Производные индола или бензимидазола для модуляции ikb-киназы
Изобретение относится к новым соединениям формулы I
и/или стереоизомерная форма соединения формулы I, и/или физиологически совместимая соль соединения формулы I, причем Х и М являются одинаковыми или разными и, независимо друг от друга, обозначают атом N или СН, R1 и R11 являются одинаковыми или разными и, независимо друг от друга, обозначают: 1) атом водорода, 2) F, Cl, J или Br; R2 обозначает: 1) гетероарильный остаток из группы, включающей 1,3,4-оксадиазол, оксадиазолидиндион, оксадиазолон, тиазол, и гетероарильный остаток является незамещенным или, независимо друг от друга, одно-, двух- или трехкратно замещенным: 1.1. кето-остатком; 2) -C(O)-R5, где R5 обозначает атом водорода или -(С1-С4)-алкил, либо 3) -C(O)-N(R7)-R8, где R7 и R8 независимо друг от друга обозначают атом водорода, -(C1-С4)-алкил-ОН, -O-(С1-С4)-алкил или -(С1-С4)-алкил, R3 обозначает атом водорода или -(C1-С4)-алкил, R4 обозначает: 1) гетероарильный остаток из группы, включающей тиазол, изотиазол, пиридин, пиразин, пиримидин, причем гетероарильный остаток незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен, независимо друг от друга, -(С1-С5)-алкилом, галогеном, трифторметилом, или 2) арильный остаток из группы, включающей фенил. Изобретение также относится к способу получения, лекарственному средству и к применению соединений на основе формулы I, обладающих активностью в отношении IkB-киназы. Технический результат - получение новых соединений, обладающих полезными биологическими свойствами. 4 н. и 2 з.п. ф-лы.
Изобретение касается производных индола или бензимидазола, ингибирующих IkB-киназу, способа их получения и их применения в качестве лекарственных средств.
В заявке WO 94/12478 среди прочих описываются производные индола, ингибирующие агрегацию тромбоцитов. В заявках WO 01/00610 и WO 01/30774 описываются производные индола и бензимидазола, которые могут модулировать NFkB.
NFkB является гетеродимерным фактором транскрипции, который может активировать большое число генов, кодирующих, среди прочих, предвоспалительные цитокины, такие как IL-1, IL-2, TNFα или IL-6. NFkB находится в цитозоле клеток, образуя комплекс с его встречающимся в природе ингибитором IkB. Стимуляция клеток, например, посредством цитокинов, приводит к фосфорилированию и последующему протеолитическому расщеплению IkB. Это протеолитическое расщепление ведет к активации NFkB, который затем переходит в ядро клетки и там активирует множество предвоспалительных генов.
При заболеваниях, таких как ревматический артрит (при воспалении), остеоартрит, астма, инфаркт миокарда, болезни Альцгеймера, диабета типа II, воспалительные заболевания кишечника "inflammatory bowel disease" или артериосклероз, NFkB является активизированным сверх нормальной меры. Торможение NFkB применяется также при лечении рака, так как оно используется в этом случае само по себе или для усиления цитостатического лечения. Было показано, что лекарственные средства, такие как глюкокортикоиды, салицилаты или соли золота, которые используются при лечении ревматизма, ингибирующе встраиваются в различные сайты сигнальной цепи, активирующей NFkB, или непосредственно интерферируют с транскрипцией генов.
Первым этапом в названных сигнальных каскадах является расщепление IkB. Это фосфорилирование регулируется специфической IkB-киназой. До сих пор неизвестны ингибиторы, ингибирующие специфическую IkB-киназу.
Недостатком известных ингибиторов IkB-киназы часто является недостаточная специфичность ингибирования только одного класса киназ. Например, большинство ингибиторов IkB-киназы тормозят одновременно несколько различных киназ, так как каталитические домены этих киназ имеют похожую структуру. Вследствие этого ингибиторы нежелательным образом воздействуют на многие ферменты, также на ферменты с жизненной функцией.
В заявке WO 01/30774 уже были описаны производные индола, которые могут модулировать NFkB и оказывают сильное ингибирующее действие на IkB-киназу. Соединения, описанные в заявке WO 01/30774, которые приведены в примерах, однако оказывают сильное тормозящее действие также на другие киназы такие, как cAMP-зависимую протеинкиназу, протеинкиназу С или казеинкиназу II. Однако некоторые эти производные индола при улучшении специфичности проявляют пониженное ингибирование IkB-киназы. Далее достигаемый уровень плазмы крови посредством соединений, описанных в заявке WO 01/30774, недостаточен для орального введения этих производных.
При поиске эффективных соединений для лечения ревматического артрита (при воспалении), остеоартрита, астмы, инфаркта миокарда, болезней Альцгеймера, раковых заболеваний (потенцирование цитотоксической терапии) или артериосклероза было обнаружено, что производные индола и бензимидазола согласно изобретению не имеют вышеназванных недостатков. Производные индола и бензимидазола согласно изобретению являются сильными ингибиторами IkB-киназы, при этом очень селективно ингибируют киназы и характеризуются высоким уровнем плазмы крови после орального введения.
Таким образом, изобретение касается соединения формулы I
и/или стереоизомерной формы соединения формулы I, и/или физиологически совместимой соли соединения формулы I, причем
X и M являются одинаковыми или разными и независимо друг от друга обозначают атом N или CH,
R1 и R11 являются одинаковыми или разными и независимо друг от друга обозначают
1. атом водорода,
2. F, Cl, J или Br,
3. -(C1-C4)-алкил,
4. -CN,
5. -CF3,
6. -OR5, где R5 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
7. -N(R5)-R6, где R5 и R6 независимо друг от друга обозначают атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
8. -C(O)-R5, где R5 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил, или
9. -S(O)X-R5, где x обозначает целое число ноль, 1 или 2 и R5 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
R2 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы, включающей 3-гидроксипирро-2,4-дион, имидазол, имидазолидин, имидазолин, индазол, изотиазол, изотиазолидин, изоксазол, 2-изоксазолидин, изоксазолидин, изоксазолон, морфолин, оксазол, 1,3,4-оксадиазол, оксадиазолидиндион, оксадиазолон, 1,2,3,5-оксатиадиазол-2-оксид, 5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол, 5-оксо-1,2,4-тиадиазол, пиперазин, пиразин, пиразол, пиразолин, пиразолидин, пиридазин, пиримидин, тетразол, тиадиазол, тиазол, тиоморфолин, триазол или триазолон, и гетероарильный остаток является незамещенным или, независимо друг от друга, одно-, двух- или трехкратно замещенным
1.1. -C(O)-R5, где R5 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
1.2. -(C1-C4)-алкилом,
1.3. -O-R5, где R5 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
1.4. -N(R5)-R6, где R5 и R6 независимо друг от друга обозначают атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
1.5. галогеном,
1.6. кето-остатком,
2. -C(O)-R5, где R5 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
3. -C(O)-OR5, где R5 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил, или
4. -C(O)-N(R7)-R8, где R7 и R8 независимо друг от друга обозначают атом водорода, -(C1-C4)-алкил-ОН, -О-(C1-C4)-алкил или -(C1-C4)-алкил,
R3 обозначает атом водорода или -(C1-C4)-алкил,
R4 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы, включающей пиррол, фуран, тиофен, имидазол, пиразол, оксазол, изоксазол, тиазол, изотиазол, тетразол, 1,2,3,5-оксатиадиазол-2-оксиды, триазолоны, оксадиазолон, изоксазолон, оксадиазолидиндион, триазол, 3-гидроксипирро-2,4-дионы, 5-оксо-1,2,4-тиадиазолы, пиридин, пиразин, пиримидин, индол, изоиндол, индазол, фталазин, хинолин, изохинолин, хиноксалин, хиназолин, циннолин, β-карболин и бензанелированные, циклопента- или циклогекса-производные этих гетероарильных остатков, причем гетероарильный остаток незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен, независимо друг от друга, -(C1-C5)-алкилом, -(C1-C5)-алкокси, галогеном, нитро, амино, трифторметилом, гидроксилом, гидрокси-(C1-C4)-алкилом, метилендиокси, этилендиокси, формилом, ацетилом, циано, гидроксикарбонилом, аминокарбонилом или -(C1-C4)-алкоксикарбонилом, или
2. арильный остаток из группы, включающей фенил, нафтил, 1-нафтил, 2-нафтил, бифенилил, 2-бифенилил, 3-бифенилил и 4-бифенилил, антрил или флуоренил, и арильный остаток незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен, независимо друг от друга, -(C1-C5)-алкилом, -(C1-C5)-алкокси, галогеном, нитро, амино, трифторметилом, гидроксилом, гидрокси-(C1-C4)-алкилом, метилендиокси, этилендиокси, формилом, ацетилом, циано, гидроксикарбонилом, аминокарбонилом или -(C1-C4)-алкоксикарбонилом.
Изобретение касается далее соединений формулы I, причем X и M являются одинаковыми или разными и независимо друг от друга обозначают атом N или CH,
R1 и R11 определены, как в указано выше в пунктах 1-9,
R2 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы, включающей имидазол, изотиазол, изоксазол, 2-изоксазолидин, изоксазолидин, изоксазолон, 1,3,4-оксадиазол, оксадиазолидиндион, 1,2,3,5-оксадиазолон, оксазол, 5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол, тетразол, тиадиазол, тиазол, триазол или триазолон, и гетероарильный остаток является незамещенным или, независимо друг от друга, одно-, двух- или трехкратно замещенным
1.1. кето-остатком,
1.2. галогеном или
1.3. -(C1-C2)-алкилом, или
2. -C(O)-N(R7)-R8, где R7 и R8, независимо друг от друга, обозначают атом водорода, -(C1-C4)-алкил-ОН, -О-(C1-C4)-алкил или -(C1-C4)-алкил,
R3 обозначает атом водорода, метил или этил,
R4 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы ненасыщенных, частично насыщенных или полностью насыщенных циклов, образованных из пиридина, пиразина, пиримидина, пиридазина, пиррола, фурана, тиофена, имидазола, пиразола, оксазола, изоксазола, тиазола, триазола или изотиазола, причем гетероарильный остаток незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен, независимо друг от друга, -(C1-C4)-алкилом, -(C1-C4)-алкокси, F, Cl, J, Br, нитро, амино, трифторметилом, гидроксилом, гидрокси-(C1-C4)-алкилом, метилендиокси, этилендиокси, формилом, ацетилом, циано, гидроксикарбонилом, аминокарбонилом или -(C1-C4)-алкоксикарбонилом, или
2. фенил, и фенил незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен, независимо друг от друга, F, Cl, J, Br, CF3, -OH, (C1-C4)-алкилом или -(C1-C4)-алкокси.
