Способ прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего

Авторы патента:

Богданова Екатерина Александровна (RU)

Грачёв Сергей Витальевич (RU)

Алёшкин Владимир Андрианович (RU)

Афанасьев Станислав Степанович (RU)

Рубальский Олег Васильевич (RU)

Рубальский Евгений Олегович (RU)

Несвижский Юрий Владимирович (RU)

Воропаева Елена Александровна (RU)

Герасимова Елена Владимировна (RU)

C12Q1/18 - испытания материала на антимикробную активность

Владельцы патента RU 2377311:

Федеральное государственное учреждение науки "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" (ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора) (RU)
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова Росздрава) (RU)
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО АГМА Росздрава) (RU)

Изобретение относится к медицине, экологии и фармакологии и может быть использовано для выявления влияния внутренней среды организма или факторов внешней среды на микробиоценоз биотопов организма млекопитающего. В культуру ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования, содержащей бактерии родов Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterococcus и Escherichia coli, взятых в соотношении 10¹¹:10¹⁰:10¹⁰:10¹⁰ КОЕ/л, добавляют жидкий образец внутренней среды организма или внешней среды в количестве 1-10 об.%. Затем смешивают культуру ассоциации микроорганизмов с жидким образцом и инкубируют полученную смесь при 37°С в течение суток. После чего оценивают соотношение компонентов ассоциации микроорганизмов и прогнозируют: отсутствие дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды соответственно при отсутствии снижения не менее, чем в 100 раз концентрации одного из компонентов ассоциации микроорганизмов. Дестабилизация микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды соответственно наблюдается при снижении не менее, чем в 100 раз концентрации одного из компонентов ассоциации микроорганизмов. Это обеспечивает универсальность и информативность прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего.

Известна методика бактериологического исследования содержимого толстого кишечника, заключающаяся в посеве исследуемого материала в серийных разведениях на селективные питательные среды. После инкубирования посевов при оптимальных условиях культивирования подсчитывают количество микроорганизмов каждого вида (колониеобразующие единицы - КОЕ) и пересчитывают на 1 г исследуемого материала. На основании полученных данных в сравнении с нормативными значениями основных представителей нормальной микрофлоры делается заключение о состоянии микрофлоры пациента и диагностируется дисбактериоз кишечника (RU, Леванова Л.А., Афанасьев С.С., Алешкин В.А., Сурикова Е.В. Микробиоценоз кишечника, бактериологическая диагностика и методы коррекции дисбактериоза у жителей Кемеровской области. Методические рекомендации. - Кемерово, 2002. - 31 с).

Основным недостатком известной методики является то, что она непригодна для универсального прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего, так как основана на исследовании содержимого толстого кишечника человека, предназначена только для диагностики дисбактериоза человека и сложна.

Известен способ определения общей токсичности твердой, жидкой и газообразной сред in vitro, заключающийся в оценке роста индикаторных тест-культур микроорганизмов рода Bacillus и Sarcina lutea B-110, согласно которому из рода Bacillus выбирают ряд известных по чувствительности к предположительно содержащемся в исследуемой среде токсикантам микроорганизмов. Общую токсичность среды определяют в виде интегрального критерия, слагаемого из результирующих показателей роста каждой тест-культуры, каждый из которых ранжирован по одному из, как правило, трех критериев токсичности: нормальный рост, угнетенный рост, отсутствие роста (RU, патент 2202619 С2, C12Q 1/18, 1/06, 2003.04.20).

Основным недостатком известного способа является то, что он не является универсальным, так как непригоден для прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего в связи с использованием тест-культур, неадекватных для моделирования ассоциаций микрофлоры организма млекопитающего, и неинформативного для прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего показателя общей токсичности среды, определяемого в виде интегрального критерия, слагаемого из результирующих показателей роста каждой тест-культуры.

В основу изобретения положена задача обеспечения универсальности и информативности прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды на основе модели in vitro.

Задача решена тем, что в культуру ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования, содержащей бактерии родов Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterococcus и Escherichia coli, взятых в соотношении 10¹¹:10¹⁰:10¹⁰:10¹⁰ КОЕ/л, добавляют жидкий образец внутренней среды организма или внешней среды в количестве 1-10 об.%, смешивают культуру ассоциации микроорганизмов с жидким образцом, затем инкубируют полученную смесь при 37°С в течение суток, оценивают соотношение компонентов ассоциации микроорганизмов и прогнозируют:

отсутствие дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды соответственно при отсутствии снижения не менее чем в 100 раз концентрации одного из компонентов ассоциации микроорганизмов;

дестабилизацию микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды, соответственно при снижении не менее чем в 100 раз концентрации одного из компонентов ассоциации микроорганизмов.

