Терапевтическое лечение

Изобретение относится к области медицины и фармацевтики и касается комбинации, содержащей кандесартан и розувастатин, для предупреждения или лечения атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, а также способа предупреждения или лечения атеросклероза или сердечно-сосудистых заболеваний. Комбинация проявляет синергетический эффект. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 ил.

 

Настоящее изобретение относится к комбинации, содержащей кандесартан и розувастатин.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим комбинацию, упомянутую выше. Настоящее изобретение также относится к применению упомянутой выше комбинации в предупреждении или лечении атеросклероза.

Атеросклероз представляет собой состояние, опосредованное сложными патологическими процессами, которые приводят к ненормальному распределению липидных отложений в артериях и являются основным фактором, способствующим развитию коронарной болезни сердца. Поэтому уменьшение проявлений атеросклероза является главной мишенью для снижения количества сердечно-сосудистых событий, например инфаркта миокарда, ухудшения стенокардии, остановки сердца, удара, застойной сердечной недостаточности и сердечно-сосудистой смерти.

Дислипидемия, в частности повышенный уровень липопротеинов низкой плотности (LDL) в плазме крови, является одним из основных факторов риска развития атеросклероза. Клинические исследования продемонстрировали, что снижение уровня LDL в плазме крови ингибиторами З-гидрокси-3-метилглутарил-кофермент А-редуктазы (HMG-CoA-редуктазы), общеизвестными как статины, приводит к снижению риска сердечно-сосудистых событий.

Активацию системы ренин-ангиотензин (RAS) можно рассматривать как другой важный фактор риска развития атеросклероза. Активация RAS с образованием ангиотензина (II) (А (II)) и активация рецепторов А (II) вовлечена в атерогенез, разрыв атеросклеротической бляшки, ишемическую дисфункцию миокарда и застойную сердечную недостаточность (Singh and Mehta, Arch Intern Med, 2003, vol.163, 1296-1304).

В публикации международной патентной заявки WO 95/26188 раскрыто лечение атеросклероза блокаторами рецепторов А (II), возможно, в комбинации с ингибиторами HMG-CoA-редуктазы. В публикации международной патентной заявки WO 01/76573 раскрыто применение комбинации по меньшей мере двух из антагониста А (II), ингибитора АСЕ (ангиотензин-превращающего фермента) и ингибитора HMG-CoA-редуктазы для предупреждения или замедления прогрессирования перечня состояний, среди которых указан атеросклероз.

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что комбинация антагониста А (II) кандесартана и ингибитора HMG-CoA-редуктазы розувастатина проявляет синергетический эффект в уменьшении проявлений атеросклероза. По всей вероятности, этот синергетический эффект возникает благодаря синергетическому ингибированию экспрессии ряда воспалительных медиаторов, вовлеченных в RAS (например CD40, металлопротеиназ (ММР)), и/или ингибированию экспрессии рецептора LOX-1 (который представляет собой рецептор окисленных LDL на эндотелиальных клетках). Синергетический эффект дает веское доказательство взаимного влияния RAS и дислипидемии при атерогенезе.

Понятно, что активность ММР можно регулировать in vivo их тканевыми ингибиторами (TIMP (тканевые ингибиторы металлопротеиназ)). Авторы настоящего изобретения также показали, что экспрессия Т1МР-1 и TIMP-2 позитивно регулируется пищевым рационом с высоким содержанием холестерина и значительно ослабляется комбинацией кандесартана и розувастатина. Эти данные подтверждают концепцию, что пищевой рацион с высоким содержанием холестерина нарушает баланс между ММР и TIMP, и что этот дисбаланс можно "нормализовать" комбинаций антагониста А (II) и агента, понижающего уровень липидов.

В одном аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для предупреждения или лечения атеросклероза.

В еще одном аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для предупреждения сердечно-сосудистых событий.

Такая комбинация может быть также полезна в лечении или предупреждении других заболеваний, связанных с этими медиаторами, например воспалительных заболеваний или состояний, таких как ишемическое реперфузионное повреждение (по отношению к сердцу, головному мозгу, почкам, легким и печени), повреждение, индуцированное радиацией, повреждение, вызванное ожогом, и периферическое сосудистое заболевание.

Подходящим может быть кандесартан в форме кандесартана или в форме пролекарства кандесартана цилексетила. Эти формы могут быть приготовлены с дополнительным агентом, таким как диуретик, например гипотиазид (например Atacand Plus™).

