Диамиды аминокислот по положению, не являющемуся -положением, полезные в качестве адъювантов для введения биологически активных агентов
Изобретение относится к диамидам аминокислот по положению, не являющемуся α-положением, формулы (1), где R1 выбран из группы, состоящей из функциональных групп: алкил, галоген, NO2, ОН, ОСН3, присутствующих либо поодиночке, либо в сочетании, и R2 представляет собой Н, которые полезны в качестве адъювантов для введения активных биологических агентов, и к фармацевтическим композициям, содержащим указанные диамиды формулы (1). 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.
ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к новым диамидам аминокислот по положению, не являющемуся α-положением, которые полезны в качестве адъювантов для введения биологических активных ингредиентов. Соединения по изобретению облегчают пероральное, интрадуоденальное, внутритолстокишечное и легочное введение гепарина, низкомолекулярных гепаринов, гепаринов очень низкой молекулярной массы и других гликозаминогликанов и производных.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Гепарин в настоящее время используют посредством парентерального введения для предупреждения и лечения тромбоза глубоких вен. Гепарин и родственные производные неэффективны в желудочно-кишечном тракте или разрушаются в нем посредством кислотного или ферментативного гидролиза. Кроме того, размер и ионный заряд молекул могут препятствовать их абсорбции.
Для улучшения пероральной абсорбции гепарина использовались различные адъюванты (например, неионогенные поверхностно-активные вещества). В последнее время для облегчения введения различных биологических агентов, в частности гепарина, использовали модифицированные аминокислоты (WO 98/34632, WO 01/51454, WO 97/36480).
Эти соединения по существу являются производными 4-аминофенилмасляной кислоты:
и различных амидов, таких как:
В частности, следующие производные:
Главным образом, те производные, которые относятся к n=2 и n=5 (WO 97/36480), заявлены в качестве агентов, которые облегчают пероральную абсорбцию биологических продуктов.
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В рамках исследования пероральной абсорбции гепарина автор открыл новое семейство химических продуктов, которые облегчают и значительно увеличивают пероральную абсорбцию гепарина и его низкомолекулярных производных, особенно посредством внутритолстокишечного введения.
Эти продукты имеют следующую структуру:
где R1 выбран из группы, состоящей из функциональных групп: алкил, галоген, NO2, ОН, ОСН3, присутствующих либо поодиночке, либо в сочетании, и R2 выбран из группы, состоящей из функциональных групп: Н, алкил, галоген, NO2, ОН, ОСН3.
Эти продукты являются новыми. Исследование, проведенное автором, выявило новизну этой структуры. Фактически автор смог показать, что вышеуказанные продукты, а именно структура В, n=3 (пример 1) и n=5 (пример 2), синтезированные автором, не оказывают никакого влияния на абсорбцию в толстой кишке низкомолекулярного гепарина (бемипарина) у крыс. Аналогично, продукты, которые имеют структуру Г (пример 3)
синтезированные автором, не оказывают никакого эффекта на абсорбцию бемипарина в толстой кишке (смотри Таблицу).
Таблица показывает анти-Ха (фактор Ха) активность/мл в плазме после внутритолстокишечного введения крысам Бемипарина и комбинации Бемипарина с соединениями из примеров 1, 2 и 3, как показано ниже:
| Время после введения (ч) | |||||
| Лечение | Путь введения | Дозировка, мг/кг | 0,5 | 2 | 4 |
| Бемипарин | Внутритолстокишечный | 30 | 0,103 | 0,222 | 0,345 |
| Бемип. + прим.1 | Внутритолстокишечный | 30+30 | 0,299 | 0,196 | 0,147 |
| Бемип. + прим.2 | Внутритолстокишечный | 30+30 | 0,367 | 0,193 | 0,111 |
| Бемип. + прим.3 | Внутритолстокишечный | 30+30 | 0,512 | 0,316 | 0,240 |
Эти результаты демонстрируют важность водородной связи между атомами О и Н в продуктах по изобретению.
Другая характерная особенность изобретения касается важности природы и положения заместителя R1, а также длины цепи (значение n).
Автор также обнаружил, что производные, которые имеют заместители Сl или NO2 в положении 3, являются по меньшей мере такими же активными, как и производные, которые имеют ОН в положении 1.
Среди продуктов по изобретению предпочтительными соединениями являются соединения, которые соответствуют n=3 и заместителям ОН (пример 4), Cl (пример 17), NO2 (пример 11).
Продукты по изобретению применимы в форме кислоты или в форме растворимой соли, являющихся биологически приемлемыми, или в виде фармацевтической композиции, содержащей гепарин или производное гепарина (сложный эфир, амид, олигосахариды и так далее), а также адъювант, известный своим благоприятным действием (полиэтиленгликоль, альгинат, хитозан и производные, пропиленгликоль, карбопол и так далее).
Одна из предпочтительных композиций включает комбинацию одного из описанных выше продуктов с низкомолекулярным гепарином, таким как бемипарин, для перорального применения для предупреждения и лечения венозного и артериального тромбоза.
Другое применение продуктов по изобретению заключается в комбинировании их с любым неантикоагулянтным производным гепарина для перорального применения при таких состояниях, как воспаление, аллергия и рак.
В целом продукты по изобретению усиливают пероральную абсорбцию, особенно при внутритолстокишечном введении, гликозаминогликанов и гликозаминогликановых олигосахаридов.
Свойства продуктов по изобретению были исследованы на экспериментальной модели, описанной ниже, которая заключалась в измерении у крыс внутритолстокишечной абсорбции низкомолекулярного гепарина, бемипарина, со средней молекулярной массой приблизительно 3500 дальтон и анти-Ха активностью приблизительно 100 единиц/мг.
Полученные результаты показывают, в частности, для продуктов из примеров 4 (смотри Фиг.1), 11 и 17 (смотри Фиг.2) значительное увеличение абсорбции бемипарина, измеренное по анти-Ха активности в плазме.
Фиг.1 показывает внутритолстокишечную абсорбцию у крысы бемипарина и соединений из примеров 4, 5 и 9, которые показаны ниже.
Фиг.2 показывает внутритолстокишечную абсорбцию у крысы соединений из примеров 10, 11 и 17, которые показаны ниже.
Другое преимущество продуктов по изобретению и интерес к ним в качестве агентов, которые увеличивают пероральную абсорбцию олигосахаридов, имеющих происхождение от гепарина, было продемонстрировано исследованием внутритолстокишечной абсорбции гепарина очень низкой молекулярной массы, RO-14 (2500 дальтон, 80-100 единиц анти-Ха/мг). Фармацевтическая композиция RO-14 + продукт из примера 4 (смотри Фиг.3) показывает высокую длительную анти-Ха активность.
Фиг.3 показывает внутритолстокишечную абсорбцию у крысы комбинации фармацевтической композиции RO-14 с продуктом из примера 4.
