Способ получения дипептидов лупанового ряда

Изобретение относится к способу получения тритерпеновых дипептидов лупанового ряда, проявляющих противовирусную антипролиферативную и иммуностимулирующую активность. Целевые дипептиды синтезируются взаимодействием метилового эфира N-(9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты с хлорангидридами бетулоновой (3-оксо-луп-20(29)-ен-28-овой) и дигидробетулоновой (3-оксо-лупан-28-овой)кислот.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения дипептидов лупановых тритерпеноидов N{N-[3-оксо-луп-20(29)-ен-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (I) и N'{N-[3-оксо-лупан-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (II),

представляющих интерес для использования в медицине в качестве лекарственных агентов.

N{N-[3-Оксолуп-20(29)-ен-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропионовая кислота (I) обладает противовирусной (анти-ВИЧ, противогерпесной) и иммуностимулирующей активностью ([1], Патент РФ 2211843 от 25.01.2002 г. по заявке 2002.102338/04. БИПМ. 2003. №25. ч.3, с.498-499). В работе ([2] А.Б.Шинтяпина, Э.Э.Шульц, Н.И.Петренко, Н.В.Узенкова, Г.А.Толстиков, Н.В.Пронкина, B.C.Кожевников, А.Г.Покровский. Биоорганическая химия. Т.33. №6. 620-626) показано, что N'{N-[3-оксо-20(29)-лупен-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропионовая кислота (I) ингибирует рост опухолевых клеток МТ-4, MOLT-4, СЕМ и Hep G2. Соединение (I) является активным индуктором апоптоза в лейкозных клетках и клетках гепатокарциномы in vitro [2]. Известны другие пептиды и амиды бетулоновой кислоты, обладающие анти-ВИЧ ([3-5], F.Soler, С.Poujade, М. Evers, J.-С.Carry, Y.Henin, A.Bousseau, T.Huet, R.Pauwels, E.De Clercq, J. Med. Chem., 1996, V.39. 1069-1083; I.-C.Sun, C.-H.Chen, Y.Kashiwada, J.-H.Wu, H.-K.Wang, K.-H.Lee, J. Med. Chem., 2002, V.45. 4271-4275; P.Dzubak, M.Hajduch, D.Vydra, A.Hustova, M.Kvasnica, D.Biedermann, L.Markova, M.Urban, J.Sarek, Nat. Prod. Rep., 2006. V.23. P.394-411) и противоопухолевой активностью ([6], В.В.Saxena, L.Zhu, M.Нао, Е.Kisilis, М.Katdare, О.Oktem, A.Bomshteyn, P.Rathnam, Bioorg. Med. Chem. Lett., 2006, V.14. 6349-6358).

В работах [3,4] показано, что амиды 28,29-дигидробетулоновой кислоты являются более активными анти-ВИЧ агентами, чем соответствующие производные бетулоновой кислоты.

Известный способ получения дипептида (I) из бетулоновой кислоты (III) заключается в постадийном построении боковой цепи (схема 1) [1]. Недостатками указанного способа являются

- необходимость хроматографической очистки промежуточных и конечного продуктов, усложняющей процесс синтеза;

- использование дорогостоящих и высокотоксичных реагентов, например дициклогексилкарбодиимида;

- малая гибкость подхода, не позволяющая варьировать структуру тритерпенового фрагмента.

Схема 1

Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в разработке технологичного способа получения дипептидов, отличающегося универсальностью подхода и основанного на использовании блок-синтона.

Поставленная задача решается способом синтеза дипептидов, основанном на использовании блочного подхода. На первой стадии проводится синтез пептидного блока, имеющего строение метилового эфира N-9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (IV). Синтез пептида (IV) осуществлен по схемам 2 или 3 из карбобензокси- или фталоильного производных 9-аминононановой кислоты (Va, б) путем взаимодействия хлорангидридов N-карбобензокси- (VIa) или N-фталоил-9-аминононановой кислоты (VIб) с метиловым эфиром 3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (VII) с последующим снятием защитных групп в соединениях (VIIIa, б).