Если в данном описании упоминается кандесартан, то этот термин охватывает как кандесартан, так и кандесартан цилексетил.

Предпочтительно, кальциевую соль розувастатина, которая может быть упомянута как розувастатин кальций, используют в различных аспектах настоящего изобретения.

Обычно фармацевтически приемлемые соли включают соли присоединения кислоты, такие как метансульфонат, тозилат, α-глицерофосфат, фумарат, гидрохлорид, цитрат, малеат, тартрат и (менее предпочтительно) гидробромид. Фармацевтически приемлемые соли обычно также включают соли, образованные с фосфорной кислотой и серной кислотой. Фармацевтически приемлемые соли обычно включают соли с основаниями, такие как соль со щелочным металлом, например натрием, соль со щелочноземельным металлом, например кальцием или магнием, соль с органическим амином, например триэтиламином, морфолином, N-метилпиперидином, N-этилпиперидином, новокаином, дибензиламином, N,N-дибензилэтиламином, трис-(2-гидроксиэтил)амином, трис(гидроксиметил)метиламмонием, N-метил-d-глюкамином и аминокислотами, например лизином. В зависимости от количества заряженных функциональных групп и валентности катионов или анионов может быть более чем один катион или анион.

Следует понимать, что используемый в данном описании термин "комбинация" относится к одновоеменному раздельному или последовательному введению. В одном аспекте изобретения термин "комбинация" относится к одновременному введению. В другом аспекте изобретения термин "комбинация" относится к раздельному введению. В еще одном аспекте термин "комбинация" относится к последовательному введению. Если введение последовательное или раздельное, то задержка во введении второго компонента должна быть такой, чтобы оба агента присутствовали в организме, вызывая синергетический эффект комбинации.

В следующем аспекте изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, для применения в предупреждении или лечении атеросклероза.

В следующем аспекте изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем, для применения в предупреждении или снижении риска сердечно-сосудистых событий.

Композиции, описанные здесь, могут быть в форме, подходящей для перорального введения, например в форме таблетки или капсулы, для парентеральной инъекции (в том числе внутривенной, подкожной, внутримышечной, внутрисосудистой или инфузии), например в форме стерильного раствора, суспензии или эмульсии, для местного введения, например в форме мази или крема, для ректального введения, например в форме суппозитория, или путем введения может быть инъекция прямо в опухоль, или регионарная доставка, или местная доставка. В других воплощениях настоящего изобретения соединения для комбинированного лечения могут быть доставлены эндоскопически, внутритрахеально, в место повреждения, чрескожно, внутривенно, подкожно, интраперитонеально или внутрь опухоли. Как правило, описанные здесь композиции могут быть приготовлены традиционным способом с использованием традиционных эксципиентов или носителей, которые общеизвестны в данной области.

Подходящие фармацевтически приемлемые эксципиенты или носители для композиций в форме таблеток включают, например, инертные эксципиенты, такие как лактоза, карбонат натрия, фосфат кальция или карбонат кальция; гранулирующие и разрыхляющие агенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связывающие агенты, такие как желатин или крахмал; смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк; консерванты, такие как этил- или пропил-4-гидроксибензоат; и антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота. Таблетки могут не иметь покрытия или могут быть покрыты оболочкой либо для модификации их распадаемости и последующего всасывания активного ингредиента в желудочно-кишечном тракте, либо для улучшения их стабильности и/или внешнего вида, в любом случае с использованием традиционных покрывающих агентов и процедур, общеизвестных в данной области.

Композиции для перорального применения могут быть в форме твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с инертным твердым эксципиентом, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в форме мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешан с водой или маслом, таким как арахисовое масло, вазелиновое масло или оливковое масло.

Кандесартан имеется в продаже в виде Atacand™ и Atacand Plus™. Розувастатин кальций имеется в продаже в виде Crestor™. Подходящие для настоящего изобретения препараты включают препараты, которые имеются в продаже.

Подходящими дозировками каждого компонента комбинации являются дозировки имеющихся в продаже коммерческих продуктов. Альтернативно, синергизм между компонентами может дать возможность использовать меньшую дозировку одного или обоих компонентов. Например, можно использовать дозу 4 мг, 8 мг, 16 мг, 32 мг или до 160 мг кандесартана в сочетании с дозой 80 мг, 40 мг, 20 мг, 10 мг, 5 мг или 2,5 мг розувастатина. Должно быть понятно, что любая из доз кандесартана может быть объединена с любой подходящей дозой розувастатина.

