Ингибиторы mif

Описывается соединение формулы 1

где R₁ означает незамещенный или замещенный (С₃-С₈)циклоалкил(С₁-С₄)алкил, фенил(С₁-С₄)алкил, (С₃-С₈)циклоалкил, фенил, нафтил, фенил, конденсированный с 18-(краун)-6, где заместители включают фенил, галоген, гидрокси, аминосульфонилокси, (С₁-С₄)алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси, галоген(С₁-С₄)алкил или галоген(С₁-С₄)алкокси, R₂ означает водород, гидрокси, аминосульфонилокси, (С₁-С₄)алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси или галоген(С₁-С₄)алкокси. Описывается также применение соединения для получения лекарственного средства и фармацевтическая композиция. Представленные соединения обладают ингибирующим действием в отношении фактора миграции макрофагов (MIF). 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 табл.

 

Настоящее изобретение относится к фармацевтически активным соединениям, фактору-ингибитору миграции макрофагов (фактор MIF), например ингибиторам таутомеразной активности MIF человека, таким как 3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, замещенные по атому азота следующими незамещенными или замещенными группами: С₃-С₈циклоалкил, С₃-С₈циклоалкил(С₁-С₄)алкил, С₆-С₁₈арил или С₆-С₁₈арил(С₁-С₄)алкил.

Фактор MIF является цитокином с широким спектром клеточной и биологической активности (обзоры см. в статьях Calandra и др., Nat. Rev. Immunol. 3:791-800 (2003); Orita и др., Curr. Pharm. Design 8:1297-1317 (2002); Nishihira, J Interferon Cytokine Res. 20:751-762 (2000); Swope & Lolis, Rev. Physiol. Biochem. Pharmacol. 139:1-32 (1999); Metz & Bucala, Adv. Immunol. 66:197-223 (1997)). Установлено, что фактор MIF подавляет хаотичную миграцию макрофагов и ассоциируется с гиперчувствительностью замедленного типа (см. статьи George & Vaughan, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 111:514-521 (1962); Weiser и др., J. Immunol. 126:1958-1962 (1981); Bloom & Bennett, Science, 153:80-82 (1966); David, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 56:72-77 (1966)). Установлено также, что фактор MIF повышает адгезию, фагоцитоз и противоопухолевую активность макрофагов (см. статьи Nathan и др, J. Exp. Med. 137:275-288 (1973); Nathan и др., J. Exp. Med. 133:1356-1376 (1971); Churchill и др., J. Immunol. 115:781-785 (1975)).

Рекомбинантный MIF человека впервые был клонирован из библиотеки Т-клеток человека (см. статью Weiser и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 7522-7526 (1989)), а также было установлено, что он активирует макрофаги крови, уничтожающие внеклеточных паразитов и опухолевые клетки in vitro, стимулирует экспрессию IL-1β и TNFα, а также индуцирует синтез оксида азота (см. статьи Weiser и др., J. Immunol. 147:2006-2011 (1991); Pozzi и др., Cellular Immunol. 145:372-379 (1992); Weiser и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:8049-8052 (1992); Cunha и др., J. Immunol. 150:1908-1912 (1993)). Недавно было установлено, что фактор MIF является не только цитокином, продуцируемым иммунной системой, но и является гормоноподобным продуктом эндокринной системы, прежде всего из гипофиза. В этой работе предполагается, что MIF проявляет активность обратного регулятора противовоспалительного действия глюкокортикоидов (как эндогенного происхождения, так и введенных в виде терапевтических средств), при этом нормальная активность глюкокортикоидов, проявляющаяся в ограничении и снижении тяжести воспалительной ответной реакции ингибируется в присутствии MIF, и таким образом ответная реакция на эндогенный MIF может служить причиной или фактором обострения множества воспалительных заболеваний или состояний (см. обзор Donnelly и Bucala, Molecular Medicine Today 3:502-507 (1997)).

Дополнительные типы активности включают регуляцию стимулированных Т-клеток (см. статью Bacher и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7849-7854 (1996)), контроль синтеза IgE (см. статью Mikayama и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:10056-60 (1993)), функциональную активацию белка р53, подавляющего рост опухоли (см. статью Hudson и др., J. Exp. Med. 190:1375-1382 (1999), регуляцию метаболизма глюкозы и других углеводов (см. статью Sakaue и др., Mol. Med. 5:361-371 (1999)) и регуляцию роста опухолевых клеток и ангиогенеза (см. статью Chesney и др., Mol Med. 5:181-191 (1999); Shimizu и др., Biochem. Biophys. Res. Commun. 264:751-758 (1999); Mitchell & Bucala, Cancer Biol. 10:359-366 (2000)). Установлена также роль MIF в ангиогенезе (см. статью Lin и др., Circulation Res. 8:1202-1208 (2000)), в развитии астмы (см. статью Yamaguchi и др., Clin. Exp. Allergy 30:1244-1249 (2000)) и в развитии малярии (см. статью Martiney и др., Infection Immunity 68:2259-2267 (2000)).