Далее изобретение касается соединений:
[(S)-2-дифениламино-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
[(S)-1-(5-оксо-4,5-дигидро-1,3,4-оксадиазол-2-ил)-2-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
[2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-1-(4H-[1,2,4]триазол-3-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
[1-карбамоил-2-(фенил-тиазол-2-ил-амино)-этил]-амид (S)-2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
[1-метоксикарбамоил-2-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-этил]-амид (S)-2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
[1-(2-гидрокси-этилкарбамоил)-2-(фенил-пиримидин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
(S)-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбонил]-амино}-3-[фенил-(4-трифторметил-пиримидин-2-ил)-амино]-пропионовая кислота,
{1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-(5-метил-пиримидин-2-ил)-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты,
((S)-1-карбамоил-2-дифениламино-этил)-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-бензимидазол-5-карбоновой кислоты или
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты.
Под понятием «галоген» имеют в виду фтор, хлор, бром или иод. Под понятиями «-(С1-С5)-алкил» или «-(С1-С5)-алкокси» имеют в виду углеводородные остатки, углеродные цепи которых являются неразветвленными или разветвленными и содержат от 1 до 5 атомов углерода, такие как метил, этил, пропил, н-бутил, пентил или трет.-бутил. Под понятием «гетероарильный остаток из группы ненасыщенных, частично насыщенных или полностью насыщенных циклов, образованных из пиридина, пиразина, пиримидина, пиридазина, пиррола, фурана, тиофена, имидазола, пиразола, оксазола, изоксазола, тиазола, изотиазола» имеют в виду, например, соединения такие, как пиперазин, пиразолин, имидазолин, пиразолидин, имидазолидин, тетрагидропиридин, изоксазолин, изоксазолидин, морфолин, изотиазолин, изотиазолидин, тетрагидро-1,4-тиазин или пиперидин.
Получение соединений формулы I осуществляют, например, как описано в заявках WO 01/00610 и WO 01/30774. Исходные вещества для химических превращений являются известными или могут быть легко получены описанными в литературе способами.
Далее изобретение касается способа получения соединения формулы I и/или стереоизомерной формы соединения формулы I, и/или физиологически совместимой соли соединения формулы I, отличающегося тем, что
а) соединение формулы IV
где R1, R2 и R4 определены, как в формуле I, подвергают взаимодействию с хлорангидридом или активированным сложным эфиром соединения формулы III
причем D1 обозначает -COOH, и R11, X, M и R3 определены как в формуле I, в присутствии основания или, в случае необходимости, обезвоживающего средства в растворе, и переводят в соединение формулы I,
b) соединение формулы I, полученное по способу a), вследствие своей химической структуры существующее в энантиомерных формах, разделяют путем солеобразования с энантиомерно чистыми кислотами или основаниями, хроматографией на хиральных стационарных фазах или превращением посредством хиральных энантиомерно чистых соединений таких, как аминокислоты, отделением таким образом полученных диастереомеров, и отщеплением хиральных вспомогательных групп в чистых энантиомерах, или
c) соединение формулы I, полученное по способу a) или b), выделяют или в свободной форме, или, в случае наличия кислотных или основных групп, переводят в физиологически совместимые соли.
Получение производных индол- или бензимидазолкарбоновых кислот осуществляется по методике, описанной в Houben-Weyl "Methoden der Org. Chemie", Band E6-2A или E6-2B. Так, для получения производных индол- или бензимидазолкарбоновых кислот формулы III предпочтительно могут подвергаться взаимодействию гидразинобензойные кислоты и арил- или гетероарилкетоны, в присутствии полифосфорной кислоты в качестве растворителя при 145оС. Получение необходимых гидразинобензойных кислот осуществляют известными специалистам способами, например, из соответствующих анилинов бензойной кислоты, арил- или гетероарилкетоны также получают общепринятыми среди специалистов способами, например, из соответствующих хлорангидридов кислот или нитрилов посредством взаимодействия, например, с металлоорганическими соединениями.
Для конденсации соединений формулы IV с соединениями формулы III предпочтительно используют сами по себе хорошо известные специалистам из химии пептидов способы присоединения (см., например, Houben-Weyl, Methoden der Organischen Chemie, Band 15/1 и 15/2, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974). В качестве средств для конденсации или реагентов присоединения имеют в виду такие соединения, как карбонилдиимидазол, карбодиимид, как дициклогексилкарбодиимид или диизопропилкарбодиимид (DIC), О-((циано(этокси-карбонил)-метилен)амино)-N,N,N'N'-тетраметилурониум-тетрафторборат (TOTU) или ангидрид пропилфосфоновой кислоты (PPA).
Конденсация может проводиться в стандартных условиях. При конденсации, как правило, необходимо, чтобы имеющиеся нереагирующие аминогруппы были защищены обратимыми защитными группами. Это относится равным образом к не участвующим в реакции карбоксильным группам, которые во время конденсации предпочтительно находятся в виде -(С1-С6)-алкиловых сложных эфиров, бензиловых сложных эфиров или трет.-бутиловых сложных эфиров. Защита аминогрупп является излишней, если аминогруппы еще находятся в форме стадии предшественника, как нитрогруппы или цианогруппы, и образуются только после конденсации посредством гидрирования. После конденсации имеющиеся защитные группы отщепляют пригодным образом. Например, NO2-группы (гуанидиновая защита в аминокислотах), бензилоксикарбонильные группы и бензильные группы в бензиловых сложных эфирах могут быть удалены гидрированием. Защитные группы трет.-бутильного типа отщепляются в кислых условиях, в то время как остаток 9-флуоренилметилоксикарбонильного остатка удаляют с помощью вторичных аминов.
Изобретение касается также лекарственных средств, отличающихся эффективным содержанием, по меньшей мере, одного соединения формулы I и/или одной физиологически совместимой соли соединения формулы I, и/или, в случае необходимости, одной стереоизомерной формы соединения формулы I, вместе с фармацевтически пригодными и физиологически совместимыми носителем, добавкой и/или другими биологически активными и вспомогательными веществами.
Благодаря фармакологическим свойствам соединения согласно изобретению пригодны для профилактики и лечения всех заболеваний, протекание которых обусловлено повышенной активностью IkB-киназы. К ним относятся, например, хронические заболевания двигательного аппарата, такие, как воспалительные, иммунологически или обменом веществ обусловленные острые и хронические артриты, артропатии, ревматоидный артрит, или дегенеративные заболевания суставов, такие, как остеоартрозы, спондилезы, диабет типа II, воспалительные заболевания кишечника, атрофия хряща после травмы сустава или длительного положения покоя сустава после повреждения мениска или коленной чашечки, или разрывов связок, или заболевания соединительной ткани такие, как коллагенозы и периодонтальные заболевания, миалгии и нарушения обмена веществ кости, или заболевания, обусловленные сверхэкспрессией фактора некроза опухоли альфа (TNFα) или повышенной концентрацией TNFα такие, как истощение, рассеянный склероз, черепно-мозговая травма, болезнь Крона и язвы кишечника, или заболевания такие, как артериосклероз, стенозы, ульцерация, болезнь Альцгеймера, диссимиляция мышц, раковые заболевания (потенцирование цитотоксической терапии), инфаркт миокарда, подагра, сепсис, септический шок, эндотоксический шок, вирусные инфекции такие, как грипп, гепатит, тяжелые вирусные инфекции (HIV-инфекции), СПИД, или заболевания, вызванные аденовирусами или герпесвирусами, паразитарные инфекции такие, как малярия или лепра, грибковые или дрожжевые инфекции, воспаления мозговых оболочек, хронические воспалительные легочные заболевания такие, как хронический бронхит или астма, острые респираторные дистрессовые синдромы, острый синовит, туберкулез, псориаз, диабет, лечение острых или хронических реакций отторжения органа реципиента против трансплантированного органа, хронические заболевания «трансплантат против хозяина» и воспалительные заболевания сосудов. Названные заболевания можно лечить соединениями согласно изобретению в основном специфически и с минимальным спектром побочного действия, так как в основном ингибируется только IkB-киназа.
Лекарственные средства согласно изобретению можно вводить орально, путем ингаляции, ректально или чрезкожно, или путем подкожных, внутрисуставных, внутрибрюшинных или внутривенных инъекций. Предпочтительно оральное введение.
Изобретение касается также способа получения лекарственного средства, отличающегося тем, что, по меньшей, одно соединение формулы I с фармацевтически пригодным и физиологически совместимым носителем и, в случае необходимости, другими пригодными биологически активными веществами, добавками или вспомогательными веществами доводят до пригодной формы введения.
Пригодными твердыми или галеновыми препаративными готовыми формами являются, например, грануляты, порошки, драже, таблетки, (микро)капсулы, суппозитории, сиропы, соки, суспензии, эмульсии, капли или растворы для инъекций, а также препараты с пролонгированным высвобождением биологически активного вещества, для получения которых используются обычные вспомогательные вещества, как носители, распылители, связующие, вещества для покрытий, агенты набухания, вещества, придающие скользкость или смазки, вкусовые добавки, подсластители и агенты растворения. В качестве часто используемых вспомогательных веществ называют карбонат магния, диоксид титана, лактозу, маннит и другие сахара, тальк, молочный белок, желатин, крахмал, целлюлозу и ее производные, животные и растительные масла, как рыбий жир, подсолнечное, арахисовое или кунжутное масло, полиэтиленгликоль и растворитель, как, например, стерильная вода, и одно- или многоатомные спирты как глицерин. Предпочтительно фармацевтические препараты изготавливают и вводят в разовых дозах, причем каждая разовая доза содержит в качестве активного компонента одну определенную дозу соединения формулы I согласно изобретению. Для твердых разовых доз в виде таблеток, капсул, драже или суппозиториев эта доза может составлять вплоть до около 1000 мг, предпочтительно от приблизительно 50 до 300 мг, и для инъекционных растворов в форме ампул вплоть до около 300 мг, предпочтительно от приблизительно 10 до 100 мг. Для лечения взрослых пациентов весом около 70 кг, в зависимости от эффективности соединения согласно формуле I, показана суточная доза от приблизительно 20 до 1000 мг биологически активного вещества, предпочтительно от приблизительно 100 до 500 мг. При известных условиях, однако, также могут быть использованы большие или меньшие суточные дозы. Введение суточной дозы может осуществляться как посредством одноразового введения в форме отдельной разовой дозы, или же нескольких меньших разовых доз, так и посредством многократного приема разделенных доз в определенные интервалы.
Целевые продукты, как правило, определяются посредством масс-спектрометрических методов (FAB-, ESI-МС). Температуру обозначают в градусах Цельсия, КТ (RT) обозначает комнатную температуру (от 22 до 26оС). Используемые сокращения или пояснены, или соответствуют общепринятым соглашениям. Далее изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Примеры получения.
А) Получение анилина.
А.1.) 2-(п-фторанилино)-пиридин(3)
Смесь из 29,34 г (0,264 моль) 4-фторанилина (1) и 29,98 г (0,264 моль) 2-хлорпиридина (2) нагревали 2 часа при 150оС. После охлаждения до комнатной температуры (КТ) распределяли между 500 мл 1 н. NaOH и 500 мл этилового эфира уксусной кислоты. Водную фазу 2 раза экстрагировали этилацетатом (по 300 мл) и объединенные органические фазы сушили сульфатом магния. После выпаривания растворителя осадок поглощали 500 мл этилацетата и добавляли около 40 г активированного угля. 10 минут перемешивали при КТ и затем отфильтровывали через кизельгур. Активированный уголь 4 раза промывали этилацетатом (по 1 л). Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок вымешивали из 120 мл этилацетата. Твердое вещество отсасывали и при 50оС сушили под вакуумом. Получили 41 г 2-(п-фторанилино)-пиридина (3); выход 83%.