При обеспечении мягких условий на стадии получения хлорангидрида (VIa) выход пептида (IV) по схеме 2 составляет 78-79% в расчете на исходную 9-аминононановую кислоту. При этом карбобензоксизащита легко удаляется гидрогенолизом без затрагивания сложноэфирной группы.

Общий выход соединения (IV) по схеме 3 (с использованием более распространенной и дешевой фталоильной защиты) составляет 50% (лимитирующая стадия - снятие фталоильной защиты). Попытка расщепления фталоильного производного спиртовым раствором гидразина и соляной кислотой не приводит к успеху; снятие защиты проводили с использованием гидроксиламина. Гидрохлорид 9-амнононаноил-β-фенилаланина переводили в метиловый эфир IV обработкой хлористым тионилом в метаноле.

Схема 2

Схема 3

Дипептид (IV) в виде гидрохлорида является блок-синтоном, способным храниться неограниченное время. Синтез целевых соединений (I) и (II) проводится взаимодействием хлорангидридов бетулоновой (IX) и дигидробетулоновой (X) кислот с гидрохлоридом пептида (IV) в среде хлористого метилена в присутствии триэтиламина (схема 4). Продукты конденсации (XI, XII) гладко омыляются в целевые дипептиды (I, II) (общий выход 75-85% на две стадии).

Преимущества предлагаемого способа заключаются в следующем:

- разработан технологичный способ синтеза дипептидов лупановых тритерпеноидов, не требующий применения хроматографической очистки продуктов и позволяющий масштабирование синтеза;

- способ обеспечивает выходы целевых продуктов не ниже 75% при чистоте не ниже 95%;

- способ исключает применение дорогостоящих и токсичных реагентов;

- способ позволяет проводить синтез практически неограниченного числа дипептидов методами комбинаторного синтеза.

Схема 4

Изобретение иллюстрируется следующими примерами

Пример 1. Синтез N-карбобензокси-9-аминононановой кислоты (Vа).

а) Бензиловый эфир хлормуравьиной кислоты вакуумируют на роторном испарителе при 40-45°С в течение 1 ч.

б) 12.3 г гидрохлорида 9-аминононановой кислоты растворяют в 250 мл воды с 5 г гидроксида натрия. После растворения массу фильтруют, доводят объем раствора до 350 мл добавлением воды.

в) В стакан объемом 600 мл, снабженный мешалкой, термометром и двумя капельными воронками, заливают раствор натриевой соли 9-аминононановой кислоты (п.б) и при перемешивании за 20-30 мин одновременно прикапывают раствор гидроокиси натрия (3 г в 50 мл воды) и 45 мл бензилового эфира хлормуравьиной кислоты. Температура дозировки 15-20°С. Реакционную массу выдерживают при перемешивании 10-15 мин, добавляют 100 мл бензола, быстро нагревают до 40-45°С и переносят в делительную воронку. Водный слой отделяют, вновь нагревают до 40-45°С, добавляют 50 мл бензола и разделяют слои. Повторяют экстракцию еще раз. Водный слой фильтруют.Фильтрат подкисляют разбавленной соляной кислотой (1: 10 по объему) до рН 2-3. Образующуюся суспензию охлаждают до 8-10°С. Осадок N-карбобензокси-9-аминононановой кислоты (Va) отфильтровывают, промывают водой (2 раза по 50 мл) и сушат. Выход соединения (Va) 90%. ТСХ (бензол: метанол; 4:1); т.пл. 88-90°С. ИК-спектр: (KBr, см^-1) 3325 с, 2940 с, 2852 ср, 1685 с, 1532 с, 1464 сл, 1435 сл, 1307 ср, 1252 с, 1141 сл, 1029 с, 782 ср, 750 ср, 697 ср.