Антитела против MIF проявляют активность в ряде моделей: индуцированный эндотоксином и экзотоксином токсической шок (Bernhagen и др., Nature, 365:756-759 (1993); Kobayashi и др., Hepatology, 29:1752-1759 (1999); Calandra и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 95:11383-11388 (1998); Makita и др., Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158:573-579 (1998), Calandra и др., Nat. Med. 6:164-170 (2000)), активация Т-клеток (Bacher и др., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 93:7849-7854 (1996)), аутоиммунные заболевания, включая ревматоидный артрит (Leech et al., Arthritis Rheum., 42:1601-1608, 1999), увеоретинит (Kitaichi и др., Curr. Eye Res., 20:109-114 (2000)), гломерулонефрит (Yang и др., Mol. Med. 4: 413-424 (1998)), экспериментальный острый энцефаломиелит (Denkinger и др., J. Immunol. 170: 1274-1282 (2003)), колит (de Jong и др., Nat. Immunol. 2:1061-1066 (2001); Ohkawara и др., Gastroenterol. 123: 256-270 (2002)), деструкция кожных трансплантатов (Hou и др., Transplantation 72: 1890-1897 (2001)) и атеросклероз (Chen и др. Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol. 24:709-714 (2004); Schober и др., Circulation 109:380-385 (2004)). Кроме того, установлено, что антитела против MIF подавляют рост опухоли и ангиогенез (Chesney и др., Mol. Med. 5:181-191 (1999); Ogawa и др., Cytokine 12:309-314 (2000); Mitchell & Bucala, Cancer Biol. 10:359-366 (2000)). В связи с активностью антител против MIF низкомолекулярные ингибиторы MIF характеризуются высокой терапевтической эффективностью.

Фактор MIF характеризуется высокой гомологией аминокислотной последовательности (36% идентичности) с D-допахром-таутомеразой и проявляет ферментативную активность, то есть катализирует таутомеризацию нефизиологических субстратов, D-допахрома (Rosengren и др., Mol. Med. 2:143-149 (1996)) и метилового эфира L-допахрома (Bendrat и др., Biochemistry, 36:15356-15362 (1997), фиг.1А). Кроме того, субстратами MIF являются фенилпировиноградная кислота и пара-гидроксифенилпировиноградная кислота (Rosengren и др., FEBS Letter, 417:85-88 (1997)), 3,4-дигидроксифениламинхром и норэпинефринхром (Matsunaga и др., J. Biol. Chem., 274:3268-3271 (1999)). Данные трехмерного рентгеноструктурного анализа MIF человека свидетельствуют о гомотримерной структуре белка (Lolis и др., Ргос. Ass. Am. Phys. 108:415-419 (1996)). Известны различные ингибиторы таутомеразной активности MIF (например, см. статьи Orita и др. J. Med. Chem. 44:540-547 (2001); Senter и др., Proc. Natl. Acad. Sci (USA) 99:144-149 (2002); Dios и др., J. Med. Chem. 45: 2410-2416 (2002); Lubetsky и др. J. Biol. Chem. 277:24976-24982 (2002)).

Неожиданно был идентифицирован новый класс соединений, проявляющих активность ингибиторов MIF.

В одном объекте настоящего изобретения предлагаются соединения, выбранные из группы, включающей:

3-(С₆-С₁₂арил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, например 3-(фенил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, 3-(нафтил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(С₃-С₈циклоалкил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, например 3-(циклогексил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(С₆-С₁₂арил(С₁-С₄)алкил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, например 3-(бензил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, и

3-(С₃-С₈циклоалкил(С₁-С₄)алкил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, предпочтительно

3-(фенил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(нафтил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(циклогексил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны и

3-(бензил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(фенил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(нафтил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(циклогексил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны и

3-(бензил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(фенил)-7-аминосульфонилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(нафтил)-7-аминосульфонилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны,

3-(циклогексил)-7-аминосульфонилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны и

3-(бензил)-7-аминосульфонилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается соединение формулы

которое, например, означает 3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он, где R₁ означает незамещенный или замещенный С₃-С₈циклоалкил(С₁-С₄)алкил, С₆-С₁₈арил(С₁-С₄)алкил, С₃-С₈циклоалкил, С₆-С₁₈арил,

например, где С₆-С₁₈арил необязательно является конденсированным с другой кольцевой системой, например заместители выбраны из группы, включающей С₆-С₁₈арил, галоген, гидрокси, аминосульфонилокси, С₁-С₄алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси, галоген(С₁-С₄)алкил или галоген(С₁-С₄)алкокси,

R₂ означает водород или незамещенный или замещенный гидрокси, например водород, гидрокси, аминосульфонилокси, С₁-С₄алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси или галоген(С₁-С₄)алкокси.

В соединении формулы I

R₁ предпочтительно означает незамещенный или замещенный циклогексил, фенил, нафтил, фенил, который является конденсированным с другой кольцевой системой, например конденсированным с краун-эфиром, фенил(С₁-С₄)алкил, причем заместители выбраны из группы, включающей С₆-С₁₈арил, галоген, гидрокси, аминосульфонилокси, С₁-С₄алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси, галоген(С₁-С₄)алкил, галоген(С₁-С₄)алкокси,

R₂ означает водород, гидрокси, аминосульфонилокси, С₁-С₄алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси, галоген(С₁-С₄)алкил или галоген(С₁-С₄)алкокси.

В одном объекте настоящего изобретения предлагается соединение формулы I, где

R₁ означает циклогексил, гидроксициклогексил, например 4-гидроксициклогексил, фенил, бифенил, например бифенил-4-ил, нафтил, например нафтил-1-ил, гидроксифенил, например 3-гидроксифенил, 4-гидроксифенил, метоксифенил, например 4-метоксифенил, трифторметоксифенил, например 4-трифторметоксифенил, бромфенил, например 4-бромфенил, аминосульфонилоксифенил, например 3-аминосульфонилоксифенил, 4-аминосульфонилоксифенил, (трет-бутил)(диметил)силилоксифенил, например 4-(трет-бутил)(диметил)силилоксифенил, фенилметил или фенил, конденсированный с 18-(краун)-6, таким как бензо-18-(краун)-6,

а R₂ имеет значение, указанное выше.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается соединение формулы I, где

R₁ имеет значение, указанное выше, а

R₂ означает водород, гидрокси, аминосульфонилокси.