Суммарная формула C11H9N2; М.В.=188,21; МС (M+H) 189,1.
1H ЯМР (CDCl3) 6,68-6,75 (м, 2H), 6,88 (с, 1H), 7,05 (т, 2H), 7,24-7,32 (м, 2H), 7,43-7,49 (м, 1H), 8,18 (д, 1H).
A.2.) 2-(анилино)-пиримидин (6).
Из 16,2 г анилина (4) посредством аналогичных превращений, вышеописанных в п. А.1.), посредством 2-хлорпиримидина (5) получили 9,15 г (31%) анилинопиримидина 6.
Суммарная формула C10H9N3; М.В.=171,08; МС (M+H) 172,2.
B.) Синтез аминокислоты через Z-серин-лактон 8
B.1) Метиловый эфир (S)-2-амино-3-дифениламино-пропионовой кислоты (11)
B.1.1.) N-бензилокси-карбонил-L-серин-β-лактон (8)
54,8 г (0,209 моль) трифенилфосфина суспендировали в 600 мл ацетонитрила и охлаждали до температуры от -35 до -45оС при исключении влажности. При этой температуре в течение 50 минут по каплям прибавляли 36,4 г (0,209 моль) диэтилового эфира азодикарбоновой кислоты. Затем перемешивали 15 минут при -35оС. К этой смеси затем медленно прикапывали раствор из 50 г (0,209 моль) N-бензилоксикарбонил-L-серина (7) в 500 мл ацетонитрила, так что температура не поднималась выше -35оС. Затем 12 час перемешивали при 5оС. По прекращению реакции реакционный раствор при пониженном давлении освобождали от растворителя, и сырой продукт очищали посредством хроматографии среднего давления на кизельгеле (DCM/ацетонитрил (AcCN):25/1). После удаления растворителя получили 20,8 г N-бензилокси-карбонил-L-серин-β-лактона (8) в виде тонких иголок; выход 45% (см. также Org. Synth. 1991 (70) 1ff.).
Суммарная формула C11H11NO4; М.В.=221,2; МС (M+H) 222,1.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 4,30 (м, 1H), 4,45 (м,1H) 5,10 (с, 2H), 5,22 (м, 2H), 7,45 (м, 5H), 8,20 (д, J=9,8 Гц, 1H).
B.1.2.) (S)-2-бензилоксикарбониламино-3-дифениламинопропионовая кислота (9)
5,0 г (22,6 ммоль) серинлактона (5) примешивали к 20 г (118,2 ммоль) дифениламина и 2 часа нагревали при 100оС. Сырой продукт очищали посредством хроматографии среднего давления на кизельгеле (DCM/метанол:9/1, затем ЭА(этилацетат)/н-гептан:4/1). После удаления растворителя получили 3,65 г (выход 42%) чистой 2-бензилоксикарбониламино-3-дифениламинопропионовой кислоты (9).
Суммарная формула C23H22N2O4; М.В.=390,44; МС (M+H) 391,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 3,85 (м, 1H), 4,18 (м, 1H), 4,3 (м, 1H), 4,9 (м, 2H), 6,9 (м, 5H), 7,25 (м, 10H).
B.1.3.) метиловый эфир (S)-2-бензилоксикарбониламино-3-дифениламино-пропионовой кислоты (10)
К 75 мл метанола прикапывали при -5оС 6,5 мл (89,1 ммоль) тионилхлорида и 15 мин перемешивали. Затем добавляли 3,6 г (9,22 ммоль) растворенной в 75 мл метанола 2-бензилоксикарбониламино-3-дифениламино-пропионовой кислоты (9) и далее перемешивали 3 часа при комнатной температуре. После выпаривания растворителя осадок поглощали этилацетатом и экстрагировали раствором карбоната натрия. После очистки посредством флэш-хроматографии (н-гептан/этилацетат 7:3) получили 2,76 г (50% выход) метилового эфира 2-бензилоксикарбониламино-3-дифениламино-пропионовой кислоты (10). Суммарная формула С24H24N2O4; М.В.=404,47; МС (M+H) 405,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 3,58(с, 3H), 3,95(м, 1H), 4,18(м,1H) 4,4(м,1H), 4,95(м, 2H), 6,9(м, 6H), 7,3(м,9H), 7,85(д,J=9,8 Гц, 1H).
B.1.4.) метиловый эфир (S)-2-амино-3-дифениламино-пропионовой кислоты (11)
Для отщепления защитной Z-группы 2,7 г (6,68 ммоль) производного (10), защищенного Z-группой, растворяли в 500 мл метанола и прибавляли в защитной атмосфере азота 100 мг катализатора (10% Pd(ОН)2-C). Затем замещали инертный газ большим избытком водорода и 2 часа встряхивали в атмосфере водорода. После завершения реакции отфильтровывали катализатор и концентрировали фильтрат. Получили 1,65 г (выход 91%) метилового эфира 2-амино-3-дифениламино-пропионовой кислоты (11).
Суммарная формула С16H18N2O2; М.В.=270,32; МС (M+H) 271,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 3,45 (с, 3H), 3,58 (м, 1H), 3,8 (м, 1H), 3,95 (м, 1H), 6,9 (м, 6H), 7,3(м, 4H).
B.2.) Синтез аминокислот через акриловую кислоту 13
B.2.1.) Разделение энантиомеров
Рацемические аминокислоты, полученные через акриловую кислоту, могли быть разделены на энантиомеры посредством препаративной ВЭЖХ (HPLC) с хиральными фазами, как, например, Chiralpak AD (Daicel) 100x380, КТ, поток 300 мл/мин. Чистота энантиомеров могла быть определена посредством аналитической ВЭЖХ как Chiralpak AD-H (Daicel) 4,6x250, 30оС, поток 1 мл/мин, комнатная температура).
B.2.2.) метиловый эфир (3-(N-4-фторфенил-N-2-пиридил)-амино)-2-(ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-пропионовой кислоты (14)
B.2.2.1.) метиловый эфир 2-(ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-акриловой кислоты (13)
50 г (0,228 моль) Boc-серина (12) растворяли в 300 мл ацетонитрила. Добавляли 107 г (0,493 моль) Boc-ангидрида и 2,64 г (22 ммоль) DMAP. Оставляли на ночь перемешиваться при КТ, отгоняли растворитель под вакуумом и осадок поглощали 500 мл этилацетата. Органическую фазу промывали 500 мл 1 н. HCl и сушили сульфатом магния. Посредством кристаллизации из 200 мл гептана при -30оС после отсасывания получили 23 г акриловой кислоты 13. Маточный раствор концентрировали и осадок растворяли в 140 мл ацетонитрила. Добавляли 31 г (0,142 моль) Boc-ангидрида и 1,26 г (10 ммоль) DMAP. После нагревания до 50оС в течение 8 час отгоняли растворитель под вакуумом и осадок поглощали 500 мл этилацетата. Органическую фазу промывали 400 мл 1 н. HCl и сушили над сульфатом магния. После удаления растворителя под вакуумом посредством кристаллизации из гептана далее получили 31,5 г акрилата 13. Выход 54,5 г (0,181 моль), 79%. Суммарная формула С14H23NO6; М.В.=301,34; МС ((M*2)+Na+) 625,7.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 1,40 (с, 18H), 3,74 (с, 3H), 5,85(с, 1H), 6,28(с, 1H).
B.2.2.2.) метиловый эфир (3-(N-4-фторфенил-N-2-пиридил)-амино)-2-(ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-пропионовой кислоты (14)
11,5 г (38,2 ммоль) акрилата 13 смешивали с 7,2 г (38,2 ммоль) анилина 3 и 37,3 г (114 ммоль) карбоната цезия. Добавляли 100 мл ацетонитрила и оставляли 2 дня перемешиваться при 55оС. После этого оставляли далее на 2 дня перемешиваться при комнатной температуре. Твердое вещество отсасывали через кизельгур и 3 раза промывали ацетонитрилом (по 100 мл). Из объединенных органических фаз под вакуумом отгоняли растворитель и осадок хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/этилацетат 4:1. Выход: 14 г (75%) 14.
Суммарная формула С25H32FN3O6; М.В.=489,55; МС (M+H) 490,6.
1H ЯМР (CDCl3) 1,28 (с, 18H), 3,72 (с, 3H), 4,25(дд, 1H), 4,75(дд, 1H), 5,83(дд, 1H), 6,22(д, 1H), 6,56-6,61(м, 1H), 7,05-7,12(м, 2H), 7,19-7,26(м, 3H), 8,18(д, 1H).
B.2.3.) метиловый эфир (3-(N-фенил-N-2-пиримидил)-амино)-2-(ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-пропионовой кислоты (15)
Из 35 г 6, при аналогичном превращении, описанном в п. B.2.2.2.), получили 3 г (7%) аминокислоты 15.
Суммарная формула С24H32N4O6; М.В.=472,23; МС (M+H) 473,1.
С.) Синтез гетероциклических основных фрагментов
С.1.) Синтез индольного основного фрагмента:
2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновая кислота (20)
С.1.1.) 1-диметиламино-4,4-диметокси-пент-1-ен-3-он (18)
100 г (0,76 моль) 3,3-диметокси-2-бутанона (16) при 120оС перемешивали в течение 48 час с 90,2 г N,N-диметилформамид-диметилацеталя (17) (0,76 моль). Метанол, образующийся в результате реакции, непрерывно удаляли из реакционного раствора посредством дистилляции. При охлаждении раствора начиналась спонтанная кристаллизация, которая с помощью небольшой добавки гептана доходила до полного завершения. Таким образом получили 128,24 г сырого продукта 18 (выход 90%), который подвергали превращению без дальнейшей очистки.
Суммарная формула С9H17NO3; М.В.=187,24; МС (M+H) 188,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 1,22(с, 3H), 2,80(с, 3H), 3,10 (с, 9H), 5,39(д,J=15 Гц, 1H), 7,59(д,J=15 Гц, 1H).
С.1.2.) [4-(1,1-диметокси-этил)-пиримидин-2-ил]-метил-амин (19)
1,22 г (53 ммоль) натрия растворяли в 100 мл абсолютного этанола. К этому при перемешивании добавляли 5,8 г (53 ммоль) метилгуанидингидрохлорида и 10 г (53 ммоль) 1-диметиламино-4,4-диметокси-пент-1-ен-3-он (18) и 4 часа нагревали до кипения. По завершении реакции выпаривали этанол. Полученный таким образом продукт 19 без дальнейшей очистки использовали в последующей реакции. Выход 11,5 г (58 ммоль, количественно).