Спектр ЯМР ¹Н (δ, м.д.): 1.1-1.7 м (12Н, СН₂×6), 2.31 т (2Н, CH₂-СООН), 3.16 д.д (CH ₂-NH), 4.75 уш.с (2Н, NH, ОН), 5.08 с (2Н, CH ₂-Ph), 7.24-7.41 м (5Н, Ph). Спектр ЯМР ¹³С (5, м.д.): 24.47, 26.46, 28.77, 28.84, 28.92, 29.74 (СН₂)₆, 33.82 (СН ₂-СО), 40.92 (CH ₂-NH), 66.48 (CH ₂-Ph), 127.94, 127.98, 128.36, 128.37, 128.40, 136.48 (Ph), 156.30 (С=O), 179.25 (С=O).

Найдено, %: С 66.39; Н 8.25; N 4.51. C₁₇H₂₅NO₄.

Вычислено, %: С 66.45; Н 8.14; N 4.56.

Пример 2. Синтез метилового эфира N(N'-карбобензокси-9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (VIIIа).

а) В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой и обратным холодильником с хлоркальциевой трубкой, помещают 9.2 г соединения (Va), 40 мл сухого хлористого метилена и две капли ДМФА. Затем при перемешивании и комнатной температуре дозируют 3.4 мл хлористого тионила и выдерживают при перемешивании без нагрева 3.5 ч. После этого раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре не выше 30°С и вакуумируют еще 30 мин. К остатку добавляют 30 мл хлористого метилена и упаривают досуха в вакууме. Операцию повторяют еще два раза. Получают хлорангидрид (VIa) (9.5 г), который растворяют в 30 мл хлористого метилена и используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

б) В трехгорлую колбу на 250 мл, снабженную мешалкой, капельной воронкой и термометром, помещают 7.2 г хлоргидрата метилового эфира 3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (VII), 100 мл сухого хлористого метилена и 6.4 г триэтиламина. Массу охлаждают до 0-10°С и выдерживают при перемешивании 45-50 мин. Затем при 0-10°С за 5-7 мин прикапывают раствор (VIa) в хлористом метилене (п.а). Массу выдерживают 45-50 мин при температуре 10-15°С и приливают 25 мл воды. Перемешивание продолжают еще 5-7 мин, реакционную массу помещают в делительную воронку и разделяют слои. Органический слой промывают 40 мл 1%-ного раствора соляной кислоты, затем 40 мл воды. Операцию повторяют 3 раза. После чего промывают 40 мл 3%-ного раствора бикарбоната натрия и 40 мл воды. Органический слой сушат над безводным сульфатом магния, упаривают, вакуумируют 30 мин, заливают 80 мл эфира и охлаждают до Т=0-5°С. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром (2 раза по 20 мл), сушат. Выход метилового эфира N(N'-карбобензокси-9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (VIlla) составляет 88%. Т.пл. 72-74°С. ИК-спектр: (KBr, см^-1) 3359 с, 3329 с, 3035 сл, 2940 с, 2851 ср, 1739 с, 1685 с, 1647 с, 1531 с, 1433 ср, 1300 ср, 1244 с, 1151 ср, 1049 сл, 1027 сл, 851 сл, 780 сл, 704 ср, 605 сл.

Спектр ЯМР ¹Н (δ, м.д.): 1.15-1.64 м, (12Н, (СН₂)₆), 2.16 (т, 2Н, CH ₂, 2.82 д.д (2Н, CH ₂), 3.14 д (2Н, CH ₂), 3.58 с (3Н, СН₃), 4.85 уш.с (1Н, NH), 5.06 с (2Н, CH ₂), 5.44 д.д (1Н, CH-Ph), 7.20-7.40 м (5Н, Ph). Спектр ЯМР ¹³С (δ, м.д.): 25.34, 26.34, 28.75, 28.83, 28.87, 29.64, 36.45, 39.64, 40.80 (-(СН₂)₈-, СН₂-СО), 49.15 (СН₃), 50.57 (СН), 66.30 (CH₂-Ph), 126.06, 127.35, 128.28 (Ph), 127.84, 128.46 (о-, п-, м-H-Ph), 136.50 с, 140.53 с (Ph),_ 156.23 (С=O), 171.50, 172.18 (С=О).