Серия примеров представлена ниже для того, чтобы разъяснять изобретение, не ограничивая его объем. Эти примеры описывают методику получения соединений 1-22, указанных ниже, а также их действие по увеличению внутритолстокишечной абсорбции низкомолекулярного гепарина, Бемипарина.
Пример 1
4-[4-(гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 1)
К раствору 4,41 г (18,69 ммоль) метил-4-(4-аминобензоиламино)бутаноата, растворенного в 80 мл этилацетата, очень медленно добавляют 2,49 г (15,97 ммоль) 2-гидроксибезоилхлорида, растворенного в 10 мл этилацетата. Затем добавляют 1,61 г (15,97 ммоль) триэтиламина и выдержавают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 24 часов. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 40 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока твердая фаза полностью не растворится. Немедленно подкисляют концентрированной соляной кислотой, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 1,48 г (27%) 4-[4-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 211-213°С
ИК (инфракрасная спектроскопия) (KBr): ν 3360, 2970, 2680, 1700, 1665, 1620, 1540, 1510, 855, 770, 750, 695 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.75 (m, 2H, -CH2-), 2.27 (t, 2H, J=7,2 Гц, -CH2-CO-), 3.27 (m, 2H, -CH2-N-), 6.97 (m, 2H, ароматический), 7.43 (m, 1H, ароматический), 7.79 (d, 2H, J=8,5 Гц, ароматический), 7.85 (d, 2H, J=8,5 Гц, ароматический), 7.94 (m, 1H, ароматический), 8.39 (t, 1H, J=5,3 Гц, -NH-CH2-), 10.51 (s, 1H, -NH-Ph) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 100 МГц): δ 24.6, 31.6, 38.6, 117.2, 117.9, 119.1, 119.8, 127.9, 129.3, 129.9, 133.7, 140.7, 158.0, 165.6, 166.4, 174.2 млн-1
МС (масс-спектрометрия) m/z (%): 342 (M+, 4), 324 (5), 239 (19), 204 (18), 168 (21), 120 (100), 92 (19), 65 (33)
Элементный анализ C18H18N2O5
Рассчитано: % С=63,15; % H=5,30; % N=8,18
Найдено: % С=63,10; % H=5,32; % N=8,04
Пример 2
6-[4-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]гексановая кислота (соединение 2)
К раствору 2,81 г (10,64 ммоль) метил-6-(4-аминобензоил-амино)гексаноата, растворенного в 50 мл ацетонитрила, очень медленно добавляют 1,42 г (9,10 ммоль) 2-гидроксибензоилхлорида, растворенного в 5 мл ацетонитрила. Затем добавляют 0,92 г (9,10 ммоль) триэтиламина и выдерживают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 24 часов. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока твердая фаза полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной соляной кислотой, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2О) с получением 1,11 г (33%) 6-[4-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]гексановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 201-203°С
ИК (КВr): ν 3330, 3050, 2950, 2680, 2570, 1700, 1675, 1600, 1540, 855, 770, 750 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.32 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 1.51 (m, 4H, -CH 2-CH2-CH 2-), 2.20 (t, 2H, J=7,3 Гц, -CH2-CO-), 3.23 (m, 2H, -CH2-N-), 6.97 (m, 2H, ароматический), 7.43 (m, 1H, ароматический), 7.78 (d, 2H, J=8,5 Гц, ароматический), 7.84 (d, 2H, J=8,5 Гц, ароматический), 7.93 (m, 1H, ароматический), 8.35 (t, 1H, J=5,1 Гц, -NH-CH2-), 10.51 (s, 1H, -NH-Ph), 11.62 (s, 1H, -ОН), 11.95 (s, 1H, -COOH) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 100 МГц): δ 14.2, 24.5, 25.5, 28.6, 34.1, 60.3, 68.5, 114.3, 125.9, 164.1, 173.5 млн-1
MC m/z (%): 263 (M-18, 3), 236 (4), 218 (2), 172 (5), 143 (20), 115 (16), 97 (49), 69 (100), 55 (49), 41 (65)
Элементный анализ C20H22N2O5
Рассчитано: % С=64,85; % H=5,99; % N=7,56
Найдено: % С=64,51; % H=5,86; % N=7,45
Пример 3
4-[3-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 3)
К раствору 2,60 г (11,00 ммоль) метил-4-(3-аминобензоиламино)бутаноата, растворенного в 25 мл этилацетата, очень медленно добавляют 1,40 г (10,00 ммоль) 2-гидроксибензоилхлорида, растворенного в 5 мл этилацетата. Затем добавляют 1,00 г (10 ммоль) Et3N (триэтиламин) и выдерживают реакционную смесь при комнатной температуре в течение 24 часов. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 40 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока твердая фаза полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2О) с получением 1,60 г (48%) 4-[3-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 172-174°С
ИК (ATR) (инфракрасная спектроскопия ослабленного полного отражения): ν 3291, 2940, 1714, 1611, 1551, 1455, 1335, 1232, 1214, 878, 817, 735 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1,77 (q, 2H, J=7,0 Гц, -СН2-), 2.28 (t, 2H, J=7,4 Гц, -СН2-СО-), 3.28 (m, 2H, -CH2-N-), 6.97 (m, 2H, ароматический), 7.43 (m, 2H, ароматический), 7.59 (m, 1H, ароматический), 7.87 (m, 1H, ароматический), 7.98 (m, 1H; ароматический), 8.12 (m, 1H, ароматический), 8.50 (t, 1H, J=5,0 Гц, -NH-CH2-), 10.50 (s, 1H, -NH-) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 100 МГц): δ 24.5, 31.2, 38.7, 117.3, 117.4, 119.1, 120.2, 122.7, 123.5, 128.6, 129.1, 133.8, 135.4, 138.2, 158.5, 166.1, 166.7, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 238 (M+-104, 61), 210 (3), 186 (2), 160 (3), 137 (9), 119 (100), 120 (30), 92 (50), 91 (12), 65 (31)
Элементный анализ C18H18N2O5
Рассчитано: % С=63,14; % H=5,31; % N=8,18
Найдено: % С=63,01; % H=5,23; % N=8,21
Пример 4
4-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 4)
К суспензии 20,36 г (91,71 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 200 мл сухого метиленхлорида добавляют 42,33 г (391,92 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 11,87 г (117,57 ммоль) триэтиламина и раствор 15,52 г (78,38 ммоль) ацетилсалицилоилхлорида, растворенного в 20 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 200 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 21,66 г (81%) 4-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 173-174°С
