Способ получения мембран эритроцитов

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Способ включает выделение эритроцитов из крови и их гемолиз, при этом к гемолизату для осаждения мембран добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ, проводят центрифугирование при 1000g в течение 5 мин, затем супернатант удаляют, а осадок промывают буферным раствором в присутствии лантана, после удаления супернатанта, добавляют 1 мМ ЭДТА. Изобретение обеспечивает создание быстрого, не требующего ультрацентрифугирования способа получения мембран эритроцитов, позволяющего сократить время получения мембран эритроцитов в 10 раз. 1 ил.

 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к лабораторным методам исследования.

Известно, что для электрофоретического разделения мембранных белков эритроцитов в системе додецилсульфат натрия - полиакриламидный гель необходимо получить мембраны, свободные от гемоглобина (Dodge J.T. et al., Arch. Biochem. Biophys. - 1963. - Vol.100. - P.118-130; Fairbanks et al., Biochemistry. - 1971. - Vol.10. - P.2606-2617).

Известен метод получения мембран эритроцитов, свободных от гемоглобина (Dodge J.T et al., Arch. Biochem. Biophys. - 1963. - Vol.100. - P.118-130), включающий выделение эритроцитов из крови и их гемолиз в буферной системе с низкой ионной силой, с последующим ультрацентрифугированием при 30000g. После ультрацентрифугирования супернатант удаляется. В результате получаются чистые мембраны, свободные от гемоглобина. Однако этот способ требует ультрацентрифугирование и длительного времени (ультрацентрифугирование 3 раза по 30 минут).

Поэтому создание быстрого, не требующего ультрацентрифугирования способа получения мембран эритроцитов является актуальной задачей.

Решение поставленной задачи достигается способом, который заключается в том, что эритроциты выделяют из крови, гемолизируют в растворе с низкой ионной силой, добавляют к гемолизату хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ, после агрегации мембраны центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. После этого супернатант убирают, еще раз добавляют хлористый лантан и центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. По окончании центрифугирования супернатант убирают, а к мембранам эритроцитов для нейтрализации лантана добавляют 1 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусной кислоты). Далее мембраны эритроцитов используют для электрофоретического разделения белков.

Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток крови центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Эритроциты гемолизируют в 20 мМ трис-HCl буфере (рН 8.5; 0-2°С). После гемолиза эритроцитов добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ. В этом диапазоне концентраций лантана происходит наиболее полное осаждение мембран. После агрегации мембран эритроцитов их центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. Супернатант удаляют, а к мембранам еще раз добавляют буферный раствор с лантаном. Центрифугируют при 1000g в течение 5 мин. Супернатант убирают, а к мембранам для нейтрализации лантана добавляют 1 мМ ЭДТА. Полученные мембраны используют для электрофоретического разделения белков эритроцитов в системе додецилсульфат натрия - полиакриламидный гель (Steck T.L. J. Mol. Biol. - 1972. - Vol.66 - P.295-305).

Пример. На чертеже представлена электрофореграмма мембранных белков эритроцитов, полученных методом Dodge et al. 1963 (а) и лнтановым способом (б). Из чертежа видно, что электрофоретическое разделение мембран эритроцитов, полученных с использованием лантана, не отличается от классического метода.

Таким образом, способ не требует ультрацентрифугирования и сокращает время получения мембран эритроцитов в 10 раз.

Способ получения мембран эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и их гемолиз, отличающийся тем, что к гемолизату для осаждения мембран добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 0,8-1,2 мМ, проводят центрифугирование при 1000 g в течение 5 мин, затем супернатант удаляют, а осадок еще раз промывают буферным раствором в присутствии лантана, после удаления супернатанта добавляют 1 мМ ЭДТА.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, ветеринарии, точнее к производству лекарственных средств, а именно к способу подготовки сырья для производства лекарственных средств из крови.Предложен способ приготовления гемоглобинсодержащего средства из эритроцитов, при этом взвесь донорских эритроцитов замораживают при температуре от минус 30°С до минус 60°С и хранят при температуре не выше минус 18°С.
Изобретение относится к медицине, конкретно к гематологии, и касается разработки новых направлений в использовании крови животных для получения из них новых препаратов и повышения их качества.
Изобретение относится к медицине, онкологии и может быть использовано в комплексном лечении рака, в частности рака молочной железы и местно-распространенного рака ободочной кишки.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в комплексном лечении рака молочной железы T1-2N0-1М0. .
Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии, и касается лечения двусторонних гнойных опухолевидных образований придатков матки. .
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии. .
Изобретение относится к медицине, в частности к трансфузиологии, и может быть использовано для получения эритроцитсодержащих компонентов. .
Изобретение относится к медицине, а именно к комбустиологии, и может быть использовано у больных с дефектами кожного покрова, в том числе после ожогов. .
Изобретение относится к офтальмологии и может быть использовано для консервативного лечения заболеваний роговицы, сетчатки и зрительного нерва. .
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении местно-распространенного рака легкого, его неоперабельных форм. .
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения рака ободочной кишки
Изобретение относится к медицине и может быть использовано при лечении алкоголизма
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и касается получения новых препаратов из крови животных
Изобретение относится к медицине, точнее к трансфузиологии, а именно к выделению растворов гемоглобина, очищенных от стромальных компонентов
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при хирургическом лечении рака прямой кишки

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в комплексном лечении первично нерезектабельных местно-распространенных форм рака молочной железы
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и касается разработки способа обработки цельной крови или ее компонентов
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для снижения концентрации аммиака в крови с помощью внедренного в эритроциты фермента глутаминсинтетазы

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для лечения депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатической миелосупрессии
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении рака молочной железы (РМЖ)
Наверх