В соединении формулы I каждый описанный заместитель является предпочтительным заместителем, например, независимо от каждого другого описанного заместителя.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается соединение, выбранное из группы, включающей:

3-циклогексил-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-метоксифенил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-гидроксициклогексил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-фенил-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(3-гидроксифенил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-гидроксифенил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-аминосульфанилоксифенил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-(трет-бутил)(диметил)силилоксифенил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(6.7.9.10.12.13.15.16.18.19-декагидро-5,8,11,14,17,20-гексаоксибензоциклооктадецен-2-ил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(фенилметил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он, 3-(4-трифторметилоксифенил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-метоксифенил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(бифенил-4-ил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(нафт-1-ил)-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-бромфенил)-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(3-аминосульфанилоксифенил)-7-аминосульфанилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-циклогексил-7-аминосульфанилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-аминосульфанилоксифенил)-7-аминосульфанилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-метоксифенил)-7-аминосульфанилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-фенил-7-аминосульфанилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(4-гидроксифенил)-7-аминосульфанилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он,

3-(фенилметил)-7-аминосульфанилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается соединение формулы

Соединения, описанные в данном контексте, обозначены как «соединения по настоящему изобретению». Соединение по настоящему изобретению включает соединение в любой форме, например в свободной форме, в форме соли, в форме сольвата и в форме соли и сольвата.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается соединение в форме соли.

Соль соединения по настоящему изобретению включает фармацевтически приемлемую соль, например соль металла или кислотно-аддитивную соль. Соли металла включают, например, соли щелочных или щелочно-земельных металлов, кислотно-аддитивные соли включают соли органических и неорганических кислот, например HCl. Соединение по настоящему изобретению в свободной форме превращают в соответствующую соль и наоборот. Соединение по настоящему изобретению в свободной форме или в форме соли и в форме сольвата превращают в соответствующее соединение в свободной форме или в несольватированную соль и наоборот.

Соединение по настоящему изобретению существует в форме изомеров и их смесей, например оптических изомеров, диастереоизомеров, цис/транс конформеров. Соединение по настоящему изобретению может, например, содержать асимметрические атомы углерода и, таким образом, существовать в форме энантиомеров или диастереоизомеров и их смесей, например рацематов. Заместители при любом асимметрическом атоме углерода могут находиться в (R)-, (S)- или (R,S)-конфигурации, предпочтительно в (R)- или (S)-конфигурации.

Например, заместитель связан с циклоалкилом, например заместитель связан с циклогексилом в любом положении за исключением пара-положения, R₁ в соединении формулы I может находиться в (R)- или (S)-конфигурации в отношении группы 7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он, также связанной с указанным циклоалкилом.

Изомерные смеси разделяют стандартными способами, при этом получают индивидуальные изомеры. Настоящее изобретение включает соединение по настоящему изобретению в любой изомерной форме и любую смесь изомеров. Настоящее изобретение также включает таутомеры соединения формулы I, если они существуют.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается способ получения соединения формулы I:

а) взаимодействие соединения формулы

или формулы

соответственно,

где PROT означает гидрокси-защитную группу, например бензил, с соединением формулы H₂N-R₁, где R₁ имеет значение, определенное выше, в присутствии восстанавливающего агента, такого как NaBH₄, с образованием соединения формулы

или формулы

соответственно,

b) взаимодействие соединения формулы III или формулы IIIA соответственно с карбонилдиимидазолом в присутствии основания, например триэтиламина, с образованием соединения формулы

или формулы

соответственно,

c) необязательно, если R₁ содержит заместитель, который означает гидрокси, взаимодействие указанной гидроксигруппы (с целью получения замещенной гидроксигруппы) с реакционно-способным производным указанного заместителя, например, для получения соединения формулы I, где R₁ означает три(С₁-С₆)алкилсилилокси, взаимодействие с три(С₁-С₆)алкилсилилгалогенидом, таким как хлорид, например, в присутствии имидазола,

например, для получения соединения формулы I, где R₁ означает аминосульфонилокси, взаимодействие гидроксигруппы с амидохлорсульфоновой кислотой,

d) необязательно деблокирование, т.е. удаление защитной группы PROT, например, каталитическим гидрированием, с образованием соединения формулы I,

e) необязательно, если соединение формулы II используется в качестве исходного материала, взаимодействие гидроксигруппы, полученной на стадии d (с целью получения замещенной гидроксигруппы), с реакционно-способным производным указанного заместителя,

например, для получения соединения формулы I, где R₂ означает три(С₁-С₆)алкилсилилокси, взаимодействие гидроксигруппы, полученной на стадии d, с три(С₁-С₆)алкилсилилгалогенидом, таким как хлорид, например, в присутствии имидазола,

например, для получения соединения формулы I, где R₂ означает аминосульфонилокси,

взаимодействие гидроксигруппы, полученной на стадии d, с амидохлорсульфоновой кислотой, и

f) выделение полученного соединения формулы I.

Любое соединение, описанное в данном контексте, например соединение по настоящему изобретению, получают по стандартным методикам или как описано в данном контексте. Соединения формулы II или формулы III известны или их получают по стандартным методикам.

