Модифицированные сахариды, имеющие улучшенную стабильность в воде

Модифицированный полисахарид, в частности модифицированный полисахарид Neisseria meningitidis серогруппы А, который сохраняет иммуногенность, но имеет улучшенную стабильность. Модифицированный полисахарид получают взаимодействием капсулярного полисахарида, или его фрагмента - олигосахарида, с бифункциональным реагентом типа CDI, сопровождаемого взаимодействием с аминосоединением, таким как диметиламин. Также описаны модифицированные полисахарид-белковые конъюгаты и вакцины, которые получают из таких конъюгатов. 10 н. и 60 з.п. ф-лы, 18 ил.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Модифицированный капсулярный сахарид, содержащий блокирующую группу в положении гидроксильной группы по меньшей мере на одном моносахаридном звене соответствующего нативного капсулярного сахарида, где капсулярный сахарид содержит фосфодиэфирные связи и где блокирующая группа является электроноакцепторной группой.

2. Модифицированный капсулярный сахарид по п.1, в котором по меньшей мере одно моносахаридное звено является нетерминальным моносахаридным звеном.

3. Модифицированный капсулярный сахарид по п.1, который включает по меньшей мере одну свободную гидроксильную группу или аминогруппу.

4. Модифицированный капсулярный сахарид по п.2, который включает по меньшей мере одну свободную гидроксильную группу или аминогруппу.

5. Модифицированный капсулярный сахарид по п.3, в котором по меньшей мере одна свободная гидроксильная группа является терминальной аномерной гидроксильной группой.

6. Модифицированный капсулярный сахарид по п.4, в котором по меньшей мере одна свободная гидроксильная группа является терминальной аномерной гидроксильной группой.

7. Модифицированный капсулярный сахарид по п.1, в котором блокирующая группа имеет формулу:

-O-X-Y или -OR³, где

Х представляет собой С(O), (S)O или SO₂;

Y представляет собой С_1-12алкил, С_1-12алкоксил, С_3-12циклоалкил, С_5-12арил или С_5-12арил-С_1-6алкил, каждый из которых может быть необязательно замещенным 1, 2 или 3 группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, CO₂H, CO₂ (C_1-6алкил), CN, CF₃ или CCl₃; или Y представляет собой NR¹R²;

R¹ и R² независимо выбраны из Н, C_1-12алкила, C_3-12циклоалкила, C_5-12арила, С_5-12арил-С_1-6алкила; или R¹ и R² могут быть объединены с образованием C_3-12 насыщенной гетероциклической группы;

R³ представляет собой C_1-12алкил или C_3-12циклоалкил, каждый из которых может необязательно быть замещен 1, 2 или 3 группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, СО₂(C_1-6алкил), CN, CF₃ или CCl₃; или R³ представляет собой С_5-12арил или С_5-12арил-С_1-6алкил, каждый из которых может быть необязательно замещенным 1, 2, 3, 4 или 5 группами, выбранными из F, Cl, Br, CO₂H, CO₂ (C_1-6алкил), CN, CF₃ или CCl₃.

8. Модифицированный капсулярный сахарид по п.2, в котором блокирующая группа имеет формулу:

-O-X-Y или -OR³,

где Х представляет собой С(O), (S)O или SO₂;

Y представляет собой С_1-12алкил, С_1-12алкоксил, С_3-12циклоалкил, С_5-12арил или С_5-12арил-С_1-6алкил, каждый из которых может быть необязательно замещенным 1, 2 или 3 группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, CO₂H, СО₂(С_1-6алкил), CN, CF₃ или CCl₃;

или Y представляет собой NR¹R²;

R¹ и R² независимо выбраны из Н, С_1-12алкила, С_3-12циклоалкила, С_5-12арила, С_5-12арил-С_1-6алкила; или R¹ и R² могут быть объединены с образованием С_3-12 насыщенной гетероциклической группы;

R³ представляет собой C_1-12алкил или C_3-12циклоалкил, каждый из которых может необязательно быть замещен 1, 2 или 3 группами, независимо выбранными из F, Cl, Br, CO₂(С_1-6алкил), CN, CF₃ или CCl₃; или R³ представляет собой С_5-12арил или С_5-12арил-С_1-6алкил, каждый из которых может быть необязательно замещенным 1, 2, 3, 4 или 5 группами, выбранными из F, Cl, Br, CO₂H, CO₂(C_1-6алкил), CN, CF₃ или CCl₃.