Суммарная формула С9H15N3O2; М.В.=197,24; МС (M+H) 198,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 1,45(с, 3H), 2,78(с, 3H), 3,10 (с, 6H), 6,75(д, J=3 Гц, 1H), 7,0-7,1 (с(уш.), 1Н), 8,30(д, J=3 Гц, 1H).
С.1.3.) 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновая кислота (20)
К 150 мл 50%-ной серной кислоты при комнатной температуре при перемешивании добавляли 5 г (25 ммоль) [4-(1,1-диметокси-этил)-пиримидин-2-ил]-метиламина (19) и 3,85 г 4-гидразинбензойной кислоты и 4 часа нагревали при 130оС. Метанол, образующийся в результате реакции, непрерывно удаляли из реакционного раствора посредством дистилляции. После охлаждения до 10оС реакционную смесь выливали на 200 мл льда и с помощью концентрированного раствора гидроксида натрия устанавливали значение рН около 5,5. Образующийся при этом осадок сульфата натрия и смеси продукта отфильтровывали и осадок с фильтра многократно экстрагировали метанолом. Объединенный метанольный экстракт концентрировали и продукт 20 очищали посредством флэш-хроматографии (DCM/метанол 9:1). Выход 0,76 г (11%).
Суммарная формула С14H13N4O2; М.В.=268,28; МС (M+H) 269,1.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95 (с, 3H), 6,90-7,10 (с(уш.), 1H), 7,18 (д, J=3 Гц, 1H), 7,4(с, 1H), 7,58(д, J=4,5 Гц, 1H), 7,80 (д, J=4,5 Гц, 1H), 8,30(с, 1H), 7,80(д, J=4,5 Гц, 1H), 8,38 (д, J=3 Гц, 1H), 11,85(с, 1H), 12,40-12,60(с(уш.), 1H).
С.2.) Синтез бензимидазольного основного фрагмента:
2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5 карбоновая кислота (25)
С.2.1) 4-диметиламин-1,1-диметокси-бут-3-ен-2-он (22)
300 г (307 мл, 2,54 моль) метилглиоксальдиметилацеталя (21) при 110оС перемешивали в течение 4 час с 300 г (337 мл, 2,54 моль) N,N-диметилформамид-диметилацеталя (17). Метанол, образующийся в результате реакции, непрерывно удаляли из реакционного раствора посредством дистилляции. После охлаждения раствор экстрагировали гептаном и испаряли растворитель. Получили 303 г сырого продукта 22 (выход 70%), который подвергали превращению без дальнейшей очистки.
Суммарная формула С8H15NO3; М.В.=173,21; МС (M+H) 174,1.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,10(с, 1H), 2,80(с, 3H), 3,10 (с, 3H), 3,25 (с, 3H), 3,3 (с, 3H), 4,42 (с, 1H), 5,19 (д(уш.), J=12,8 Гц, 1H), 7,60 (д, J=15 Гц, 1H).
С2.2.) (4-диметоксиметил-пиримидин-2-ил)-метил-амин (23)
0,33 г (14,4 ммоль) натрия растворяли в 50 мл абсолютного этанола. К этому при перемешивании добавляли 1,57 г (14,4 ммоль) метилгуанидингидрохлорида и 2,48 г (14,4 ммоль) 4-диметиламин-1,1-диметокси-бут-3-ен-2-она (22) и 3 часа нагревали до кипения. По завершении реакции выпаривали этанол. Полученный таким образом продукт 23 использовали без дальнейшей очистки. Выход 2,6 г (количественно).
Суммарная формула С8H13N3O2; М.В.=183,21; МС (M+H) 184,1.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,78(с, 6H), 3,10(с, 3H), 5,02 (с, 1H), 6,62 (д, J=3 Гц, 1H), 8,30 (д, J=3 Гц, 1H).
С.2.3.) 2-метиламино-пиримидин-4-карбальдегид (24)
10 г (54 ммоль) (4-диметоксиметил-пиримидин-2-ил)-метил-амина (23) растворяли в 54 мл 2 н. серной кислоты и при перемешивании нагревали 3 часа до 80оС. После охлажения реакции реакционный раствор осторожно доводили до рН около 9 твердым Na2CO3 и 3 раза экстрагировали этанолом. Объединенный высушенный экстракт после выпаривания растворителя содержал титульный альдегид 24 с 60%-ным выходом (4,47 г).
Суммарная формула С6H7N3O; М.В.=137,12; МС (M+H) 138,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,60-2,80 (с(уш.), 3H), 6,95 (д, J=3 Гц, 1H), 7,40-7,60 (с(уш.), 1H), 8,55 (д, J=3 Гц, 1H).
С.2.4.) 2-(2-метиламин-пиримидин-4-ил)-1Н-бензоимидазол-5-карбоновая кислота (25)
4,3 г (31,3 ммоль) метиламин-пиримидин-4-карбальдегида (24) и 4,8 г (31,1 ммоль) 3,4-диамино-бензойной кислоты 2 часа нагревали в 300 мл нитробензола до 150оС. После охлаждения до 0оС осадок бензимидазола отделяли от нитробензола путем фильтрации, и продукт 25 очищали посредством флэш-хроматографии (DCM/метанол 4:1). Выход 2,66 г (32%).
Суммарная формула С13H11N5O2; М.В.=269,28; МС (M+H) 270,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95 (с, 3H), 7,50 (д, J=3 Гц, 1H), 7,75 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,90 (д, J=4,5 Гц, 1H), 8,35(с, 1H), 8,55 (д, J=3 Гц, 1H), 8,70-9,05(с(уш.), 1H).
D.) Целевой продукт индол
D.1.) [(S)-2-дифениламино-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (28)
D.1.1.) метиловый эфир 3-дифениламино-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-(S)-амино}-пропионовой кислоты (26)
5,0 г (18,64 ммоль) 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (20) растворяли в 1,2 л диметилформамида (ДМФ) и друг за другом добавляли 7,9 г (24,08 ммоль) TOTU (О-[(циано-(этоксикарбонил)метилиден)амино)-1,1,3,3-тетраметил]урониум-тетрафторборат) и 7,9 мл (46,45 ммоль) этилдиизопропиламина. Перемешивали 20 мин при 5оС и добавляли к раствору 0,73 г (3,28 ммоль) метилового эфира (S)-2-амино-3-дифениламинопропионовой кислоты (11). После 15 час перемешивания реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, осадок поглощали н-бутанолом, и органическую фазу для отделения побочных продуктов экстрагировали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия. После сушки над MgSO4 и концентрирования органической фазы выделяли метиловый эфир титульного соединения 26 посредством флэш-хроматографии на кизельгеле (DCM:метанол=19:1). Выход 4,3 г (98%).
Суммарная формула С30H28N6O3; М.В.=520,22; МС (M+H) 521,3.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95 (c(уш.), 3H), 3,60 (с, 3H), 4,19-4,58 (м, 2H), 4,85 (кв, 1H), 6,90-7,10 (м, 7H), 7,18 (д, J=3 Гц, 1H), 7,25-7,40 (м, 5H), 7,50 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,65 (д, J=4,5 Гц, 1H), 8,05 (с, 1H), 8,35 (д, J=3 Гц, 1H), 8,70 (д, J=3,75Гц, 1H), 11,85 (с, 1H).
D.1.2.) ((S)-2-дифениламино-1-гидразин-карбонил-этил)-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (27)
1,0 г (1,92 ммоль) метилового эфира 3-дифениламино-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-(S)-амино}-пропионовой кислоты (26) растворяли в 10 мл метанола, добавляли 0,48 г (9,95 ммоль) гидразингидрата и 15 час перемешивали при комнатной температуре. Осадок продукта (0,3 г) отделяли от маточного раствора фильтрацией. Из концентрированного маточного раствора далее выделяли гидразид 27 (0,1 г) посредством флэш-хроматографии на кизельгеле (DCM:метанол=19:1). Выход 0,4 г (40%).
Суммарная формула С29H28N8O2; М.В.=520,6; МС (M+H) 521,4.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95(s(уш.), 3H), 4,02-4,58 (м, 2H), 4,4 (с, 2H), 4,85 (кв, 1H), 6,90-7,10 (м, 7H), 7,18 (д, J=3 Гц, 1H), 7,20-7,45 (м, 5H), 7,50 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,62 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,99 (с, 1H), 8,25 (д, J=3 Гц, 1H), 8,35 (с(уш.), 1H), 9,30 (с, 1H), 11,70 (с, 1H).
D.1.3.) [(S)-2-дифениламино-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (28)
200 мг (0,384 ммоль) ((S)-2-дифениламино-1-гидразин-карбонил-этил)-амида 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (27) суспендировали в 20 мл метиленхлорида и при 0оС прикапывали при перемешивании 20%-ный раствор фосгена в толуоле (0,398 ммоль). Далее перемешивали 15 час при комнатной температуре и концентрировали растворитель. Затем оксадиазолон 28 выделяли посредством флэш-хроматографии на кизельгеле (DCM:метанол=9:1). Выход 160 мг (76%).
Суммарная формула С30H26N8O3; М.В.=546,6; МС (м+H) 547,3.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95(с(уш.), 3H), 4,02-4,58 (м, 2H), 4,85 (кв, 1H), 6,90-7,10 (м, 7H), 7,15 (д, J=3 Гц, 1H), 7,20-7,40 (м, 6H), 7,52 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,68 (д, J=4,5 Гц, 1H), 8,10 (с, 1H), 8,92 (д, J=3 Гц, 1H), 11,78 (с, 1H), 12,15-12,40 (с(уш.), 1H).
D.2.) {1-карбамоил-2-[(4-фторфенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (30)
D.2.1.) метиловый эфир 3-[(4-фторфенил)-пиридин-2-ил-амино]-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-пропионовой кислоты (29)
0,75 г (1,53 ммоль) 14 растворяли в 10 мл диоксана и охлаждали до 0оС. Добавляли 10 мл 4 н. HCl в диоксане, выдерживали в течение 2 час при комнатной температуре и 12 час после перемешивания. Растворитель отгоняли под вакуумом. Осадок поглощали 10 мл ДМФ (раствор А). 617 мг кислоты 20 растворяли в 20 мл ДМФ и охлаждали до 0оС. Добавляли 1,05 г HATU и 1,6 мл DIEA. После перемешивания в течение 40 мин при 0оС добавляли раствор А. Выдерживали при комнатной температуре и после перемешивали в течение 4 час. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок распределяли между 100 мл насыщенного раствора NaHCO3 и 100 мл этилацетата. Водную фазу 3 раза экстрагировали этилацетатом (по 50 мл), и объединенные органические фазы промывали 100 мл насыщенного раствора NaCl. Органическую фазу сушили сульфатом магния. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/этилацетат 1:3. Получили 560 мг (68%) сложного эфира 29. Суммарная формула С29H26FN7O3; М.В.=539,57; МС (M+H) 540,2.
D.2.2.) {1-карбамоил-2-[(4-фторфенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (30)
320 мг (0,593 ммоль) сложного эфира 29 растворяли при 0оС в 50 мл метанола, насыщенного аммиаком. Перемешивали в течение 24 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли под вакуумом, и осадок вымешивали из 5 мл этилацетата. Твердое вещество отсасывали и при 50оС сушили под вакуумом. Получили 270 мг (87%) амида 30.
