Способ диагностики миксоспоридий у рыб
Владельцы патента RU 2363155:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Кубанский государственный аграрный университет" (RU)
Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает растворение измельченного биологического субстрата в искусственном желудочном соке, инкубирование, получение осадка, его центрифугирование в течение 15 мин и исследование под микроскопом на наличие спор миксоспоридий. При этом в качестве биологического субстрата используют все мягкие ткани рыб. Осадок центрифугируют при 1500-8000 об/мин, а инкубацию проводят при температуре не более 40°С в течение 20-25 мин. Способ обладает высокой точностью и позволяет сократить время диагностики. 1 табл.
Изобретение относится к рыбоводству, в частности к методам контроля заболевания рыб.
Известен способ диагностики трихинеллеза, включающий растворение измельченного биологического субстрата в искусственном желудочном соке, инкубирование, получение осадка и исследование его под микроскопом на наличие паразитов, вызывающих заболевание (см. Методика лабораторной диагностики трихинеллеза, утвержденная Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 16.10.1986 г.).
Известен способ диагностики миксоспоридиозов рыб (патент на изобретение №2309585, Кл. А01К 61/00, авторы: А.А.Лысенко и др. от 10.11.2007 г. - прототип).
Известные технические решения диагностики миксоспоридий у рыб требуют значительных затрат времени на одно исследование.
Техническим решением задачи является изменение параметров переваривания тканей рыб и уменьшение времени исследования, не изменяя точности диагностики.
Поставленная задача достигается в способе диагностики миксоспоридий у рыб, включающем растворение измельченного биологического субстрата в искусственном желудочном соке, инкубирование, получение осадка и его центрифугирование в течение 15 мин и исследование его под микроскопом на наличие спор миксоспоридий, согласно изобретению в качестве биологического субстрата используют все мягкие ткани рыб, а осадок центрифугируют при 1500-8000 об/мин, при этом инкубацию проводят при температуре не более 40°С в течение 20-25 мин.
Новизна заявляемого предложения обусловлена тем, что изменены температурные параметры переваривания всех мягких тканей рыб с последующей обработкой в искусственном желудочном соке и центрифугированием, что позволяет сократить время исследования каждой пробы с 3-4 ч до 20-25 мин, кроме того, переваривание всех мягких тканей обеспечивает возможность обнаружить практически все споры, находящиеся в организме рыбы, так называемый «индекс обилия».
По данным научно-технической и патентной литературы не обнаружена аналогичная заявляемой совокупность признаков, позволяющая получить технический результат, который ранее не достигался известными средствами, что позволяет судить об изобретательском уровне заявляемого предложения.
Предложенное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», поскольку воспроизводимо и в исполнении доступно.
Способ диагностики миксоспоридий у рыб осуществляется следующим образом.
Предварительно измельчают биологический субстрат, в качестве которого используют все мягкие ткани рыб, затем растворяют в искусственном желудочном соке путем переваривания, инкубируют при температуре в пределах 40°С в течении 20-25 мин, получают осадок путем центрифугирования в течение 15 мин при 1500-8000 об/мин и исследуют его под микроскопом на наличие спор миксоспоридий. Если инкубацию проводить при температуре выше 40°С, то происходит разрушение и гибель спор.
Пример конкретного осуществления способа диагностики миксоспоридий у рыб.
Все мягкие ткани рыбы измельчают на мясорубке, закладывают в колбу Эленмеера и заливают теплым (37°С) искусственным желудочным соком в соотношении 1:20. Затем колбу с содержимым ставят в термостат при температуре в пределах 40°С на 20-25 мин, периодически помешивая. По окончании переваривания полученную смесь центрифугируют в течение 15 мин при 1500-8000 об/мин, в зависимости от плотности смеси. Полученную обезвоженную фракцию (осадок) затем исследует на наличие спор миксоспоридий. Искусственный желудочный сок был изготовлен из пепсина медицинского в количестве 3,0 г, концентрированной соляной кислоты - 0,75 мл и воды - 100 мл.
Эффективность использования способа диагностики миксоспоридий у рыб была подтверждена результатами исследований (см. таблицу).
| Таблица | |||||
| № п/п | № рыбы | Традиционный способ Экз.спор в пробе (увел. 7×40) | Время исслед. | Заявляемый способ Экз.спор в пробе (увел.7×40) | Время исслед. |
| 1. | 2034 | 35-37 | 3-4 часа | 31-34 | 20-25 минут |
| 2. | 2035 | 11-13 | 13-17 | ||
| 3. | 2036 | 6-9 | 4-8 | ||
| 4. | 2037 | 8-13 | 5-9 | ||
| 5. | 2038 | 10-13 | 15-19 | ||
| 6. | 2039 | Не обнаруж. | Не обнаруж. | ||
| 7. | 2040 | 37-40 | 29-35 | ||
| 8. | 2041 | 17-19 | 7-12 | ||
| 9. | 2042 | 15-19 | 20-22 | ||
| 10. | 2043 | 29-33 | 21-24 |
Анализируя данные таблицы, следует сделать вывод: точность диагностики предлагаемого способа соответствует традиционному способу, а затраты времени на исследование уменьшились в 9-10 раз.
Способ диагностики миксоспоридий у рыб, включающий растворение измельченного биологического субстрата в искусственном желудочном соке, инкубирование, получение осадка и его центрифугирование в течение 15 мин и исследование его под микроскопом на наличие спор миксоспоридий, отличающийся тем, что в качестве биологического субстрата используют все мягкие ткани рыб, а осадок центрифугируют при 1500-8000 об/мин, при этом инкубацию проводят при температуре не более 40°С в течение 20-25 мин.