9. Модифицированный капсулярный сахарид по п.3, в котором блокирующей группой является -OC(O)NR¹R² или -ОС(O)CF₃.

10. Модифицированный капсулярный сахарид по п.4, в котором блокирующей группой является -OC(O)NR¹R² или -ОС(O)CF₃.

11. Модифицированный капсулярный сахарид по п.5, в котором блокирующей группой является -OC(O)NR¹R², и R¹ и R² являются независимо выбранными из C_1-6-алкила.

12. Модифицированный капсулярный сахарид по п.6, в котором блокирующей группой является -OC(O)NR¹R², и R¹ и R² являются независимо выбранными из C_1-6алкила.

13. Модифицированный капсулярный сахарид по п.1, в котором оба R¹ и R² представляют собой метил.

14. Модифицированный капсулярный сахарид по любому из пп.1-13, в котором по меньшей мере 10% моносахаридных звеньев включают блокирующую группу.

15. Модифицированный капсулярный сахарид по любому из пп.1-13, в котором соответствующий капсулярный сахарид включает моносахаридные звенья, связанные фосфодиэфирными связями.

16. Модифицированный капсулярный сахарид по п.14, в котором соответствующий капсулярный сахарид включает моносахаридные звенья, связанные фосфодиэфирными связями.

17. Модифицированный капсулярный сахарид по п.15, в котором соответствующий капсулярный сахарид является сахаридом из Neisseria meningitidis серогруппы А.

18. Модифицированный капсулярный сахарид по п.16, в котором соответствующий капсулярный сахарид является сахаридом из Neisseria meningitidis серогруппы А.

19. Модифицированный капсулярный сахарид по любому из пп.17 и 18, в котором блокирующая группа находится в любом из 4- и/или 3-положений соответствующего сахарида Neisseria meningitidis серогруппы А.

20. Модифицированный капсулярный сахарид по любому из пп.17 и 18, в котором блокирующая группа находится в любом из положений 4-соответствующего сахарида Neisseria meningitidis серогруппы А.

21. Модифицированный капсулярный сахарид по любому из пп.1-13, 16-18, который представляет собой олигосахарид.

22. Модифицированный капсулярный сахарид по п.14, который представляет собой олигосахарид.

23. Модифицированный капсулярный сахарид по п.15, который представляет собой олигосахарид.

24. Модифицированный капсулярный сахарид по п.19, который представляет собой олигосахарид.

25. Модифицированный капсулярный сахарид по п.20, который представляет собой олигосахарид.

26. Модифицированный капсулярный сахарид по любому из пп.1-13, 16-18, 22-25, для применения в качестве лекарственного средства.

27. Модифицированный капсулярный сахарид по п.14, для применения в качестве лекарственного средства.

28. Модифицированный капсулярный сахарид по п.15, для применения в качестве лекарственного средства,

29. Модифицированный капсулярный сахарид по п.19, для применения в качестве лекарственного средства.

30. Модифицированный капсулярный сахарид по п.20, для применения в качестве лекарственного средства.

31. Модифицированный капсулярный сахарид по п.21, для применения в качестве лекарственного средства.