Неожиданно были идентифицированы соединения по настоящему изобретению, которые проявляют активность ингибиторов MIF, то есть ингибируют ферментативную активность MIF in vitro. В настоящее время природные субстраты ферментативной активности MIF еще не известны. Однако таутомеразную активность MIF можно определять с использованием в качестве субстратов D-допахрома и пара-гидроксифенилпирувата (НРР) (Rosengren и др. Molec. Med. 2:143-149 (1996); Rosengren E, FEBS Lett. 417:85-88 (1997)). Анализ НРР проводили в микропланшетах.

- Белок MIF человека очищали по методике, описанной в статье Bernhagen и др. Biochemistry, 33:14144-14155 (1994). Фермент разбавляли в 50 мМ натрий фосфатном буферном растворе, 1 мМ ЭДТУ, pH 6,5.

- Для анализа использовали коммерческий препарат НРР фирмы Aldrich, получали исходный 60 мМ раствор НРР в этаноле и хранили его в течение не более 4 ч на льду. Рабочий раствор субстрата (600 мкМ) получали при разбавлении аликвотной части исходного раствора 50 мМ натрий фосфатным буферным раствором, 1 мМ ЭДТУ, pH 6,5.

- Для анализа использовали микротитрационные 96-луночные планшеты, прозрачные в УФ фирмы Corning (номер по каталогу 3635). Растворы ингибитора и фермента добавляли вручную с использованием 12-канальной пипетки фирмы Eppendorf. Субстрат для инициации реакции добавляли с использованием автоматического дозатора Igel 96 (OpalJena, Йена, Германия), который позволяет одновременно добавлять жидкость во все 96 лунок планшета.

- Оптическую плотность измеряли на ридере SpectraAmax 250 (фирмы Molecular Devices) с использованием программного обеспечения SoftmaxPro 2.6.1.

- Анализ: в три лунки микротитрационных планшетов добавляли только буферный раствор для определения фона, в остальные лунки последовательно добавляли: 50 мкл разбавленного раствора ингибитора (или буферный раствор для контроля), 50 мкл разбавленного раствора фермента (55 нМ, конечная концентрация в реакционной смеси 18,3 нМ), 50 мкл свежеприготовленного разбавленного рабочего раствора субстрата (600 мкМ, конечная концентрация 200 мкМ).

На последней стадии использовали 96-канальный дозатор. Затем планшет немедленно (в течение нескольких секунд) вручную переносили в ридер SpectraAmax 250 и измеряли оптическую плотность при 310 нм.

Полученные данные использовали для расчета величины IC₅₀ с использованием программного обеспечения Excel и XLfit.

По данным анализа соединения по настоящему изобретению проявляют активность, то есть они ингибируют ферментативную (таутомеразную) активность, и, следовательно, их можно использовать для применения в качестве фармацевтических препаратов, например, для лечения заболеваний, опосредованных фактором MIF. В основном соединения проявляют ингибирующую активность в отношении таутомеразы MIF, а величина IC₅₀ находится в диапазоне от 20 нМ до 20 мкМ. Предпочтительным соединением является соединение, полученное в примере 2, которое характеризуется величиной IC₅₀ 20 нМ.

Соединения по настоящему изобретению предназначены для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных MIF.

Заболевания, опосредованные MIF, например воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, невропатические нарушения и рак, включая трансплантацию, включают, например,

- заболевания, опосредованные токсичностью цитокина, например, включая токсичность интерлейкина-2,

- заболевания костной ткани, например, включая остеопороз,

- заболевания мозга и нервной системы, например, включая состояния, связанные с гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системой, нейродегенеративные заболевания, цереброваскулярные заболевания, инфекции центральной нервной системы, травматические состояния, болезнь Альцгеймера, мозговые нарушения, включая травму и воспалительные последствия травмы,

- глазные заболевания, например, включая увеоритинит, витреоретинопатию, заболевание роговицы, воспаление радужной оболочки глаза, иридоциклит, катаракту, увеит, диабетическую ретинопатию,

- заболевания желудочно-кишечного тракта, например, включая колит, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, гастрит, эзофагит,

- сердечно-сосудистые заболевания, например, включая заболевания сердца, пролиферативные заболевания сосудов, васкулит, нодозный полиартериит, воспалительные последствия ишемии, ишемическую болезнь сердца, инфаркт миокарда, инсульт, заболевание периферической системы кровообращения, легочную гипертензию,

- заболевания печени и почек, например, включая цирроз печени, гепатит, склерозирующий холангит, первичный билиарный цирроз,

- заболевания дыхательных путей и легких, например, включая легочные заболевания, хронические легочные заболевания, острый респираторный дистресс-синдром у взрослых (ARDS), астму, бронхиальную астму, бронхоэктаз, диффузные интерстициальные заболевания легких, пневмокониоз, фиброзный авеолит,

- заболевания кожи и соединительных тканей, например, включая экзему, атопический дерматит, контактный дерматит, псориаз, дерматомиозит, синдром Гужеро-Шегрена, синдром Черджа-Стросса, солнечную эритему, рак кожи, заживление ран,

- аллергические заболевания, например, включая гиперчувствительность замедленного типа, аллергический ринит,

- заболевания, связанные с развитием кровеносных сосудов, например, включая заболевания, характеризующиеся аномальным развитием кровеносных сосудов, развитие кровеносных сосудов, ассоциированное с опухолью,

