектин, декстрин, крахмал, трагакант, метилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза, легкоплавкий воск, масло какао и тому подобное.

Соли включают в себя, но не ограничены ими, фармацевтически приемлемые соли. Примеры фармацевтически приемлемых солей в пределах объема настоящего изобретения включают в себя: ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, битартрат, бромид, ацетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдисилат, эстолат, эзилат, фумарат, глюкаптат, глюконат, глутамат, гликолиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, изетионат, лактат, лактобионат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, памоат (эмбонат), пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, таннат, тартрат, теоклат, триэтиодид, соли бензатина, хлорпрокаина, холина, диэтаноламина, этилендиамина, меглумина, прокаина, соли алюминия, кальция, лития, магния, калия, натрия и цинка. Примеры фармацевтически неприемлемых солей в пределах объема настоящего изобретения включают в себя: гидройодид, перхлорат и тетрафторборат. Фармацевтически неприемлемые соли можно использовать в связи с их преимущественными физическими и/или химическими свойствами, такими как кристалличность.

Предпочтительными фармацевтически приемлемыми солями являются гидрохлориды, сульфаты и битартраты. Особенно предпочтительны соли гидрохлориды и сульфаты.

В термин «композициям следует включать препарат активного компонента с инкапсулирующим материалом в качестве носителя, образующим капсулу, в которой активный компонент (с другими носителями или без них) окружен носителем, который, таким образом, ассоциирован с ним. Подобным образом включены крахмальные капсулы.

Таблетки, порошки, крахмальные капсулы и капсулы можно применять в качестве твердых лекарственных форм, подходящих для перорального введения.

Композиции в виде жидких форм включают в себя растворы, суспензии и эмульсии. Растворы активных соединений в стерильной воде или в воде-пропиленгликоле можно упомянуть в качестве примера жидких препаратов, подходящих для парентерального введения. Жидкие композиции можно также изготавливать в виде раствора препарата в растворе водного полиэтиленгликоля.

Водные растворы для перорального введения можно изготавливать путем растворения активного компонента в воде и добавления подходящих красителей, корригентов, стабилизаторов и загущающих агентов по желанию. Водные суспензии для перорального применения можно изготавливать путем диспергирования тонко измельченного активного компонента в воде вместе с вязким материалом, таким как природные и синтетические смолы, камеди, метилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза и другие суспендирующие агенты, известные в области фармацевтических препаратов.

Предпочтительно фармацевтические композиции находятся в стандартной лекарственной форме. В такой форме композиция разделена на стандартные дозы, содержащие подходящие количества активного компонента. Стандартная лекарственная форма может представлять собой упакованный препарат, причем упаковка содержит дискретные количества препаратов, например упакованных таблеток, капсул и порошков во флаконах или в ампулах. Стандартная лекарственная форма может также представлять собой капсулу, крахмальную капсулу или таблетку саму по себе, либо может представлять собой подходящее количество любых из этих упакованных форм.

БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА

Модель in vitro

Культура клеток

А. Клетки человека 293S, экспрессирующие клонированные μ-, δ- и к-рецепторы человека и устойчивость к неомицину, выращивали в суспензии при 37°С и 5% CO₂ в качалочных колбах, содержащих свободную от кальция модифицированную Дульбекко среду Игла (DMEM), 10% FBS, 5% BCS, 0,1% плюроник (Pluronic) F-68 и 600 мкг/мл генетицина.

Б. Головной мозг мышей и крыс взвешивали и промывали в охлажденном на льду фосфатно-буферном растворе (PBS) (содержащем 2,5 мМ ЭДТА, рН 7,4). Мозги гомогенизировали гомогенизатором Polytron в течение 15 с (мышь) или 30 с (крыса) в охлажденном на льду буфере (50 мМ Трис, рН 7,0, 2,5 мМ ЭДТА с фенилметилсульфонилфторидом, добавленным непосредственно перед использованием до 0,5 мМ из 0,5 М исходного раствора в смеси ДМСО : этанол).

