Способ количественного определения резвератрола

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других биологических исследованиях при хроматографическом определении транс-резвератрола в биологически активных добавках, а также в вине. Способ включает хроматографирование методом ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрическую детекцию и количественное определение методом калибровочного графика. Причем дополнительно проводят центрифугирование. При этом в качестве элюента применяют смесь ацетронитрила 27,2%, уксусной кислоты 2,6% и дистиллированной воды 70,2%. Для дополнительной очистки исследуемого раствора применяют предколонку. Техническим результатом изобретения является разработка способа эффективного определения резвератрола в объектах различного происхождения, обеспечивающего высокую чувствительность и селективность определения наряду с сокращением длительности анализа и подбором универсальных условий его проведения. 1 з.п. ф-лы.

 

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других биологических исследованиях при хроматографическом определении трансрезвератрола в биологически активных добавках, а также в вине и других биологических объектах.

Известен способ определения резвератрола в вине [1], включающий выделение резвератрола через стадии выпаривания под вакуумом, растворения сухого остатка в деионизированной воде, ферментативного гидролиза при действии β-D-глюконидазы при 37°С в течение 8 часов, четырехкратной экстракцией этилацетатом, смешанным с водой. Этилацетатные экстракты выпариваются досуха под вакуумом. Сухой остаток растворяется в смеси метанол-вода 6:4, раствор центрифугируется, осадок промывается метанолом и снова центрифугируется. Хроматографирование образца проводят методом высокоэффективной хроматографии. В качестве сорбента используется гиперсил 5 мкм и колонка 100×2,1. Элюентом является смесь метанола и 0,5% раствора муравьиной кислоты 30:70, скорость подачи элюента 250 мкл/мин. Детекция (определение) ионов проводится на масс-спектрометре с m/z=229.

Недостатком данного способа является ограниченный круг анализируемых объектов, детекция выхода анализируемых веществ осуществляется с помощью масс-спектрометра, являющегося дорогостоящим оборудованием.

Наиболее близким решением является способ определения резвератрола [2], при котором проводится анализ виноградных вин, методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с УФ детекцией. Цис- и трансизомеры резвератрола экстрагировались из вин с помощью картриджей твердофазной экстракции. Экстракция проводилась в затемненном помещении для предотвращения изомеризации трансизомера в цисизомер. После этого проводился гидролиз гликозидов резвератрола при 50°С в течение 9 часов под действием β-глюкозидазы. После гидролиза транс- и цисизомеры резвератрола определяли методом ВЭЖХ. В качестве элюента использовались 2 фазы:

Фаза А: вода-уксусная кислота (рН3)

Фаза В: ацетонитрил-уксусная кислота (рН3)

Разделение изомеров велось градиентом фаз, то есть определенным соотношением фаз во времени.

0-0,01 мин: 5% В

0,01-10,00 мин: 25% В

10,01-20,00 мин: 40% В

20,01-35,00 мин: 100% В

Детекцию веществ осуществляли УФ-спектрофотометрически при длинах волн 285 нм и 307 нм, которые характерны для цис- и трансизомеров резвератрола. Количественное определение цис- и трансизомеров резвератрола проводили методом калибровочного графика, построенного по концентрациям стандартных образцов резвератрола.

Недостатком данного способа является большая продолжительность анализа и необходимость соблюдать градиент фаз растворителей.

Задачей изобретения является разработка способа эффективного определения резвератрола в объектах различного происхождения, обеспечивающего высокую чувствительность и селективность определения наряду с сокращением длительности анализа и подбором универсальных условий его проведения.

Поставленная задача решается тем, что способ включает хроматографирование методом ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрическую детекцию и количественное определение методом калибровочного графика, причем дополнительно проводят центрифугирование и в качестве элюента применяют смесь ацетронитрила 27,2%, уксусной кислоты 2,6% и дистиллированной воды 70,2%. Для дополнительной очистки исследуемого раствора применяют предколонку.

Способ осуществляется следующим образом. Отбирают пробу исследуемого продукта, содержащего резвератрол, центрифугируют и подвергают процедуре обращенно-фазазной ВЭЖХ. В качестве подвижной фазы используют смесь растворителей: ацетонитрил 27,2%, уксусная кислота 2,6% и вода дистиллированная. Детекцию осуществляют УФ-спектрофотометрически при длине волны 307 нм. Количественное определения проводят методом калибровочного графика. При необходимости для дополнительной очистки исследуемого раствора применяют предколонку.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Анализ резвератролсодержащей биологической добавки «Эноат», представляющей собой густую жидкость.