В результате впервые проведенных нами исследований были выявлены наиболее адекватные виды бактерий нормофлоры и было установлено наиболее приемлемое (информативное, чувствительное, оптимальное, показательное и универсальное для различных образцов внутренней среды организма или внешней среды) соотношение данных видов бактерий, необходимые для разработки заявляемого способа прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего. Также впервые определено объемное соотношение культуры ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования и жидкого образца внутренней среды организма или внешней среды, и установлен критерий прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды.

Заявляемый способ прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего является новым и в литературе не описан.

Техническим результатом заявляемого изобретения является обеспечение универсальности и информативности прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды на основе модели in vitro за счет установления адекватных видов бактерий нормофлоры, наиболее приемлемого соотношения данных видов бактерий, объемного соотношения культуры ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования и жидкого образца внутренней среды организма или внешней среды и критерия прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды.

Сущность изобретения поясняется на следующих примерах, показывающих универсальность и информативность прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды при использовании заявляемого изобретения.

Пример 1. После добавления в культуру ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования, содержащей бактерии родов Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterococcus и Escherichia coli, взятых в соотношении 10¹¹:10¹⁰:10¹⁰:10¹⁰ КОЕ/л, жидкого образца внутренней среды организма - цитратной плазмы крови пациента - в количестве 1 об.%, смешивали культуру ассоциации микроорганизмов с жидким образцом, затем инкубировали полученную смесь при 37°С в течение суток, оценивали соотношение компонентов ассоциации микроорганизмов. Получили соотношение культуры ассоциации микроорганизмов 10¹⁰:10⁵:10⁴:10⁵ КОЕ/л. На основании этого была спрогнозирована возможность дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма - крови пациента. Для подтверждения данного прогноза проводилось бактериологическое исследование фекалий пациента, которое подтвердило развитие микробиологических признаков дисбактериоза кишечника пациента.

Пример 2. После добавления в культуру ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования, содержащей бактерии родов Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterococcus и Escherichia coli, взятых в соотношении 10¹¹:10¹⁰:10¹⁰:10¹⁰ КОЕ/л, жидкого образца внутренней среды организма - секрета слизистой полости рта пациента - в количестве 2 об.%, смешивали культуру ассоциации микроорганизмов с жидким образцом, затем инкубировали полученную смесь при 37°С в течение суток, оценивали соотношение компонентов ассоциации микроорганизмов. Получили соотношение культуры ассоциации микроорганизмов 10¹¹:10¹⁰:10⁹:10⁹ КОЕ/л. На основании этого было спрогнозировано отсутствие возможности дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма - секрета слизистой полости рта пациента. Для подтверждения данного прогноза проводилось бактериологическое исследование секрета слизистой полости рта пациента, которое установило отсутствие дисбиоза полости рта пациента.

Пример 3. После добавления в культуру ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования, содержащей бактерии родов Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterococcus и Escherichia coli, взятых в соотношении 10¹¹:10¹⁰:10¹⁰:10¹⁰ КОЕ/л, жидкого образца внешней среды - водного экстракта почвы - в количестве 5 об.%, смешивали культуру ассоциации микроорганизмов с жидким образцом, затем инкубировали полученную смесь при 37°С в течение суток, оценивали соотношение компонентов ассоциации микроорганизмов. Получили соотношение культуры ассоциации микроорганизмов 10⁸:10⁸:10⁸:10⁸ КОЕ/л. На основании этого была спрогнозирована возможность дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внешней среды - водного экстракта почвы. Для подтверждения данного прогноза водный экстракт почвы вводили перорально инбредным крысам Wistar в составе воды для питья в течение 1 суток с последующим исследованием нормальной микрофлоры фекалий животных, которое подтвердило развитие дисбактериоза кишечника у инбредных крыс Wistar под влиянием водного экстракта почвы.