Найдено, %: С 68.99; Н 7.60; N 6.31. С₂₇Н₃₆N₂O₅.

Вычислено, %: С 69.23; Н 7.69; N 5.98.

Пример 3. Синтез 9-фталимидононановой кислоты (Vб). В трехгорлую колбу, снабженную насадкой Дина-Старка и мешалкой, помещают 4.44 г гидрохлорида 9-аминононановой кислоты, 3.14 г фталевого ангидрида и 44 мл м-ксилола. Кипятят, отгоняя воду, в течение 3 ч. Затем массу переносят в стакан, добавляют 100 мл гексана, нагревают до кипения. Выпавший после охлаждения осадок соединения (Vб) отфильтровывают и сушат. Выход продукта 85%. Т.пл. 88-90°С. ИК-спектр: (КВк, см^-1) 3300 ср, 2930 с, 2855 ср, 2360 ср, 2342 сл, 1735 с, 1715 с, 1596 с, 1563 сл, 1438 ср, 1300 ср, 1164 сл, 875 сл, 784 сл, 722 ср, 692 ср, 643 ср, 576 сл.

Спектр ЯМР ¹³С (δ, м.д.): 26.58, 28.36, 28.76, 28.88, 33.83, 37.84 ((СН₂)₆, СН₂-СО), 76.89 (=N-CH₂), 131.99 (i, Ph), 123.01, 133.69 (Ar), 168.34, 176.70 (C=0).

Найдено, %: С 67.81; H 6.60; N 4.31. C₁₇H₂₁NO₄.

Вычислено, %: С 67.33; Н 6.93; N 4.62.

Пример 4. Синтез метилового эфира N(9-фталимидононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (VIIIб). 22.9 г 9-фталимидононановой кислоты (Va) растворяют в 230 мл сухого дихлорэтана. Раствор помещают в трехгорлую круглодонную колбу на 500 мл, снабженную мешалкой, термометром и обратным холодильником. Затем при комнатной температуре дозируют 11 мл хлористого тионила. Реакционную массу нагревают до 40°С и выдерживают при перемешивании 3 ч. Растворитель упаривают под вакуумом досуха, к остатку добавляют 100 мл сухого дихлорэтана и массу снова упаривают досуха. Получают хлорангидрид 9-фталимидононановой кислоты (VIa) (выход 95-98%).

В трехгорлую колбу на 100 мл помещают 8 г гидрохлорида метилового эфира 3-амино-3-фенилпропионовой кислоты, 60 мл сухого дихлорэтана и 7.5 г триэтиламина. Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре, затем приливают раствор 10 г хлорангидрида (VIa) в 40 мл сухого дихлорэтана. Происходит разогрев до 40-45°С. Реакционную массу выдерживают при перемешивании и температуре 40-45°С в течение 1 ч и отфильтровывают выпавший гидрохлорид триэтиламина. Фильтрат промывают водой (2×50 мл), 3%-ным раствором соляной кислоты (2×100 мл), затем водой (100 мл). Органический слой сушат над хлоридом кальция, растворитель упаривают в вакууме, остаток (вязкая жидкость) заливают 100 мл гексана и охлаждают до Т<0°С. Выпавший осадок отфильтровывают и сушат. Выход продукта 75%, т.пл 68-70°С.

Спектр ЯМР ¹³С (δ, м.д.): 25.88, 26.91, 28.66, 29.10, 29.24, 36.58, 38.19, 40.42 ((СН₂)₇, СН₂СО), 49.92 (СН₃), 77.58 (=NCH₂), 123.44, 126.53, 127.82, 128.18, 134.37 (Ar), 132.20, 141.26 (i, Ar), 169.08, 173.53, 173.97 (С=0). Найдено, %: С 70.96; Н 8.03; N 5.36. C₂₈H₃₂N₂O₅.

