Питательная среда для культивирования бруцелл

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в получении питательных сред для выращивания бруцеллезного микроба. Питательная среда в своем составе содержит в качестве питательной основы патоку рафинадную, дрожжевой экстракт, натрия хлорид, натрий фосфорнокислый двузамещенный, натрия метабисульфит, агар микробиологический, водопроводную воду. Изобретение позволяет снизить себестоимость питательной среды и упростить способ ее приготовления.

 

Изобретение относится к микробиологии, именно к получению питательных сред для выращивания бруцеллезного микроба.

Известна питательная среда, основой которой является агар Мартена следующего состава, г/л: пептон Мартена 0,5; хлористый натрий 3,0; 20% гидроокись натрия 3,0; агар микробиологический 2,0; мясная вода 0,5 л; рН 7,2±0,1 (Черкесс Ф.К., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология. - М.: Изд. Медицина, 1987).

Недостатком данной среды является ее низкая продуктивность.

Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является среда Альбими, способ приготовления которой следующий: 2 г пептона, 1 г декстрозы, 5 г натрия хлорида, 0,1 г натрия бисульфата, 2 см3 дрожжевого аутолизата, 2% промытого агар-агара растворяют в 1 л дистиллированной воды (Сидоров М.А., Скородумова Д.И., Федотов В.Б. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. - М.: Колос, 1995, - с.183).

Недостатками данной среды являются ее высокая себестоимость и сложность в приготовлении.

Целью настоящего изобретения является получение основы качественной питательной среды растительного происхождения, которая обеспечивала ростовые свойства и снижение ее стоимости, а также упрощение способа приготовления.

Поставленная цель достигается тем, что питательной основой предлагаемой питательной среды является патока рафинадная, натрия хлорид, натрий фосфорнокислый двузамещенный, агар микробиологический на водопроводной воде с добавлением в среду стимулирующих добавок, в качестве которых используют метабисульфит натрия и дрожжевой экстракт при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Патока рафинадная20,0
Дрожжевой экстракт5,0
Натрия хлорид5,0
Натрий фосфорнокислый двузамещенный4,0
Натрия метабисульфит0,3
Агар микробиологический12,0
Водопроводная вода Остальное

Патока рафинадная (ОСТ 18-233-75) в своем составе содержит не менее - 45% сахарозы. В отличие от прототипа предлагаемая среда, имея более низкую стоимость, обеспечивает оптимальные условия для роста и размножения бруцеллезного микроба.

Использование патоки рафинадной с метабисульфитом натрия и дрожжевого экстракта на водопроводной воде в качестве основы является отличительным признаком предлагаемой питательной среды.

Способ приготовления питательной основы предлагаемой питательной среды для выращивания бруцеллезного микроба заключается в следующем. Патоку рафинадную растворяют в водопроводной воде, добавляют хлорид натрия, натрий фосфорнокислый двузамещенный, дрожжевой экстракт, нагревают до кипения, доводят рН до 7,2±0,1 гидроокисью натрия 20%. Выпавший осадок фильтруют через тканевый фильтр с фильтровальной бумагой. В фильтрат добавляют агар микробиологический, варят в течение 10±1 мин до полного его расплавления. Корректируют рН до 7,2±0,1, добавляют метабисульфит натрия. Готовую среду разливают по 400±0,1 мл в стерильные градуированные флаконы, закупоривают стерильными резиновыми пробками, накрывают алюминиевыми колпачками, вальцуют, стерилизуют при 1 атм 30 мин. Готовую среду используют для выращивания бруцелл.

Эффективность исследуемых сред оценивали в соответствии с методическими рекомендациями «К контролю питательных сред по биологическим показателям». М., 1980, с использованием в качестве тест-культур вакцинных штаммов бруцелл В.melitensis Rev-1, В.abortus 19, В suis 61 и вирулентных штаммов В.melitensis 565, В.abortus 544, В.suis 1330.

Испытуемые культуры выращивали на пластинках плотного агара рН 7,2±0,1 при температуре 37°С 48 ч. Из двухсуточных культур готовили 1 млрд. взвесь м.т. тест-штаммов, равный 10 ед. по оптическому стандарту мутности ОСО ГИСК им. Л.А.Тарасевича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 1000 и 100 м.к. Из данных разведений взвеси культур высевали по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного агара. Посевы инкубировали при 37°С в течение 5 суток при ежедневном их просмотре. Через 72-120 ч учитывали результаты подсчетов выросших колоний.

Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: патоку рафинадную 18,0; дрожжевой экстракт 4,0; натрия хлорид 4,0; натрия фосфорнокислого двузамещенного 3,0; метабисульфита натрия 0,2, агар микробиологический 11,0; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцеллезного микроба при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило 83 и 5.

Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: патоку рафинадную 20,0; дрожжевой экстракт 5,0; натрия хлорид 5,0; натрия фосфорнокислого двузамещенного 4,0; метабисульфита натрия 0,3; агар микробиологический 12,0; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцеллезного микроба при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило 130 и 16.

Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: патоку рафинадную 22,0; дрожжевой экстракт 6,0; натрия хлорид 6,0; натрия фосфорнокислого двузамещенного 5,0; метабисульфита натрия 0,4, агар микробиологический 13,0; водопроводная вода - остальное. При таком соотношении ингредиентов количество колоний, выросших на плотных пластинках агара, для бруцеллезного микроба при посевной дозе 100 и 10 м.к. составило 70 и 2.

Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе патоке рафинадной (пример 2).

Таким образом, на основании вышеизложенного можно сказать о явных преимуществах предлагаемой питательной среды, состоящей из патоки рафинадной 20,0, дрожжевого экстракта 5,0, натрия хлорида 5,0, натрия фосфорнокислого двузамещенного 4,0, метабисульфита натрия 0,3, агара микробиологического 12,0, водопроводной воды. Питательная среда технически проста в приготовлении без предварительного этапа подготовки основы. Предлагаемая среда дешевле, так как в основу берется растительное сырье и для ее приготовления не требуется дистиллированной воды, среда готовится на водопроводной воде.

Питательная среда для культивирования бруцелл, содержащая питательную основу, натрия хлорид, агар микробиологический, воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит натрий фосфорнокислый двузамещенный, в качестве стимулирующей добавки натрия метабисульфит и дрожжевой экстракт, а в качестве питательной основы - патоку рафинадную, воды - водопроводную воду при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

Патока рафинадная20,0
Дрожжевой экстракт5,0
Натрия хлорид5,0
Натрий фосфорнокислый двузамещенный4,0
Натрия метабисульфит0,3
Агар микробиологический12,0
Водопроводная водаОстальное



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности для лабораторной диагностики демодекоза у собак. .

Изобретение относится к медицине, в частности к эпидемиологии и микробиологии, и может быть использовано при эпидемиологическом надзоре за гнойно-септическими инфекциями для выявления госпитальных микробных ассоциаций.
Изобретение относится к области медицины, медицинской токсикологии, микробиологии, биологии при испытании различных сорбентов (например, аппликационных, используемых для лечения ран), а именно к оценке уровня сорбционной активности сорбентов в отношении микробных токсинов.
Изобретение относится к микробиологии, может быть использовано для диагностики неспецифических инфекционно-воспалительных заболеваний влагалища. .
Изобретение относится к иммунологии. .

Изобретение относится к иммунологии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии. .

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для бактериологической диагностики возбудителя сибирской язвы из объектов внешней среды и инфекционного материала.
Изобретение относится к лабораторным исследованиям, касается способа дифференциации аллергических реакций на ППД-туберкулин для млекопитающих, инфицированных бактериями из рода Corynebacterium, и может быть использовано для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу получения микробиологических питательных сред для культивирования сибиреязвенного микроба и близкородственных спорообразующих сапрофитов (Bacillus subtilis.
Изобретение относится к почвенной микробиологии, в частности к способам обработки семян люцерны. .
Изобретение относится к области биотехнологии, ветеринарной микробиологии, санитарии, охраны окружающей среды и представляет собой штамм Actinomyces fradiae-96, выделенный из почвы, отобранной из-под органических отходов птицеводства.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к микробиологическому получению андроста-1,4-диен-3,17-диона (АДД). .
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству экологически чистого торфодробинного компоста. .

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой, косметической, биотехнологической, медицинской промышленности и ветеринарии с целью укрепления здоровья, в частности, при приготовлении кисломолочных, ферментированных и неферментированных пищевых продуктов, косметических средств, биологически активных добавок и пробиотика.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологической промышленности, и касается новой культуры микроорганизмов, разрушающих нефть и нефтепродукты
Наверх