ИК (ATR): ν 3322, 2925, 2852, 1688, 1652, 1633, 1597, 1529, 1448, 1260, 1228, 756 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.76 (q, 2H, J=7,0 Гц, -CH2-), 2.28 (t, 2H, J=7,3 Гц, -СН2-СО-), 3.27 (m, 2H, -CH2-N-), 6.96 (m, 2H, ароматический), 7.20 (m, 1H, ароматический), 7.42 (m, 1H, ароматический), 7.50 (m, 1H, ароматический), 7.68 (m, 1H, ароматический), 7.83 (m, 1H, ароматический), 8.48 (m, 1H, ароматический), 8.50 (t, 1H, J=5,0 Гц, -NH-CH2-), 11.62 (Sуширенный, 1H, -OH), 12.03 (Sуширенный, 1H, -COOH), 12.19 (s, 1H, -NH-Ph) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.9, 117.2, 117.9, 119.3, 121.7, 123.1, 123.3, 128.1, 129.2, 131.3, 133.7, 137.8, 158.1, 165.5, 168.1, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 342 (М+, 5), 265 (4), 239 (100), 222 (11), 121 (50), 120 (64), 119 (62), 92 (54), 77 (10), 65 (53), 39 (39)
Элементный анализ C18H18N2O5
Рассчитано; % С=63.15; % Н=5.30; % N=8.18
Найдено: % С=63.15; % Н=5.38; % N=8.15
Пример 5
5-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]пентановая кислота (соединение 5)
К суспензии 1,61 г (6,81 ммоль) 5-(2-аминобензоиламино)пентановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 1,41 г (11,94 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,88 г (8,73 ммоль) триэтиламина и раствор 1,15 г (5,82 ммоль) ацетилсалицилоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 20 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 1,26 г (61%) 5-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]пентановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 168-170°С
MK (ATR): ν 3310, 1698, 1648, 1626, 1597, 1521, 1269, 1223; 1139, 746 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.54 (m, 4Н, -CH2-CH 2 -CH 2-CH2-), 2.21 (t, 2H, J=7,2 Гц, -СН2-СО), 3.26 (m, 2H, -CH2-N-), 6.97 (m, 2H, ароматический), 7.18 (m, 1H, ароматический), 7.40 (m, 1Н, ароматический), 7.51 (m, 1H, ароматический), 7.67 (m, 1Н, ароматический), 7.84 (m, 1H, ароматический), 8.47 (m, 1Н, ароматический), 8.72 (t,
1 H, J=5,4 Гц, -NH-СН2-), 11.62 (s, 1H, -ОН), 11.98 (s, 1H, -COOH), 12.18 (s, 1 H, -NH-Ph)
млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 22.0, 28.3, 33.3, 38.9, 117.2, 118.0, 119.3, 121.74, 123.2, 123.5, 128.0, 129.3, 131.3, 133.7, 137.8, 158.0, 165.5, 168.0, 174.4 млн-1
MC m/z (%): 356 (M+, 1), 337 (9), 239 (72), 119 (100), 99 (18), 92 (59), 77 (15), 65 (48), 41 (25)
Элементный анализ C19H20N2O5
Рассчитано: % С=64,04; % Н=5,66; % N=7,86
Найдено: % С=63.90; % Н=5,69; % N=7,75
Пример 6
8-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]октановая кислота (соединение 6)
К суспензии 2,00 г (7,20 ммоль) 8-(2-аминобензоиламино)октановой кислоты в 25 мл сухого метиленхлорида добавляют 1,36 г (12,60 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,93 г (9,22 ммоль) триэтиламина и раствор 1,21 г (6,15 ммоль) ацетилсалицилоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 20 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 1,41 г (58%) 8-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]октановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 124-125°С
ИK (ATR): ν 3110, 2931, 2855, 1698, 1654, 1627, 1585, 1526, 1495, 1448, 1409, 1361, 1315, 1268, 1222, 1196, 1168 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.25 (m, 6Н, -СН2-СН2-СН 2 -СН 2 -СН 2-СН2-СН2-), 1.46 (m, 4Н, -CH2-CH2-CH 2-CH2-CH2-CH 2-CH2-), 2.14 (t, 2Н, J=7,5 Гц, -СН2-СО), 3.23 (m, 2Н, -CH2-N-), 6.95 (m, 2Н, ароматический), 7.18 (m, 1Н, ароматический), 7.41 (m, 1Н, ароматический), 7.50 (m, 1Н, ароматический), 7.65 (m, 1Н, ароматический), 7.84 (m, 1Н, ароматический), 8.44 (m, 1Н, ароматический), 8.67 (t, 1Н, J=5,7 Гц, -NH-CH2-), 11.61 (s, 1Н, -ОН), 11.90 (s, 1Н, -СООН), 12.13 (s, 1Н, -NH-Ph) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.5, 26.4, 28.50, 28.52, 28.8, 33.6, 39.2, 117.2, 117.9, 119.3, 121.8, 123.2, 123.8, 128.0, 129.2, 131.2, 133.7, 137.7, 158.1, 165.5, 167.9, 174.5 млн-1
MC m/z (%): 398 (M+, 1), 379 (3), 351 (2), 278 (5), 251 (6), 239 (94), 197 (9), 137 (11), 119 (100), 100 (17), 92 (51), 77 (8), 65 (37), 41 (20)
Элементный анализ C19H20N2O5
Рассчитано: % С=66,32; % Н=6,58, % N=7,03
Найдено: % С=66,03; % Н=6,47; % N=7,05
Пример 7
6-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]гексановая кислота (соединение 7)
К суспензии 0,30 г (1,20 ммоль) 6-(2-аминобензоиламино)гексановой кислоты в 5 мл сухого метиленхлорида добавляют 0,23 г (2,10 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,15 г (1,53 ммоль) триэтиламина и раствор 0,20 г (2,05 ммоль) 2-ацетилсалицилоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 10 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (ЕtOН/Н2O) с получением 0,24 г (62%) 6-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]гексановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 165-167°С
ИК (ATR): ν 3348, 2923, 2853, 1688, 1595, 1523, 1493, 1414, 1360, 1272, 903, 815, 759 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.31 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 1.51 (m, 4H,
-СН2-СН 2-СН2-СН 2-СН2-), 2.17 (t, 2H, J=7,4 Гц, -СН2-СО-), 3.24 (m, 2H, -CH2-NH-), 6.96 (m, 2H, ароматический), 7.18 (m, 1H, ароматический), 7.41 (m, 1H, ароматический), 7.50 (m, 1H, ароматический), 7.66 (m, 1H, ароматический), 7.84 (m, 1H, ароматический), 8.46 (m, 1H, ароматический), 8.69 (Sуширенный, 1H, -NH-CH2-), 11.61 (s, 1H, -ОН), 11.93 (s, 1H, -COOH), 12.16 (s, 1H, -NH-Ph) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 26.0, 28.5, 33.6, 39.1, 117.2, 118.0, 119.3, 121.8, 123.2, 123.7, 128.0, 129.3, 131.2, 133.7, 137.7, 158.0, 165.4, 167.9, 174.4 млн-1