- заболевания, связанные с гиперпролиферацией клеток, например, включая предраковое состояние, гиперпролиферативные нарушения, первичный или метастатический рак, рак шейки матки и метастатический рак, солидные опухоли, рост опухоли, лимфому, лимфому В-клеток или Т-клеток, доброкачественную опухоль, доброкачественные непролиферативные нарушения, рак почек, рак пищевода, рак желудка, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, рак ободочной кишки, рак легких, меланому, рак носоглотки, остеокарциному, рак яичников, рак матки, рак предстательной железы, рак кожи, лейкоз, реваскуляризацию опухоли, ангиому, миелодисплазию,

- диабет, например, включая диабет, диабетическую ретинопатию, инсулинзависимый диабет, сахарный диабет,

- эндометриоз, дисфункция яичников,

- инфекционные заболевания, например хронические инфекционные заболевания, например, включая бактериальные заболевания, воспаление среднего уха, болезнь Лайма, тиреоидит, вирусные заболевания, паразитарные болезни, грибковые заболевания, малярию, например малярийную анемию, сепсис, тяжелый сепсис, септический шок, например, вызванный эндотоксином септический шок, токсический шок, вызванный экзотоксином, инфекционный (септический) шок, септический шок, вызванный грамотрицательными бактериями, воспалительные заболевания почечной лоханки, СПИД,

- тяжелая псевдопаралитическая миастения,

- нефрит, например, включая гломерулонефрит, интерстициальный нефрит, грануломатоз Вегенера,

- заболевания, связанные с болью,

- ревматические заболевания, например, включая артрит, ревматический артрит, остеоартрит, псориатический артрит, кристаллическую артропатию, подагру, псевдоподагру, отложение пирофосфата кальция, волчанку, системную красную волчанку, склероз, склеродермию, рассеянный склероз, атеросклероз, артериосклероз, спондилоартропатию, системный склероз, реактивный артрит, синдром Рейтера, анкилозирующий спондилоартрит, полимиозит,

- саркоидоз,

- заболевания, связанные с трансплантацией, например, включая реакцию трансплантат против хозяина, недостаточность при трансплантации в результате отторжения, отторжение трансплантата, защиту трансплантированных органов, такую как лечение или профилактика воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, невропатических нарушений и рака, например, включая заболевания, вызванные трансплантацией органов.

Предпочтительным является лечение или профилактика заболеваний желудочно-кишечного тракта, включая колит, воспалительное заболевание кишечника, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит, а также ревматических заболеваний, таких как артрит, ревматический артрит.

В другом объекте настоящего изобретения прелагается соединение по настоящему изобретению для применения в качестве фармацевтического средства, предназначенного, например, для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных МIF, таких как лечение или профилактика воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, невропатических нарушений и рака, например, включая заболевания, вызванные трансплантацией органов, например, включая заболевания, опосредованные токсичностью цитокинов, заболевания костной ткани, мозга, нервной системы, глаз, желудочно-кишечного тракта, сердечно-сосудистые заболевания, печени и почек, дыхательного тракта и легких, кожи и соединительных тканей, аллергические заболевания, ангиогенез, гиперпролиферацию клеток и рак, диабет, эндометриоз, дисфункцию яичников, инфекционные заболевания, неспецифическую миастению, нефрит, боль, ревматические заболевания, саркоидоз и заболевания, вызванные трансплантацией органов.

В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается применение соединения по настоящему изобретению для получения лекарственного средства, например фармацевтической композиции, предназначенного для лечения или профилактики заболеваний, опосредованных MIF, таких как описано выше.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается способ лечения или профилактики заболеваний, опосредованных MIF, например, таких как описано выше, включая введение терапевтически эффективного количества соединения по настоящему изобретению субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

Лечение включает лечение и профилактику. Пригодная доза при таком лечении изменяется в зависимости, например, от химической природы и фармакокинетических свойств использованного соединения по настоящему изобретению, от индивидуальности пациента, от способа введения лекарственного средства и от природы и тяжести заболевания, подлежащего лечению.

Термин «фармацевтически эффективное количество», использованный в данном контексте, означает количество соединения по настоящему изобретению, которое приводит к снижению развития или тяжести заболевания, опосредованного MIF. Токсичность и терапевтическую эффективность таких соединений определяют по стандартным фармацевтическим, фармакологическим и токсикологическим методикам с использованием культуры клеток или лабораторных животных. Указанные параметры, например величину LD₅₀ (летальная доза для 50% популяции) и величину ED₅₀ (терапевтически эффективная доза для 50% популяции), например данные анализа, полученные с использованием клеточных культур и моделей животных, можно использовать для определения доз, предназначенных для введения человеку. Дозировка соединения по настоящему изобретению предпочтительно находится в диапазоне концентраций в кровотоке, включая величину ED₅₀ (или ED₉₉) при условии незначительной токсичности или ее полного отсутствия. Дозировка зависит от формы лекарственного средства, предназначенного для введения, и от способа введения. Каждый лечащий врач может выбрать конкретную фармацевтическую композицию, способ введения и дозировку с учетом состояния пациента (см., например, справочник Fingl и др., "The Pharmacological Basis of Therapeutics", гл.1, с.1 (1975)).

Дозировку и диапазон можно подбирать для каждого конкретного пациента, чтобы обеспечить достаточный уровень активного агента в плазме для проявления требуемой активности или для обеспечения минимальной ингибирующей концентрации (MIC). Величина MIC изменяется для каждого соединения, и ее можно определить по данным анализа in vitro, например, по концентрации, необходимой для проявления ингибирующей активности MIF в диапазоне 50-97%. Дозы, необходимые для обеспечения MIC, зависят от конкретных характеристик и способа введения. Однако для определения концентрации в плазме можно использовать анализ методом ЖХВР, биоанализ и иммунный анализ. Диапазон доз можно определить по величине MIC.