Суммарная формула С28H25FN8O2; М.В.=524,56; МС (M+H) 525,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,45 (с, 3H), 4,10 (д, 1H), 4,52-4,66 (м, 2H), 6,26 (д, 1H), 6,77 (т, 1H), 7,02 (уш.с, 1H), 7,09-7,17(м, 2H), 7,22-7,32 (м, 5H), 7,38-7,46 (м, 1H), 7,47-7,58 (м, 3H), 7,92(с, 1H), 8,27-8,36 (м, 2H), 8,59(д, 1H), 11,70 (с, 1H).
D.3.) [(S)-1-(5-оксо-4,5-дигидро-1,3,4-оксадиазол-2-ил)-2-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (33)
D.3.1.) метиловый эфир (3-(N-фенил-N-2-пиридил)-амино)-2-(ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-пропионовой кислоты (31)
4,96 г (16,5 ммоль) акрилата 13 смешивали с 5,6 г (32,9 ммоль) 2-анилинопиридина и 32,16 г (98,7 ммоль) карбоната цезия. Добавляли 50 мл ацетонитрила и в течение 2 дней перемешивали при 45оС. Твердое вещество отсасывали через кизельгур и 3 раза промывали ацетонитрилом (по 100 мл). Объединенные органические фазы концентрировали и осадок хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/диэтиловый эфир 1:1. Получили 5,66 г (73%) сложного эфира 31.
Суммарная формула С25H33N3O6; М.В.=471,56; МС (M+H) 472,2.
D.3.2.) Разделение энантиомеров осуществляли, как описано в п.В.2.1.).
D.3.3.) метиловый эфир 2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-3-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-пропионовой кислоты (32)
2,9 г S-энантиомера 31 растворяли в 30 мл диоксана и охлаждали до 0оС. Добавляли 30 мл 4 н. HCl в диоксане, оставляли при комнатной температуре и затем 12 час перемешивали. Растворитель отгоняли под вакуумом. Осадок поглощали 30 мл ДМФ (раствор А). 2,47 г (9,2 ммоль) кислоты 20 растворяли в 50 мл ДМФ и охлаждали до 0оС. Добавляли 4,21 г HATU и 6,4 мл DIEA. После перемешивания в течение 45 мин при 0оС оставляли при комнатной температуре и добавляли раствор А. Выдерживали при комнатной температуре в течение 12 час. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок распределяли между 300 мл насыщенного раствора NaHCO3 и 300 мл этилацетата. Водную фазу 3 раза экстрагировали этилацетатом (по 100 мл) и объединенные органические фазы промывали 400 мл насыщенного раствора NaCl. Органическую фазу сушили сульфатом магния. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/этилацетат 1:3. Получили 1,78 г (55%) сложного эфира 32.
Суммарная формула С29H27N7O3; М.В.=521,58; МС (M+H) 522,2.
D.3.4.) [(S)-1-(5-оксо-4,5-дигидро-1,3,4-оксадиазол-2-ил)-2-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (33)
1,78 г (3,4 ммоль) сложного эфира 32 растворяли в 30 мл метанола. Добавляли 0,83 мл гидразингидрата и перемешивали 5 часов при 40оС. После этого добавляли 1,6 мл гидразингидрата и перемешивали 15 часов при комнатной температуре. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок поглощали 80 мл дихлорметана. Добавляли 3,2 мл 20%-ного раствора фосгена в толуоле и выдерживали при перемешивании 3 дня. Затем растворитель удаляли под вакуумом и осадок распределяли между 80 мл воды и 80 мл этилацетата. При этом выпадающее в осадок твердое вещество отсасывали. Органическую фазу концентрировали, осадок объединяли с твердым веществом и хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/этилацетат 1:5. Получили 390 мг (21%) оксадиазолона 33.
Суммарная формула С29H25N9O3; М.В.=547,58; МС (М+H) 548,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,96(с, 3H), 4,30 (дд, 1H), 4,67 (дд, 1H), 5,40 (дд, 1H), 6,32 (д, 1H), 6,70-6,75 (м, 1H), 6,98 (уш. с, 1H), 7,16 (д, 1H), 7,22-7,33 (м, 4H), 7,38-7,46 (м, 3H), 7,52(д, 1H), 7,63 (д, 1H), 8,08 (с, 1H), 8,21 (д, 1H), 8,31-8,35 (м, 1H), 9,00 (д, 1H), 11,72 (с, 1H), 12,15 (с,1H).
D.4.) {1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (35)
D.4.1.) метиловый эфир 3-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-2-{[2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-пропионовой кислоты (34)
Из 750 мг 14, при превращении, аналогичном описанному в п. D.2.1.), получили 370 мг (46%) сложного метилового эфира 34.
Суммарная формула С28H24FN7O3; М.В.=525,55; МС (м+H) 526,2.
D.4.2.) {1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (35)
Из 150 мг 34, при превращении, аналогичном описанному в п. D.2.2.), получили 95 мг (65%) амида 35.
Суммарная формула С27H23FN8O2; М.В.=510,54; МС (M+H) 511,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 4,08-4,17 (м, 1H), 4,54-4,65 (м, 2H), 6,29 (д, 1H), 6,54 (с, 2H), 6,74-6,80 (м, 1H), 7,10 (с, 1H), 7,18(д, 1H), 7,22-7,31 (м, 4H), 7,38-7,56 (м, 6H), 7,92 (с, 1H), 8,29-8,35 (м, 2H), 8,74 (д, 1H), 11,80 (с, 1H).
D.5.) [2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-1-(4H-[1,2,4]-триазол-3-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (36)
30 мг (0,25 ммоль) амида 35 растворяли в 10 мл ДМФ. Добавляли 40 мкл ДМФ-диметилацеталя и нагревали 4 часа до 90оС. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок поглощали 3,5 мл уксусной кислоты. После добавления 27 мкл гидразингидрата оставляли перемешиваться в течение 18 час. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок очищали посредством препаративной ВЭЖХ. Получили 84 мг (50%) триазола 36.
Суммарная формула С29H25FN10O; М.В.=548,59; МС (М+H) 549,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6)3,04 (с, 3H), 4,36-4,43(м, 1H), 4,49-4,59(м, 1H), 5,60-5,67 (м, 1H), 6,50 (д, 1H), 6,78(т, 1H), 7,17-7,37(м, 7H), 7,45-7,65(м, 4H), 8,02(с, 1H), 8,19(д, 1H), 8,35(д, 1H), 8,39(д, 1H), 11,85(с, 1H).
D.6.) [1-карбамоил-2-(фенил-тиазол-2-ил-амино)-этил]-амид S-2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (42)
D.6.1.) фенил-тиазол-2-ил-амин (39)
10 г (65,7 ммоль) фенилтиомочевины 37 растворяли в 100 мл уксусной кислоты. Добавляли 9,9 мл ацеталя 38 и нагревали 2 часа до 100оС. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок распределяли между 300 мл 1 н. NaOH и 300 мл этилацетата. Водную фазу дважды экстрагировали этилацетатом (по 100 мл) и объединенные органические фазы сушили сульфатом магния. Растворитель отгоняли и осадок вымешивали из 50 мл диизопропилового эфира. Твердое вещество отсасывали и сушили при 50оС под вакуумом. Получили 2,5 г анилина 39. Маточный раствор диизопропилового эфира концентрировали и осадок хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/этилацетат 2:1. Таким образом получили 3,5 г 39. Выход 6,0 г (52%).
Суммарная формула С9H8N2S; М.В.=176,24; МС (М+H) 177,1.
D.6.2.) метиловый эфир (3-(N-фенил-N-2-тиазолил)-амино)-2-(ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-пропионовой кислоты (40)
Из 3,8 г (12,5 ммоль) акрилата 13, 2,2 г (12,5 ммоль) анилина 39 и 20 г карбоната цезия аналогично превращению, описанному в п. D.3.1.), получили 4,5 г (75 %) сложного эфира 40.
Суммарная формула С23H31N3O6S; М.В.=477,58; МС (М+H) 478,2.
D.6.3.) Разделение энантиомеров осуществляли, как описано в п.В.2.1.)
D.6.4.) метиловый эфир S-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-3-(фенил-тиазол-2-ил-амино)-пропионовой кислоты (41)
Из 1,07 г (2,2 ммоль) сложного эфира 40 и901 мг(3,3 ммоль) кислоты 20, аналогично описанному в п. D.3.3.) превращению, получили 640 мг (55%) 41.
Суммарная формула С27H25N7O3S; М.В.=527,61; МС (М+H) 528,1.
D.6.4.) [1-карбамоил-2-(фенил-тиазол-2-ил-амино)-этил]-амид S-2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (42)
Из 500 мг (0,95 ммоль) 41, аналогично описанному в п. D.2.2.) превращению, получили 340 мг (70%) амида 42.
Суммарная формула С26H24N8O2S; М.В.=512,60; МС (М+H) 513,3.
1H ЯМР (ДМСО-d6)2,97 (с, 3H), 4,23-4,30 (м, 1H), 4,39-4,48 (м, 1H), 4,71-4,78 (м, 1H), 6,78 (д, 1H), 7,16 (д, 1H), 7,28-7,35 (м, 3H), 7,37-7,60 (м, 7H), 7,98 (с, 1H), 8,33 (д, 1H), 8,62 (д, 1H), 11,70 (с, 1H),
D.7.) [1-метоксикарбамоил-2-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-этил]-амид S-2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (43)
80 мг (0,95 ммоль) гидрохлорида О-метилгидроксиламина растворяли в 10 мл ТГФ и охлаждали до -40оС. Прикапывали 0,95 мл (1,9 ммоль) 2М раствора изопропилмагний-хлорида в ТГФ. В течение 1 часа выдерживали при -20оС. Затем прикапывали раствор 100 мг (0,19 ммоль) сложного эфира 32 в 3 мл ТГФ. В течение 4 час выдерживали при комнатной температуре и заканчивали реакцию добавлением 5 мл воды. ТГФ отгоняли под вакуумом и осадок распределяли между 20 мл насыщенного раствора хлорида аммония и 20 мл этилацетата. Водную фазу 3 раза экстрагировали этилацетатом (по 20 мл) и объединенные органические фазы сушили сульфатом магния. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок очищали посредством препаративной ВЭЖХ. Получили 60 мг (61%) метилгидроксамата 43.
Суммарная формула С29H28N8O3; М.В.=536,60; МС (М+H) 537,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6)2,95 (с, 3H), 3,52 (с, 3H), 4,09-4,18 (м, 1H), 5,51-4,62 (м, 2H), 6,33 (д, 1H), 6,78 (т, 1H), 7,00 (уш.с, 1H), 7,18 (д, 1H), 7,25-7,33 (м, 4H), 7,49-7,61 (м, 5H), 7,98 (с, 1H), 8,29-8,36 (м, 2H), 8,79 (д, 1H), 11,31 (с, 1H), 11,75 (с, 1H).