MC m/z (%): 352 (М+-18,3), 351 (4), 265 (3), 251 (9), 239 (56), 211 (6), 132 (7), 119 (100), 102 (5), 92 (62), 77 (15), 65 (52), 41 (26)
Элементный анализ C20H22N2O5
Рассчитано: % С=64,85; % H=5,99; % N=7,56
Найдено: % С=64,57; % H=5,93; % N=7,57
Пример 8
4-[2-(2-нитробензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 8)
К суспензии 3,90 г (17,50 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 40 мл сухого этилацетата добавляют 3,26 г (17,56 ммоль) 2-нитробезоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого этилацетата и 1,76 г триэтиламина. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 24 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока твердая фаза полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl и экстрагируют продукт этилацетатом. Растворитель удаляют при низком давлении и рекомбинируют неочищенный продукт сухим эфиром с получением белого твердого вещества. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2O) с получением 3,34 г (51%) 4-[2-(2-нитробензоиламино)бензоил-амино]бутановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 142-144°С
ИК (ATR): ν 3348, 2923, 2853, 1688, 1595, 1523, 1493, 1414, 1360, 1272, 903, 815, 759 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.73 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.26 (t, 2H, J=7,0 Гц, -CH2-CO-), 3.24 (m, 2H, -CH2-NH-), 7.24 (m, 1H, ароматический), 7.56 (m, 1H, ароматический), 7.80 (m, 4H, ароматический), 8.10 (m, 1H, ароматический), 8.38 (m, 1H, ароматический), 8.82 (Sуширенный, 1H, -NH-СН2-), 12.02 (s, 1H, -COOH), 12.06 (s, 1H, -NH-Ph) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.1, 31.0, 38.6, 120.8, 121.6, 123.6. 124.6, 128.2, 128.3, 131.5, 131.98, 132.02, 134.1, 138.3, 147.1, 163.3, 168.1, 174.1 млн-1
MC m/z (%): 371 (M+, 4), 353 (6), 268 (26), 236 (49), 208 (36), 150 (54), 134 (100), 120 (55), 119 (55), 104 (39), 90 (47), 76 (57), 44 (58)
Элементный анализ C18H17N3O6
Рассчитано: % С=58,22; % Н=4,61; % N=11,32
Найдено: % С=58,15; % Н=4,55; % N=11,35
Пример 9
3-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]пропановая кислота (соединение 9)
К суспензии 0,5 г (2,40 ммоль) 3-(2-аминобензоиламино)пропановой кислоты в 10 мл сухого метиленхлорида, добавляют 0,45 г (4,20 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником под аргоном в течение 2 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,31 г (3,07 ммоль) триэтиламина и раствор 0,40 г (2,05 ммоль) 2-ацетилсалицилоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2O) с получением 0,37 г (56%) 3-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]пропановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 200-202°С
ИК (ATR): ν 3331, 3051, 2657, 1718, 1649, 1626, 1593, 1523, 1269, 1225, 904, 853, 749 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 2.52 (t, 2H, J=7,4 Гц, -СН2-СО-), 3.46 (m, 2H, -CH2-NH-), 6.97 (m, 2H, ароматический), 7.18 (m, 1H, ароматический), 7.41 (m, 1H, ароматический), 7.51 (m, 1H, ароматический), 7.65 (m, 1H, ароматический), 7.85 (m, 1H, ароматический), 8.45 (m, 1H, ароматический), 8.79 (Sуширенный, 1H, -NH-CH2-), 11.61 (s, 1H, -ОН), 12.15 (s, 1H, -COOH), 12.25 (s, 1H, -NH-Ph) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 35.4, 35.5, 117.2, 118,02, 119.3, 121.7, 123.1, 123.2, 128.0, 129.4, 131.4, 131.7, 137.8, 157.9, 165.3, 168.1, 172.7 млн-1
MC m/z (%): 328 (M+, 6), 293 (3), 250 (5), 239 (100), 208 (20), 119 (65), 92 (50), 65 (60), 44 (42)
Элементный анализ C17H16N2O5
Рассчитано: % С=62,19; % H=4,91; % N=8,53
Найдено: % С=61,82; % H=4,72; % N=8,39
Пример 10
2-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]этановая кислота (соединение 10)
К суспензии 4,74 г (24,44 ммоль) 2-(2-аминобензоиламино)этановой кислоты в 40 мл сухого метиленхлорида добавляют 5,05 г (4,28 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 3,16 г (31,32 ммоль) триэтиламина и раствор 4,13 г (20,88 ммоль) ацетилсалицилоилхлорида, растворенного в 10 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 40 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 3,54 г (54%) 2-[2-(2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]этановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 222-224°С
ИК (АТР): ν 3286, 2978, 1730, 1650, 1627, 1598, 1584, 1526, 1242, 900, 835, 752 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 3.95 (d, 2H, J=4,9 Гц, -СН2-), 6.97 (m, 2Н, ароматический), 7.21 (m, 1H, ароматический), 7.41 (m, 1H, ароматический), 7.55 (m, 1H, ароматический), 7,80 (m, 2Н, ароматический), 8.52 (m, 2Н, ароматический), 9.07 (Sуширенный, 1H, -NH-CH2-), 11.58 (s, 1H, -ОН), 12.18 (s, 1Н, -СООН), 12.70 (s, 1H, -NH-Ph) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 41.2, 117.2, 118.0, 119.3, 121.8, 122.3, 123.2, 128.1, 129.3, 131.8, 133.7, 138.1, 157.9, 165.4, 168.4, 171.0 млн-1
MC m/z(%): 278 (М+-36, 16), 239 (37), 234 (17), 195 (14), 107 (9), 119 (100), 92 (36), 77 (22), 65 (28), 50 (19)
Элементный анализ C20H22N2O5
Рассчитано: % С=61,14; % Н=4,49; % N=8,91
Найдено: % С=60.90; % Н=4,42; % N=8,98
Пример 11
4-[2-(2-гидрокси-4-нитробензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 11)
К суспензии 1,00 г (4,50 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 4,50 г (38,50 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,58 г (5,70 ммоль) триэтиламина и раствор 0,77 г (38,50 ммоль) 2-гидрокси-4-нитробензоилхлорида, растворенного в 10 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывпают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 0,50 г (34%) 4-[2-(2-гидрокси-4-нитробензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде желтого твердого вещества.