Пример 4. После добавления в культуру ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования, содержащей бактерии родов Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterococcus и Escherichia coli, взятых в соотношении 10¹¹:10¹⁰:10¹⁰:10¹⁰ КОЕ/л, жидкого образца внешней среды - образец минеральной воды - в количестве 10 об.%, смешивали культуру ассоциации микроорганизмов с жидким образцом, затем инкубировали полученную смесь при 37°С в течение суток, оценивали соотношение компонентов ассоциации микроорганизмов. Получили соотношение культуры ассоциации микроорганизмов 10¹¹:10⁸:10⁸:10⁸ КОЕ/л. На основании этого была спрогнозирована возможность дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внешней среды - водопроводной воды. Для подтверждения данного прогноза образец минеральной воды вводили перорально в течение 1 суток инбредным крысам Wistar с последующим исследованием нормальной микрофлоры фекалий животных, которое подтвердило развитие дисбактериоза кишечника у инбредных крыс Wistar под влиянием образца водопроводной воды.

Способ прогнозирования дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды, характеризующийся тем, что в культуру ассоциации микроорганизмов в жидкой среде культивирования, содержащей бактерии родов Bifidobacterium, Lactobacterium, Enterococcus и Escherichia coli, взятых в соотношении 10¹¹:10¹⁰:10¹⁰:10¹⁰ КОЕ/л, добавляют жидкий образец внутренней среды организма или внешней среды в количестве 1-10 об.%, смешивают культуру ассоциации микроорганизмов с жидким образцом, затем инкубируют полученную смесь при 37°С в течение суток, оценивают соотношение компонентов ассоциации микроорганизмов и прогнозируют:
отсутствие дестабилизации микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды, соответственно, при отсутствии снижения не менее в 100 раз концентрации одного из компонентов ассоциации микроорганизмов;
дестабилизацию микробиоценоза организма млекопитающего под влиянием внутренней среды организма или внешней среды, соответственно, при снижении не менее чем в 100 раз концентрации одного из компонентов ассоциации микроорганизмов.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и иммунологии и касается отбора высокоактивных моноклональных антител (МКА), взаимодействующих с эпитопами, экспонированными на поверхности микробных клеток возбудителя мелиоидоза.

Способ оценки антибактериальной активности крови пациента in vitro при лечении инфекционного эндокардита // 2293327

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии. .

Способ оценки специфической активности иммунных препаратов // 2291425

Изобретение относится к области медицины, медицинской токсикологии, микробиологии, биологии при испытании различных иммунных препаратов (например, иммуноглобулинов).

Способ оценки антибактериального действия озонированного физиологического раствора (офр) // 2289812

Изобретение относится к области медицины, а именно к исследованию антибактериального действия озонированного физиологического раствора (ОФР), и может быть использовано в гнойной хирургии и комбустиологии.

Способ биоиндикации загрязнения морской воды тяжелыми металлами // 2264465

Изобретение относится к биотехнологии. .

Средство для повышения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам // 2246541

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к средствам для повышения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам. .

Способ определения эффективности антибиотика для лечения воспалительных заболеваний микробной этиологии // 2231554

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для выбора антибиотика, наиболее эффективного для лечения воспалительного заболевания микробной этиологии.

Способ определения общей токсичности твердой, жидкой и газообразной сред // 2202619

Изобретение относится к аналитическому определению токсичности. .

Тест-система для определения антибактериальных субстанций в моче // 2164946

Изобретение относится к медицине. .

Способ определения лекарственной чувствительности микобактерий // 2157849

Изобретение относится к микробиологии. .

Способ определения бактериостатического, бактерицидного и стимулирующего действия антибиотика на микроорганизмы // 2410437

Изобретение относится к медицине, микробиологии, а именно к бактериологии и относится к способам определения действия антибиотика на микроорганизмы

Домен связывания бактериальной атр-синтазы // 2418001

Способ оценки антибактериального действия озонированного физиологического раствора // 2425888

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в клинической микробиологии

Способ качественной оценки биокоррозионных поражений тонкостенных герметичных оболочек из алюминиево-магниевых сплавов при эксплуатации космических аппаратов и суспензия споровых материалов для его реализации // 2486250

Изобретение относится к технической микробиологии и биокоррозионным испытаниям, а именно к способам определения подверженности алюминиево-магниевых сплавов, применяемых в авиа-космической технике, к воздействиям технофильных штаммов микроорганизмов, выделенных в реальных эксплуатационных условиях с элементов конструкций Российского сегмента (PC) Международной космической станции (МКС) и депонированных во Всероссийскую коллекцию микроорганизмов (ВКМ)

Способ определения бактерицидных свойств сыворотки крови // 2489489

Изобретение относится к области биомедицинских измерительных технологий

Применение индол-3-ил-глиоксиламидов для подавления хламидийной инфекции // 2493259

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой новое применение индол-3-ил глиоксиламидов в качестве специфических ингибиторов протеазы CPAF для подавления хламидийной инфекции. Изобретение позволяет достичь эффекта подавления хламидийной инфекции без применения антибиотиков и других веществ, снижающих жизнеспособность бактерий, использование которых ведет к развитию устойчивости.2 н.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 18 пр.

