Ферментативное лечение пигментного ретинита и релевантная фармацевтическая композиция для этого лечения в виде набора

Изобретение относится к лечению пигментного ретинита с помощью ферментов и к фармацевтической композиции в виде набора, который можно использовать для этого лечения. Набор для лечения пигментного ретинита, содержит ферменты глутатионпероксидазу, пролидазу, глюкоза-6-фосфатдегидрогеназу и, необязательно, альдозаредуктазу в аликвотных частях и интерактивных количествах, подходящих для введения указанных ферментов в соответствии с заданной временной последовательностью. Изобретение позволяет создать способ лечения пигментного ретинита, который дает возможность постепенного восстановления остроты зрения, четкости изображения и восприятия цветов. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к лечению пигментного ретинита с помощью ферментов и к фармацевтической композиции в виде набора, который можно использовать для этого лечения.

Уровень техники

Пигментный ретинит представляет собой заболевание сетчатки, выражающееся в виде многих различных патологических проявлений: он вызывает сужение поля зрения и возрастающее затруднение темновой адаптации и адаптации к полумраку, когда он поражает периферические зоны сетчатки, где находится основная часть палочковидных зрительных клеток, которые позволяют видеть в полумраке и воспринимать движение в латеральных зонах, или может привести к утрате центрального зрения, когда колбочки сетчатки модифицируются. Скорость прогрессирования заболевания различна у разных больных. Как правило, пигментный ретинит проявляется в юности, но часто также поражает детей и ведет себя коварно.

Причины, ответственные за этот недуг, до настоящего времени неизвестны и, следовательно, не существует какого-либо эффективного способа лечения пораженных им больных, хотя предпринимались попытки лечения, в частности, с применением дилтиазема (патент FR 2784030 F). Единственные точные сведения, имеющиеся в распоряжении, касаются генетической природы пигментного ретинита, которая частично передается по наследству от поколения к поколению по известным генетикам механизмам. Большая часть форм пигментного ретинита является наследственной, и до настоящего времени идентифицировано три возможных типа наследования: аутосомно-доминантный, аутосомно- рециссивный и сцепленный с полом (связанный с X-хромосомой).

Основными симптомами заболевания являются сумеречная и ночная слепота, т.е. затрудненное зрение при слабом освещении и проблемы адаптации при переходе от яркого освещения к темноте и наоборот. Это явление вызвано тем, что, по меньшей мере, в большинстве случаев на ранних стадиях развития болезни поражаются палочки сетчатки. Другими типичными симптомами являются реакция на очень яркий свет (ослепление), постепенное сужение поля зрения, которое само по себе проявляется в виде трудности восприятия боковых объектов или спотыкания о ступеньки или другие низкие препятствия, в конце концов все это приводит к полной слепоте.

Длительность заболевания очень различна, но течение его всегда постепенно и в конечном счете ведет к потере трудоспособности. В большинстве случаев описанные ранее симптомы усиливаются, поле зрения становится все более и более суженным и в конце концов полностью закрывается. Появляются другие жалобы, среди них ослепление, невозможность различать цвета и особая форма катаракты. К сожалению, во многих случаях в конце наступает абсолютная слепота.

При диагностике заболевания обычно полагаются на такие тесты, как исследование глазного дна, проверка поля зрения, электроретинограммы, флюорангиография и визуальный осмотр:

- проверка глазного дна имеет целью оценку состояния сетчатки и проверку присутствия характерных пигментных пятен на характерном "остеобластоподобном" образовании. Несмотря на то, что некоторые редкие формы пигментного ретинита проявляют те же самые симптомы, они, однако, не характеризуются пятнами на глазном дне;

- проверка поля зрения позволяет оценить чувствительность различных участков сетчатки в отношении световых раздражителей. Полезно иметь объективную информацию о трудностях зрительного восприятия, возникающих у пациента;