Т.пл.: 209-211°С
ИК (ATR): ν 3378, 2939, 1702, 1592, 1520, 1449, 1420, 1347, 1326, 1300, 1259, 1232, 1215, 1162, 813, 748, 737 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.75 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.28 (t, 1H, J=7,3 Гц, -СН2-СО-), 3.26 (m, 2H, -CH2-N-), 7.20 (m, 1H, ароматический), 7.52 (m, 1H, ароматический), 7.66 (m, 1H, ароматический), 7.74 (m, 2H, ароматический), 8.10 (m, 1H, ароматический), 8.49 (m, 1H, ароматический), 8.71 (t, J=5,4 Гц, -NH-CH2-), 12.12 (s, 2H, -ОН, -СООН), 12.30 (s, 1H, -NH) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.7, 111.4, 113.6, 121.1, 123.5, 124.0, 125.4, 128.1, 131,2, 132.1, 137.4, 149.9, 156.8, 162.5, 167.8, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 284 (М+-103, 55), 253 (4), 238 (16), 222 (1), 211 (2), 182 (8), 154 (9), 146 (13), 119 (90), 92 (47), 63 (48), 53 (21), 30 (100)
Элементный анализ С18Н17N3О7
Рассчитано: % С=55,81; % H=4,42; % N=10.85
Найдено: % С=55,79; % H=4,44; % N=10,74
Пример 12
4-[2-(2-гидрокси-5-нитробензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 12)
К суспензии 1,00 г (4,50 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 4,50 г (38,50 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,58 г (5,70 ммоль) триэтиламина и раствор 0,77 г (38,50 ммоль) 2-гидрокси-5-нитробензоилхлорида, растворенного в 10 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (диоксан/Н2O) с получением 0,99 г (67%) 4-[2-(2-гидрокси-5-нитробензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого вещества кремового цвета.
Т.пл.: 239-241°С
ИК (ATR): ν 3315, 3079, 2626, 1695, 1651, 1631, 1584, 1373, 1334, 1218, 831, 756, 746 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.75 (m, 2 H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.28 (t, 1H, J=6,8 Гц, -СН2-СО-), 3.26 (m, 2H, -CH2-N-), 7.15 (m, 1H, ароматический), 7.18 (m, 1H, ароматический), 7.53 (m, 1H, ароматический), 7.65 (m, 1H, ароматический), 7.26 (m, 1H, ароматический), 8.45 (m, 1H, ароматический), 8.70 (m, J=5,4 Гц, -NH-CH2-), 8.76 (m, 1Н, ароматический), 12.09 (s, 2H, -ОН, -СООН), 12.90 (s, 1Н, -NH) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.7, 117.9, 119.8, 122.2, 123.5, 124.3, 127.2, 128.1, 128.5, 131.1, 137.3, 139.7, 162.0, 162.3, 167.8, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 369 (M+-18, 1), 352 (10), 335 (1), 311 (3), 296 (3), 284 (31), 253 (11), 237 (3), 209 (6), 166 (6), 137 (8), 119 (74), 92 (55), 63 (43), 42 (56), 41 (72), 30 (100)
Элементный анализ C18H17N3O7
Рассчитано: % С=55,81; % Н=4,42; % N=10,85
Найдено: % С=55.89; % Н=4.50; % N=10.80
Пример 13
4-[2-(2-гидрокси-4-метоксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 13)
К суспензии 1,00 г (4,50 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 4,50 г (38,50 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,58 г (5,70 ммоль) триэтиламина и раствор 0,71 г (38,5 ммоль) 2-гидрокси-4-метоксибензоилхлорида, растворенного в 10 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (ЕtOН/Н2O) с получением 0,54 г (38%) 4-[2-(2-гидрокси-4-метоксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого белого вещества.
Т.пл.: 201-203°С
ИК (ATR): ν 3306, 2939, 1711, 1643, 1622, 1582, 1524, 1508, 1438, 1383, 1244, 1208, 1178, 1144, 964, 830, 751, 671 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.76 (m, 2H, -СН2-СН 2-СН2-), 2.29 (t, 1H, J=7,3 Гц, -СН2-СО-), 3.29 (m, 2H, -CH2-N-), 3.78 (s 3H, -СН3), 6.48 (m, 1H, ароматический), 6.58 (m, 1H, ароматический), 7.17 (m, 1H, ароматический), 7.50 (m, 1H, ароматический), 7.71 (m, 1H, ароматический), 7.76 (m, 1H, ароматический), 8.45 (m, 1H, ароматический), 8.77 (t, J=5,4 Гц, -NH-СН2-), 12.05 (s, 2H, -OH, -NH), 12.22 (s, 1 H, -COOH) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.7, 55.4, 101.3, 106.7, 109.9, 121.5, 122.6, 122.9, 128.1, 129.9, 131.5, 138.1, 160.9, 163.8, 166.0, 168.2, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 372 (M+, 3), 353 (2), 269 (84), 228 (16), 222 (17), 182 (4), 151 (100), 120 (58), 119 (59), 92 (47), 65 (24), 52 (12), 30 (53)
Элементный анализ C19H20N2O6
Рассчитано: % С=61,28; % H=5,41; % N=7,52
Найдено: % С=60,89; % H=5,37; % N=7,40
Пример 14
4-[2-(2-гидрокси-5-метоксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 14)
К суспензии 1,00 г (4,50 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 4,50 г (38,50 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 0,58 г (5,70 ммоль) триэтиламина и раствор 0,71 г (38,5 ммоль) 2-гидрокси-5-метоксибензоилхлорида, растворенного в 10 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2О) с получением 0,791 г (56%) 4-[2-(2-гидрокси-5-метоксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого вещества кремового цвета.
Т.пл.: 191-193°С
ИК (ATR): ν 3330, 2877, 1702, 1593, 1523, 1494, 1473, 1449, 1419, 1356, 1328, 1306, 1266, 1205, 1188, 1174, 1047, 931, 792, 746, 687 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.76 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.28 (t, 1H, J=7,3 Гц, -CH2-CO-), 3.27 (m, 2H, -CH2-N-), 3.73 (s, 3H, -СН3), 6.91 (m, 1H, ароматический), 7.04 (m, 1H, ароматический), 7.18 (m, 1H, ароматический), 7.38 (m, 1H, ароматический), 7.50 (m, 1H, ароматический), 7.76 (m, 1H, ароматический), 8.46 (m, 1H, ароматический), 8.70 (t, J=5,4 Гц, -NH-CH2-), 11.10 (s, 1 H, -ОН), 12.03 (s, 1 H, -NH), 12.09 (s, 1H, -COOH) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.7, 55.4, 112.8, 118.1, 118.3, 120.5, 121.7, 123.1, 123.8, 128.0, 131.2, 137.7, 151.6, 151.9, 164.8, 168.0, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 372 (M+, 5), 353 (3), 269 (100), 254 (88), 198 (11), 150 (20), 120 (55), 119 (45), 92 (50), 79 (33), 65 (29), 52 (21), 30 (51)
Элементный анализ C19H20N2O6
Рассчитано: % С=61,28; % H=5,41; % N=7,52
Найдено: % С=61,21; % H=5,40; % N=7,47
Пример 15
4-[2-(4-нитробензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 15)
К суспензии 2,14 г (9,63 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 40 мл сухого метиленхлорида добавляют 1,83 г (16,87 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,24 г (12,33 ммоль) триэтиламина и суспензию 1,53 г (8,22 ммоль) 4-нитробензоилхлорида в 10 мл сухого этилацетата. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (диоксан/Н2О) с получением 1,33 г (43%) 4-[2-(4-нитробензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого вещества кремового цвета.