В одном аспекте используют 80 мг розувастатина. В другом аспекте используют 40 мг розувастатина. В еще одном аспекте используют 20 мг розувастатина. В еще одном аспекте используют 10 мг розувастатина. В еще одном аспекте используют 5 мг розувастатина. В еще одном аспекте используют 2,5 мг розувастатина.

В одном аспекте используют от 32 до 160 мг, например примерно от 64 до 128 мг, например от 64 до 112 мг, например примерно от 64 до 96 мг кандесартана. Удобно использовать примерно 72 мг кандесартана. В другом аспекте используют 32 мг кандесартана. В еще одном аспекте используют 16 мг кандесартана. В еще одном аспекте используют 8 мг кандесартана. В еще одном аспекте используют 4 мг кандесартана.

Следует понимать, что фармацевтическая композиция по настоящему изобретению включает композицию, содержащую кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. Такая композиция, например в едином пероральном препарате, обеспечивает терапевтический комбинированный продукт по изобретению, удобный для одновременного введения для предупреждения или лечения атеросклероза.

Предпочтительно, два компонента комбинации оба вводят перорально.

Предпочтительно, два компонента комбинации вводят в виде единого перорального препарата.

Предпочтительно, комбинацию готовят в форме препарата для дозирования один раз в сутки.

Удобно, если комбинация приготовлена в виде одной таблетки или капсулы.

Дозировки и режимы введения, описанные здесь выше, можно менять в зависимости от конкретного болезненного состояния и общего состояния пациента. Например, может оказаться необходимым или желательным уменьшить вышеупомянутые дозы компонентов комбинированной терапии для того, чтобы снизить токсическое действие. Дозировки и режимы введения могут также меняться, если в дополнение к комбинированному лечению по настоящему изобретению используют один или более дополнительных химиотерапевтических агентов. Режим введения может определить, используя свой профессиональный опыт и знания, практикующий врач, который лечит какого-то конкретного пациента.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению также включает отдельные композиции, содержащие первую композицию, содержащую кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель, и вторую композицию, содержащую розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый эксципиент или носитель. Такая композиция обеспечивает терапевтическую комбинацию по изобретению, удобную для последовательного или раздельного введения для синергетического предупреждения или лечения атеросклероза, но отдельные композиции можно вводить также одновременно.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в качестве лекарственного средства для предупреждения или лечения атеросклероза.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в качестве лекарственного средства для предупреждения сердечно-сосудистых событий.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в изготовлении лекарства.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в изготовлении лекарства для предупреждения или лечения атеросклероза.

В другом аспекте изобретения предложена комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в изготовлении лекарства для предупреждения сердечно-сосудистых событий.

В еще одном аспекте изобретения предложен способ предупреждения или лечения атеросклероза у теплокровного животного, например человека, включающий введение комбинации кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли.

В еще одном аспекте изобретения предложен способ предупреждения сердечно-сосудистых событий у теплокровного животного, например человека, включающий введение комбинации кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен набор, включающий комбинацию кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли, возможно, с инструкциями по применению в предупреждении или лечении атеросклероза.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложен набор, включающий:

а) кандесартан в первой стандартной лекарственной форме;

б) розувастатин во второй стандартной лекарственной форме; и

в) контейнеры для содержания в них указанных первой и второй лекарственных форм; и, возможно,

г) инструкции по применению в предупреждении или лечении атеросклероза.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования экспрессии CD40 и/или металлопротеиназ (ММР) путем введения комбинации кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли.

Конкретными металлопротеиназами являются ММР-1, ММР-2 и ММР-9.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения пациентов с атеросклерозом путем ингибирования экспрессии CD40 и/или металлопротеиназ (ММР) путем введения комбинации кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли в количестве, подходящем для ингибирования экспрессии CD40 и/или металлопротеиназ (ММР).

Согласно еще одному аспекту изобретения предложен способ нормализации баланса между ММР и TIMP путем введения некоторого количества комбинации кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования экспрессии LOX-1 путем введения комбинации кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения пациентов с атеросклерозом путем ингибирования экспрессии LOX-1 путем введения комбинации кандесартана или его фармацевтически приемлемой соли и розувастатина или его фармацевтически приемлемой соли в количестве, подходящем для ингибирования экспрессии LOX-1.