32. Сахарид формулы:

где Т имеет формулу (А) или (В)

n является целым числом от 1 до 100;

каждая группа Z независимо выбрана из -ОН или блокирующей группы, определенной в пп.1, 7-13; и

каждая группа Q независимо выбрана из -ОН или блокирующей группы, определенной в пп.1, 7-13;

W выбран из -ОН или блокирующей группы, определенной в пп.1, 7-13;

V выбран из -NH₂, -NH-E, где Е является защитной группой азота;

и где больше, чем приблизительно 7% групп Q представляют собой блокирующие группы.

33. Сахарид по п.32, в котором по меньшей мере 50% групп Z представляют собой ОАс.

34. Сахарид по п.32 или 33, в котором n является целым числом от 15 до 25.

35. Сахарид по п.32 или 33, в котором по меньшей мере 10% групп Q представляют собой блокирующие группы.

36. Сахарид по п.34, в котором по меньшей мере 10% групп Q представляют собой блокирующие группы.

37. Модифицированный сахарид по п.32 или 33, для применения в качестве лекарственного средства.

38. Модифицированный сахарид по п.34, для применения в качестве лекарственного средства.

39. Способ получения модифицированного сахарида по п.1, включающий стадии:

(a) обеспечения капсулярного сахарида, имеющего по меньшей мере одну гидроксильную группу на моносахаридном звене; и

(b) преобразования по меньшей мере одной упомянутой гидроксильной группы в блокирующую группу;

где капсулярный сахарид содержит фосфодиэфирную связь и где блокирующая группа является электроноакцепторной группой.

40. Способ модификации капсулярного сахарида, содержащий стадии:

(a) обеспечения капсулярного сахарида, имеющего по меньшей мере одну гидроксильную группу на моносахаридном звене;

(b) преобразования по меньшей мере одной упомянутой гидроксильной группы в блокирующую группу -OC(O)NR¹ R² путем (b1) взаимодействия капсулярного сахарида с бифункциональным реагентом в органическом растворителе и (b2) взаимодействия продукта стадии (b1) с аминосоединением формулы (I)

где бифункциональный реагент выбран из 1,1'-карбонилдиимидазола (CDI), карбонилди-1,2,4-триазола (CDT), карбонилди-1,2,3-бензотриазола (CDB), дифенилкарбоната, бромциана, фосгена или трифосгена, и

где R¹ и R² независимо выбраны из Н, С_1-12алкила, С_3-12циклоалкила, С_5-12арила, С_5-12арил-С_1-6алкила; или R¹ и R² могут быть объединены с образованием С_3-12 насыщенной гетероциклической группы.

41. Способ по п.39 или 42, в котором блокирующая группа определена в любом из пп.1, 7-13.

42. Способ по п.41, в котором органическим растворителем является апротонный растворитель.

43. Способ по п.42, в котором апротонный растворитель выбран из диметилсульфоксида (DMSO), диметилформамида (DMF), формамида, гексаметилфосфорамида (НМРА), гексаметилфосфортриамида (НМРТ), 1,3-диметил-3,4,5,6-тетрагидро-2(1Н)-пиримидинона (DMPU) или диметилацетамида (DMAC).

44. Способ по п.42 или 43, в котором апротонным растворителем является DMSO.

45. Способ по п.43, в котором бифункциональный реагент выбран из 1,1'-карбонилдиимидазола (CDI), карбонилди-1,2,4-триазола (CDT), карбонилди-1,2,3-бензотриазола (CDB), дифенилкарбоната, бромциана, фосгена или трифосгена.

46. Способ по п.44, в котором бифункциональный реагент выбран из 1,1'-карбонилдиимидазола (CDI), карбонилди-1,2,4-триазола (CDT), карбонилди-1,2,3-бензотриазола (CDB), дифенилкарбоната, бромциана, фосгена или трифосгена.

47. Способ по п.45 или 46, в котором бифункциональным реагентом является CDI.

48. Способ по любому из пп.39, 40, 42, 43, 45 и 46, в котором модифицированным капсулярным сахаридом является модифицированный капсулярный олигосахарид.

49. Способ по п.41, в котором модифицированным капсулярным сахаридом является модифицированный капсулярный олигосахарид.