- электроретинограмма (ERG) представляет собой регистрацию (запись) электрической активности сетчатки в ответ на конкретные световые раздражители, что позволяет давать различные оценки функциональности двух различных типов фоторецепторов (т.е. палочковидным и колбочковидным зрительным клеткам). Электроретинограмма является очень важным исследованием при диагностике пигментного ретинита, так как даже когда болезнь находится в начальных стадиях, результирующая кривая почти всегда или очень ровная или полностью отсутствует;

- флюорангиографию осуществляют с помощью внутривенной инъекции флуоресцентного вещества и последующей фотографии сетчатки в разное время. Действительно, за счет кровотока флуоресцентное вещество достигает сетчатки, где оно окрашивает артерии, капилляры и вены и тем самым делает их видимыми, так же, как функциональное состояние их стенок;

- визуальный осмотр позволяет оценить видимую остроту и заключается в чтении пациентом букв различного размера на расстоянии три метра.

Хотя пигментный ретинит идентифицировали и классифицировали, примерно, в середине прошлого века, достигнут очень небольшой прогресс как в области возможного лечения, так и в равно важной области понимания причин, которые определяют и регулируют его течение. В настоящее время направления, по которым широко проводятся международные исследования, представляют собой генетический подход, когда пытаются идентифицировать ген или гены, отвечающие за заболевание, и тем самым сделать возможным последующее вмешательство с помощью новейших методов рекомбинантной ДНК (генной инженерии), трансплантационный подход, целью его является совершенствование метода, который бы сделал возможным трансплантацию ретинальной ткани или, по меньшей мере, трансплантацию здоровых клеток в больную сетчатку, и иммунологический подход, который предполагает проверку некоторых теорий, считающих, что в основе заболевания лежит некое изменение иммунологической системы.

Целью настоящего изобретения является создание фармакологической композиции в виде набора, который делает возможным эффективное лечение пигментного ретинита.

Другой целью настоящего изобретения является создание способа лечения пигментного ретинита, который сделал бы возможным постепенное восстановление остроты зрения, четкости изображения и восприятия цветов и в конце концов реконституцию нормальной электроретинограммы.

Согласно настоящему изобретению этих целей достигают, применяя особые ферменты, вводимые в фармацевтическую композицию в виде набора, которую используют для лечения пигментного ретинита с помощью инъекции в ретробульбарную ткань.

Более конкретно, применяемые ферменты представляют собой глутатионпероксидазу (далее в данном описании обозначаемую Фермент А), пролидазу (далее в данном описании обозначаемую Фермент В), глюкоза-6-фосфатдегидрогеназу (далее в данном описании обозначаемую Фермент С), которые применяются во временной последовательности и по методу, дополнительно описываемому ниже в данном описании.

Лечение может также включать (необязательно) применение альдозаредуктазы (далее в данном описании обозначаемую Фермент D), которая, как было обнаружено, применима тогда, когда - а это бывает в большинстве случаев - предметы видны не резко (нерезкое изображение, вуаль).

Ферменты, используемые при лечении по данному изобретению, продаются в лиофилизированной форме и их растворяют в физиологическом растворе, чтобы сделать их пригодными для лечения.

Каждый фермент - в растворе - вводят в виде ретробульбарной инъекции в каждый глаз ежедневно в течение трех дней, повторяя лечение еще в течение двух курсов, каждый из которых проводят через один месяц после предыдущего (для каждого фермента). На практике процедуру осуществляют следующим образом:

- одну дозу Фермента А инъецируют в ретробульбарную ткань каждого глаза ежедневно в течение трех дней в начале лечения, причем лечение повторяют затем на второй и третий месяц;

- на четвертый, пятый и шестой месяц ежедневно в течение трех дней инъецируют одну дозу Фермента В в ретробульбарную ткань каждого глаза;

- на седьмой, восьмой и девятый месяц ежедневно в течение трех дней инъецируют одну дозу Фермента С в ретробульбарную ткань каждого глаза;

- если необходимо, следующие три месяца в течение трех дней без перерыва продолжают лечение Ферментом D, причем способ введения точно повторяет способ введения предыдущих ферментов.