Материалы и методы

Животная модель

Пять пар мышей C57BL/6J и три пары гомозиготных аро-Е "нокаутированных" мышей (по происхождению C57BL/6J) были получены из Jackson Laboratories (Bar Harbor, ME). Они были выведены спариванием брат-сестра и размещены в помещении, освещенном с 6:00 утра до 6:00 вечера и поддерживаемом при температуре 21°С. Мыши C57BL/6J (n=10) продолжали получать нормальный корм в течение всего периода исследований. Аро-Е "нокаутированные" мыши были разделены на четыре группы. Животным Группы 1 (n=10) давали только корм с высоким содержанием холестерина (1% холестерина) в течение 12 недель, начиная с возраста 6 недель; животным Группы 2 (n=10) давали корм с высоким содержанием холестерина вместе с кандесартаном (1 мг/кг/сутки) в течение 12 недель, начиная с возраста 6 недель; животным Группы 3 (n=10) давали корм с высоким содержанием холестерина вместе с розувастатином (1 мг/кг/сутки) в течение 12 недель, начиная с возраста 6 недель; животным Группы 4 (n=10) давали корм с высоким содержанием холестерина вместе с кандесартаном (1 мг/кг/сутки) и розувастатином (1 мг/кг/сутки) в течение 12 недель, начиная с возраста 6 недель.

В конце 12-недельного периода лечения мышей умерщвляли и подвергали исследованиям, описанным ниже. Все экспериментальные процедуры выполняли в соответствии с протоколами, одобренными Институциональным комитетом по защите и использованию животных Медицинского университета Арканзаса (Institutional Animal Care and Usage Committee of University of Arkansas for Medical Sciences).

Количественный анализ атеросклеротических бляшек

В конце 12-недельного периода лечения по 5 мышей из каждой группы подвергали эвтаназии, и аорты отделяли от окружающих тканей. После удаления адвентициальной жировой ткани аорты вскрывали вдоль от дуги аорты до подвздошной бифуркации и фиксировали в 10% формалине в течение 24 часов. Затем аорты промывали 70% спиртом в течение короткого периода времени, окрашивали раствором Судана IV в течение 15 минут, дифференцировали в 80% спирте в течение 20 минут и промывали проточной водой в течение 1 часа (Russell L. Techniques for studying atherosclerotic lesion, Lab Invest. 1958; 7:42-47). Готовили препараты аорт, и их изображения снимали камерой, соединенной с препаровальной лупой. Изображения анализировали с использованием компьютерной программы (Image Pro Plus, Media Cybernetics).

Получение РНК и анализ методом ОТ-ПЦР

В конце 12-недельного периода лечения по 5 мышей из каждой группы подвергали эвтаназии, и аорты (от дуги аорты до подвздошной бифуркации) отделяли от окружающих тканей и хранили на сухом льду. Каждую аорту разрезали на четыре сегмента, два из которых использовали для экстракции тотальной РНК одностадийным методом с использованием смеси кислота-гуанидиния тиоцианат-фенол-хлороформ, как описано ранее (27). Один микрограмм тотальной РНК подвергали обратной транскрипции в кДНК с использованием олиго-dT (Promega, Madison, WI, U.S.A.) и обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (M-MLV) (Promega) при 42°С в течение 1 часа. Два микролитра материала обратной транскрипции (ОТ) амплифицировали ДНК-полимеразой Taq (Promega) и праймерной парой, специфичной к LOX-1, CD40 или ММР (ММР-1, -2, -9) мыши. Для мышиного LOX-1 использовали прямой праймер: 5'-TTACTCTCCATGGTGGTGCC-3' и обратный праймер: 5'-AGCTTCTTCTGCTTGTTGCC-3'. 30 циклов полимеразной цепной реакции (ПЦР) осуществляли при 94°С в течение 40 секунд (денатурация), при 55°С в течение 1 минуты (отжиг) и при 72°С в течение 1 минуты (синтез цепей). Размер продукта полимеразной цепной реакции (ПЦР) составил 193 пары оснований. Для мышиного CD40 использовали прямой праймер 5'-GTTTAAAGTCCCGGATGCGA-3' и обратный праймер 5'-CTCAAGGCTATGCTGTCTGT-3'. 35 циклов полимеразной цепной реакции (ПЦР) осуществляли при 94°С в течение 1 минуты (денатурация), при 55°С в течение 1 минуты (отжиг) и при 72°С в течение 1 минуты (синтез цепей). Размер продукта ПЦР составил 408 пар оснований. Для мышиной ММР-1 использовали прямой праймер 5'-GGACTCTCCCATTCTTAATGA T-3' и обратный праймер 5'-CCTCTTTCTGGATAACATCATCA АС-3'. Для мышиной ММР-2 использовали прямой праймер 5'-ATCAAGGGGATCCAGGAGC-3' и обратный праймер 5'-GCAGCGATGAAG ATGATAG-3'. Для мышиной ММР-9 использовали прямой праймер 5'-AGTTTGGTGTCGCGGAGCAC-3' и обратный праймер 5'-TACATGAGCGCTTCCGGCAC-3'. Для всех ММР осуществляли 35 циклов ПЦР при 94°С в течение 1 минуты (денатурация), при 58°С в течение 1 минуты (отжиг) и при 75°С в течение 1 минуты (синтез цепей). Размеры продуктов ПЦР составили 627, 718 и 753 пар оснований соответственно. Пару праймеров, специфичную к β-актину мыши, использовали в качестве "гена домашнего хозяйства" (прямой праймер: 5'-TTCTACAATGAGCTGCGTTG-3', обратный праймер: 5'-CACTGTGTTGGCATAGAGGTC-3'). Использовали 30 циклов при 94°С в течение 30 секунд (денатурация), при 55°С в течение 1 минуты (отжиг) и при 72°С в течение 1 минуты (синтез цепей). Продукт ПЦР составил 560 пар оснований. Образец, амплифицированный методом обратной транскрипции-полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР), визуализировали в 1,5% агарозном геле с использованием этидия бромида.