Соединения следует вводить по схеме, обеспечивающей поддержание уровней в плазме выше MIC в течение 10-90% времени, предпочтительно от 30 до 90% и наиболее предпочтительно от 50-90%.

Однако в основном для обеспечения удовлетворительных результатов при лечении крупных млекопитающих, например человека, рекомендуемая суточная доза находится в диапазоне приблизительно от 0,5 мг до 1000 мг (например, от приблизительно 0,00625 мг/кг до приблизительно 12,5 мг/кг) активного соединения по настоящему изобретению, которое вводят стандартным способом, например, в виде разделенных доз до четырех раз в сутки.

Соединение по настоящему изобретению вводят любым пригодным способом, например энтеральным способом, например, включая назальный, трансбуккальный, ректальный, пероральный способы, парантеральным способом, например, включая внутривенное, внутримышечное, подкожное введение, или местным способом, например, включая кожное, интраназальное, внутритрахеальное введение, например, в форме таблеток или таблеток с покрытием, капсул, растворов или суспензий для вливания, например, в виде ампул, флаконов, в форме кремов, гелей, паст, порошка или пены для ингаляций, настойки, помады для губ, капель, спреев или в форме суппозиториев.

Соединения по настоящему изобретению вводят в форме фармацевтически приемлемой соли, например кислотно-аддитивной соли или соли металла, или в свободной форме, необязательно в форме сольвата. Соединения по настоящему изобретению в форме соли обладают такой же активностью, как соединения по настоящему изобретению в свободной форме, необязательно в форме сольвата.

В другом объекте настоящего изобретения прелагается фармацевтическая композиция, содержащая по крайней мере одно соединение по настоящему изобретению в смеси по крайней мере с одним фармацевтическим эксципиентом, например пригодным носителем и/или разбавителем, и включающая наполнители, связующие агенты, дезинтегрирующие агенты, кондиционеры текучести, замасливатели, сахара и подсластители, ароматизаторы, консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты и/или эмульгаторы, солюбилизаторы, соли для регуляции осмотического давления и/или буферные вещества.

Фармацевтические композиции по настоящему изобретению получают стандартными методами, например смешиванием, растворением, получением драже, флотацией, эмульгированием, инкапсулированием или лиофилизацией с использованием одного или более фармацевтически приемлемого эксципиента, например, включая носители, разбавители и вспомогательные вещества, которые облегчают процесс переработки соединений по настоящему изобретению в фармацевтические композиции. Необходимую информацию о получении и введении соединений по настоящему изобретению можно найти в книге "Remington's Pharmaceutical Sciences", Mack Publishing Co., Easton, Pa., последнее издание.

Фармацевтические композиции, например, включают фармацевтические композиции:

- для перорального введения, такие как таблетки, пилюли, драже, капсулы, жидкости, гели, сиропы, суспензии, взвеси,

- для трансбуккального введения, например, в форме таблеток или лепешек,

- для введения ингаляцией, например, если соединение по настоящему изобретению доставляется в форме аэрозольного спрея из упаковки под давлением или распылителя с использованием пригодного пропеллента или в форме капсул и картриджей, например желатиновых, для использования в ингаляторе или вдувателе в виде смеси порошка соединения по настоящему изобретению с пригодной порошкообразной основой, такой как лактоза или крахмал,

- для парентерального введения инъекцией, например, струйным вливанием или непрерывным вливанием, например, в форме стандартной лекарственной формы, такой как ампулы или контейнеры, содержащие несколько доз, причем фармацевтическая композиция по настоящему изобретению представляет собой суспензию, раствор или эмульсию, например, в масляном или водном связующем, необязательно содержащем другие вспомогательные агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты, в другом варианте активный ингредиент может представлять собой порошок, который перед использованием смешивают с пригодным (жидким) связующим, например водой,

- для ректального введения, в форме суппозиториев или клизмы, например, содержащих пригодную для суппозиториев основу, такую как масло какао или другие глицериды,

- для местного введения, например, в форме гелей, кремов.

Одно или более соединений по настоящему изобретению можно использовать для медикаментозного лечения по настоящему изобретению в отдельности или в комбинации с одним или более другими фармацевтически активными агентами.

Другие фармацевтические агенты включают вещества, пригодные для лечения заболеваний, опосредованных MIF, таких как воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, невропатические нарушения и рак, заболевания, вызванные трансплантацией органов. Такие фармацевтические агенты включают, например, стероиды, глюкокортикоиды, ингибиторы других воспалительных цитокинов (например, антитела анти-TNF-α, антитела анти-IL-1, антитела анти-IFN-γ) или других цитокинов, таких как IL-1RA или IL-10, другие агенты, которые снижают эндогенное количество внеклеточного или внутриклеточного MIF, такие как антитела против MIF, другие низкомолекулярные ингибиторы MIF, ингибиторы редуктазы HMG-CoA, антигиперлипидемические лекарственные средства (фибраты), противоопухолевые агенты или иммуномодуляторы, например, включая иммунодепрессанты, или комбинации отдельных агентов, например, как описано выше.