Вычислено, %: С 70.59; Н 7.72; N5.15.

Пример 5. Синтез гидрохлорида метилового эфира N(9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (IV).

Метод А. В плоскодонную колбу на 250 мл поместили 5,9 г соединения (VIIIa), 1,2 мл концентрированной соляной кислоты и 1,2 г катализатора (6%-ный Pd/C, влажность 50%). Массу перемешивают с помощью магнитной мешалки и пропускают водород при комнатной температуре. Периодически (каждые 2-4 ч) откачивают смесь водорода и углекислого газа под вакуумом и подают водород. Реакцию заканчивают при исчезновении пятна исходного соединения (ТСХ бензол: метанол, 4: 1). Катализатор отделяют фильтрованием, раствор упаривают досуха и дополнительно вакуумируют при 50-60°С. Полученный жидкий продукт через сутки кристаллизуется. Выход продукта 98-99%. Т.пл. 71-73°С.

Спектр ЯМР ¹Н (δ, м.д.): 1.2-1.8 м (12Н, (СН₂)₆), 2.27 д.д (2Н, СН ₂-СО), 2.29 м (4Н, CH ₂N, CH ₂Ph), 3.65 с (3Н, СН₃), 4.95 уш.с (1Н, NH), 5.40 т (1Н, CHPh), 7.20-7.40 м (5Н, Ph). Спектр ЯМР ¹³С (δ, м.д.): 26.50, 26.96, 27.96, 29.49, 29.62, 36.58, 40.44, 41.28 ((СН₂)₈, СН₂СО), 49.17(СН₃), 50.29(CHPh), 125.29, 126.31, 127.37, 140.14 (Ph), 170.33, 173.10 (С=O).

Найдено, %: С 61.75; Н 8.10; N 7.52. C₁₉H₃₁N₂O₃Cl.

Вычислено, %: С 61.54; Н 8.10; N7.56.

Метод Б. В трехгорлую колбу, снабженную мешалкой и обратным холодильником, помещают 2 г метилового эфира 9-фталимидононаноил-β-фенилаланина, 30 мл ацетона, 10 мл воды и 5 мл концентрированной соляной кислоты. Раствор кипятят 2 часа, затем ацетон упаривают в вакууме. Водный слой сливают, а оставшееся в колбе масло заливают 30 мл эфира. Выкристаллизовавшийся осадок отфильтровывают.

В стакане смешивают 1.68 г гидрохлорида гидроксиламина в 20 мл этанола с раствором метилата натрия, полученным при растворении 1.11 г металлического натрия в 20 мл метанола. Выпавший осадок (поваренная соль) отфильтровывают, к фильтрату приливают раствор 3.63 г 9-фталимидононаноил-β-фенилаланина в 40 мл этанола. Массу подкисляют метанольным раствором хлороводорода до рН 1-2. Выпавший осадок (поваренная соль) отфильтровывают.Фильтрат упаривают в вакууме досуха, остаток обрабатывают 50 мл горячего бензола. Бензольный слой отделяют, к нижнему слою приливают 20 мл метанола и 1 мл хлористого тионила, выдерживают 30 мин при 0°С и 2 ч при 50-55°С. Реакционную массу упаривают досуха и вакуумируют 1 ч при температуре не выше 45°С. Продукт (IV) образуется в виде вязкой массы (выход 65%).

Пример 6. Синтез метилового эфира N'{N-[3-оксо-20(29)лупен-28-оил]-9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (метиловый эфир дипептида бетулоновой кислоты) (XI).