50. Способ по п.44, в котором модифицированным капсулярным сахаридом является модифицированный капсулярный олигосахарид.

51. Способ по п.47, в котором модифицированным капсулярным сахаридом является модифицированный капсулярный олигосахарид.

52. Способ по п.48, в котором капсулярный сахарид на стадии (а) является капсулярным олигосахаридом, полученным сортировкой по размерам соответствующего нативного капсулярного полисахарида.

53. Способ по любому из пп.49-51, в котором капсулярный сахарид на стадии (а) является капсулярным олигосахаридом, полученным сортировкой по размерам соответствующего нативного капсулярного полисахарида.

54. Способ по п.48, в котором капсулярный сахарид на стадии (а) является нативным капсулярным полисахаридом, и способ дополнительно включает стадию (с), на которой продукт стадии (b) сортируется по размеру, обеспечивая, таким образом, модифицированный капсулярный олигосахарид.

55. Способ по любому из пп.49-51, в котором капсулярный сахарид на стадии (а) является нативным капсулярным полисахаридом, и способ дополнительно включает стадию (с), на которой продукт стадии (b) сортируется по размеру, обеспечивая, таким образом, модифицированный капсулярный олигосахарид.

56. Способ модификации полисахарида Neisseria meningitidis серогруппы А, включающий стадии:

(a) обеспечения нативного полисахарида Neisseria meningitidis серогруппы А;

(b) сортировки по размерам вышеупомянутого полисахарида для обеспечения олигосахарида; и

(c) преобразования по меньшей мере одной гидроксильной группы олигосахарида в защитную группу в соответствии с п.40.

57. Способ модификации полисахарида Neisseria meningitidis серогруппы А, включающий стадии:

(a) обеспечения нативного полисахарида Neisseria meningitidis серогруппы А;

(b) преобразования по меньшей мере одной гидроксильной группы полисахарида в блокирующую группу в соответствии с п.40; и

(c) сортировки по размерам полученного полисахарида.

58. Сахарид-белковый конъюгат из модифицированного сахарида по любому из пп.1-36 и белкового носителя, где белковый носитель представляет собой бактериальный токсин или анатоксин и где сахарид-белковый конъюгат получен путем конъюгации белкового носителя с модифицированным сахаридом через концевую гидроксильную группу или через концевую амино группу.

59. Конъюгат по п.58, в котором бактериальном токсином или анатоксином является дифтерийный токсин или анатоксин.

60. Конъюгат по п.58, в котором бактериальным токсином или анатоксином является CRM₁₉₇.

61. Конъюгат по любому из пп.58-60 для применения в качестве лекарственного средства.

62. Фармацевтическая композиция, обладающая иммуногенной активностью в отношении млекопитающих, включающая (а) модифицированный сахарид по любому из пп.1-36, и/или сахарид-белковый конъюгат по любому из пп.58-60, и (b) фармацевтически приемлемый носитель.

63. Композиция по п.62, дополнительно включающая сахаридный антиген из N.Meningitidis одной или более серогрупп С, W135 и Y, сахарид, необязательно являющийся олигосахаридом и необязательно являющийся конъюгированным с белком-носителем.

64. Композиция по п.62 или 63, дополнительно включающая вакцинный адъювант.

65. Композиция по п.64, в которой адъювант является фосфатом алюминия.

66. Композиция по любому из пп.62, 63 или 65, которая является вакциной против болезни, вызываемой Neisseria meningitidis.

67. Композиция по п.64, которая является вакциной против болезни, вызываемой Neisseria meningitidis.

68. Способ увеличения ответа антител у млекопитающего, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.62-67 млекопитающему.

69. Применение модифицированного полисахарида по любому из пп.1-36 или конъюгата по любому из пп.58-60 для производства лекарственного средства для профилактики или лечения болезни, вызываемой одной или более капсулярной бактерией.

70. Применение по п.69, где болезнью является бактериальный менингит.