Дозы различных ферментов, применяемые при каждой инъекции (ежедневно), следующие:

Фермент А	0.03-0.05 Межд. Ед.
Фермент В	5-7 Межд. Ед.
Фермент С	7-9 Межд. Ед
Фермент D	7-9 Межд. Ед.

Предпочтительные дозы различных ферментов в каждой инъекции следующие:

Фермент А	0.04 Межд. Ед.
Фермент В	6.67 Межд. Ед.
Фермент С	8.00 Межд. Ед
Фермент D	8.00 Межд. Ед.

Эти дозы остаются постоянными для всех пациентов вне зависимости от типологии изменения. В частности, растворы ферментов готовят таким образом, чтобы указанные выше количества содержались в инъекции 0.4 мл. Например, растворы ферментов, пригодные для получения инъецируемых доз 0.4 мл, содержащих указанное выше предпочтительное количество ферментов, готовят следующим образом:

Фермент А:

В склянке, содержащей 10 Межд. Ед. лиофилизированного фермента, доводят объем до 100 мл, прибавляя физиологический раствор.

Фермент В:

В склянке, содержащей 1000 Межд. Ед. лиофилизированного фермента, доводят объем до 60 мл, прибавляя физиологический раствор.

Фермент С:

В склянке, содержащей 2000 Межд. Ед. лиофилизированного фермента, доводят объем до 100 мл, прибавляя физиологический раствор.

Фермент D:

В склянке, содержащей 2000 Межд. Ед. лиофилизированного фермента, доводят объем до 100 мл, прибавляя физиологический раствор.

Естественно, эти отношения можно модифицировать, если решают изменить дозу любого фермента в указанном выше интервале.

Ферменты вводят в аликвотных частях и интерактивных количествах, подходящих для введения в порядке, в котором они указаны выше, и циклы инъекций проводят без перерыва (ежедневно):

а) Фермент А в концентрации 0.03-0.05 Межд. Ед. в 0.4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

б) Фермент В, начиная через месяц после последнего введения Фермента А, в концентрации 5-7 Межд. Ед. в 0.4 мл физиологического раствора ежедневно три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

в) Фермент С, начиная через месяц после последнего введения Фермента В, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0.4 мл физиологического раствора ежедневно три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

г) Фермент D (необязательно) начинают вводить через месяц после последнего введения Фермента С, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0.4 мл физиологического раствора ежедневно три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз.

Ферменты содержатся в каждом наборе в лиофилизированной форме в количествах, достаточных, по меньшей мере, для одной полной серии введения, причем каждый фермент разделен на аликвотные части, содержащие количество, достаточное для одного трехмесячного цикла инъекций, т.е. восемнадцать инъекций, или для однодневного применения, т.е. две инъекции, и, необязательно, соответствующие дозы физиологического раствора для получения указанных аликвотных частей. В частности, в каждом наборе различные ферменты делят на одну или более аликвотных частей, каждая из которых содержит, в виде указанных выше предпочтительных лекарственных форм, 0.04- 0.72 Межд.Ед. Фермента А, 6.67-120 Межд.Ед. Фермента В, 8-144 Межд.Ед. Фермента С и, возможно, 8-144 Межд.Ед. Фермента D. Возможно также присутствие трех или более аликвотных частей физиологического раствора, 0.4-7.2 мл каждая.

У пациентов, проходивших лечение по данному изобретению, обнаружено постепенное увеличение остроты и поля зрения, улучшение цветового восприятия и четкости образов (распознавания). Их электроретинограммы понемногу улучшались, в конце концов восстанавливались. Проводимое лечение дало положительный результат у всех пациентов, хотя через различные промежутки времени. Последующие проверки через 5-8 лет показали, что достигнутое улучшение является долговременным и не дает каких-либо побочных эффектов.

