Способ повышения активности, живучести и оплодотворяемости ранее замороженной спермы быков

Изобретение относится к ветеринарии. Способ предусматривает добавление 0,2-0,5 мл абдоминальной жидкости к сперме во время ее оттаивания. Абдоминальная жидкость сохраняет липидный, протеиновый слой на поверхности мозаичной структуры цитоплазматической мембраны спермиев, способствует быстрому и благополучному процессу рекристаллизации. Жидкость содержит криопрофилактические соединения, которые компенсируют потерянное повышение осмотического давления в сторону гипертонии, сокращает эквилибрационный период оттаивания, стабилизирует цитологическое содержимое, компенсируя питательные вещества и энергетический материал. Изобретение может быть использовано в искусственном осеменении животных. 1 табл.

 

Способ относится к ветеринарии и может быть использован в искусственном осеменении животных.

Известен способ стимуляции подвижности спермиев, когда на предметное стекло пипеткой наносят каплю спермы, затем каплю 2,9% раствора лимоннокислого натрия смешивают со спермой, накрывают покровным стеклом, нагревая до 38°С, на обогреваемом столике микроскопа (1, 2).

Недостатком этого способа является то, что 2,9% раствор лимоннокислого натрия не обладает бактерицидным свойством, не влияет на ферментативный, гормональный обмен в сперме, не является питательной средой.

Известен способ повышения активизации и подвижности спермы путем переноса ампул с замороженной спермой из среды хранения -(79-198)°С непосредственно в подогретую до 38-40°С воду или перенесения ампул со спермой из жидкого азота в ледяную воду (3).

Недостатком этого способа является то, что при оттаивании активность спермиев не снижается в течение только 8 часов хранения. Процесс оттаивания не повышает процента подвижности и жизнеспособности спермиев.

Известен также способ повышения активности и живучести сперматозоидов, который был нами принят как прототип, когда для повышения гипертонии среды используется лимоннокислый натрий и глюкоза при температуре оттаивания 40°С в водяной бане (4).

Недостатком этого способа при оттаивании спермы является то, что насыщенный глицерино-углеводно-солевой раствор способен повреждать половые клетки, при этом не повышается компенсация осмотического давления введением лимоннокислого натрия и глюкозы, что продолжает увеличивать эквилибрационный период при оттаивании.

Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является внесение в технологию оттаивания замороженной спермы гидрофильной коллоидной фракции в виде абдоминальной жидкости эмбрионального происхождения, повышающей активность и жизнеспособность спермиев.

Технический результат достигается тем, что в способе, повышающем активность и жизнеспособность сперматозоидов, в состав стимуляторов при оттаивании спермы входят компоненты, предотвращающие сперматозоиды от температурного шока, от криоповреждений, от микробного воздействия, а также обеспечивают нормальное протекание процесса капатации и обеспечение сперматозоидов энергетическим материалом, питательными веществами смешиванием при оттаивании гранулированной спермы с абдоминальной эмбриональной жидкостью.

Абдоминальную жидкость от плодов крупного рогатого скота можно отнести к криопрофилактическим соединениям, соединенная с замороженной спермой, она доводит уровень электролитов до первоначальной концентрации, подводя их в соответствие с естественной окружающей средой эякулята, взятого у самцов-производителей.

Было нами установлено, что оптимальное добавление к сперме абдоминальной жидкости связано с компенсацией повышения осмотического давления в оттаиваемой сперме и действует как дополнительный растворитель, повышающий осмотическое давление среды, изменяя ее в сторону гипертонии, что сокращает эквилибрационный период при оттаивании спермы, уменьшает концентрацию осмотических и реактивных веществ, повышая жизнеспособность спермиев.

Абдоминальная жидкость, взятая от плодов крупного рогатого скота, защищающая при оттаивании поверхностную мембрану спермиев, состоит из липидов, гликопротеидов, гемогистиобластов (родоначальники форменных элементов), недифференцируемых стволовых клеток, плазматических клеток, специфических иммуноглобулинов, активизирующих синтез и расщепление аминокислот. Эти компоненты являются стабилизатором постоянства цитологического содержимого, способствующим гипертоническому воздействию на осмотическое давление, что обеспечивает спермии питательными веществами, энергетическим материалом, который был израсходован в период разбавления, замораживания и хранения спермиев при низкой температуре (-196°С).

