Способ культивирования бактерий leuconostoc mesenteroides вкпм в-9280

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано в пищевой промышленности в производстве продуктов диетического и диабетического назначения и в медицине. Способ предусматривает приготовление питательной среды, содержащей в своем составе (г/л): дрожжевой экстракт - 20; MgSO4·7H2O - 0,1; NaCl - 0,01; CaCl2 - 0,02; KH3PO4 - 20; MnSO4 - 0,01; FeSO4 - 0,01; сахарозу - 175. Затем приготовленную питательную среду засевают бактериями Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 в количестве 8% от объема питательной среды, и культивируют без аэрации в течение 12 часов при температуре 27°С и рН среды 7,0. Изобретение позволяет увеличить выход биомассы бактериальных клеток. 1 табл.

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к способам получения штаммов - продуцентов изомальтулозосинтазы. Фермент может найти применение в пищевой промышленности в производстве продуктов диетического и диабетического назначения и в медицине.

Техническая задача изобретения - разработка способа культивирования бактерий Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280, обладающих изомальтулозосинтазной активностью.

Способ культивирования бактерий Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280, предусматривает приготовление питательной среды, содержащей в своем составе (г/л): дрожжевой экстракт - 20; MgSO4·7H2O - 0,1; NaCl - 0,01; CaCl2 - 0,02; KH3PO4 - 20; MnSO4 - 0,01; FeSO4 - 0,01; сахарозу - 175, воду - остальное, засев ее бактериями Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 в количестве 8% от объема питательной среды, культивирование бактерий без аэрации в течение 12 часов при температуре 27°С и рН 7,0.

Технический результат заключается в повышении изомальтулозосинтазной активности бактерий Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280, интенсификации процесса получения фермента, увеличении выхода биомассы бактериальных клеток.

Способ осуществляется следующим образом.

Готовят питательную среду следующего состава (г/л): дрожжевой экстракт - 20; MgSO4·7H2O - 0,1; NaCl - 0,01; CaCl2 - 0,02; KH2PO4 - 20; MnSO4 - 0,01; FeSO4 - 0,01; сахароза - 175, вода - остальное, значение рН среды 7,0, засевают бактериями Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 в количестве 8% от объема питательной среды, культивирование бактерий ведут без аэрации в течение 12 часов при температуре 27°С. Культивирование проводят в колбах емкостью 750 мл с объемом питательной среды 200 мл. Культуральную жидкость отделяют центрифугированием от клеток, отбирают 0,1 мл культуральной жидкости и используют для определения активности изомальтулозосинтазы, бактериальные клетки взвешивают для определения выхода биомассы.

С целью определения ферментативной активности используют следующий состав реакционной смеси: 0,2 мл 4% сахарозы, 0,1 мл культуральной жидкости. Реакция протекает при температуре 35°С, время реакции составляет 30 минут. Определение концентрации изомальтулозы, образовавшейся в процессе изомеризации сахарозы, осуществляют по методу Сомоджи-Нельсона с учетом коэффициента пересчета, полученного при построении калибровочного графика. Об активности изомальтулозосинтазы судят по изменению концентрации изомальтулозы, полученной в результате изомеризации сахарозы. Активность изомальтулозосинтазы рассчитывают по формуле

где Сим - концентрация изомальтулозы, мкг/мл;

Mrим - молекулярная масса изомальтулозы,

τ - время гидролиза, мин;

n - разведение.

Способ поясняется следующими примерами.

Пример 1. Культивирование бактерий Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 на среде с содержанием сахарозы в среде 125 г/л.

Готовят питательную среду следующего состава (г/л): дрожжевой экстракт - 20; MgSO4·7H2O - 0,1; NaCl - 0,01; CaCl2 - 0,02; KH3PO4 - 20; MnSO4 - 0,01; FeSO4 - 0,01; сахароза - 125, вода - остальное, значение рН среды 7,0, засевают бактериями Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 в количестве 8% от объема питательной среды, культивирование бактерий ведут без аэрации в течение 12 часов при температуре 27°С. Культивирование проводят в колбах емкостью 750 мл с объемом питательной среды 200 мл. Культуральную жидкость отделяют центрифугированием от клеток, отбирают 0,1 мл культуральной жидкости и используют для определения активности изомальтулозосинтазы. Бактериальные клетки взвешивают для определения выхода биомассы. Данные анализа представлены в таблице.