D.8.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (45)
D.8.1.) метиловый эфир 3-[(фенил)-пиридин-2-ил-амино]-2-{[2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-пропионовой кислоты (44)
Из 540 мг rac-10 (рац.-10), аналогично описанному в п. B.1.4.) и D.1.1.) превращению, получили 816 мг (80%) сложного метилового эфира 44.
Суммарная формула С29H26N6O3; М.В.=506,56; МС (М+H) 507,37.
D.8.2.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (45)
Из 150 мг 44 аналогично описанному в п. D.2.2.) превращению получили 162 мг (67%) амида 45.
Суммарная формула С28H25N7O2; М.В.=491,56; МС (М+H) 492,32.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 3,18 (с(уш.), 3H), 4,05-4,13 (м, 2H), 4,85 (кв, 1H), 6,58 (с(уш.),2H), 6,88-7,59 (м, 19H), 7,98 (с, 1H), 8,25 (д, J=3 Гц, 1H), 8,35 (д, J=2 Гц, 1H), 11,78 (с, 1H).
D.9.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (47)
D.9.1.) метиловый эфир 3-[(фенил)-пиримидил-2-ил-амино]-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-пропионовой кислоты (46)
Из 2,36 г 15 аналогично описанному в п. D.2.1.) превращению получили 1,75 мг (67%) сложного метилового эфира 46.
Суммарная формула С28H26N8O3; М.В.=522,57; МС (М+H) 523,3.
D.9.2.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (47)
Из 700 мг 46 аналогично описанному в п. D.2.2.) превращению получили 440 мг (65%) амида 47.
Суммарная формула С27H25N9O2; М.В.=507,21; МС (M+H) 508,4.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 3,0 (с(уш.), 3H), 4,20-4,32 (м, 1H), 4,45-4,59 (м, 2H), 4,75-4,90 (м, 1H), 6,75 (м, 1H), 7,10-7,60 (м, 12H), 7,95 (с, 1H), 8,35-8,45 (м, 4H), 11,85 (с(уш.), 1H).
D.10.) [1-(2-гидроксиэтилкарбамоил)-2-(фенил-пиримидин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (49)
D.10.1) 2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-3-(фенил-пиримидин-2-ил-амино)-пропионовая кислота (48)
4,0 г сложного метилового эфира 46 растворяли в 400 мл метанола. К этому добавляли 40 мл 2 н. водного раствора NaOH и 12 час перемешивали при комнатной температуре. После выпаривания растворителя осадок растворяли в воде и насыщенным раствором NaH2PO4 доводили pH˜5. Образующийся осадок отфильтровывали и промывали водой. Получили 1,3 г (выход 93 %) кислоты 48.
Суммарная формула С29H26N6O3; М.В.=506,21; МС (М+H) 507,3.
D.10.2) [1-(2-гидрокси-этилкарбамоил)-2-(фенил-пиримидин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (49)
200 мг кислоты 48 растворяли в 2 мл абсолютного ДМФ. К этому добавляли 94 мг HOAt и 158 мкл DIEA. Затем прикапывали 56 мкл этаноламина, охлаждали до 0оC и добавляли 195 мг EDC. После 2 дней перемешивания при комнатной температуре выпаривали растворитель и очищали сырой продукт посредством хроматографии среднего давления (MPLC) (элюент: DCM:метанол=9:1). Выход 108 мг (50%) целевого амида 49.
Суммарная формула С31H31N8O2; М,В,=549,64; МС (М+H) 550,4,
1H ЯМР (ДМСО-d6) 1,2 (т, 2H), 3,0 (с(уш.), 3H), 3,35 (т, 1H), 4,00-4,32 (м, 2H), 4,80-4,99 (м, 1H), 6,95 (м, 1H), 7,00-7,65 (м, 7H), 7,90 (м, 1H), 8,35-8,40 (м, 1H), 11,90 (с(уш.), 1H).
D.11.) (S)-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-3-[фенил-(4-трифторметил-пиримидин-2-ил)-амино]-пропионовая кислота (54)
D.11.1) фенил-(4-трифторметил-пиримидин-2-ил)-амин (51)
Из 5,1 г анилина (4) и 5 г хлорпиримидина 50 аналогично описанному в п.А.1.) превращению получили 5,1 г (78%) анилина 51.
Суммарная формула С11H8F3N3; М.В.=239,20; МС (М+H) 240,1.
D.11.2.) метиловый эфир (3-(N-фенил-N-4-трифторметилпиримидин-2-ил)-амино)-2-ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-пропионовой кислоты (52)
Из 2,5 г (8,4 ммоль) акрилата 13, 3 г (12,5 ммоль) анилина 51 и 16 г (50 ммоль) карбоната цезия аналогично описанному в п. D.3.1.) превращению получили 3,9 г (86%) сложного эфира 52.
Суммарная формула С25H31F3N4O6; М.В.=540,54; МС (М+H) 541,2.
D.11.3.) Разделение энантиомеров осуществляли, как описано в п. B.2.1.)
D.11.4.) метиловый эфир S-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-3-[фенил-(4-трифторметил-пиримидин-2-ил)-амино]-пропионовой кислоты (53)
Из 743 мг (1,375 ммоль) S-энантиомера сложного эфира 52 и 550 мг (1,436 ммоль) кислоты 20 аналогично описанному в п. D.3.3.) превращению получили 467 мг (58%) 53.
Суммарная формула С29H25F3N8O3; М.В.=590,57; МС (М+H) 591,7.
D.11.5.) (S)-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-3-[фенил-(4-трифторметил-пиримидин-2-ил)-амино]-пропионовая кислота (54)
Из 97 мг (0,164 ммоль) сложного эфира 53 аналогично описанному в п. D.10.1.) превращению получили 38 мг (40%) кислоты 54.
Суммарная формула С28H23F3N8O3; М.В.=576,54; МС (М+H) 577,7,
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95 (с, 3H), 4,27-4,34 (м, 1H), 4,54-4,63 (м, 1H), 4,83-4,92 (м, 1H), 6,90 (уш.с, 1H), 7,15 (д, 2H), 7,19-7,23 (м, 1H), 7,27-7,36 (м, 5H), 7,45-7,55 (м, 2H), 7,96 (с, 1H), 8,32 (с, 1H), 8,41 (уш.с, 1H), 8,66 (д, 1H), 11,70 (с, 1H).
D.12.) {1-карбамоил)-2-[(4-фторфенил)-(5-метил-пиримидин-2-ил)-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (61)
D.12.1.) пентафторфениловый эфир 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (55)
6,38 г (23,78 ммоль) кислоты 20 суспендировали в 100 мл ТГФ. К этому добавляли 5,25 г (28,54 ммоль) пентафторфенола и 5,47 г (28,54 ммоль) гидрохлорида 1-этил-3-(3-диметиаминопропил)-карбодиимида (EDC*HCl). Выдерживали 15 час при перемешивании при комнатной температуре, удаляли растворитель под вакуумом и осадок распределяли между 300 мл насыщенного раствора NaHCO3 и 300 мл этилацетата. Твердое вещество отфильтровывали через кизельгур и осадок 2 раза промывали этилацетатом (по 100 мл). Фазы разделяли и водную фазу 2 раза экстрагировали этилацетатом (по 100 мл). Объединенные органические фазы промывали 200 мл насыщенного раствора NaCl и затем сушили MgSO4. После удаления растворителя под вакуумом осадок хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/этилацетат 1:1. Получили 4,7 г (46%)пентафторфенилового сложного эфира 55.
Суммарная формула С20H11F5N4O2; М.В.=434,33; МС (М+H) 435,4.
D.12.2.) 2-хлор-5-метил-пиримидин (57)
10,0 г (61,35 ммоль) 2,4-дихлор-5-метилпиримидина (56) растворяли в 50 мл ТГФ. Добавляли 12,93 г (184 ммоль) цинка и нагревали с обратным холодильником. Затем медленно прикапывали раствор из 3,51 мл (61,35 ммоль) уксусной кислоты в 10 мл ТГФ. После окончания добавления еще 1 час нагревали с обратным холодильником. Далее прикапывали 1,5 мл уксусной кислоты в 5 мл ТГФ и 1 час нагревали с обратным холодильником. Затем оставляли охлаждаться до комнатной температуры, фильтровали через кизельгур и промывали 2 раза, каждый раз по 20 мл ТГФ. Растворитель отгоняли под вакуумом и осадок хроматографировали на кизельгеле. Получили 4,7 г (60%) хлорпиримидина 57.
Суммарная формула С5H5ClN2; М.В.=128,56; МС (М+H) 129,2.
D.12.3.) (4-фтор-фенил)-(5-метил-пиримидин-2-ил)-амин (58)
Из 2,5 г (19,45 ммоль) 2-хлор-5-метилпиримидина (57) и 2,7 г (24,31 ммоль) 4-фторанилина (1) аналогично описанному в п. А.1.) превращению получили 1,8 г (45%) анилина 58.
Суммарная формула С11H10FN3; М.В.=203,22; МС (М+H) 204,2.
D.12.4.) метиловый эфир (3-(N-4-фтор-фенил-N-5-метил-пиримидин-2-ил)-амино)-2-ди-трет.-бутилоксикарбонил)-амино-пропионовой кислоты (59)
Из 2,67 г (8,86 ммоль) акрилата 10, 1,8 г (8,86 ммоль) анилина 58 и 8,66 г (26,58 ммоль) карбоната цезия аналогично описанному в п. D.3.1.) превращению получили 2,88 г (64%) сложного эфира 59.
Суммарная формула С25H33FN4O6; М.В.=504,56; МС (М+H) 505,6.
D.12.5.) метиловый эфир 3-[(4-фтор-фенил)-(5-метил-пиримидин-2-ил)-амино]-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-пропионовой кислоты (60)
500 мг (0,991 ммоль) сложного эфира 59 растворяли в 10 мл дихлорметана и охлаждали до 0оС. К этому добавляли 5 мл ТФА, выдерживали 1 час при комнатной температуре и перемешивали. Удаляли растворитель под вакуумом. Осадок поглощали 10 мл ДМФ и добавляли 430 мг (0,991 ммоль) 55 и 1,38 мл (7,93 ммоль) DIEA. Перемешивали в течение 15 час при комнатной температуре, удаляли растворитель под вакуумом и осадок хроматографировали на кизельгеле с элюентом гептан/этилацетат 1:3. Получили 423 мг (77%) 60.
Суммарная формула С29H27FN8O3; М.В.=554,59; МС (М+H) 555,2.
D.12.6.) {1-карбамоил)-2-[(4-фторфенил)-(5-метил-пиримидин-2-ил)-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты (61)
Из 260 мг (0,469 ммоль) сложного эфира 60 аналогично описанному в п. D.2.2.) превращению получили 250 мг (99%) амида 61.
Суммарная формула С28H26FN9O2; М.В.=539,58; МС (M+H) 540,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,11(с, 3H), 2,95(с, 3H), 4,21 (дд, 1H), 4,48(дд, 1H), 4,75-4,80(м, 1H), 7,01 (уш.с, 1H), 7,10-7,16(м, 4H), 7,22-7,30(м, 3H), 7,43(с, 1H), 7,47-7,53(м, 2H), 7,91(с, 1H), 8,26(с, 2H), 8,29-8,34(м, 2H), 11,70(с, 1H).