В трехгорлую колбу заливают 40 мл сухого хлористого метилена, добавляют 2.4 г гидрохлорида метилового эфира 9-аминононаноил-β-фенилаланина, 1.3 г триэтиламина и при 5-10°С прикапывают 2.9 г раствора хлорангидрида бетулоновой кислоты в 20 мл хлорметилена. Перемешивают 2 ч при 10-18°С. Реакционную массу промывают в делительной воронке 5 мл воды, 5%-ной соляной кислотой (6 раз по 10 мл), 10%-ным раствором хлорида натрия (2 раза по 10 мл), сушат над сульфатом магния. Затем упаривают массу досуха. Выход продукта 85%. Чистота полученного при этом продукта составляет 96%.

ИК-спектр (ν, см^-1): 1669 (CONH), 1729, 1739 (СООМе).

Найдено, %: С 77.73; Н 9.89; N 3.32. C₄₉H₇₄N₂O₅.

Вычислено, %: С 76.36; Н 9.61; N 3.63.

Спектральные характеристики соединения (XI) соответствуют данным, приведенным в патенте [1].

Пример 7. Синтез метилового эфира N'{N-3-оксо-лупан-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (метиловый эфир дипептида дигидробетулоновой кислоты) (XII) проводили по аналогичной методике. Выход продукта 79%. Т.пл. 108-110°С. Чистота полученного при этом продукта составляет 95%. ИК-спектр (ν, см^-1): 1670 (CONH), 1729, 1739 (СООМе). Спектр

ЯМР ¹Н (δ, м.д.): 0.69 д, 0.80 д (6Н, J=7 Гц, i Pr- Ме-29 и 30), 0.86 (3Н, с, Ме-25), 0.90, 0.91 (6Н, с, Ме-26,27), 0.97 (3Н, с, Ме-24), 0.95 (1H, м, Н-12), 1.01 (3Н, с, Ме-23), 1.10 (1Н, м, Н-15), 1.18-1.48 (24Н, м, Н-1,5-7, 9, 11, 15, 16, 18, 21, 22, 32-36), 1.58 (2Н, м, Н-37), 1.60-1.66 (2Н, м, Н-12,22), 1.69-1.76 (1Н, м, Н-20), 1.83-1.91 (2Н, м, Н-1,16), 1.93 м (1Н, Н-21), 2.21 (2Н, м, CH ₂CONH), 2.24 (м, 1Н, Н-19), 2.34 и 2.42 (2Н, оба м, Н-2), 2.47 (1Н, ддд, J,=13.0 Гц, J₂=11.3 Гц, J₃=3.6 Гц, Н-13), 2.78 и 2.92 (2Н, АВХ-система с J₁=15.6 Гц, J₂=6.1 Гц и J₁=15.6 Гц, J₂=6.4 Гц, СН ₂СООМе). 3.11 (1Н, м, CONHCH ₂), 3.18 (1H, м, CONHCH ₂), 3.56 (3Н, с, ОМе), 3.67 (1H, с, NH), 5.38 (1Н, дт, J₁=8.5 Гц, J₂=6.1 Гц, CHPh), 5.78 (1Н, т, J=5.5 Гц, CONH), 7.18-7.26 (5Н, м, Ph). Спектр ЯМР ¹³С (5, м.д.): 14.27 (к, С-27), 14.42 (к, С-29), 15.70 (к, С-30), 15.71 (к, С-25 или С-26), 15.80 (к, С-26 или С-25), 19.45 (т, С-6), 20.83 (к, С-24), 21.33 (т, С-11), 22.79 (д, С-20), 25.48 (т, С-37), 25.38 (т, С-12), 26.42 (к, С-23), 26.63 (т, С-33), 26.80 т, 28.74, 28.78 (т, С-34-36), 28.82 (т, С-15), 29.21 (т, С-32), 29.53 (т, С-21), 29.69 (д, С-19), 33.41, 33.59 (т, С-7,16), 33.92 (т, С-2), 36.04 (т, С-38), 36.69 (с, С-10), 37.42 (д, С-13), 38.55 (т, С-22), 38.99 (т, С-31), 39.41 (т, С-1), 39.62 (т, С-41), 40.48 (с, С-8), 42.50 (с, С-14), 47.10 (с, С-4), 49.24 (д, С-40), 49.57 (д, С-9), 49.66 (д, С-18), 51.58 (к, С-43), 54.79 (д, С-5), 55.84 (с, С-17), 126.13 (2С, д, Ph), 127.44 (д, Ph), 128.47 (2С, д, Ph), 140.27 (с, Ph), 171.28 (с, С-42), 172.94 (с, С-39), 176.15 (с, С-28), 217.86 (с, С-3).

