Способ получения иммобилизованной липазы

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод. Способ предусматривает иммобилизацию липазы в полидиаллилдиметиламмоний хлориде при массовом соотношении липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:1-100 и при рН 7,6-8,2, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут. Способ позволяет получить целевой продукт с повышенной ферментативной активностью.

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод.

Способ получения липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите (патент США №5667634, публ. 16.09.1997, МКИ D21C 9/08).

Однако липаза, полученная известным способом, недостаточно эффективна при высоких температурах ее использования.

Техническим эффектом предлагаемого изобретения является повышение активности целевого продукта при высоких температурах.

Технический эффект достигается в предлагаемом способе получения липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите тем, что в качестве полиэлектролита используют полидиаллилдиметиламмоний хлорид, причем иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:1-100 и при рН 7,6-8,2, температуре 18-24°С в течение 10-20 минут.

Полидиаллилдиметиламмоний хлорид в качестве полимерного коагулянта используется для снижения солесодержания сточных вод (Гоголашвили Э.Л., Куренков В.Ф., Молгачева И.Е., Гайсина А.И. Влияние органических полимерных коагулянтов на эффективность процесса водоочистки // Структура и динамика молекулярных систем, вып.Х, ч.2, с.85-88, 2003).

В научно-технической литературе неизвестно техническое решение, аналогично заявляемому, т.е. предложение соответствует критерию изобретения «новизна».

Полученная согласно предлагаемому способу иммобилизованная липаза может быть использована для очистки животноводческих отходов и сточных вод, т.е. «промышленно применима».

Впервые предложено использование полиэлектролита полидиаллилдиметиламмоний хлорида при определенном авторами массовом соотношении для повышения активности липазы, используемой при высокой температуре субстрата. Авторами впервые показано, что взаимодействие полиэлектролита полидиаллилдиметиламмоний хлорида и липазы приводит к изменению конформации липазы за счет препятствия разворачивания полипептидной цепи и стабилизации каталитически выгодной конформации липазы и, по-видимому, открытию активных центров фермента, т.е. предложение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемое изобретение иллюстрируется на следующих примерах.

Пример 1. Далее к 1 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида добавляют 1 мг липазы, полученной из поджелудочной железы /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:1). Иммобилизацию проводят в течение 10 минут при рН 7,6 при температуре 18°С.

Полученную иммобилизованную липазу и исходную проверяли на ферментативную активность при температуре субстрата (триацетина), равной 60°С и 80°С. В результате активность липазы составила 320 и 446 единиц относительной активности липазы при 60°С и 80°С соответственно, а исходная активность липазы равна при этих же условиях 100 единиц активности. Т.е. активность липазы, полученной согласно предлагаемому способу, была выше активности исходной липазы в 3,2-4,5 раза.

Пример 2. К 10 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида добавляют 1 мг липазы, полученной из поджелудочной железы /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:10). Иммобилизацию проводят в течение 20 минут при рН 8,2 при температуре 24°С.

Полученную иммобилизованную липазу и исходную проверяли на ферментативную активность при температуре субстрата (триацетина), равной 60°С и 80°С. В результате активность липазы составила 893 и 360 единиц относительной активности липазы при 60°С и 80°С соответственно, а исходная активность липазы равна при этих же условиях 100 единиц активности. Т.е. активность липазы, полученной согласно предлагаемому способу, была выше активности исходной липазы в 3,6-8,9 раз.

Пример 3. Далее к 1 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида добавляют 1 мг липазы, из Mucor javanicus /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:1). Иммобилизацию проводят в течение 10 минут при рН 7,6, при температуре 18°С.

Полученную иммобилизованную липазу и исходную проверяли на ферментативную активность при температуре субстрата (триацетина), равной 60°С и 80°С. В результате активность липазы составила 1276 и 460 единиц относительной активности липазы при 60°С и 80°С соответственно, а исходная активность липазы равна при этих же условиях 100 единиц активности. Т.е. активность липазы, полученной согласно предлагаемому способу, была выше активности исходной липазы в 12,8-4,6 раз.

