Способ получения иммобилизованной липазы

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод. Способ предусматривает иммобилизацию липазы в смеси полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия, взятых в массовых соотношениях 1:0,3-1,0. Иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза: смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия 1:50-200 и при рН 9,0-11,0, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут. Способ позволяет получить целевой продукт с повышенной ферментативной активностью.

 

Предлагаемое изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод.

Способ получения липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите (патент США №5667634, опубл. 16.09.1997, МКИ D21C 9/08).

Однако получения липазы путем иммобилизации ее в комплекс разнозаряженных полиэлектролитов неизвестно.

Техническим эффектом предлагаемого изобретения является повышение активности целевого продукта в комплексе из двух полимеров.

Технический эффект достигается в предлагаемом способе получения липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите тем, что в качестве полиэлектролита используют смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия, взятых в массовых соотношениях равных 1:0,3-1,0, причем иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза:смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия 1:50-200 и при рН 9-11, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут.

Известно использование пленки полистиролсульфоната натрия как селективной, ультратонкой перегородки для переноса анионов (Harris Jeremy J., Stair Jacqueline L., Bruening Merlin L. Layered polyelectrolyte films as selective, ultrathin barriers for anion transport // Chem. Mater. 2000. 12, №7, с.1941-1946).

Полидиаллилдиметиламмоний хлорид в качестве полимерного коагулянта используется для снижения солесодержания сточных вод (Гоголашвили Э.Л., Куренков В.Ф., Молгачева И.Е., Гайсина А.И. Влияние органических полимерных коагулянтов на эффективность процесса водоочистки // Структура и динамика молекулярных систем, вып.Х, ч.2, с.85-88, 2003)

В научно-технической литературе неизвестно техническое решение, аналогично заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения "новизна".

Полученная согласно предлагаемому способу иммобилизованная липаза может быть использована для очистки животноводческих отходов и сточных вод, т.е. "промышленно применима".

Впервые предложена смесь полиэлектролитов полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия при определенном авторами массовом соотношении для повышения активности липазы. Авторами впервые показано, что взаимодействие полиэлектролитов полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия и липазы приводит к изменению конформации липазы и, по-видимому, открытию активных центров фермента, т.е. предложение соответствует критерию "изобретательский уровень".

Предлагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 100 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 60 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 50 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из бактерий Pseudomonas fluorescens /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:50). Иммобилизацию проводят в течение 10 минут при рН 11 при температуре 18°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 100% по отношению к контролю.

Пример 2. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 100,0 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 60,0 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из бактерий Pseudomonas fluorescens /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 20 минут при рН 11,0 при температуре 24°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 104% по отношению к контролю.

Пример 3. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 200,0 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 120,0 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 200 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из бактерий Pseudomonas fluorescens /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:200). Иммобилизацию проводят в течение 15 минут при рН 11,0 при температуре 21°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 119% по отношению к контролю.

Пример 4. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,3 путем смешивания 100 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 30 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из поджелудочной железы свиньи /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 10 минут при рН 9,0 при температуре 18°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 180% по отношению к контролю.

Пример 5. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:0,6 путем смешивания 100,0 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 60,0 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из Mucor javanicus /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 20 минут при рН 9,0 при температуре 24°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 180% по отношению к контролю.

Пример 6. Получают смесь полиэлектролитов при массовом соотношении полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия равном 1:1 путем смешивания 100 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида и 100 мг полистиролсульфоната натрия. Далее к 100 мг полученной смеси добавляют 1 мг липазы, полученной из Mucor javanicus /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полиэлектролит 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 15 минут при рН 9,0 при температуре 21°С.

Полученную иммобилизованную липазу проверяли на ферментативную активность по отношению к субстрату триацетину. В результате активность иммобилизованной липазы составила 177% по отношению к контролю.

Таким образом, заявленный способ получения липазы позволяет сохранить (100%) или увеличить в 1,04-1,8 раз ферментативную активность целевого продукта по отношению к исходной липазе.

Способ получения иммобилизованной липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите, отличающийся тем, что в качестве полиэлектролита используют смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия, взятых в массовых соотношениях 1:0,3-1,0, причем иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза: смесь полидиаллилдиметиламмоний хлорида и полистиролсульфоната натрия 1:50-200 и при рН 9,0-11,0, температуре 18-24°С в течение 10-20 мин.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к стереоселективному способу получения дигидроксиэфиров и их производных. .

Изобретение относится к биотехнологии, касается сшитых кристаллов протеина, которые отличаются способностью переходить из нерастворимой и стабильной формы в растворимую и активную форму при изменении среды, окружающей указанные кристаллы.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения варианта фермента путем создания модификаций в аминокислотной последовательности в определенной области липолитического фермента.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в хлебопекарной промышленности. .

Изобретение относится к молекулам ДНК, рекомбинантным векторам и клеточным культурам, предназначенным для использования в способах экспрессии стимулируемой солями желчи липазы (BSSL) в метилтрофных дрожжах Pichia pastoris.

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии и касается фермента хондроитиназы, применяемой в химико-фармацевтической промышленности, высокоочищенной хондроитиназы и способа получения фермента и фармацевтических композиций, содержащих фермент.

Изобретение относится к использованию ферментов при добыче нефти, газа или воды из подземного пласта. .
Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в медицине и ветеринарии при получении инъекционных препаратов иммобилизованных ферментов. .

Изобретение относится к области биотехнологии. .

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической промышленности. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности с целью получения глюкозы в процессе гидролиза крахмала. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности с целью получения глюкозы в процессе гидролиза крахмала. .

Изобретение относится к биотехнологии, может найти применение в медицине и ветеринарии для лечения различных заболеваний, где необходим ферментативный гидролиз белков некротических тканей и гнойных масс, а также гидролиз фибрина и растворение тромбов крови.

Изобретение относится к области получения иммуносорбентов и может быть использовано для лечения дифтерии методом иммуносорбции, для проведения различных иммунологических исследований.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу получения иммобилизованных ферментов, и может быть использовано в пищевой, химической, микробиологической промышленности, а также в медицинской и лабораторной практике.
Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод

Наверх