Антимикробный препарат

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологической промышленности и может быть использовано для защиты от инфекций, вызываемых микроорганизмами. Антимикробный препарат включает бактериальную нуклеазу в комбинации с электроактивированным водно-солевым раствором, содержащим 0,1% йодита калия и 0,3% хлорида натрия, и стабилизатором - глицерином, или сахарозой, или поливинилпирролидоном, или глюкозой, или альбумином. Изобретение позволило расширить спектр действия бактериальной эндонуклеазы, т.е. создать препарат, обладающий вирулицидным, фунгицидным, бактерицидным и хламидиоцидным действием без выраженной видо- и типоспецифичности. 1 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к ветеринарии, сельскому хозяйству, медицине, биотехнологии и микробиологической промышленности и может быть использовано для защиты от инфекций, вызываемых микроорганизмами.

В настоящее время рынок насыщен препаратами, ингибирующими рост и развитие микроорганизмов. Однако до сих пор не создан надежный универсальный препарат, способный угнетать рост и развитие бактерий, грибов, в также ДНК- и РНК-содержащих вирусов, оставаясь при этом нетоксичным для человека и животных. Обычно отсутствие видо- и типоспецифичности препаратов сочетается с их острой токсичностью в отношении теплокровных организмов или (и) агрессивностью в отношении окружающей среды.

Наиболее близким к заявляемому препарату является препарат «Эндоглюкин», созданный на основе бактериальной эндонуклеазы и применяемый для борьбы и профилактики инфекций пчел, вызываемых рядом РНК-содержащих вирусов [1].

Бактериальная эндонуклеаза - продукт структурного гена nuc, исходно найденного в геноме бактерий S.marcescens и позднее клонированного и экспрессированного в клетках S.marcescens и Е.colli [2]. Поскольку бактериальная эндонуклеаза - это природный биологический катализатор белковой природы, она нетоксична благодаря способности к самопроизвольной инактивации и безвредна для человека, животных и растений. Присутствие в среде бактериальной эндонуклеазы ускоряет нарушение фосфодиэфирных связей ДНК и РНК по сравнению с их спонтанным разрушением в 1016 раз. Фермент гидролизует нуклеиновые кислоты по эндонуклеолитическому механизму до моно-, ди-, три-, тетра- и олигонуклеотидов, чем обусловлено его воздействие на вирусы.

Влияние бактериальной эндонуклеазы на рост и размножение бактерий и грибов отсутствует, что было установлено в ходе разработки «Ингибитора РНК-геномных бактериофагов» для микробиологической промышленности и биотехнологии [3].

Задачей изобретения является расширение спектра действия бактериальной эндонуклеазы, т.е. создание препарата, обладающего вирулицидным, фунгицидным, бактерицидным и хламидиоцидным действием без выраженной видо- и типоспецифичности.

Поставленная задача решается применением препарата бактериальной эндонуклеазы в комбинации с электроактивированным водно-солевым раствором, содержащим 0,1% йодита калия и 0,3% хлорида натрия (препарат «Йодохлорин»), и стабилизатором.

Препарат эндонуклеазы представляет собой раствор с активностью не менее 10000 ед./мл (удельная активность 10000 ед./мг белка), содержащий 1 М Трис-HCl буфер, рН 6,5-9,5, и не менее 0,5 моль/л ионов магния.

Стабилизатор представляет собой 40-80% глицерин, или 30-70% сахарозу, или 50-90% поливинилпирролидон, или 40-80% глюкозу, или 0,5-10% альбумин.

Пример: Антимикробное действие испытывали в непосредственном контакте микроорганизмов с электроактивированным водно-солевым раствором, содержащим 0,1 мас.% йодита калия и 0,3 мас.% хлорида натрия, и 0,01% бактериальной эндонуклеазой в присутствии стабилизатора. Комбинированный препарат получали, смешивая равные объемы электроактивированного водно-солевого раствора (препарат «Йодохлорин»), исходно содержавшего 0,2 мас.% йодита калия и 0,6 мас.% хлорида натрия, и 0,02% раствора бактериальной эндонуклеазы, предварительно разведенной в 100 раз раствором стабилизатора. Фунгицидное, бактерицидное и хламидиоцидное действие оценивали по изменению числа жизнеспособных клеток стандартными методами. Вирулицидную активность определяли в отношении бактериофагов E.coli в перекрестном тесте на чашках Петри.