Т.пл.: 206-208°С
ИК (ATR): ν 3282, 3090, 1731, 1655, 1626, 1597, 1558, 1517, 1444, 1417, 1399, 1350, 1326, 1297, 1258, 1227, 1166, 854, 836, 766, 715 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.77 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.29 (t, 1H, J=7,3 Гц, -СН2-СО-), 3.31 (m, 2H, -CH2-N-), 7.24 (m, 1H, ароматический), 7.58 (m, 1H, ароматический), 7.85 (m, 1H, ароматический), 8.14 (d, 2H, J=8.7 Гц, ароматический), 8.42 (d, 2H, J=8,7 Гц, ароматический), 8.58 (m, 1H, ароматический), 8.46 (m, 1H, ароматический), 8.91 (t, J=5,4 Гц, -NH-CH2-), 12.06 (s, 1H, -NH), 12.72 (s, 1H, -COOH)
млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.1, 31.0, 38.9, 120.5, 120.8, 123.4, 124.1, 128.2, 128.5, 132.2, 138.8, 140.1, 149.4, 162.7, 168.5, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 371 (M+, 5), 353 (3), 334 (1), 269 (22), 268 (29), 253 (6), 238 (59), 224 (9), 150 (23), 146 (23), 120 (50), 119 (100), 104 (39), 92 (69), 76 (48), 64 (29), 50 (27), 30 (50)
Элементный анализ C18H17N3O6
Рассчитано: % С=58,22; % Н=4,61; % N=11,32
Найдено: % С=58,15; % Н=4,65; % N=11,10
Пример 16
4-[2-(4-метоксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 16)
К суспензии 2,14 г (9,63 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 8,90 г (82,39 ммоль) триметилсилилхлорида и реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,25 г (12,36 ммоль) триэтиламина и раствор 1,40 г (8,24 ммоль) 4-метоксибензоилхлорида, растворенного в 10 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 2,32 г (79%) 4-[2-(4-метоксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого вещества кремового цвета.
Т.пл.: 172-174°С
ИК (ATR): ν 3320, 2960, 2837, 1720, 1630, 1592, 1532, 1509, 1446, 1301, 1254, 1167, 1096, 1025, 841, 748 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.79 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.31 (t, 1H, J=7,4 Гц, -CH2-CO-), 3.33 (m, 2H, -CH2-N-), 3.83 (s, 3H, -CH3), 7.11 (d, 2H, J=8,8 Гц, ароматический), 7.16 (m, 1H, ароматический), 7.53 (m, 1H, ароматический), 7,82 (m, 1H, ароматический), 7.89 (d, 2H, J=8,8 Гц, ароматический), 8.65 (m, 1H, ароматический), 8.87 (t, J=5,4 Гц, -NН-СН2-), 12.08 (s, 1H, -NH), 12.49 (s, 1H, -COOH) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.7, 55.5, 114.2, 120.0, 120.1, 122.4, 126.7, 128.2, 128.8, 132.1, 139.7, 162.2, 163.9, 168.7, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 356 (M+, 4), 338 (9), 319 (3), 253 (19), 252 (18), 238 (5), 209 (5), 135 (100), 119 (35), 107 (7), 92 (22), 74 (28), 64 (11), 50 (7), 41 (10)
Элементный анализ C19H20N2O5
Рассчитано: % С=64,04; % H=5,66; % N=7,86
Найдено: % С=63,97; % H=5,63; % N=7,79
Пример 17
4-[2-(4-хлорбензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 17)
К суспензии 2,00 г (9,01 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 8,36 г (77,00 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,17 г (11,55 ммоль) триэтиламина и раствор 1,35 г (7,70 ммоль) 4-метоксибензоилхлорида, растворенного в 10 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной НСl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/H2O) с получением 1,79 г (65%) 4-[2-(4-хлорбензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого вещества кремового цвета.
Т.пл.: 182-184°С
ИК (ATR): ν 3069, 2939, 1692, 1672, 1628, 1592, 1525, 1491, 1444, 1332, 1310, 1284, 1259, 1222, 1180, 1110, 1096, 1011, 902, 845, 756, 745 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.79 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.31 (t, 1H, J=7,4 Гц, -СН2-СО-), 3.32 (m, 2H, -СН2-N-), 7.18 (m, 1H, ароматический), 7.54 (m, 1H, ароматический), 7.64 (d, 2H, J=8,5 Гц, ароматический), 7.83 (m, 1H, ароматический), 7.92 (d, 2H, J=8,5 Гц, ароматический), 8.61 (m, 1H, ароматический), 8.89 (t, J=5,4 Гц, -NН-СН2-), 12.07 (s, 1H, -NH), 12.61 (s, 1H, -COOH) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.7, 55.5, 114.2, 120.3, 120.4, 122.9, 128.2, 128.8, 129.0, 132.2, 133.3, 136.9, 139.3, 163.3, 168.6, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 360 (M+, 11), 342 (4), 323 (1), 258 (30), 238 (15), 213 (6), 187 (8), 162 (6), 141 (33), 139 (100), 119 (38), 111 (56), 92 (25), 75 (20), 65 (11), 41 (11)
Элементный анализ C18H17ClN2O4
Рассчитано: % С=59,92; % H=4,75; % N=7,76
Найдено: % С=59,71; % H=4,77; % N=7,72
Пример 18
4-[2-(4-хлор-2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 18)
К суспензии 2,00 г (9,00 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 40 мл сухого метиленхлорида добавляют 8,36 г (77,00 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,17 г (11,50 ммоль) триэтиламина и раствор 1,45 г (7,70 ммоль) 4-хлор-2-гидроксибензоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2O) с получением 1,35 г (47%) 4-[2-(4-хлор-2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 205-206°С
ИК (ATR): ν 3319, 3067, 2936, 1688, 1583, 1525, 1494, 1447, 1408, 1350, 1330, 1302, 1261, 1214, 919, 796, 755 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.75 (m, 2Н, -СН2-СН 2-СH2-), 2.28 (t, 2H, J=7,3 Гц, -СН2-СО-), 3.26 (m, 2H, -CH2-N-), 7.01 (m, 2Н, ароматический), 7.18 (m, 1H, ароматический), 7.50 (m, 1Н, ароматический), 7.65 (m, 1H, ароматический), 7.87 (m, 1Н, ароматический), 8.46 (m, 1H, ароматический), 8.69 (t, 1H, J=5,12 Гц, -NH-CH2-), 12.07 (Sуширенный, 3Н, -ОН, -СООН, -NH-Ph) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.3, 31.1, 38.6, 116.6, 117.8, 119.3, 121.9, 123.2, 123.9, 128.0, 131.1, 131.7, 137.3, 137.6, 158.4, 163.9, 167.9, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 376 (M+, 2), 273 (65), 238 (17), 222 (7), 155 (25), 146 (5), 120 (39), 119 (100), 99 (13), 92 (43), 63 (27), 30 (45)
Элементный анализ C18H17ClN2O5
Рассчитано: % С=57,38; % Н=4,59; % N=7,43
Найдено: % С=57,19; % Н=4,57; % N=7,41
Пример 19
4-[2-(5-хлор-2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 19)
К суспензии 2,30 г (10,4 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 40 мл сухого метиленхлорида добавляют 9,56 г (88,50 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,34 г (13,30 ммоль) триэтиламина и раствор 1,67 г (8,85 ммоль) 5-хлор-2-гидроксибензоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Продукт реакции очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2O) с получением 0,95 г (29%) 4-[2-(5-хлор-2-гидроксибензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде белого твердого вещества.