Пример 4. К 10 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида добавляют 1 мг липазы, полученной из Mucor javanicus /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:10). Иммобилизацию проводят в течение 20 минут при рН 8,2, при температуре 24°С.

Полученную иммобилизованную липазу и исходную проверяли на ферментативную активность при температуре субстрата (триацетина), равной 60°С и 80°С. В результате активность липазы составила 1860 и 1357 единиц относительной активности липазы при 60°С и 80°С соответственно, а исходная активность липазы равна при этих же условиях 100 единиц активности. Т.е. активность липазы, полученной согласно предлагаемому способу, была выше активности исходной липазы в 13,6-18,6 раз.

Пример 5. К 100 мг полидиаллилдиметиламмоний хлорида добавляют 1 мг липазы, полученной из Mucor javanicus /фирмы Сигма/ (соотношение липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:100). Иммобилизацию проводят в течение 15 минут при рН 7,9, при температуре 21°С.

Полученную иммобилизованную липазу и исходную проверяли на ферментативную активность при температуре субстрата (триацетина), равной 60°С и 80°С. В результате активность липазы составила 141 и 624 единиц относительной активности липазы при 60°С и 80°С соответственно, а исходная активность липазы равна при этих же условиях 100 единиц активности. Т.е. активность липазы, полученной согласно предлагаемому способу, была выше активности исходной липазы в 1,4-6,2 раз.

Таким образом, заявленный способ получения липазы позволяет в 1,4-18,6 раз увеличить ферментативную активность целевого продукта в сравнении с известным способом /прототипом/.

Способ получения иммобилизованной липазы путем иммобилизации ее в полиэлектролите, отличающийся тем, что в качестве полиэлектролита используют полидиаллилдиметиламмоний хлорид, причем иммобилизацию липазы проводят при массовом соотношении липаза:полидиаллилдиметиламмоний хлорид 1:1-100 и при рН 7,6-8,2, температуре 18-24°С в течение 10-20 мин.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод. .

Изобретение относится к стереоселективному способу получения дигидроксиэфиров и их производных. .

Изобретение относится к биотехнологии, касается сшитых кристаллов протеина, которые отличаются способностью переходить из нерастворимой и стабильной формы в растворимую и активную форму при изменении среды, окружающей указанные кристаллы.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ получения варианта фермента путем создания модификаций в аминокислотной последовательности в определенной области липолитического фермента.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в хлебопекарной промышленности. .

Изобретение относится к молекулам ДНК, рекомбинантным векторам и клеточным культурам, предназначенным для использования в способах экспрессии стимулируемой солями желчи липазы (BSSL) в метилтрофных дрожжах Pichia pastoris.

Изобретение относится к области медицины и биотехнологии и касается фермента хондроитиназы, применяемой в химико-фармацевтической промышленности, высокоочищенной хондроитиназы и способа получения фермента и фармацевтических композиций, содержащих фермент.

Изобретение относится к использованию ферментов при добыче нефти, газа или воды из подземного пласта. .
Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для очистки животноводческих отходов и сточных вод. .
Изобретение относится к биотехнологии и может найти применение в медицине и ветеринарии при получении инъекционных препаратов иммобилизованных ферментов. .

Изобретение относится к области биотехнологии. .

Изобретение относится к медицине, в частности к фармацевтической промышленности. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности с целью получения глюкозы в процессе гидролиза крахмала. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в пищевой промышленности с целью получения глюкозы в процессе гидролиза крахмала. .

Изобретение относится к биотехнологии, может найти применение в медицине и ветеринарии для лечения различных заболеваний, где необходим ферментативный гидролиз белков некротических тканей и гнойных масс, а также гидролиз фибрина и растворение тромбов крови.

Изобретение относится к области получения иммуносорбентов и может быть использовано для лечения дифтерии методом иммуносорбции, для проведения различных иммунологических исследований.
Изобретение относится к биотехнологии
Наверх