Последующий анализ с прототипом показывает, что заявляемый способ отличается следующими признаками.

1. Для повышения активности и жизнеспособности спермиев при оттаивании к гранулам замороженной спермы приливается 0,5 мл абдоминальной жидкости от плодов крупного рогатого скота, в состав жидкости входят криопрофилактические соединения, которые в спермиях концентрацию электролитов подводят при оттаивании к первоначальному состоянию, идентичному естественной среде организма животных.

2. Оптимальное количество абдоминальной жидкости как дополнительный протектор, компенсирующий понизившееся в период разбавления и замораживания спермы осмотическое давление среды, изменяя ее в сторону гипертонии, что благоприятствует восстановлению эквилибрационного периода при оттаивании спермы.

3. Абдоминальная жидкость, взятая от плодов крупного рогатого скота, является стабилизатором постоянства цитологического содержимого, обеспечивая сперматозоиды питательными веществами и энергетическим материалом, который был израсходован в период разбавления, замораживания и хранения спермиев при низкой температуре.

4. Абдоминальная жидкость эмбрионального происхождения, смешанная со спермой, замороженной в гранулах, перед оттаиванием препятствует «омылению» защитных свойств липидов и протеинов, образованию гидрофильных продуктов на цитоплазматической мембране спермиев, что способствует созданию защитного покрова на поверхностной мембране.

Способ выполняется следующим образом: к извлеченной сперме в гранулах (2 гранулы на 0,5 мл) добавляется 0,5 мл эмбриональной абдоминальной жидкости и проводится ее оттаивание в водяной бане (39-40°С) в течение 50-60 секунд, до появления из гранул ледяного стерженька. Далее берется раздавленная капля спермы на предметном стекле, ставится на обогревательный столик микроскопа и оценивается сперма на подвижность в десятибалльной системе. Перед просмотром к раздавленной капле не добавляется 29% цитрат натрия и другие ускорители подвижности спермиев.

Результаты наших исследований в практических условиях имели следующие показатели (таблица 1): после оттаивания спермы, расфасованной в гранулах 0,5 мл (2 гранулы) по общепринятой методике подвижность спермы была 4 балла, а оплодотворяемость коров равнялась 62,9%. Однако после оттаивания гранулированной спермы, предварительно смешанной с 0,5 мл абдоминальной жидкости, подвижность спермиев равнялась 6 баллам; переживаемость спермиев при температуре 38°С была в 2,2 раза больше, чем в контроле, оплодотворяемость у коров была выше, чем в контроле на 8% при близкой достоверной разнице.

Таблица 1
Способ оттаивания гранулированной спермы в водяной бане +38-40°С	Подвижность спермы при взятии у быка (баллы)	Подвижность спермы после оттаивания (баллы)	Переживаемость спермы при t - 38-40°С (часы)	Осеменено коров (всего)	Из них стали стельными
Число	%
Гранулы смешивали с 0,5 мл эмбриональной абдоминальной жидкости	8	6	18	55	39	70,9
Без добавок к гранулам (контроль)	8	4	8	54	34	62,9

Из таблицы 1 видно, что искусственное осеменение коров в АО Николаевское Николаевского района Волгоградской области на основании лабораторных исследований Волгоградского племпредприятия позволило увеличить оплодотворяемость коров, используя при оттаивании спермы абдоминальную жидкость.

Использованная литература

1. Искусственное осеменение коров и телок (инструкция), Москва, ВО «Агропромиздат», 1988, ГОСТ 26030-83 (измерения №1).

2. Н.Г.Болашов «Ветеринарный контроль при искусственном осеменении животных», Москва, Колос, 1980, с.28.

3. Ф.И.Осташко «Глубокое замораживание и длительное хранение спермы», Киев, «Урожай», 1978, с.138-139.

4. В.К.Милованов «Биология воспроизведения и искусственное осеменение животных», Издательство сельскохозяйственной литературы журналов и плакатов, Москва, 1962, с.156.

Способ повышения активности, живучести и оплодотворяемости ранее замороженной спермы быков во время оттаивания при температуре 40°С, отличающийся тем, что во время оттаивания к сперме добавляют 0,2-0,5 мл абдоминальной жидкости.