Препарат мембран

Клетки осаждали и ресуспендировали в буфере для лизиса (50 мМ Трис, рН 7,0, 2,5 мМ ЭДТА с фенилметилсульфонилфторидом (PMSF), добавленным непосредственно перед использованием до 0,1 мМ из 0,1 М исходного раствора в этаноле), инкубировали на льду в течение 15 мин, затем гомогенизировали, используя Potytron, в течение 30 с. Суспензию центрифугировали при 1000 g (максимум) в течение 10 мин при 4°С. Супернатант хранили на льду, а осадки ресуспендировали и центрифугировали, как описано выше. Супернатанты от обоих центрифугирований объединяли и центрифугировали при 46000 g (максимум) в течение 30 мин. Осадки ресуспендировали в холодном Трис-буфере (50 мМ Трис/Cl, рН 7,0) и снова центрифугировали. Конечные осадки ресуспендировали в буфере для мембран (50 мМ Трис, 0,32 М сахароза, рН 7,0). Аликвоты (1 мл) в полипропиленовых пробирках замораживали в сухом льду/этаноле и хранили при -70°С до использования. Концентрации белка определяли модифицированным анализом по Лоури с додецилсульфатом натрия (SDS).

Анализы связывания

Мембраны подвергали оттаиванию при 37°С, охлаждали на льду, пропускали 3 раза через иглу 25 размера и разбавляли в связывающем буфере (50 мМ Трис, 3 мМ MgCl₂, 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (BSA) (Sigma A-7888), рН 7,4, который хранили при 4°С после фильтрования через 0,22 м фильтр, и к которому были добавлены свежеприготовленные 5 мкг/мл апротинина, 10 мкМ бестатина, 10 мкМ дипротина А (без DTT). Аликвоты по 100 мкл добавляли в охлажденные на льду полипропиленовые пробирки 12×75 мм, содержащие 100 мкл соответствующего радиоактивного лиганда и 100 мкл тестируемого соединения в различных концентрациях. Общее (ОС) и неспецифическое (НС) связывание определяли в отсутствие и в присутствии 10 мкМ налоксона соответственно. Пробирки встряхивали и инкубировали при 25°С в течение 60-75 мин, и через это время содержимое быстро фильтровали в вакууме и промывали примерно 12 мл/пробирку охлажденного на льду буфера для отмывки (50 мМ Трис, рН 7,0, 3 мМ MgCl₂) через фильтры GF/B (Whatman), предварительно замоченные в течение по меньшей мере 2 ч в 0,1% полиэтиленимине. Радиоактивность (число распадов в минуту, dpm), оставшуюся на фильтрах, измеряли с использованием бета-счетчика после замачивания фильтров в течение по меньшей мере 12 ч в мини-флаконах, содержащих 6-7 мл сцинтилляционной жидкости. Если анализ ставили в 96-луночных планшетах с глубокими лунками, фильтрование осуществляли через 96-луночные стандартные фильтры, замоченные в PEI, которые промывали 3×1 мл буфера для отмывки и высушивали в печи при 55°С в течение 2 ч. Фильтровальные планшеты подсчитывали в TopCount (Packard) после добавления 50 мкл сцинтилляционной жидкости MS-20 на лунку.

Функциональные анализы

Агонистическую активность соединений измеряли на основании определения степени, с которой комплекс соединений с рецептором активирует связывание ГТФ с G-белками, с которыми сопряжены эти рецепторы. В анализе связывания ГТФ GTP[γ]³⁵S объединяли с тестируемыми соединениями и мембранами из клеток HEK-293S, экспрессирующими клонированные опиоидные рецепторы человека, или из гомогенизированного головного мозга крысы и мыши. Агонисты стимулируют связывание GTP[γ]³⁵S с этими мембранами. Значения ЕС₅₀ и E_max соединений определяют на основании кривых доза-ответ. Сдвиги кривой доза-ответ вправо дельта-агонистом налтриндолом используют для подтверждения того факта, что агонистическая активность опосредована дельта-рецепторами.

Методика для ГТФ головного мозга крысы

Мембраны головного мозга крысы оттаивали при 37°С, пропускали 3 раза через иглу с тупым концом 25 размера и разбавляли в GTPγS связывающем буфере (50 мМ HEPES, 20 мМ NaOH, 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ MgCl₂, pH 7,4, добавлены свежеприготовленные: 1 мМ DTT, 0,1% БСА). Наконец, к разведениям мембран добавляли 120 мкМ ГДФ. Значения ЕС₅₀ и E_max соединений оценивали на основании кривых доза-ответ по 10 точкам, построенных для 300 мкл с соответствующим количеством мембранного белка (20 мкг/лунка) и 100000-130000 dpm (число распадов в минуту) GTPγ³⁵S на лунку (0,11-0,14 нМ). Базальное и максимально стимулированное связывание определяли в отсутствие и в присутствии 3 мкМ SNC-80.