Т.пл.: 222-223°С
ИК (ATR): ν 3315, 2958, 1693, 1657, 1594, 1524, 1479, 1447, 1360, 1325, 1303, 1272, 1213, 914, 812, 749 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.75 (m, 2Н, -СН2-СН 2-СH2-), 2.28 (t, 2H, J=7,3 Гц, -СН2-СО-), 3.26 (m, 2H, -CH2-N-), 7.01 (m, 2Н, ароматический), 7.18 (m, 1Н, ароматический), 7.50 (m, 1Н, ароматический), 7.50 (m, 1H, ароматический), 7.63 (m, 1Н, ароматический), 7.83 (m, 1Н, ароматический), 8.43 (m, 1Н, ароматический), 8.67 (t, 1H, J=5,5 Гц, -NH-CH2-), 11.99 (Sуширенный, 3Н, -ОН, -СООН, -NH-Ph) млн-1
13С ЯМР (ДМСО, 200 МГц): δ 24.2, 31.1, 38.6, 118.9, 120.5, 122,3, 122.8, 123.3, 124.3, 128.0, 129.4, 131.6, 132.9, 137.4, 155.8, 163.1, 167.8, 174.2 млн-1
MC m/z (%): 376 (M+, 3), 273 (100), 238 (22), 155 (18), 120 (40), 119 (80), 99 (13), 92 (46), 63 (26), 30 (35)
Элементный анализ C18H17ClN2O5
Рассчитано: % С=57,38; % Н=4,59; % N=7,43
Найдено: % С=57,27; % Н=4,58; % N=7,41
Пример 20
4-[2-(2-хлорбензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 20)
К суспензии 2,00 г (9,01 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 8,36 г (77,00 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,17 г (11,55 ммоль) триэтиламина и раствор 1,35 г (7,70 ммоль) 2-хлорбензоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часов при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органическую фазу высушивают безводным MgSO4 и удаляют при низком давлении. Неочищенный продукт промывают несколько раз эфиром и, наконец, очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2О) с получением 1,27 г (36%) 4-[2-(2-хлорбензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде коричневого твердого вещества.
Т.пл.: 110-112°С
ИК (ATR): ν 3308, 1730, 1659, 1627, 1598, 1560, 1513, 1445, 1433, 1310, 1287, 1255, 1168 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.73 (m, 2H, -СН2-СН 2-СН2-), 2.26 (t, 2H, J=7,0 Гц, -СН2-СО-), 3.24 (m, 2H, -CH2-N-), 7.21 (m, 1H, ароматический), 7.51 (m, 4H, ароматический), 7.65 (m, 1H, ароматический), 7.79 (m, 1H, ароматический), 8.53 (m, 1H, ароматический), 8.82 (Sуширенный, 1H, -NH-CH2-), 11.89 (s, 1H, -COOH), 12.05 (s, 1H, -NH) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 100 МГц): δ 24.1, 31.1, 38.6, 120.4, 121.1, 123.3, 127.6, 128.2, 128.9, 129.8, 130.2, 131.7, 132.0, 136.3, 138.5, 164.3, 168.2, 174.1 млн-1
MC m/z (%): 360 (M+, 1), 342 (7), 289 (9), 269 (8), 257 (50), 213 (57), 178 (16), 139 (97) 120 (22), 119 (100), 111 (60), 85 (67), 75 (81), 63 (32), 50 (63), 30 (76)
Элементный анализ C18H17ClN2O4
Рассчитано: % С=59,92; % H=4,75; % N=7,76
Найдено: % С=59,95; % H=4,77; % N=7,68
Пример 21
4-[2-(2-бромбензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 21)
К суспензии 2,00 г (9,01 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 8,36 г (77,00 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,17 г (11,55 ммоль) триэтиламина и раствор 1,68 г (7,70 ммоль) 2-бромбензоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной НСl, полученную в результате твердую фазу отфильтровывают и промывают несколько раз водой и эфиром. Наконец, очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2O) с получением 1,95 г (63%) 4-[2-(2-бромбензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого вещества кремового цвета.
