Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней
Владельцы патента RU 2357756:
Государственное научное учреждение Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (RU)
Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida серовариантов А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II, Streptococcus suis серовара II (штамм Касли), грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта. При этом в качестве продуцентов используют волов, а гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных тел с интервалом 2-3 дня. Грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных тел, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия. Способ нетрудоемок, прост в исполнении, позволяет увеличить выход сыворотки в 3,2-3,5 раза. 2 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения гипериммунной сыворотки для лечения и профилактики гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней. Известен способ изготовления гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, получаемой от продуцентов свиней (RU 2118169 А61К 39/02, 39/09, 39/102 - прототип).
Однако данный способ экономически нецелесообразен, т.к. срок эксплуатации свиней составляет 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Кроме того, процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Целесообразно использовать в качестве продуцентов волов, срок эксплуатации которых не менее 5 лет.
Технический результат заявляемого изобретения состоит в повышении выхода целевого продукта и упрощении способа, а также применении препарата одновременно против трех заболеваний.
Указанный технический результат предлагаемого способа достигается тем, что для создания грундиммунитета волам (не более один раз в пять лет) двукратно подкожно в разные участки тела вводят инактивированные и концентрированные гемофилезный, стрептококковый и пастереллезный антигены: сначала по 10-15 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см3 Al(ОН)3, а через 14 дней - по 20-25 млрд м.т.
Гипериммунизацию волов проводят 7-10-внутримышечными инъекциями в возрастающих дозах инактивированных и концентрированных антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общей дозе каждого антигена 1800-2400 млрд микробных тел с интервалом 2-3 дня.
В процессе эксплуатации после каждого взятия крови (16-17 см3 крови на 1 кг массы тела) через 1-2 дня проводят очередные внутримышечные инъекции инактивированного концентрированного гемофилезного, стрептококкового и пастереллезного антигенов в дозе по 400-500 млрд м.т каждого, а через 8-10 дней после этого от продуцентов снова берут кровь.
Способ осуществляют следующим образом.
Пример 1. Гипериммунизацию волов проводили путем 10 внутримышечных инъекций в возрастающих дозах инактивированного и концентрированного гемофилезного, стрептококкового и пастереллезного антигенов, очищенных от культуральной жидкости в общем количестве 2400 млрд м.т каждого антигена с интервалом 2-3 дня по схеме:
40-60-100-150-250-350-450 - 2-недельный перерыв - 200-300-500 млрд м.т.
Результаты определения активности
Титры полученной сыворотки составили:
| контроль (прототип) | ||
| к Pasteurella multocida | А 1:128 | 1:128 |
| реакция пассивной | В 1:512 | 1:512 |
| гемагглютинации (РПГА) | Д 1:128 | 1:128 |
| Haemophilus pleuropneumoniae 5870 | 1:320 | 1:320 |
| Реакция агглютинации (PA) ГУ-19 | 1:640 | 1:640 |
| Streptococcus suis Касли | ||
| Реакция агглютинации (РА) | 1:200 | 1:200 |
Пример 2. В сравнении с примером 1 увеличено количество инъекций и дозы антигенов при гипериммунизации. Проводят 11 инъекций в общем количестве 3000 млрд м.т каждого антигена по схеме: 40-60-100-150-250-350-450 - 2-недельный перерыв - 200-300-500-600 млрд м.т.
Результаты определения активности
Титры получаемой сыворотки составили:
| Контроль (прототип) | |||
| к P.multocida | A | 1:128 | 1:128 |
| РПГА | В | 1:512 | 1:512 |
| Д | 1:128 | 1:128 | |
| H.pleuropneumoniae 5870 | 1:320 | 1:320 | |
| РА | ГУ-19 | 1:640 | 1:640 |
| Str. Suis (PA) | 1:200 | 1:200 |
Увеличение числа инъекций больше 10 и общего количества антигенов больше 2400 млрд м.т не привело к дальнейшему повышению титра антител сыворотки. Увеличение количества антигенов и числа инъекций нецелесообразно, так как оказывает дополнительную нагрузку на иммунную систему продуцентов и не выгодно с экономической точки зрения.
Пример 3. Уменьшили количество инъекций до 7 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1800 млрд м.т:
40-60-100-200-300-500-600 млрд. м.т.
Титры полученной сыворотки составили:
| Контроль (прототип) | |||
| к P.multocida | A | 1:128 | 1:128 |
| РПГА | В | 1:512 | 1:512 |
| Д | 1:128 | 1:128 | |
| H.pleuropneumoniae | 5870 | 1:320 | 1:320 |
| PA | ГУ-19 | 1:640 | 1:640 |
| Str. Suis (PA) | 1:200 | 1:200 |
Уменьшение числа инъекций до 7 при уменьшении общего количества антигенов до 1800 млрд м.т не привело к снижению титра антител в сыворотке.
Пример 4. Уменьшили количество инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т по схеме:
40-60-150-250-350-450 млрд м.т.
Титры полученной сыворотки составили:
| Контроль (прототип) | |||
| к P.multocida | A | 1:64 | 1:128 |
| РПГА | В | 1:256 | 1:512 |
| Д | 1:64 | 1:128 | |
| H.pleuropneumonie | 5870 | 1:160 | 1:320 |
| PA | ГУ-19 | 1:320 | 1:640 |
| Str. Suis (PA) | 1:100 | 1:200 |
Уменьшение числа инъекций до 6 при уменьшении общего количества вводимых антигенов до 1300 млрд м.т каждого антигена привело к снижению титров антител в полученной сыворотке.
Предложенный способ апробирован с положительными результатами в лабораторных и производственных условиях.
Предложенный способ в отличие от известного обладает следующими преимуществами:
1. Увеличивается выход сыворотки в 3,2-3,5 раза (табл.2).
| Таблица 2 | |||
| Вид продуцента | Вес, | Кол-во крови с 1 кг живого веса |
Выход, |
| (кг) | животного, | (мл) | |
| (мл) | |||
| свиньи | 150-160 | 13 | 1950-2080 |
| волы | 400-450 | 16 | 6400-7200 |
2. Более прост в исполнении и менее трудоемок.
Срок эксплуатации свиней 5-6 месяцев (в зависимости от длины хвоста и клинического состояния продуцентов). Процесс иммунизации и крововзятий у этого вида животных крайне трудоемок. Напротив, срок эксплуатации волов не менее 5 лет.
Отсюда вытекает, что грунд- и гипериммунизация свиней проводится раз в 5-6 месяцев, в то время как волов - раз в 5 лет.
3. Более экономически целесообразен, что вытекает из пунктов 1 и 2. Кроме того, данная сыворотка может использоваться для лечения и профилактики гемофилеза, стретококкоза и пастереллеза одновременно.
Способ получения гипериммунной сыворотки против гемофилеза, стрептококкоза и пастереллеза свиней, включающий приготовление антигена из инактивированных и концентрированных культур Pasterella multocida серовариантов А, В и Д и Haemophilus pleuropneumoniae сероваров I и II, Streptococcus suis серовара II (штамм Касли), грундиммунизацию и гипериммунизацию возрастающими дозами антигена с последующим крововзятием и выделением целевого продукта, отличающийся тем, что в качестве продуцентов используют волов, при этом гипериммунизацию проводят 7-10-кратными внутримышечными инъекциями в общей дозе каждого антигена 1800-2400 миллиардов микробных тел с интервалом 2-3 дня, а грундиммунизацию осуществляют подкожно в разные участки тела двукратно сначала по 10-15 миллиардов микробных тел, а через 14 дней по 20-25 миллиардов микробных тел с добавлением 10 см3 гидроокиси алюминия.