Найдено, %: С 77.65; Н 9.91; N 3.42. C₄₉H₇₆N₂O₅.

Вычислено, %: С 76.16; Н 9.84; N 3.63.

Пример 8. Синтез N'{N-[3-оксо-20(29)лупен-28-оил]-9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (дипептид бетулоновой кислоты) (I).

В одногорлую колбу помещают 2 г метилового эфира дипептида бетулоновой кислоты, 14 мл метанола и 28 мл тетрагигрофурана. При комнатной температуре прибавляют 2,8 мл 4н. раствора NaOH. Реакционную смесь выдерживают при перемешивании в течение суток, затем выливают на смесь льда с разбавленной соляной кислотой, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и сушат. Выход продукта 95-98%, чистота 97%. Т.пл. 146-148°С. ИК-спектр (ν, см^-1): 1660, 1675 (CONH), 1706 (С=O), 1730 (СООМе). Спектр ЯМР ¹Н (δ, м.д.): 0.84 (3Н, с, Ме-25), 0.90 (6Н, с, Ме-26,27), 0.93 (3Н, с, Ме-24), 0.94 (1Н, м, Н-12), 0.98 (3Н, с, Ме-23), 1.08 (1Н, м, Н-15), 1.18-1.45 (23Н, м, Н-1,5-7, 9, 11, 15, 16, 21, 22, 32-36), 1.48 (1H, т, J=11.3 Гц, Н-18), 1.54 (2Н, м, Н-37), 1.60 (3Н, с, Ме-30), 1.64 (1Н, м, Н-12), 1.67 (1H, м, Н-22), 1.78-1.91 (3Н, м, Н-1,16,21), 2.12 (1Н, т, J=7.4 Гц, CH ₂CONH), 2.31 и 2.39 (2Н, оба м, Н-2), 2.47 (1H, ддд, J₁=13.0 Гц, J₂=11.3 Гц, J₃=3.6 Гц, Н-13), 2.74 и 2.83 (2Н, АВХ-система с J₁=15.6 Гц, J₂=6.1 Гц и J₁=15.6 Гц, J₂=6.4 Гц, СН ₂СООМе), 3.06 (2Н, м, Н-19, CONHCH ₂), 3.17 (1H, м, CONHCH ₂), 3.52 (3Н, с, ОМе), 4.51 и 4.65 (2Н, оба уш.с, =СН₂), 5.36 (1Н, дт, J₁=8.5 Гц, J₂=6.1 Гц, CHPh), 5.79 (1H, т, J=5.5 Гц, CONH), 6.75 (1Н, д, J=8.5 Гц, CONH), 7.14-7.25 (5Н, м, Ph). Спектр ЯМР ¹³С (δ, м.д.): 14.27 (к, С-27), 15.65 (к, С-25 или С-26), 15.70 (к, С-26 или С-25), 19.21 (к, С-30), 19.38 (т, С-6), 20.73 (к, С-24), 21.22 (т, С-11), 25.29 (т, С-37), 25.38 (т, С-12), 26.35 (к, С-23), 26.58 (т, С-33), 28.76, 28.79, 28.89 (т, С-34-36), 29.13 (т, С-15), 29.49 (т, С-32), 30.61 (т, С-21), 33.44 (т, С-7,16), 33.84 (т, С-2), 36.33 (т, С-38), 36.63 (с, С-10), 37.47 (д, С-13), 38.15 (т, С-22), 38.86 (т, С-31), 39.35 (т, С-1), 39.68 (т, С-41), 40.43 (с, С-8), 42.24 (с, С-14), 46.42 (д, С-19), 47.01 (с, С-4), 49.18 (д, С-40), 49.73 (д, С-9), 49.85 (д, С-18), 51.43 (к, С-43), 54.73 (д, С-5), 55.25 (с, С-17), 109.03 (т, С-29), 125.98 (2С, д, Ph), 127.22 (д, Ph), 128.33 (2С, д, Ph), 140.53 (с, Ph), 150.64 (с, С-20), 171.27 (с, С-42), 172.09 (с, С-39), 175.73 (с, С-28), 217.81 (с, С-3).