Анализ данных

Специфичное связывание (СС) вычисляли как ОС-НС, и СС в присутствии различных тестируемых соединений выражали в процентах от контрольного СС. Значения IC₅₀ и коэффициента Хилла (Hill) (n_H) для лигандов по замещению специфично связанного радиоактивного лиганда вычисляли на основании графиков в логарифмическом масштабе или программ для вычерчивания кривой по точкам, таких как Ligand, GraphPad Prism, SigmaPlot или ReceptorFit. Значения K_i вычисляли на основании уравнения Cheng-Prussoff. Значения среднее ± средняя квадратичная ошибка (СКО) IC₅₀, K_i и n_H представляли для тестируемых лигандов по меньшей мере в трех кривых замещения. Биологическая активность соединений по настоящему изобретению представлена в Таблице.

Таблица
Биологические данные.
Пример №	HDELTA (нМ)	МОЗГ КРЫСЫ (нМ)	МОЗГ МЫШИ (нМ)
	IC50	ЕС50	%ЕМах	ЕС50	%ЕМах	ЕС50	%ЕМах
1-11	0,50-13	0,32-104	94-106	2,9-867	125-159	4,9-1441	126-154

Эксперименты по насыщению рецептора

Значения Kδ радиоактивных лигандов определяли путем проведения анализов связывания на клеточных мембранах с соответствующими радиоактивными лигандами в концентрациях, находящихся в диапазоне от 0,2 до 5-кратных от оцененного значения Kδ (вплоть до 10-кратных, если необходимые количества радиоактивного лиганда доступны). Специфичное связывание радиоактивного лиганда выражали в пмоль/мг мембранного белка. Значения Kδ и В_max из индивидуальных экспериментов получили на основании нелинейных соответствий специфично связанного (СС) против нМ свободного (С) радиоактивного лиганда из индивидуального эксперимента согласно однопозиционной модели.

Определение механической аллодинии с использованием тестирования по Von Frey

Тестирование проводили между 08:00 и 16:00 ч, используя способ, описанный Chapian et al. (1994). Крыс помещали в плексигласовые клетки на верхнюю поверхность дна из проволочной сетки, которая обеспечивала доступ к лапе, и оставляли для привыкания на 10-15 мин. Тестируемой областью была середина подошвы левой задней лапы, избегая менее чувствительных подушечек стопы. На лапу воздействовали серией из 8 волосков Von Frey логарифмически возрастающей жесткости (0,41, 0,69, 1,20, 2,04, 3,63, 5,50, 8,51 и 15,14 грамм; Stoelting, III, USA). Волосок Von Frey прикладывали снизу сетчатого пола перпендикулярно поверхности подошвы с достаточной силой, чтобы вызвать небольшой прогиб против лапы, и держали в течение примерно 6-8 секунд. Положительный ответ отмечали, если лапа резко отдергивалась. Вздрагивание немедленно после удаления волоска также считали положительным ответом. Передвижение считали неопределенным ответом, и в таких случаях стимул повторяли.

Протокол тестирования

Животных тестировали на 1-е сутки после операции для группы, обработанной FCA. 50%-ное пороговое значение отдергивания определяли, используя прямой способ Dixon (1980). Тестирование начинали с 2,04 г волоска, в середине серии. Стимулы всегда давали последовательным образом, либо восходящим, либо нисходящим. В отсутствие ответа в виде отдергивания лапы на исходно выбранный волосок давали более сильный стимул; в случае отдергивания лапы выбирали следующий более слабый стимул. Для вычисления оптимального порогового значения данным способом необходимо 6 ответов в непосредственной близости от 50%-ного порогового значения, и подсчет этих 6 ответов начинали, когда появлялось первое изменение ответа, то есть, когда пороговое значение впервые пересекалось. В случаях, когда пороговые значения оказывались вне диапазона стимулов, соответственно устанавливались значения 15,14 (нормальная чувствительность) или 0,41 (максимальная аллодиния). Полученную в результате картину положительных и отрицательных ответов вносили в таблицу, используя условные обозначения: Х = отсутствие отдергивания; О = отдергивание, и 50%-ное пороговое значение отдергивания интерполировали, используя формулу:

50% г пороговое значение =10^(Xf+kδ)/10000

где Xf = значение последнего использованного волоска Von Frey (логарифмические единицы); k = табличное значение (из Chapman et al. (1994)) для картины положительных/отрицательных ответов; и δ = значение разности между стимулами (логарифмические единицы). Здесь δ = 0,224.