Пример 2.

Продуцент выращивают на питательной среде, аналогичной примеру 1, но сахарозу добавляют в количестве 175 г/л. Культивирование бактерий проводят аналогично примеру 1. Данные анализа представлены в таблице.

Пример 3.

Продуцент выращивают на питательной среде, аналогичной примеру 1, но сахарозу добавляют в количестве 220 г/л. Культивирование бактерий проводят аналогично примеру 1. Данные анализа представлены в таблице.

Таблица
ПоказателиДанные по примерам
123
Концентрация сахарозы в среде, г/л125175220
Активность изомальтулозосинтазы, % от максимальной величины58,710084,8
Выход биомассы клеток, мг/мл0,00750,0150,012

Как видно из таблицы, способ культивирования бактерий Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 на питательной среде следующего состава (г/л): дрожжевой экстракт - 20; MgSO4·7H2O - 0,1; NaCl - 0,01; CaCl2 - 0,02; KH2PO4 - 20; MnSO4 - 0,01; FeSO4 - 0,01, вода - остальное с содержанием сахарозы 125-220, количеством посевного материала бактерий 8%, температурой культивирования 27°С в течение 12 часов наиболее эффективен для максимального биосинтеза изомальтулозосинтазы.

Предложенный способ культивирования бактерий Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 позволяет:

- повысить активность изомальтулозосинтазы Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280;

- интенсифицировать процесс получения фермента;

- повысить выход биомассы бактериальных клеток.

Аналоги не обнаружены.

Способ культивирования бактерий Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280, предусматривающий приготовление питательной среды, содержащей в своем составе, г/л: дрожжевой экстракт - 20; MgSO4·7H2O - 0,1; NaCl - 0,01; CaCl2 - 0,02; KH3PO4 - 20; MnSO4 - 0,01; FeSO4 - 0,01; сахарозу - 175, засев ее бактериями Leuconostoc mesenteroides ВКПМ В-9280 в количестве 8% от объема питательной среды и культивирование без аэрации в течение 12 ч при температуре 27°С и рН среды 7,0.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в биологической промышленности для получения вакцин против эшерихиозов животных. .
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной микробиологии, и может быть использовано в лабораторной практике для выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки Е.coli O157:H7 в биологическом материале.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в микробиологических лабораториях различного профиля. .
Изобретение относится к области ветеринарии и может быть использовано при дифференциальной диагностике туберкулеза, вызванного микобактериями птичьего вида. .
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к культивированию микобактерий туберкулеза на жидких питательных средах. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской и промышленной микробиологии. .
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологии, и может быть использовано в медицине, ветеринарии, прикладной биотехнологии, пищевой промышленности и смежных отраслях промышленности.
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии и может быть использовано для лабораторной диагностики туберкулеза. .
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к штаммам бактерий для биотестирования токсичности объектов окружающей среды и может быть использовано при проведении эколого-токсических исследований, при мониторинге водных экосистем.
Изобретение относится к молочной промышленности, в частности к производству ферментированных молочных продуктов. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к очистке объектов окружающей среды от загрязнения полициклическими ароматическими углеводородами и углеводородов нефти.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано при мониторинге биологических и генетических свойств возбудителя сифилиса - Treponema pallidum (патогенной бледной трепонемы), а также с целью поддержания жизнеспособности «диких штаммов» патогенной бледной трепонемы и при разработке методов серодиагностики сифилиса с использованием корпускулярных антигенов.
Изобретение относится к микробиологической промышленности. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в биологической промышленности для получения вакцин против эшерихиозов животных. .
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к ветеринарной микробиологии, и может быть использовано в лабораторной практике для выделения и идентификации энтерогеморрагической кишечной палочки Е.coli O157:H7 в биологическом материале.
Изобретение относится к биотехнологии
Наверх