Минимальное время контакта микроорганизмов с электроактивированным водно-солевым раствором, содержащим 0,1 мас.% йодита калия и 0,3 мас.% хлорида натрия, и бактериальной эндонуклеазой в присутствии стабилизатора, вызывающее 40-90% снижение жизнеспособности микроорганизмов: РНК- и ДНК-содержащих вирусов, грамположительных и грамотрицательных бактерий, включая хламидии, а также несовершенных грибов, - при 20-40°, составляло 1 мин.

Созданный принципиально новый препарат обладает широким спектром действия в отношении микроорганизмов разных групп и представляет собой нетоксичное, экологически чистое вещество, проявляющее активность при мягких физиологических условиях.

Полученные данные показывают возможность применения препарата в качестве универсального средства защиты при инфекциях различной этиологии (бактерии, хламидии, грибы и вирусы), микробиологических и биотехнологических процессов от бактериофагов, а также в различных отраслях животноводства. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1
МикроорганизмыПрепаратДоза (мг, мас.%) или концентрация (%)Время экспозиции, минСнижение жизнеспособности, %
ОпытКонтроль
123456
Ser. marcescensИодохлорин0,1-0,31400
St. aureus0,1-0,31200
Aspergillus niger0,1-0,3100
Ascosphera apis0,1-0,3100
Chl. psittaci0,1-0,31100
Фаг fd0,1-0,3100
Фаг Т40,1-0,3100
Ser. marcescensЭндонуклеаза0,01100
St. aureus0,01100
Aspergillus niger0,01100
Ascosphera apis0,01100
Chl. psittaci0,01100
Фаг fd0,011200
Фаг f20,011400
Ser. marcescensГлицерин39,6100
St. aureus39,6100
Aspergillus niger39,6100
Ascosphera apis39,6100
Chl. psittaci39,6100
Фаг fd39,6100
Фаг f239,6100
Ser. marcescensСахароза29,7100
St. aureus29,7100
Aspergillus niger29,7100
Ascosphera apis29,7100
Chl. psittaci29,7100
Фаг fd29,7100
Фаг f229,7100
Ser. marcescensПоливинилпирролидон44,6100
St. aureus44,6100
Aspergillus niger44,6100
Ascosphera apis44,6100
Chl.psittaci44,6100
Фаг fd44,6100
Фаг f244,6100
Ser. marcescensГлюкоза39,6100
St. aureus39,6100
Aspergillus niger39,6100
Ascosphera apis39,6100
Chl. psittaci39,6100
Фаг fd39,6100
Фаг f239,6100
Ser. marcescensАльбумин0,495100
St. aureus0,495100
Aspergillus niger0,495100
Ascosphera apis0,495100
Chl. psittaci0,495100
Фаг fd0,495100
Фаг f20,495100
Ser. marcescens0,1-0,31900
0,01
39,6
St. aureus0,1-0,31800
0,01
39,6
Aspergillus niger0,1-0,31500
Антибактериальный препарат: Йодохлорин/эндонуклеаза/ глицерин0,01
39,6
Ascosphera apis0,1-0,31500
0,01
39,6
Chl. psittaci0,1-0,31600
0,01,
39,6
Фаг fd0,1-0,31800
0,0111
39,6
Фаг f20,1-0,31700
0,01
39,6
Ser. marcescens0,1-0,31800
0,01
29,7
St. aureus0,1-0,31700
0,01
29,7
Aspergillus niger0,1-0,31400
0,01
Антибактериальный препарат: Йодохлорин/эндонуклеаза/ сахароза29,7
Ascosphera apis0,1-0,31400
0,01
29,7
Chl.psittaci0,1-0,31500
0,01
29,7
Фаг fd0,1-0,31500
0,01
29,7
Фаг f20,1-0,31600
0,01
29,7
Ser. marcescens0,1-0,31800
0,01
44,6
St. aureus0,1-0,51700
0,01
44,6
Aspergillus niger0,1-0,31400
Антибактериальный препарат: Йодохлорин/ эндонуклеаза/поливинилпирролидон0,01
44,6
Ascosphera apis0,1-0,31400
0,01,
44,6
Chl. psittaci0,1-0,31500
0,01
44,6
Фаг fd0,1-0,31800
0,01
44,6
Фаг f20,1-0,31800
0,01
44,6
Ser. marcescens0,1-0,31600
0,01
39,6
St. aureus0,1-0,31600
0,01
39,6
Aspergillus niger0,1-0,31400
Антибактериальный препарат: Йодохлорин/эндонуклеаза/ глюкоза0,01
39,6
Ascosphera apis0,1-0,31400
0,01
39,6
Chl. psittaci0,1-0,31400
0,01
39,6
Фаг fd0,1-0,31700
0,01
39,6
Фаг f20,1-0,31600
0,01
39,6
Ser. marcescens0,1-0,31800
0,01
0,495
St. aureus0,1-0,31700
0,01
0,495
Aspergillus niger0,1-0,31400
Антибактериальный препарат: Йодохлорин/эндонуклеаза/ альбумин0,01
0,495
Ascosphera apis0,1-0,31400
0,01
0,495
Chl. psittaci0,1-0,31600
0,01
0,495
Фаг fd0,1-0,31700
0,01
0,495
Фаг f20,1-0,31600
0,01
0,495
Ser. marcescensПрототип «Эндоглюкин»0,01100
St. aureus0,01100
Aspergillus niger0,01100
Ascosphera apis0,01100
Chl. psittaci0,01100
Фаг fd0,01100
Фаг f20,011540