Такие иммуномодуляторы включают иммунодепрессанты, например, включая кортикостероиды, азатиопрен, ингибиторы кальциневрина, такие как циклоспорины, например, включая циклоспорин А, ингибиторы mTOR, такие как рапамицины, например, включая рапамицин, 32-дезоксорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32-дезоксорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32(S)-дигидрорапамицин, 16-пент-2-инилокси-32(S)-дигидро-40-O-(2-гидроксиэтил)рапамицин, 40-O-(2-гидроксиэтил)рапамицин (эверолимус), CCI779, АР23573, АР22549, ингибиторы инозин-5′-монофосфатдегидрогеназы (IMPDH), такие как микофенольная кислота, включая микофенольную кислоту в форме соли, например мофетилмикофенолят, соединения, связывающие макрофилин-12, такие как аскомицины, например, включая FK506 (такролимус), модуляторы рецептора S1P, такие как FTY720 и антитела-иммунодепрессанты, например, включая иммунодепрессантные моноклональные антитела, например, моноклональные антитела CD3, CD4, CD25, CD28 или CD45, или другие иммуномодуляторы.

Комбинации включают фиксированные комбинации, в которых два или более фармацевтически активных агента находятся в одном составе, наборы, в которых два или более отдельных фармацевтически активных агента выпускаются в одной упаковке, например, с инструкцией по их совместному введению, и свободные комбинации, в которых фармацевтически активные агенты выпускаются в отдельных упаковках, но прилагается инструкция по их совместному или последовательному введению.

В другом объекте настоящего изобретения предлагаются фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента по крайней мере одно соединение по настоящему изобретению в комбинации, например, включая фиксированные комбинации, наборы и свободные комбинации, с одним или более другим фармацевтически активным агентом, который выбирают из группы, включающей стероиды, глюкокортикоиды, ингибиторы других воспалительных цитокинов (например, антитела анти-TNF-α, антитела анти-IL-1, антитела анти-IFN-γ) или других цитокинов, таких как IL-1RA или IL-10, другие агенты, которые снижают эндогенное количество внеклеточного или внутриклеточного MIF, такие как антитела против MIF, другие низкомолекулярные ингибиторы MIF, ингибиторы редуктазы HMG-CoA, антигиперлипидемические лекарственные средства, противоопухолевые агенты или иммуномодуляторы, например, как описано выше, в смеси по крайней мере с одним фармацевтически пригодным эксципиентом.

В другом объекте настоящего изобретения предлагаются 7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-оны, замещенные по атому азота незамещенными или замещенными группами С₃-С₈циклоалкил, С₁-С₄алкил(С₃-С₈)циклоалкил, С₆-С₁₈арил или С₆-С₁₈арил(С₁-С₄)алкил, например, включая соединение формулы

где R₁ означает незамещенный или замещенный С₃-С₈циклоалкил, С₁-С₄алкил(С₃-С₈)циклоалкил, С₆-С₁₈арил, С₆-С₁₈арил(С₁-С₄)алкил, причем С₆-C₁₈арил необязательно конденсирован с другим циклом, и где заместители выбирают из группы, включающей незамещенный или замещенный гидрокси, например R₁ означает циклогексил, гидроксициклогексил, фенил, гидроксифенил, метоксифенил, аминосульфонилоксифенил, (трет-бутил)(диметил)силилоксифенил, фенилметил или фенил, конденсированный с 18-краун-6, таким как бензо-18-краун-6.

Пример 1

Получение 3-циклогексил-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-она

А. 3-Циклогексил-7-метокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он

В раствор 2-гидрокси-4-метоксибензальдегида (26 г) в абсолютном EtOH (800 мл) при КТ добавляли циклогексиламин (40 г). Полученную смесь перемешивали в течение 1,5 ч, охлаждали до 0°С и порциями добавляли NaBH₄ (20 г), затем смесь перемешивали при КТ в течение 3 ч, выливали в воду и экстрагировали CH₂Cl₂. Две полученные фазы разделяли. Органический слой сушили, добавляли карбонилдиимидазол (42 г) и полученную смесь перемешивали при КТ в течение 16 ч. Затем добавляли дополнительную порцию карбонилдиимидазола (21,5 г), смесь перемешивали в течение 3 ч, промывали 1н. HCl, насыщенным водным раствором NaHCO₃ и солевым раствором, сушили и концентрировали в вакууме, при этом получали 3-циклогексил-7-метокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он. t_пл. 76-77°С.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 6,99 (d, J 8,4 Гц, 1Н), 6,66 (dd, J 2,5+8,4 Гц, 1Н), 6,57 (d, J 2,5 Гц, 1Н), 4,30 (s, 2H), 4,24 (tt, J 3,6+11,6 Гц, 1Н), 3,78 (s, 3H), 1,33-1,90 (m, 9H), 1,02-1,20 (m, 1H).

Образец соединения, полученного на стадии А, очищали экспресс-хроматографией на силикагеле и фракции, содержащие очищенный 3-циклогексил-7-метокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он, обрабатывали HCl, при этом получали 3-циклогексил-7-метокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он в форме гидрохлорида. t_пл. 169-172°С.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 6,86 (d, J 8,25 Гц, 1H), 6,41 (d, J 2,55 Гц, 1H), 6,33 (dd, J 2,55+8,25 Гц, 1H), 3,96 (s, 2H), 3,76 (s, 3H), 2,53 (tt, J 3,7+10 Гц, 1H), 1,92-2,03 (m, 2H), 1,56-1,80 (m, 3H), 1,03-1,37 (m, 5H).