Т.пл.: 117-118°С
ИК (ATR): ν 3280, 3176, 1731, 1654, 1628, 1598, 1557, 1510, 1444, 1428, 1312, 1286, 1251, 1166, 743, 664 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.74 (m, 2H, -CH2-CH 2-CH2-), 2.26 (t, 2H, J=7,3 Гц, -СН2-СО-), 3.23 (m, 2H, -CH2-N-), 7.21 (m, 1H, ароматический), 7.45 (m, 1H, ароматический), 7.53 (m, 2H, ароматический), 7.61 (m, 1H, ароматический), 8.53 (m, 1H, ароматический), 8.81 (t, 1H, J=5,28 Гц, -NH-СН2-), 11.84 (s, 1H, -COOH), 12.03 (s, 1H, -NH) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 100 МГц): δ 24.1, 31.1, 38.6, 118.6, 120.4, 121.1, 123.3, 128.1, 128.2, 128.7, 131.7, 132.0, 133.2, 138.5, 138.6, 165.2, 168.1, 174.2 млн-1
MC C18H17N2O4 79Br m/z (%): 404 (M+, 1), 303 (32), 257 (20), 238 (20), 221 (22), 185 (100), 178 (12), 157 (31) 143 (26), 119 (60), 90 (31), 76 (41), 50 (39)
Элементный анализ C18H17BrN2O4
Рассчитано: % С=53,35; % H=4,23; % N=6,91
Найдено: % С=53,32; % H=4,26; % N=6,89
Пример 22
4-[2-(3-хлорбензоиламино)бензоиламино]бутановая кислота (соединение 22)
К суспензии 2,00 г (9,01 ммоль) 4-(2-аминобензоиламино)бутановой кислоты в 20 мл сухого метиленхлорида добавляют 8,36 г (77,00 ммоль) триметилсилилхлорида и оставляют реакционную смесь кипеть с обратным холодильником в течение 5 часов. Затем колбу помещают на ледяную баню и добавляют 1,17 г (11,55 ммоль) триэтиламина и раствор 1,35 г (7,70 ммоль) 3-хлорбензоилхлорида, растворенного в 5 мл сухого метиленхлорида. Оставляют реакционную смесь перемешиваться в течение 30 минут на ледяной бане и 24 часа при комнатной температуре. Растворитель удаляют при низком давлении, добавляют 30 мл 10%-ного NaOH к неочищенному продукту и продолжают перемешивание смеси до тех пор, пока масло полностью не исчезнет. Немедленно подкисляют концентрированной HCl и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органическую фазу высушивают безводным MgSO4 и удаляют при низком давлении. Неочищенный продукт промывают несколько раз эфиром и, наконец, очищают перекристаллизацией (EtOH/Н2O) с получением 0,83 г (30%) 4-[2-(3-хлорбензоиламино)бензоиламино]бутановой кислоты в виде твердого вещества кремового цвета.
Т.пл.: 165-166°С
ИК (ATR): ν 3307, 3159, 1741, 1721, 1669, 1626, 1589, 1523, 1447, 1419, 1326, 1308, 1256, 1180, 759 см-1
1H ЯМР (ДМСО, 400 МГц): δ 1.78 (m, 2Н, -СН2-СН 2-СН2-), 2.30 (t, 2H, J=7,0 Гц, -CH2-CO-), 3.30 (m, 2H, -CH2-N-), 7.21 (m, 1H, ароматический), 7.56 (m, 1H, ароматический), 7.65 (m, 2Н, ароматический), 7.71 (m, 1H, ароматический), 7.84 (m, 2Н, ароматический), 7.91 (m, 1H, ароматический), 8.57 (m, 1Н, ароматический), 8.88 (t, 1H, J=5,3 Гц, -NH-CH2-), 12.05 (s, 1H, -COOH), 12.57 (s, 1H, -NH) млн-1
13C ЯМР (ДМСО, 100 МГц): δ 24.1, 31.1, 38.6, 120.4, 121.1, 123.3, 127.6, 128.2, 128.9, 129.8, 130.2, 131.7, 132.0, 136.3, 138.5, 164.3, 168.2, 174.1 млн-1
MC m/z (%): 360 (M+, 8), 323 (5), 258 (38), 238 (41), 213 (19), 139 (100), 120 (64), 119 (95), 111 (96), 92 (55), 75 (40), 65 (32), 50 (28), 39 (39)
Элементный анализ C18H17ClN2O4
Рассчитано: % С=59,92; % Н=4,75, % N=7,76
Найдено: % С=59,87; % Н=4,78; % N=7,76
Активность всех соединений из примеров, описанных выше, исследовали на животных в соответствии со следующей экспериментальной моделью.
1. Цель и обоснование
Проанализировать абсорбцию тестируемого продукта при введении крысам внутритолстокишечным путем в присутствии и в отсутствие адъювантов. Концентрацию в плазме измеряют с помощью количественного анализа способности к ингибированию фактора Ха. Используют крыс, поскольку они являются одним из видов, обычно используемых в тестах такого типа.
2. Описание способа тестирования
2.1 Экспериментальная система
- Описание: самцы крыс Wistar, приобретенные от аккредитованного поставщика
- Масса: 200-250 г
- Возраст: 9-11 недель
2.2 Способ введения
Одно внутритолстокишечное введение
2.3 Уровни дозировок и объем введения
- Уровень дозировки: 30 мг/кг тестируемого продукта + 30 мг/кг адъюванта
- Объем введения: 1 мл/кг
2.4 Носитель
25% (об./об.) пропиленгликоля в бидистиллированной воде. После растворения тестируемого продукта вместе с адъювантом, если это применимо, рН подводят приблизительно до 7,4 с помощью NaOH.
2.5 План эксперимента
Животных содержат в голодном состоянии со свободным доступом к воде в течение приблизительно 18 ч.
Животных случайным образом распределяют в разные экспериментальные группы, с одним оставленным в качестве резерва животным на группу.
В день тестирования после анестезии кетамином осуществляют обработки посредством введения внутритолстокишечным путем. Введение осуществляют с помощью катетера приблизительно 8 см, присоединенного к шприцу на 1 мл. Катетер целиком вводят в толстую кишку через анус и тестируемый продукт медленно вводят в толстую кишку.
После введения тестируемого продукта в моменты времени, установленные графиком, с помощью внутрисердечной пункции под анестезией кетамином отбирают образец цитратной крови (3,8% в соотношении 1:9).
Центрифугирование крови: 3000 об/мин, 10 минут, 4°С. Плазму замораживают (-20±5°С) до момента определения анти-фактор Ха активности.
В исследование включают контрольную группу, которая не подвергается обработке, просто в ней от каждого животного в тех же условиях, что и для обрабатываемой группы, отбирают один образец крови, который считается базовым значением анти-Ха активности.
Анти-Ха активность оценивают количественно хромогенным способом (набор для определения анти-FXa активности).
3. Анализ результатов
Для каждого параметра рассчитывают среднее значение, среднее квадратичное отклонение (СКО) и среднеквадратическую ошибку среднего значения для каждой экспериментальной группы. Признанные адекватными значения, полученные для разных экспериментальных групп, сравнивают с помощью статистического анализа.
1. Диамид аминокислот по положению, не являющемуся α-положением, формулы (1)
где R1 выбран из группы, состоящей из функциональных групп: галоген, NO2, ОН, ОСН3, присутствующих либо поодиночке, либо в сочетании, и R2 представляет собой H.
2. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой следующую структуру:
3. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой следующую структуру:
4. Соединение по п.1, отличающееся тем, что оно представляет собой следующую структуру:
5. Фармацевтическая композиция, усиливающая абсорбцию гепариновых олигосахаридов, отличающаяся тем, что она содержит гепариновые олигосахариды и по меньшей мере одно соединение формулы (1) по любому из пп.1-4.
6. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно соединение структуры
и Бемипарин.
7. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно соединение структуры
и Бемипарин.
8. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что она содержит по меньшей мере одно соединение структуры
и Бемипарин.
9. Применение соединения по любому из пп.1-4 в качестве адъюванта для введения гепариновых олигосахаридов.