Источники информации

1. Аликин Ю.С., Сенженко Л.П., Клименко В.П. Развитие технологии получения и перспективы использования эндонуклеазы Serratia marcescens // Ферменты микроорганизмов: Сб. Докладов XI Всероссийской конференции. - Казань, 1998. - С.152-163.

2. Ball Т.К., Saurugger P.N., Benedik M.J. The extracellular nuclease gene of Serratia marcescens and its secretion from Escherichia coli // Gene. -1987. - V.57. - P.183-192.

3. Лещинская И.Б., Шарипова Ф.Р., Филимонова М.Н., Штенц Э., Рокштро А., Клуге 3. Ингибитор РНК-геномных бактериофагов / Патент '1781295 A1, SU, С12N 9/14, приор. 31.05.90, регистр. 14.10.93.

Антимикробный препарат, включающий бактериальную нуклеазу - продукт гена nucA (синоним nuc), отличающийся тем, что дополнительно содержит электроактивированный водно-солевой раствор, включающий 0,1 мас.% йодита калия и 0,3 мас.% хлорида натрия, и в качестве стабилизатора глицерин или сахарозу или поливинилпирролидон или глюкозу или альбумин.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и может быть использовано для анализа ДНК. .

Изобретение относится к генной инженерии. .
Изобретение относится к пищевой промышленности, в частности к технической микробиологии, биотехнологии, а именно к получению нового штамма-продуцента циклодекстринглюканотрансферазы (альфа-1,4-глюкан-4-гликозилтрансфераза циклизующая, КФ 2.4.1.19; ЦГТ-аза).

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии и касается получения нового штамма, используемого для выделения новой эндонуклеазы рестрикции Gla I. .

Изобретение относится к отрасли микробиологической промышленности, в частности к производству ферментов, и представляет собой новый штамм Bacillus macerans BS-04 - продуцент пектиназ, протеазы, ксиланазы и амилазы.

Изобретение относится к биотехнологии и генной инженерии и касается получения нового штамма, используемого для выделения новой эндонуклеазы рестрикции BisI, которая может быть использована для выявления модифицированной ДНК.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в легкой промышленности. .

Изобретение относится к биотехнологии и предназначено для осветления ферментных растворов. .
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и касается способа стимуляции миелопоэза. .
Изобретение относится к стоматологии, а именно к композициям для улучшения гигиены полости рта. .
Изобретение относится к медицине, в частности к урологии и урогинекологии, и касается лечения хронического трихомониаза. .
Изобретение относится к медицине, оторинолариногологии, и может быть использовано для лечения полипозного риносинусита. .

Изобретение относится к области медицины и касается способа модулирования роста клеток и, более точно, способа подавления роста неопластических клеток. .
Изобретение относится к медицине и предназначено для лечения больных туберкулезом легких. .
Изобретение относится к медицине, онкологии, гематологии. .
Изобретение относится к медицине, более конкретно к офтальмологии, и может быть использовано для лазерного лечения первичной открытоугольной глаукомы. .
Изобретение относится к медицине, в частности к акушерству, и касается лечения анемии во время беременности. .

Изобретение относится к биотехнологии. .

Изобретение относится к офтальмологии и может быть использовано для лечения тромбозов центральной вены сетчатки (ЦВС) и ее ветвей
Наверх