Пробу анализируемого продукта (10 мл) центрифугируют в течение 6 минут при 7000-8000 об/мин, после чего отбирают 0,2 мл центрифугата и прибавляют 5 мл элюента. Хроматографируют методом обращенно-фазной ВЭЖХ. Детекцию осуществляют УФ-спектрофотометрически при длине волны 307 нм. Количественное определение проводят методом калибровочного графика, построенного по концентрациям стандартных образцов резвератрола.

Пример 2.

Анализ резвератролсодержащей биологической добавки "Super Resveratrol", представляющей собой порошок, заключенный в капсулы.

Порошок из трех капсул биологически активной добавки "Super Resveratrol" объединяют и берут навеску 2,95 мг. Навеску растворяют в 10 мл элюента и центрифугируют в течение 6 минут при 7000-8000 об/мин. Для дополнительной очистки исследуемого раствора применяют предколонку. Хроматографируют методом обращено-фазной ВЭЖХ. Детекцию осуществляют УФ-спектрофотометрически при длине волны 307 нм. Количественное определение проводят методом калибровочного графика, построенного по концентрациям стандартных образцов резвератрола.

Предлагаемый способ по сравнению с прототипом позволяет проводить хроматографическое определение резвератрола в узких временных рамках и сокращает продолжительность анализа в целом. Кроме того, предлагаемый способ за счет универсальных условий позволяет определять резвератрол в различных объектах, в том числе в лекарственных формах.

Предлагаемый способ не требует использования редких реактивов.

Предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью, селективностью определения, точностью и воспроизводимостью, позволяет достигнуть высокой степени разделения, учитывая сложность состава анализируемых объектов.

Источники информации

1. (Y.Wang, F.Catana, Y.Yang, et al. An LC-Ms method for analyzing total resveratrol in grape juice, cranberry juice, and wine, J. Agric. Food Chem. 2002, 50, 431-435).

2. (G.Dugo, M.Saitta, D.Giuffrida, et al. Determination of resveratrol and other phenolik compounds in experimental wines from grapes subjected to different pesticide treatments Ital. J. Food Sci. 3, vol.16, 2004, p.305-321).

1. Способ количественного определения резвератрола, включающий хроматографирование методом ВЭЖХ, УФ-спектрофотометрическую детекцию и количественное определение методом калибровочного графика, отличающийся тем, что дополнительно проводят центрифугирование и в качестве элюента применяют смесь ацетронитрила 27,2%, уксусной кислоты 2,6% и дистиллированной воды 70,2%.

2. Способ по п.2, отличающийся тем, что в хроматографической системе используется предколонка.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть применено для определения -токоферола (альфа-токоферола) в различных объектах растительного и животного происхождения.

Изобретение относится к экспресс-методам определения диспергирующе-стабилизирующих свойств и загрязненности работающих масел. .

Изобретение относится к области исследования материалов химическими способами, а именно путем хроматографии, и может найти применение при оценке качества антоциановых красителей, полученных безкислотным способом из растительного сырья, в фармацевтической, ликероводочной и других отраслях пищевой промышленности.

Изобретение относится к биологии, токсикологической и ветеринарной химии, а именно к способам определения N-(бензимидазолил-2)-O-метилкарбамата в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и ветеринарных лабораторий.

Изобретение относится к области химического анализа и может быть использовано для определения качественного состава органических веществ в объектах на основе органической матрицы: в осадках избыточного активного ила промышленных и коммунальных биологических очистных сооружений, в донных отложениях водных объектов, в органоминеральных удобрениях и почвах при экологических и санитарно-химических исследованиях.

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть рекомендовано для идентификации гидроксисульфокислот (2-нафтол-6-сульфокислоты, 1-нафтол-3,8-дисульфокислоты, 2-нафтол-6,8-дисульфокислоты, 1-амино-2-нафтол-4-сульфокислоты, 1-амино-8-нафтол-3,6-дисульфокислоты, 5-аминосульфосалициловой) при анализе сточных вод производства азокрасителей.

Изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии и дерматологии. .

Изобретение относится к аналитической химии и может найти применение в аналитических лабораториях. .