F.) Целевой продукт бензимидазол
F.1.) ((S)1-карбамоил-2-дифениламино-этил)амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (63)
F.1.1.) метиловый эфир 3-дифениламино-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбонил]-(S)-амино}-пропионовой кислоты (62)
2,6 г (9,6 ммоль) 2-(2-метиламин-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (25) растворяли в 300 мл ДМФ и последовательно добавляли 3,17 г (9,6 ммоль) TOTU и 1,6 мл (11,6 ммоль) этилдиизопропиламина. Перемешивали 20 мин при 5оС и добавляли к раствору 2,6 г (9,6 ммоль) метилового эфира (S)-2-амино-3-дифениламино-пропионовой кислоты (11). После перемешивания в течение 16 час концентрировали при пониженном давлении, затем выделяли сложный метиловый эфир 62 посредством флэш-хроматографии на кизельгеле (DCM:метанол=9:1). Выход 1,61 г (32%).
Суммарная формула С29H27N7O3; М.В.=521,58; МС (М+H) 522,3.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95 (с(уш.), 3H), 3,60(с, 3H), 4,19-4,40 (м, 2H), 4,90(кв, 1H), 6,90-7,10(м, 6H), 7,25-7,35 (м, 6H), 7,40 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,60-7,80 (д(уш.), 1H), 8,05-8,25(д(уш.), 1H), 8,45 (д, J=3 Гц, 1H), 8,90 (с(уш.), 1H), 11,85(с(уш.), 1H).
F.1.2.) ((S)1-карбамоил-2-дифениламино-этил)амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (63)
50 мл метанола (абсолют.) при 0оС насыщали аммиаком. К этому добавляли 0,5 г (0,959 ммоль) метилового эфира 3-дифениламино-2-{[2-(2-метиламин-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбонил]-(S)-амино}-пропионовой кислоты (62) и 24 часа перемешивали при комнатной температуре. После выпаривания растворителя и избыточного аммиака выделяли амид 63 посредством флэш-хроматографии на кизельгеле (DCM:метанол=19:1). Выход 0,43 г (89%).
Суммарная формула С29H28N8O2; М.В.=506,57; МС (М+H) 507,2.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 2,95 (с(уш.), 3H), 4,02-4,35 (м, 2H), 4,85 (кв, 1H), 6,80-7,10(м, 6H), 7,15-7,25 (м, 5H), 7,40 (д, J=4,5 Гц, 1H), 7,58 (с(уш.), 1H), 7,68 (с(уш.), 1H), 8,06-8,19 (д(уш.), 1H), 8,40-8,58 (м, 2H), 13,10(с, 1H).
F.2.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты (65)
F.2.1.) метиловый эфир 3-[(фенил)-пиридимидин-2-ил-амино]-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбонил]-амино}-пропионовой кислоты (64)
Из 657 мг 15 аналогично описанному в п. D.2.1.) превращению получили 210 мг (29%) сложного метилового эфира 64.
Суммарная формула С27H25N9O3; М.В.=523,56; МС (М+H) 524,2.
F.2.2.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (65)
Из 200 мг 64 аналогично описанному в п. D.2.2.) превращению получили 110 мг (65%) амида 65.
Суммарная формула С26H24FN10O2; М.В.=508,55; МС (М+H) 509,3.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 3,00(с(уш.), 3H), 4,20-4,32 (м, 1H), 4,41-4,55(м, 2H), 4,80-4,90(м, 1H), 6,75 (м, 1H), 7,10-7,50 (м, 10H), 7,65 (кв, 2H), 8,10 (с, 1H), -8,45(д, 2H), 8,50(д, 1H), 8,58(д, 1H), 12,95(с(уш.), 1H).
F.3.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (67)
F.3.1.) метиловый эфир 3-[(фенил)-пиридил-2-ил-амино]-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбонил]-амино}-пропионовой кислоты (66)
Из 3,44 г 31 аналогично описанному в п. D.2.1.) превращению получили 0,85 г (22%) сложного метилового эфира 66.
Суммарная формула С28H26N8O3; М.В.=522,57; МС (М+H) 523,3.
F.3.2.) {1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты (67)
Из 200 мг 66 аналогично описанному в п. D.2.2.) превращению получили 160 мг (98%) амида 67.
Суммарная формула С27H25N9O2; М.В.=507,56; МС (M+HCOO-) 552,3.
1H ЯМР (ДМСО-d6) 3,0(с(уш.), 3H), 4,20-4,32 (м, 1H), 4,41-4,55(м, 2H), 4,70-4,80(м, 1H), 6,63 (м, 1H), 6,85 (м, 1H), 7,20-7,75 (м, 14H), 8,10 (с, 1H), -8,20 (д, 2H), 8,50(д, 1H), 8,88(д, 1H).
Фармакологические примеры
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) IkB-киназы:
Активность IkB-киназы определяли с помощью ELISA, состоящего из биотинилированного субстратного пептида, который содержит аминокислотную последовательность в протеине IkB из серина 32 до 36, и специфического поли- или моноклонального антитела (например, от New England Biolabs, Beverly, MA, USA, Kat.: 9240), которое связано только с фосфорилированной формой пептида IkB. Этот комплекс иммобилизовывали на связывающий антитела планшет (с наслоенным протеином А) и определяли с помощью конъюгата из биотинсвязывающего протеина и пероксидазы хрена (HRP) (например, стрептавидин-HRP). Активность можно количественно определить в соответствии со стандартной кривой с субстратным фосфопептидом.
Проведение анализа
Для получения комплекса киназы 10 мл HeLa S3-экстракта клеток S 100 разбавляли 40 мл 50 мМ HEPES, рН 7,5, помещали в 40% сульфат аммония и инкубировали на льду в течение 30 мин. Осажденный гранулят растворяли в 5 мл SEC- буфера (50 мМ HEPES, рН 7,5, 1 мМ дитиотреитола ДТТ (DTT), 0,5 мМ этилендиаминтетраацетата ЭДТА (EDTA), 10 мМ 2-глицерофосфата), центрифугировали при 20000 х g 15 минут и фильтровали через фильтр с порами 0,22 мкм. Пробу подавали в 320 мл Superose-6 колонку ВЭЖХ (FPLC) (Amersham Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Schweden), которая была уравновешена SEC- буфером и действовала при 4оС со скоростью потока 2 мл/мин. Фракции, время пробега которых совпадало со временем пробега стандартного молекулярного веса 670 кДа, соединяли для активации. Активацию обеспечивали посредством 45-минутной инкубации с 100 нМ MEKK1Δ 250 мкМ MgАТФ, 10 мМ MgCl2, 5 мМ дитиотреитола (ДТТ), 10 мМ 2-глицерофосфата, 2,5 мкМ микроцистина-LR при 37оС. Активированный фермент хранили при -80оС.
Тестируемые вещества (2 мкл), растворенные в ДМСО, предварительно инкубировали 30 мин при 25оС с 43 мкл активированного фермента (разбавлен 1:25 в реакционном буфере: 50 мМ HEPES, pH 7,5, 10 мМ MgCl2, 5 мМ ДТТ, 10 мМ β-глицерофосфата, 2,5 мкМ микроцистина-LR). Затем добавляли 5 мкл субстратного пептида (биотин-(CH2)6-DRHDSGLDSMKD-CONH2) (200 мкМ), инкубировали 1 час и прекращали процесс посредством 150 мкл 50 мМ HEPES, pH 7,5, 0,1 % бычьего сывороточного альбумина БСА (BSA), 50 мМ ЭДТА, антитела [1:200]. 100 мкл ингибированной реакционной смеси или разбавленный ряд стандартного фосфопептида, (биотин-(CH2)6-DRHDS[PO3]GLDSMKD-CONH2) переносили затем на планшет с протеином-А (Pierce Chemical Co., Rockford, IL, USA) и 2 часа инкубировали при встряхивании. После 3-стадийного промывания субстратом, связывающим белок (PBS), добавляли 100 мкл 0,5 мкг/мл стрептавидин-HRP (пероксидазы хрена) (разбавленной в 50 мМ HEPES/ 0,1 % БСА) в течение 30 мин. После 5-стадийного промывания PBS добавляли 100 мкл субстрата TMB (Kirkegaard & Perry Laboratories, Gaithersburg, MD, USA) и прекращали развитие цвета добавлением 100 мкл 0,18 М серной кислоты. Абсорбцию измеряли при 450 нм. Стандартную кривую получали посредством линейной регрессии, соответствующей 4-параметровому отношению доза-результат. На основе этой стандартной кривой количественно определяли активность фермента или его ингибирование посредством тестируемых веществ.
Значение IC50 [(S)-2-дифениламин-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амида 2-(2-метиламин-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты составляло 0,050 мкМ.
Содержание в плазме крови [(S)-2-дифениламин-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амида 2-(2-метиламин-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты.
Соединение[(S)-2-дифениламин-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламин-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты, в дальнейшем называемое соединение 28, вводили мужским особям мышей C57/BL6. Для этого в каждом случае вводили орально (через желудочный зонд) около 25 мг соединения 28 на кг веса тела мыши, размолотого в 0,5% гидроксиэтилцеллюлозы (HEC) в виде суспензии. Вытяжка проб крови происходила через 0,25; 0,5; 1; 2; 4; 6 и 8 часов (в каждый названный момент времени отбирали кровь от двух умерщвленных животных в каждом случае). Пробы крови преобразовывали в гепарин-плазму. Пробы плазмы до анализа хранили при -20оС.
Анализ.
Пробы плазмы оттаивали. Затем протеины плазмы, мешающие анализу, осаждали ацетонитрилом.
Обработка: 50 мкл плазмы+20 мкл внутреннего стандарта (5 мкг/мл)+50 мкл буфера (2 мМоль раствора формиата аммония, рН 2,6/ацетонитрил, 40:60, об./об.) смешивали около 10 сек на вихревом смесителе. Затем добавляли 150 мкл ацетонитрила и вновь смешивали около 10 сек. Затем пробы центрифугировали (Hettlich, EBA 12, около 12000 об/мин). Надосадочную жидкость (около 200 мкл) переносили в стеклянный сосуд. 70 мкл надосадочной жидкости инъецировали.
Из соответствующей надосадочной жидкости определяли содержание соединения 13 в плазме посредством LC-MS/MS (жидкостная хроматография с масс-спектрометрией) по следующей методике:
Система ВЭЖХ: Agilent 1100
Программное обеспечение: Analyst
Колонка: 125x4мм Нуклеосил 120 5 C18 (Machery&Nagel)
Длина колонки: 125 мм
Детектирование: LC-MS/MS
MS-прибор: PE-Sciex API 365 (триплет-квадрополярный масс-спектрометр)
Программное обеспечение: MasQuan Software (PE-Sciex)
Род детектирования: MS/MS (MRM)
Скорость потока: 0,5 мл/мин
Объем инъекции: 70 мкл
Внутренний стандарт: SK-7 в ацетонитриле
Подвижная фаза: ацетонитрил/2 мМоль раствора формиата аммония, рН 2,6 (70:30, об./об.)