Получение белка и анализ методом вестерн-блот

Аорту каждой мыши разрезали на четыре сегмента. Два из них использовали для экстракции РНК, а остальные два использовали для экстракции белка, как описано ранее (14). Коротко, ткани аорт гомогенизировали и подвергали лизису в буфере для лизиса, затем центрифугировали при 4000 об/мин в течение 10 минут при 4°С. Белки лизатов из аорт (20 мкг/дорожка) выделяли методом 10% SDS-PAGE (электрофорез в полиакриламидном геле в присутствии 10% додецилсульфата натрия) и переносили на нитроцеллюлозные мембраны. После инкубации в блокирующем растворе (5% обезжиренное молоко, Sigma) мембраны инкубировали с разведением 1:750 моноклональное антитело: мышиный LOX-1, разведением 1:500 поликлональное антитело: мышиный CD40 (Santa Cruz), разведением 1 мкг/мл моноклональное антитело: мышиная ММР-1 (Oncogene), разведением 1 мкг/мл моноклональное антитело: мышиная ММР-2 (Oncogene), разведением 1 мкг/мл моноклональное антитело: мышиная ММР-9 (Oncogene), разведением 1:500 поликлональное антитело: мышиный TIMP-1 (Santa Cruz), разведением 1:500 поликлональное антитело: мышиный TIMP-2 (Santa Cruz) или разведением 1:5000 моноклональное антитело: мышиный β-актин (Sigma) в течение ночи при 4°С. Мембраны промывали и затем инкубировали со специфичным вторичным антителом (Amersham Life Science) в разведении 1:5000 в течение 2 часов при комнатной температуре, и мембраны промывали и детектировали с использованием ECL системы (Amersham Life Science). Относительные интенсивности полос белков анализировали с использованием программы Scan-gel-it (Li DY, Zhang YC, Sawamura T, Mehta JL. Circ Res. 1999; 84:1043-1049).

Анализ данных

Все данные представляют собой среднее из параллельных образцов. Данные представлены как среднее ±SD (стандартное отклонение). Статистическую значимость определяли при множественных сравнениях между независимыми группами данных, в которых ANOVA (вариационный анализ) и F-тест указывали на наличие значимых различий. Значение Р<0,05 считали значимым.

Результаты

Синергетический антиатеросклеротический эффект кандесартана и розувастатина

По сравнению с контрольными мышами (мыши C57BL/6J, которые получали нормальный корм) у аро-Е "нокаутированных" мышей, которые получали корм с высоким содержанием холестерина, развивался обширный атеросклероз (Р<0,01 по сравнению с контрольными мышами). Хотя и кандесартан, и розувастатин сами по себе снижали степень атеросклероза (р<0,05 по сравнению с только кормом с высоким содержанием холестерина), комбинация снижала атеросклероз в гораздо более высокой степени (Р<0,05 по сравнению с только кандесартаном или только розувастатином плюс корм с высоким содержанием холестерина). На Фиг.1 показаны результаты репрезентативных экспериментов и степень атеросклероза (среднее ±SD) в различных группах животных.