Пороговые значения Von Frey переводили в процент от максимального возможного ответа (% МВО) согласно Chaptan et al., 1994. Для компьютерного вычисления % МВО использовали следующее уравнение:

% МВО = Порог лекарственной обработки (г) - порог аллодинии (г) × 100 Контрольный порог (г) - порог аллодинии (г)

Введение тестируемого вещества

Перед тестированием по Von Frey крысам инъецировали (подкожно, внутрибрюшинно, внутривенно или перорально) тестируемое вещество, время между введением тестируемого соединения и тестом Von Frey зависело от природы тестируемого соединения.

Тест Writhing

Уксусная кислота при введении мышам внутрибрюшинно будет вызывать сокращения живота. Затем их тело будет типичным образом вытягиваться. Когда вводят обезболивающие лекарства, это описанное движение наблюдают менее часто, и это лекарство выбирают в качестве потенциального хорошего кандидата.

Рефлекс Writhing считают полным и типичным только тогда, когда присутствуют следующие элементы животное не находится в движении; нижняя часть спины слегка опущена; видна подошвенная сторона обеих лап. В данном анализе продемонстрировали, что соединения по настоящему изобретению значительно ингибируют рефлексы Writhing после пероральной дозировки 1-100 мкмоль/кг.

(1) Приготовление растворов

Уксусная кислота (АсОН): 120 мкл уксусной кислоты добавляют к 19,88 мл дистиллированной воды до получения конечного объема 20 мл при конечной концентрации 0,6% АсОН. Затем этот раствор перемешивают (встряхиванием), и он готов для инъекции.

Соединение (лекарство): Каждое соединение получают и растворяют в наиболее подходящем носителе согласно стандартным методикам.

(2) Введение растворов

Соединение (лекарство) вводят перорально, внутрибрюшинно (i.р.), подкожно (s.c.) или внутривенно (i.v.) в дозе 10 мл/кг (учитывая среднюю массу тела мышей) за 20, 30 или 40 минут (соответственно классу соединения и его характеристикам) до тестирования. Когда соединение доставляют центрально: интравентрикулярно (i.c.v.) или внутриоболочечно (i.t.), вводят объем 5 мкл.

АсОН вводят внутрибрюшинно (i.p.) в двух местах в дозе 10 мл/кг (учитывая среднюю массу тела мышей) непосредственно перед тестированием.

(3) Тестирование

Животное (мышь) наблюдают в течение периода 20 минут и в конце эксперимента отмечают и компилируют число случаев (рефлекс Writhing). Мышей держат в индивидуальных клетках "обувная коробка" с контактной подстилкой. Обычно наблюдают всего 4 мышей одновременно: один контроль и три дозы лекарства.

Эффективность при симптомах тревоги и подобных тревоге установили в конфликтном тесте Geller-Seifter у крыс.

Эффективность при симптомах функционального желудочно-кишечного расстройства можно установить в анализе, описанном Coutinho SV et al, in American Journal of Physiology - Gastrointestinal & Liver Physiology, 282 (2): G307-16, 2002 Feb, у крыс.

1. Соединение формулы

где R¹ выбран из любого из:

(1) фенила

(2) пиридинила

(3) тиенила

(4) фуранила

(5) имидазолила

где каждое фенильное или гетероароматическое кольцо R¹ может быть возможно и независимо дополнительно замещено 1, 2 или 3 заместителями, выбранными из CF₃, метилом, хлоро, фторо, бромо и йодо;

R² независимо выбран из этила и изопропила;

R³ независимо выбран из водорода и фторо;

R⁴ независимо выбран из -NH₂ и -NHSO₂R⁵;

R⁵ независимо представляет собой С₁-С₆алкил, или его соли или отдельные энантиомеры и их соли.

2. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой фенил, фуранил, тиенил или имидазолил; R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород или фторо; R⁴ представляет собой -NH₂ или -NHSO₂R⁵; R⁵ представляет собой С₁-С₆алкил.

3. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой фенил, фуранил, тиенил или имидазолил; R² представляет собой этил или изопропил; R³ представляет собой водород; R⁴ представляет собой -NHSO₂R⁵; R⁵ представляет собой С₁-С₆алкил.

4. Соединение по п.1, где гетероароматическое(ие) кольцо(а) замещено(ы) CF₃, метилом, йодо, бромо, фторо или хлоро.

5. Соединение по п.1, где гетероароматическое(ие) кольцо(а) замещено(ы) метилом.

6. Соединение по п.1, выбранное из любого из:

4-[1-(3-амино-фенил)-1-(4-бензил-пиперазин-1-ил)-метил]-N,N-диизопропил-бензамида;

4-[1-(3-амино-фенил)-1-(4-тиофен-3-илметил-пиперазин-1-ил)-метил]-N,N-диизопропил-бензамида;

4-{1-(3-амино-фенил)-1-[4-(1Н-имидазол-2-илметил)-пиперазин-1-ил]-метил}-N,N-диизопропил-бензамида;

N,N-диизопропил-4-[1-(3-метансульфониламино-фенил)-1-(4-тиофен-3-илметил-пиперазин-1-ил)-метил]-бензамида;

4-([4-(3-фурилметил)-1-пиперазинил]{3-[метилсульфонил)амино]фенил}-N,N-диизопропил-бензамида;

4-{(3-аминофенил)[4-(3-тиенилметил)-1-пиперазинил]метил}-N,N-диэтилбензамида;

4-[(3-аминофенил)(4-бензил-1-пиперазинил)метил]-N,N-диэтилбензамида и

4-((4-бензил-1-пиперазинил){3-[(метилсульфонил)амино]фенил}метил)-N,N-диэтилбензамида.

7. Соединение по любому из пп.1-6 в форме его солей гидрохлорида, дигидрохлорида или дитрифторацетата.

8. Способ получения соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -NH₂, при котором соединение общей формулы

где R² и R³ являются такими, как определено в п.1, a R⁴ представляет собой NO₂, подвергают взаимодействию с SOBr₂ в СН₂Cl₂ с последующим взаимодействием с Вос-пиперазином в ацетонитриле в присутствии триэтиламина в стандартных условиях, с последующим удалением защитной группы Вос в стандартных условиях с получением соединения формулы V

которое затем подвергают алкилированию в восстановительных условиях соединением формулы R¹-CHO с последующим восстановлением нитрогруппы с использованием водорода и палладия на угле с получением соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -NH₂.

9. Способ получения соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -NHSO₂CH₃, при котором соединение общей формулы

где R² и R³ являются такими, как определено в п.1, a R⁴ представляет собой NO₂, подвергают взаимодействию с SOBr₂ в СН₂Cl₂ с последующим взаимодействием с Вос-пиперазином в ацетонитриле в присутствии триэтиламина в стандартных условиях, с последующим восстановлением нитрогруппы путем гидрогенолиза с использованием палладия на угле в качестве катализатора, метансульфонилированием с использованием метансульфонилангидрида в дихлорметане в присутствии триэтиламина, а затем удалением защитной группы Вос в стандартных условиях с получением соединения формулы VII

которое затем подвергают алкилированию в восстановительных условиях соединением формулы R¹-СНО с получением соединения формулы I, где R⁴ представляет собой -NHSO₂СН₃.

10. Соединение по любому из пп.1-7, проявляющее δ-агонистические свойства.

11. Применение соединения формулы 1 по п.1 для производства лекарства для применения при лечении боли.

12. Фармацевтическая композиция, проявляющая δ-агонистические свойства, содержащая в качестве активного ингредиента соединение формулы I по п.1 вместе с фармакологически и фармацевтически приемлемым носителем.

Приоритет по пунктам и признакам:

18.05.2001 - пп.1-5, 8, 9, 11 и 12, п.6 соединения 1-5, частично пп.7 и 10;

15.11.2001 - п.6 соединения 6-8, частично пп.7 и 10.