В. Получение 3-циклогексил-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-она

Смесь 3-циклогексил-7-метокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-она (66 г) и гидрохлорида пиридиния (200 г) при перемешивании нагревали в отсутствии растворителя на металлической бане при 220°С в течение 45 мин, при этом выделяющийся газообразный хлористый водород удаляли в вакууме. Полученную смесь охлаждали до КТ, расплав растворяли в воде и этилацетате, две фазы разделяли. Водный слой экстрагировали этилацетатом, промывали 1н. HCl, сушили и концентрировали в вакууме. Полученный остаток фильтровали через силикагель и фильтрат концентрировали, при этом получали 3-циклогексил-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он в виде кристаллов. t_пл. 193-196°С.

¹Н-ЯМР (CDCl₃): δ 7,19 (ушир.s, 1Н), 6,95 (d, J 8,3 Гц, 1Н), 6,65 (dd, J 2,4+8,3 Гц, 1Н), 4,30 (s, 2Н), 4,23 (tt, J 3,6+11,6 Гц, 1Н), 1,30-1,90 (m, 9H), 1,02-1,20 (m, 1H).

Пример 2

Получение соединения (пример 17), указанного ниже в таблице 1

Получение 3-циклогексил-7-аминосульфонилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-она 3-Циклогексил-7-гидрокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он (22,5 г) обрабатывали амидохлорсульфоновой кислотой (42,3 г) в отсутствии растворителя. Полученную смесь перемешивали при 60°С при пониженном давлении (100 мбар) в течение 1 ч, охлаждали до КТ, добавляли этилацетат и воду, смесь экстрагировали. Органический слой сушили и концентрировали в вакууме, при этом получали 3-циклогексил-7-аминосульфонилокси-3,4-дигидробензо[е][1,3]оксазин-2-он.

¹Н-ЯМР (ДМСО-d₆): d 8,06 (ушир.s, 2Н), 7,36 (d, J 8,3 Гц, 1H), 7,06 (dd, J 2,3+8,3 Гц, 1H), 6,96 (d, J 2,3 Гц, 1H), 4,46 (s, 2H), 3,99 (tt, J 3,6+11,6 Гц, 1H), 1,20-1,84 (m, 9H), 1,00-1,19 (m, 1H).

¹³С ЯМР (d6-DMCO): d 25,376, 25,641, 29,039, 41,450, 56,165, 109,794, 117,801, 118,292, 127,513, 149,593, 150,048, 150,211.

Соединения формулы

где R₁ и R₂, а также t_пл. и данные ¹Н-ЯМР (CDCl₃, если не указано иное) приведены в таблице 1, получали аналогично тому, как описано в примере 1 и необязательно в примере 2, но при использовании соответствующих исходных материалов.

Таблица 1
Пр.	R1	R2	tпл./1H-ЯМР/МС
1		OH	193-196°
2		OH	212-215°
3		OH	239-247°
4		OH	4,78 (s, 2H), 5,96-6,65 (m, 2H), 6,88-7,06 (m, 1H) 7,22-7,50 (m, 5H), 8,98 (ушир.s, 1H)
5		OH	226-228°
6		OH	6,44 (d, 1H) 6,56(dd, 1H), 6,74-6,82 (m, 2H), 7,03 (d, 1H), 7,20-7,26 (m, 2H) 9,58 (ушир.s, 1H), 9,78 (ушир.s, 1H)
7		OH	224-227°
8		OH	212-216°
9		OH	167-169°

Пр.	R1	R2	tпл./1H-ЯМР/МС
10		OH	164-169°
11		OH	204-208°
12		H	141-143°
13		H	217-219°
14		OH	242-244°
15		H	163-164°
16		NH2-SO2-O-	90-99°
17		NH2-SO2-O-	179-184°
18		NH2-SO2-O-	53-55°
19		NH2-SO2-O-	196-199°

Пр.	R1	R2	tпл./1Н-ЯМР/МС
20		NH2-SO2-O-	197-199°
21		NH2-SO2-O-	186-189°
22		NH2-SO2-O-	176-179°

1. Соединение формулы

где R₁ означает незамещенный или замещенный (С₃-С₈)циклоалкил(С₁-С₄)алкил, фенил(С₁-С₄)алкил, (С₃-С₈)циклоалкил, фенил, нафтил, фенил, конденсированный с 18-(краун)-6,
где заместители включают фенил, галоген, гидрокси, аминосульфонилокси, (С₁-С₄)алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси, галоген(С₁-С₄)алкил или галоген(С₁-С₄)алкокси,
R₂ означает водород, гидрокси, аминосульфонилокси, (С₁-С₄)алкокси, три(С₁-С₆)алкилсилилокси или галоген(С₁-С₄)алкокси.

2. Соединение по п.1,
где R₁ означает циклогексил, гидроксициклогексил, фенил, бифенил, нафтил, гидроксифенил, метоксифенил, трифторметоксифенил, бромфенил, аминосульфонилоксифенил, (трет-бутил)(диметил)силилоксифенил или фенил, конденсированный с 18-(краун)-6,
а значения R₂ определены в п.1.

3. Соединение по любому из пп.1 и 2, где значения R₁ определены в п.1 или 2, a R₂ означает водород, гидрокси или аминосульфонилокси.

4. Соединение по любому из пп.1-3 формулы

5. Соединение по любому из пп.1 или 4 в форме соли.

6. Соединение по любому из пп.1-5, обладающее ингибирующим действием в отношении фактора миграции макрофагов (фактора MIF).

7. Применение соединения по любому из пп.1-5 для получения лекарственного средства, обладающего MIF ингибирующим действием.

8. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующим действием в отношении фактора MIF, содержащая соединение по любому из пп.1-5 в смеси по крайней мере с одним фармацевтическим эксципиентом.