Некоторые экспериментальные данные подтверждают гипотезу, что пигментный ретинит может вызываться дефектом фермента, который изменяет метаболизм сетчатки, не только модифицируя процесс зрения, но облегчая также аккумуляцию пигментов (характерный признак заболевания).

Исследования, проведенные на кроликах (New Zealand/Fulvo di Borgogna), показывают, что тотальное ингибирование некоторых ферментов вызывает изменения электроретинограммы, снижая волну деполяризации до точки угасания и восстановление кривой после ретробульбарных инъекций глутатионпероксидазы (Фермент А) и пролидазы (Фермент В). Снижение у больных пигментным ретинитом уровня глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы и глутатионпероксидазы в эритроцитах продемонстрировано затем путем сравнения концентрации ферментов в эритроцитах этих пациентов с концентрацией этих ферментов в эритроцитах людей, не пораженных этим заболеванием, по внешнему виду вполне здоровых, причем обе группы однородны по полу и возрасту.

Далее представлены результаты ферментной терапии пациентов с пигментным ретинитом согласно настоящему изобретению.

В таблице представлены результаты терапии (путем последовательного введения 3 ферментов - глутатионпероксидазы, пролидазы и глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы), полученные на 100 пациентах. Отражены данные по обоим глазам, таким образом анализируются результаты по 200 глазам. Данные, полученные в отношении остроты зрения, поля зрения и электроретинограммы, разделены на 4 класса по всем трем параметрам.

В отношении остроты зрения количество глаз в 1 м классе (3/10) до терапии равно 186, а после терапии снижается до 23. Обратная картина наблюдается в 4 классе (10/10), где до терапии число глаз было 0, а после возросло до 68.

Сходные результаты были получены для параметра поле зрения. В первом классе (10°) число глаз до терапии было 84, оно уменьшилось до 16 после терапии. Обратная картина наблюдается в 4 классе (>50°), с 6 глазами до терапии и 116 после. Улучшение поля зрения находится в обратной зависимости с распределением пигмента меланина, наблюдаемого при проверке глазного дна.

В отношении электроретинограммы все пациенты до терапии демонстрируют «угасающую» ERG. После терапии многие ERG изменились на «очень угнетенную» (34%) или «угнетенную» (34%), но ни один глаз не показал «нормальную» модель.

По трем параметрам разница в количестве глаз по 4 классам до и после терапии, проанализированная с помощью непараметрического теста χ² (вычисленного средствами статистической программы Stat-View), статистически высокозначима (Р<0.001).

Острое зрение
классы	≤3/10	4-6/10	7-9/10	≥10/10
до терапии	186	14	0	0
после терапии	23	44	65	68
Поле зрения
классы	≤10°	11-30°	31-50°	≥50°
до терапии	84	66	44	6
после терапии	16	20	48	116
Электоретинограмма
классы	угасающие	угнетенные	очень угнетенные	нормальные
до терапии	200	0	0	0
после терапии	63	69	68	0

1. Фармацевтический набор для лечения пигментного ретинита, содержащий ферменты глутатионпероксидазу (Фермент А), пролидазу (Фермент В) и глюкоза-6-фосфатдегидрогеназу (Фермент С) в аликвотных частях и интерактивных количествах, подходящих для введения:

а) Фермента А в концентрации 0,03-0,05 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

б) Фермента В, начиная через месяц после последнего введения Фермента А, в концентрации 5-7 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

в) Фермента С, начиная через месяц после последнего введения Фермента В, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз.

2. Набор по п.1, дополнительно содержащий фермент альдозаредуктазу (Фермента D) в количестве, необходимом для введения, начиная через месяц после последнего введения Фермента С, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз.

3. Набор по п.2, отличающийся тем, что концентрация Фермента А составляет 0,04 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора, концентрация Фермента В составляет 6,67 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора и концентрация Фермента С составляет 8 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора, концентрация Фермента D равна 8 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора.