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в металлургии, химической индустрии, экологии, медицине, пищевой промышленности. .
Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть использовано для идентификации углеводов (глюкоза, лактоза, галактоза, фруктоза, тагатоза) при аналитическом контроле пищевых продуктов
Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть использовано для идентификации природного красителя кармина в присутствии сульфоазокрасителей Е102, Е110, Е122, Е124 и Е129 при аналитическом контроле пищевых продуктов и фармацевтических препаратов

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств имидаклоприда в органах или тканях животных при подозрении на отравление инсектицидом, а также продуктах животного происхождения

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств инсектицида в органах и тканях животных при подозрении на отравление имидаклопридом, а также в продуктах животного происхождения

Способ и устройство могут использоваться в различных научных и практических областях медицины, биологии, химии, пищевой промышленности, охране окружающей среды и других отраслей народного хозяйства для анализа смесей органических и неорганических веществ методом тонкослойной хроматографии. Способ, при котором разделение пробы на отдельные компоненты происходит в капиллярной колонке с сорбентом под давлением восходящего потока жидкой подвижной фазы, расход которой регулируют изменением избыточного давления инертного газа на входе колонки. Устройство содержит капиллярную колонку, заполненную сорбентом, емкость с инертным газом под избыточным давлением, соединенную с выходом капиллярной колонки и с помощью регулируемого пневмосопротивления с линией сброса. Техническим результатом изобретения является повышение эффективности разделения и точности результатов анализа. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии. Способ разделения исследуемой смеси методом тонкослойной хроматографии включает нанесение исследуемой смеси на разделяющую хроматографическую пластинку и последующее разделение компонентов исследуемой смеси подвижной фазой в сэндвич-камере, включающей разделяющую хроматографическую пластинку и сухую контрпластинку, которая не касается подвижной фазы. В качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, сорбционный слой которой характеризуется большей сорбционной емкостью по сравнению с разделяющей пластинкой. Этого достигают одним из двух способов: в качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, содержащую сорбент, идентичный сорбенту разделяющей пластинки и характеризующийся большей толщиной сорбционного слоя, или же в качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, содержащую сорбент, отличный от сорбента разделяющей пластинки и характеризующийся большей удельной сорбционной емкостью. Техническим результатом изобретения является существенное увеличение величин подвижностей, эффективности разделения и других хроматографических характеристик. 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 пр., 1 ил.

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (TCX) и может быть использовано в аналитической химии и в физической химии. Сэндвич-камера с контрпластинкой для TCX содержит разделяющую хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке и контрпластинку - хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке. Обе пластинки расположены параллельно, их адсорбционные слои обращены друг к другу. Для фиксации конструкции используют зажимы, скрепляющие пластинки. Расстояние между адсорбционными слоями разделяющей и контрпластинки - менее 0,3 мм, а разделяющая пластинка сдвинута относительно контрпластинки на 3-10 мм. Для регулирования расстояния между адсорбционными слоями используют ограничитель П-образной формы. Линейные части ограничителя могут быть изготовлены из кварцевых капилляров диаметром 0,1-0,3 мм. В качестве разделяющей пластинки и/или контрпластинки используют пластинки не только на стеклянной, но и на гибкой алюминиевой или полимерной подложке, расположенные на дополнительных стеклянных пластинках, размеры которых превышают с одной или с четырех сторон размеры используемых хроматографических пластинок на 10-40 мм. По крайней мере, одна из дополнительных пластинок имеет на одной из сторон выступы для обеспечения ограничения контакта между подвижной фазой и разделяющей пластинкой. Хроматографичсская контрпластинка и дополнительная пластинка могут иметь сквозные прорези для контроля движения подвижной фазы по разделяющей пластинке и разделения исследуемой смеси. Сквозные прорези представляют собой линейные прорези, ширина которых не превышает 3 мм или круговые прорези с диаметром не более 5 мм. Техническим результатом изобретения является существенное увеличение эффективности и других хроматографических характеристик разделения. 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

Изобретение относится к области хроматографического анализа веществ и позволяет осуществить анализ органических веществ. Способ хроматографического анализа органических веществ включает растворение исследуемого органического вещества в летучем растворителе с получением раствора пробы, последующее нанесение капли раствора пробы на хроматографическую пластину со слоем сорбента, при этом в качестве растворителя выбирают вещество, не вступающее в химическое взаимодействие с пробой и сорбентом, последующий качественный и количественный анализ проявившихся колец. Причем качественный анализ осуществляют по отношению к эталонному веществу/группе веществ, наносимому на пластину в тех же условиях, что и исследуемая проба, а количественный анализ осуществляют по весу или площади кольца, соответствующего конкретному веществу/группе веществ. Техническим результатом является упрощение способа хроматографического анализа органических веществ, сокращение времени, необходимого для анализа. 2 ил.
Наверх