Кандесартан и розувастатин по отдельности снижали атеросклероз на примерно 35% и 25% соответственно. Комбинация снижала атеросклероз на 70%, демонстрируя синергетический эффект. Этот эффект иллюстрируется графически на Фиг.2.

Синергетический эффект кандесартана и розувастатина на экспрессию LOX-1

У контрольных мышей C57BL/6J экспрессия LOX-1 (мРНК и белок) была низкой. Напротив, экспрессия LOX-1 (мРНК и белок) значительно увеличивалась у аро-Е "нокаутированных" мышей, получавших корм с высоким содержанием холестерина (Р<0,01 по сравнению с контрольными мышами). И кандесартан, и розувастатин по отдельности снижали экспрессию LOX-1 (мРНК и белок), хотя и умеренно (Р<0,05 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина). Комбинация кандесартана и розувастатина имела поразительный ингибирующий эффект на положительную регуляцию LOX-1 (мРНК и белок) у аро-Е "нокаутированных" мышей (Р<0,01 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина).

Синергетический эффект кандесартана и розувастатина на экспрессию CD40

По сравнению с экспрессией у контрольных мышей C57BL/6J, экспрессия CD40 (мРНК и белок) значительно увеличивалась у аро-Е "нокаутированных" мышей, получавших корм с высоким содержанием холестерина (Р<0,01 по сравнению с контрольными мышами). Хотя лечение кандесартаном и розувастатином по отдельности слегка снижало экспрессию CD40 (Р<0,05 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина), комбинация кандесартана и розувастатина имела поразительный ингибирующий эффект на положительную регуляцию CD40 (мРНК и белок) у аро-Е "нокаутированных" мышей (Р<0,01 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина).

Синергетический эффект кандесартана и розувастатина на экспрессию ММР

По сравнению с экспрессией у контрольных мышей C57BL/6J, экспрессия ММР-1, -2 и -9 (мРНК и белок) значительно увеличивалась у аро-Е "нокаутированных" мышей, получавших корм с высоким содержанием холестерина (Р<0,01 по сравнению с контрольными мышами). Как кандесартан, так и розувастатин по отдельности снижали экспрессию ММР-1, -2 и -9 (мРНК и белок), хотя и умеренно (Р<0,05 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина). Комбинация кандесартана и розувастатина имела поразительный ингибирующий эффект на их экспрессию (Р<0,01 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина).

Эффект кандесартана и розувастатина на экспрессию TIMP

Экспрессия белка TIMP-1 и TIMP-2 также увеличивалась у аро-Е "нокаутированных" мышей, получавших корм с высоким содержанием холестерина (Р<0,01 по сравнению с контрольными мышами), но это увеличение было меньше, чем увеличение ММР. Как кандесартан, так и розувастатин по отдельности снижали экспрессию TIMP-1 и TIMP-2 в небольшой степени (Р<0,05 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина), но комбинация кандесартана и розувастатина имела больший ингибирующий эффект на их экспрессию (Р<0,01 по сравнению с одним только кормом с высоким содержанием холестерина, Р<0,05 по сравнению с кормом с высоким содержанием холестерина вместе с кандесартаном или розувастатином).

1. Комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для предупреждения или лечения атеросклероза.

2. Комбинация, содержащая кандесартан или его фармацевтически приемлемую соль и розувастатин или его фармацевтически приемлемую соль, для предупреждения сердечно-сосудистых событий.

3. Комбинация по п.1 для применения в изготовлении лекарства для предупреждения или лечения атеросклероза.

4. Комбинация по п.2 для применения в изготовлении лекарства для предупреждения сердечно-сосудистых событий.

5. Комбинация по п.1 для применения в качестве лекарственного средства для предупреждения или лечения атеросклероза.

6. Комбинация по п.2 для применения в качестве лекарственного средства для предупреждения сердечно-сосудистых событий.

7. Способ предупреждения или лечения атеросклероза у теплокровного животного, например человека, включающий введение комбинации по п.1.

8. Способ предупреждения сердечно-сосудистых событий у теплокровного животного, например человека, включающий введение комбинации по п.2.

9. Комбинация по п.1, в которой кандесартан находится в форме кандесартана цилексетила.

10. Комбинация по п.1 или 2, в которой кандесартан приготовлен с гидрохлортиазидом (Atacand Plus™).