4. Набор по п.2, отличающийся тем, что он содержит указанные ферменты в лиофилизированной форме, в количествах, достаточных, по меньшей мере, для одной серии (одного курса) введения ферментов а) - в) и, необязательно, также фермента D, разделенных на аликвотные части, содержащие для каждого фермента количество фермента, достаточное для состава указанных аликвотных частей.

5. Набор по любому из пп.2-4, отличающийся тем, что он содержит указанные ферменты в лиофилизированной форме, разделенные на одну или более аликвотных частей, каждая из которых содержит 0,04-0,72 Межд. Ед. Фермента А, 6,67-120 Межд. Ед. Фермента В, 8-144 Межд. Ед. Фермента С, и, необязательно, 8-144 Межд. Ед. Фермента D, и, необязательно, три или более аликвотных частей физиологического раствора, 0,4-7,2 мл каждая.

6. Применение ферментов глутатионпероксидазы (Фермент А), пролидазы (Фермент В), глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы (Фермент С) для получения фармацевтического набора для лечения пигментного ретинита с помощью инъекции в ретробульбарную ткань, причем указанный набор содержит указанные ферменты в аликвотных частях и интерактивных количествах, подходящих для введения:

а) Фермента А в концентрации 0,03-0,05 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

б) Фермента В, начиная через месяц после последнего введения Фермента А, в концентрации 5-7 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

в) Фермента С, начиная через месяц после последнего введения Фермента В, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

7. Применение по п.6, при котором набор дополнительно содержит альдозаредуктазу (Фермент D) в количестве, необходимом для введения начиная через месяц после последнего введения Фермента С, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз.

8. Применение по п.7, при котором концентрация Фермента А составляет 0,04 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора, концентрация Фермента В составляет 6,67 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора и концентрация Фермента С составляет 8 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора, концентрация Фермента D равна 8 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора.

9. Применение по п.7, при котором набор содержит указанные ферменты в лиофилизированной форме, в количествах, достаточных, по меньшей мере, для одной серии (одного курса) введения ферментов А, В и С и, необязательно, также D, разделенных на аликвотные части, содержащие для каждого фермента количество фермента, достаточное для состава указанных аликвотных частей.

10. Применение по любому из пп.7-9, при котором набор содержит указанные ферменты в лиофилизированной форме, разделенные на одну или более аликвотных частей, каждая из которых содержит 0,04-0,72 Межд. Ед. Фермента А, 6,67-120 Межд. Ед. Фермента В, 8-144 Межд. Ед. Фермента С, и, необязательно, 8-144 Межд. Ед. Фермента D, и, необязательно, три или более аликвотных частей физиологического раствора, 0,4-7,2 мл каждая.

11. Способ лечения пигментного ретинита, предусматривающий введение с помощью инъекции в ретробульбарную ткань:

а) глутатионпероксидазы (Фермента А) в концентрации 0,03-0,05 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

б) пролидазы (Фермента В), начиная через месяц после последнего введения Фермента А, в концентрации 5-7 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз;

в) глюкоза-6-фосфатдегидрогеназы (Фермента С), начиная через месяц после последнего введения Фермента В, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз.

12. Способ по п.11, дополнительно предусматривающий введение с помощью инъекции в ретробульбарную ткань альдозаредуктазы (Фермента D), начиная через месяц после последнего введения Фермента С, в концентрации 7-9 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора три дня подряд в течение трех месяцев с месячными интервалами и в каждый глаз.

13. Способ по п.12, отличающийся тем, что концентрация Фермента А составляет 0,04 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора, концентрация Фермента В составляет 6,67 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора и концентрация Фермента С составляет 8 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора, концентрация необязательного Фермента D равна 8 Межд. Ед. в 0,4 мл физиологического раствора.