Время удержания (Rt):
Внутренний стандарт: 4,4 мин.
Соединение 28: 3,9 мин.
Граница достоверности метода составляет 0,01 мкг/мл.
Результаты:
Содержание соединения 28 в плазме составляло максимально 4,3 мкг/мл. Экспозиция, измеренная в виде площади (AUC) под кривой, составляла 5,4 мкг/мл х час.
Протеинтирозинкиназа
В качестве примера специфичности обнаруженного ингибирования IkB-киназы определяли значение IC50 для фермента протеинтирозинкиназы.
Активность протеинтирозинкиназы определяли соответствующим набором тестов от Upstate Biotechnologie согласно предписанию изготовителя при концентрации АТФ (АТР) 50 мкМ. Вместо фосфоцеллюлозного фильтра использовали многослойные планшеты (Multi-Screen-Platten) (Millipore; фосфоцеллюлоза МС-PH, Kat. MAPHNOB 10, или Durapore PVDF, Kat. MADVNOB 50) с соответствующей системой отсасывания. В качестве субстратного набора тестов использовали Poly(Glu, Tyr 4:1) (Sigma Kat. P0275), концентрация тестов 1 мг/мл. Затем планшеты измеряли в Wallac MicroBeta сцинцилляционном счетчике. По мере надобности использовали 100 мкМ тестируемого вещества.
Каждое тестируемое вещество тестировали дважды. Определение IC50 проводили с программным обеспечением GraFit 3.0.
IC50 для[(S)-2-дифениламин-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амида 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1H-индол-5-карбоновой кислоты (соединение 28) составляет в анализе протеинтирозинкиназы 82,5 мкМ. Сравнительный опыт:
Соединение
получали, как описано в WO 01/30774 и в дальнейшем обозначали как сравнительное соединение. Сравнительное соединение вводили мужским особям мышей NMRI. Для этого в каждом случае вводили орально (через желудочный зонд) около 50 мг сравнительного соединенияв 0,5% HEC в виде суспензии (на кг веса тела мыши). Отбор проб крови производили через 0,25; 0,5; 1; 2; 4; 6 и 8 часов (в каждый названный момент времени отбирали кровь от двух умерщвленных животных в каждом случае). Пробы крови преобразовывали в гепарин-плазму. Пробы плазмы до анализа хранили при -20оС.
Анализ. Анализ проводили посредством ВЭЖХ/УФ (HPLC/UV).
Обработка: 50 мкл плазмы+20 мкл внутреннего стандарта (5 мкг/мл)+50 мкл буфера (1% муравьиной кислоты/ацетонитрил, 40:60, об./об.) смешивали около 10 сек на вихревом смесителе. Затем добавляли 150 мкл ацетонитрила и вновь смешивали около 10 сек. Затем пробы центрифугировали (Hettich, EBA 12, около 12000 об./мин). Надосадочную жидкость (около 200 мкл) переносили в стеклянный сосуд. 100 мкл надосадочной жидкости вводили в виде инъекций.
Для соответствующей надосадочной жидкости определяли содержание сравнительного соединения в плазме посредством ВЭЖХ/УФ по следующей методике:
Система ВЭЖХ: Gynkoteck P580 HPG-Pumpe+Gilson Abimed XL-231 Autosampler
Программное обеспечение: Mass-chrom
Колонка: 125x4мм протосил 120 3 ODS AQ 3 (фирма Bischoff)
Длина колонки: 125 мм
Детектирование: LC-MS/MS
МС-прибор: PE-Sciex API 365 (триплет-квадрополярный масс-спектрометр)
Программное обеспечение: MasQuan Software (PE-Sciex)
Род детектирования: MS/MS (MRM)
Скорость потока: 0,5 мл/мин
Объем инъекции: 100 мкл
Внутренний стандарт: SK-7 (фирма Aventis) в ацетонитриле
Подвижная фаза: ацетонитрил/2 мМоль раствора формиата аммония, рН 2,6 (70:30, об./об.)
Время удержания (Rt):
Внутренний стандарт: 4 мин.
Сравнительное соединение: 1,5 мин.
Граница достоверности метода 0,01 мкг/мл была идентична такой же, определенной посредством LC-MS/MS в примере с соединением 28.
Результаты
Содержание сравнительного соединения в плазме составляло максимально 1,5 мкг/мл. Экспозиция, измеренная в виде площади (AUC) под кривой, составляла 1,7 мкг/мл х час.
В сравнении с примером соединения 28 максимальное содержание в плазме крови было приблизительно на 60% ниже в сравнительном опыте, хотя сравнительного соединения было взято 50 мг/кг в два раза больше, чем соединения 28. Аналогичный результат показала также усредненная величина AUC для сравнительного соединения.
Величина IC50 для сравнительного соединения составляла в вышеописанном анализе с протеинтирозинкиназой 46,35 мкМ. Таким образом, IC50 отчетливо лучше, чем для соединения 28.
Еще отчетливее улучшение специфичности по отношению к IkB-киназе, если сопоставляются соотношение значения IC50 протеинтирозинкиназы к IkB-киназе. Этот показатель составляет для соединения 28 1650 (82,5/0,05) и для сравнительного соединения 46,35 (46,35/1,0; согласно данным WO 01/30774).
Аналогично было определено соотношение специфичности или уровень в плазме и экспозиция следующих примеров (см. табл.):
> означает лучше, чем...
1. Соединение формулы I
и/или стереоизомерная форма соединения формулы I, и/или физиологически совместимая соль соединения формулы I, причем
Х и М являются одинаковыми или разными и, независимо друг от друга, обозначают атом N или СН,
R1 и R11 являются одинаковыми или разными и независимо друг от друга обозначают
1. атом водорода,
2. F, Cl, J или Br,
R2 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы, включающей 1,3,4-оксадиазол, оксадиазолидиндион, оксадиазолон, тиазол, и
гетероарильный остаток является незамещенным или независимо друг от друга одно-, двух- или трехкратно замещенным
1.1. кето-остатком,
2. -C(O)-R5, где R5 обозначает атом водорода или -(С1-С4)-алкил, или
3. -C(O)-N(R7)-R8, где R7 и R8 независимо друг от друга обозначают атом водорода, -(С1-С4)-алкил-ОН, -O-(С1-С4)-алкил или -(С1-С4)-алкил,
R3 обозначает атом водорода или -(С1-С4)-алкил,
R4 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы, включающей тиазол, изотиазол, пиридин, пиразин, пиримидин, причем гетероарильный остаток незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен независимо друг от друга -(С1-С5)-алкилом, галогеном, трифторметилом, или
2. арильный остаток из группы, включающей фенил.
2. Соединение формулы I по п.1,
где Х и М являются одинаковыми или разными и независимо друг от друга обозначают атом N или СН,
R1 и R11 являются одинаковыми или разными и независимо друг от друга обозначают
1. атом водорода,
2. F, Cl, J или Br,
R2 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы, включающей 1,3,4-оксадиазол, оксадиазолидиндион, 1,2,3,5-оксадиазолон, тиазол, и гетероарильный остаток является незамещенным или независимо друг от друга одно-, двух- или трехкратно замещенным
1.1. кето-остатком,
2. -C(O)-N(R7)-R8, где R7 и R8 независимо друг от друга обозначают атом водорода, -(С1-С4)-алкил-ОН, -O-(С1-С4)-алкил или -(С1-С4)-алкил,
R3 обозначает атом водорода, метил или этил,
R4 обозначает
1. гетероарильный остаток из группы ненасыщенных, частично насыщенных или полностью насыщенных циклов, образованных из пиридина, пиразина, пиримидина, тиазола, или изотиазола,
причем гетероарильный остаток незамещен или одно-, двух- или трехкратно замещен независимо друг от друга -(С1-С4)-алкилом, F, Cl, J, Br, трифторметилом, или
2. фенил.
3. Соединение формулы I по п.1 или 2, представляющее собой
[(S)-2-дифениламино-1-(5-оксо-4,5-дигидро-[1,3,4]оксадиазол-2-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
[(S)-1-(5-оксо-4,5-дигидро-1,3,4-оксадиазол-2-ил)-2-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
[2-[(4-фтор-фенил)-пиридин-2-ил-амино]-1-(4Н-[1,2,4]триазол-3-ил)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
[1-карбамоил-2-(фенил-тиазол-2-ил-амино)-этил]-амид (S)-2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
[1-метоксикарбамоил-2-(фенил-пиридин-2-ил-амино)-этил]-амид (S)-2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридин-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-амино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
[1-(2-гидрокси-этилкарбамоил)-2-(фенил-пиримидин-2-ил-амино)-этил]-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
(S)-2-{[2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбонил]-амино}-3-[фенил-(4-трифторметил-пиримидин-2-ил)-амино]пропионовую кислоту,
{1-карбамоил-2-[(4-фтор-фенил)-(5-метил-пиримидин-2-ил)-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-индол-5-карбоновой кислоты,
((S)-1-карбамоил-2-дифениламино-этил)-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензоимидазол-5-карбоновой кислоты,
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиримидил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты, или
{1-карбамоил-2-[(фенил)-пиридил-2-ил-амино]-этил}-амид 2-(2-метиламино-пиримидин-4-ил)-1Н-бензимидазол-5-карбоновой кислоты.
4. Способ получения соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-3, отличающийся тем, что
а) соединение формулы IV,
где R1, R2 и R4 определены как в формуле I, подвергают взаимодействию с хлорангидридом или активированным сложным эфиром соединения формулы III,
причем D1 обозначает -СООН, и R11, X, М и R3 определены как в формуле I, в присутствии основания или, в случае необходимости, обезвоживающего средства в растворе, и переводят в соединение формулы I,
b) соединение формулы I, полученное по способу а), вследствие своей химической структуры существующее в энантиомерных формах, разделяют путем солеобразования с энантиомерно чистыми кислотами или основаниями, хроматографией на хиральных стационарных фазах или превращением посредством хиральных энантиомерно чистых соединений как аминокислоты, отделением полученных таким образом диастереомеров, и отщеплением хиральных вспомогательных групп в чистые энантиомеры, или
с) соединение формулы I, полученное по способу а) или b), выделяют или в свободной форме, или, в случае наличия кислотных или основных групп, переводят в физиологически совместимые соли.
5. Лекарственное средство, обладающее активностью в отношении IkB-киназы, отличающееся эффективным количеством, по меньшей мере, одного соединения формулы I и/или одной физиологически совместимой соли соединения формулы I и/или, в случае необходимости, одной стереоизомерной формы соединения формулы I, вместе с фармацевтически пригодным и физиологически совместимым носителем, добавкой и/или другими биологически активными и вспомогательными веществами.
6. Применение соединения формулы I по одному или нескольким пп.1-3 для получения лекарственного средства для профилактики и лечения всех заболеваний, протекание которых связано с повышенной активностью IkB-киназы.