Способ определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам // 2505813

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к средствам для определения чувствительности различных микроорганизмов, в том числе бактерий и грибов, к антимикробным веществам. Для определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным веществам осуществляют забор биологического материала, инкубацию содержащихся в нем микроорганизмов на питательной среде, введение в питательную среду исследуемого антимикробного вещества с последующей оценкой результата. Для культивирования микроорганизмов используют плотную богатую питательную среду. Исследуемое антимикробное вещество вводят в питательную среду до начала культивирования микроорганизмов в концентрации, близкой к максимально достижимой в месте забора биологического материала. Оценку чувствительности микроорганизмов к антимикробному веществу осуществляют после появления видимого роста микроорганизмов в контрольном посеве. К питательной среде могут быть добавлены витамины, и/или аминокислоты, и/или пищевые добавки. Использование способа позволяет повысить точность определения чувствительности микроорганизмов к антимикробному веществу. 11 з.п. ф-лы, 6 пр.

Способ определения интегральной функциональной активности компонентов мембраноатакующего комплекса комплемента человека // 2542397

Изобретение относится к области медицинской иммунологии и предназначено для определения интегральной функциональной активности компонентов мембраноатакующего комплекса комплемента человека по его действию на инфузории. В измерительные ячейки прибора для автоматизированного подсчета числа живых инфузорий вносят суспензию клеток Tetrahymena pyriformis, реагент R5 и испытуемый образец, содержащий компоненты мембраноатакующего комплекса с последующим определением числа живых клеток в каждую минуту. Совпадение динамики изменения числа живых клеток во времени для испытуемого образца и контрольного, представляющего пул 10 сывороток здоровых доноров, предполагает равенство активностей компонентов мембраноатакующего комплекса в этих образцах. Изобретение обеспечивает эффективный способ расчета активности комплемента, пригодный при диагностике ряда заболеваний. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.

Способ определения интегральной функциональной активности компонента с1 комплемента человека // 2542399

Изобретение относится к области медицинской иммунологии и предназначено для определения интегральной функциональной активности компонента С1 комплемента человека по его действию на инфузории. В измерительные ячейки прибора для автоматизированного подсчета числа живых инфузорий вносят суспензию клеток Tetrahymena pyriformis, реагент R1 и испытуемый образец, содержащий компонент С1 комплемента с последующим определением числа живых клеток в каждую минуту. Совпадение динамики изменения числа живых клеток во времени для испытуемого образца и контрольного, представляющего пул 10 сывороток здоровых доноров, предполагает равенство активностей компонента С1 комплемента в этих образцах. Изобретение обеспечивает эффективный способ расчета активности комплемента, пригодный при диагностике ряда заболеваний. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.

Способ определения функциональной активности фактора d комплемента человека // 2542407

Изобретение относится к области медицинской иммунологии и предназначено для определения функциональной активности фактора D комплемента человека по его действию на инфузории в бескальциевой среде, содержащей ионы магния. В измерительные ячейки прибора для автоматизированного подсчета числа живых инфузорий вносят суспензию клеток Tetrahymena pyriformis, реагент RD, представляющий собой пул не менее 10 сывороток здоровых доноров, лишенный фактора D с сохранением активностей остальных компонентов и факторов комплемента в результате хроматографической сорбции фактора D на колонке с CM-сефадексом C-50, и испытуемый образец, содержащий определяемый фактор D, с последующим определением числа живых клеток в каждую минуту. Совпадение динамики изменения числа живых клеток во времени для испытуемого образца и контрольного, представляющего пул 10 сывороток здоровых доноров, предполагает равенство активностей фактора D комплемента в этих образцах. Изобретение обеспечивает эффективный способ расчета функциональной активности комплемента, пригодный при диагностике ряда заболеваний. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.