Найдено, %: С 75.73; Н 9.69; N 3.39. C₄₈H₇₂N₂O₅.

Вычислено, %: С 76.19; Н 9.52; N3.70.

Пример 9. Синтез N'{N-[3-оксо-лупан-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты (дипептид дигидробетулоновой кислоты) (II) проводили по аналогичной методике. Выход продукта 99%, чистота 98%. Т.пл. 128-131°С, чистота 95%. ИК-спектр (ν, см^-1): 1670 (CONH), 1710 (СООН), 1739 (СООМе). Спектр ЯМР ¹³С (δ, м.д.): 14.32, 14.40 (к, С-27, С-29), 15.79 (к, С-30), 15.91 (2С, к, С-25, С-26), 19.51 (т, С-6), 20.86 (к, С-24), 21.38 (т, С-11), 22.61 (д, С-20), 22.61 (т, С-37), 25.36 (т, С-12), 26.50 (к, С-23), 26.55 (т, С-33), 26.84 т, 28.72, 28.78 (т, С-34-36), 28.83 (т, С-15), 29.25 (т, С-32), 29.52 (т, С-21), 29.74 (д, С-19), 33.44, 33.64 (т, С-7,16), 33.94 (т, С-2), 36.42 (т, С-38), 36.73 (с, С-10), 37.12 (д, С-13), 38.04 (т, С-22), 38.59 (т, С-31), 39.06 (т, С-1), 39.46 (т, С-41), 40.61 (с, С-8), 42.56 (с, С-14), 47.10 (с, С-4), 48.76 (д, С-40), 49.27 (д, С-9), 49.53 (д, С-18), 54.85 (д, С-5), 55.95 (с, С-17), 126.16 (2С, д, Ph), 127.25 (д, Ph), 128.42 (2С, д, Ph), 140.79 (с, Ph), 172.89 (с, С-39), 174.08 (с, С-42), 176.48 (с, С-28), 218.12 (с, С-3).

Найдено, %: С 75.83; Н 9.24; N 3.42. C₄₈H₇₄N₂O₅.

Вычислено, %: С 75.99; Н 9.76; N 3.69.

Способ получения дипептидов лупанового ряда, проявляющих противовирусную, антипролиферативную и иммуностимулирующую активность, отличающийся тем, что процесс получения N'{N-[3-оксо-луп-20(29)-ен-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты или N'{N-[3-оксо-лупан-28-оил]-9-аминононаноил}-3-амино-3-фенил пропионовой кислоты проводят конденсацией хлорангидридов дигидробетулоновой или бетулоновой кислот с пептидом нетривиального типа - гидрохлоридом метилового эфира N-(9-аминононаноил)-3-амино-3-фенилпропионовой кислоты в присутствии основания (например триэтиламина), а получение пептида осуществляют взаимодействием хлорангидридов N-карбобензокси- или N-фталил-аминононановой кислоты с гидрохлоридом метилового эфира 3-амино-3-фенилпропионовой кислоты в присутствии триэтиламина с последующим снятием защитной группы.