Дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-a] бензимидазола и фармацевтическая композиция на его основе

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармации, и касается применения дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола при производстве лекарственного средства, обладающего противоишемическими, гемореологическими и антирадикальными свойствами, а также фармацевтической композиции, содержащей указанный активный компонент и обладающей указанными выше свойствами. Средство обладает высокой и не обладает выраженными побочными эффектами. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 18 табл., 1 ил.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии, фармакологии и технологии лекарственных форм, и направлено на создание лекарственного препарата с противоишемическими, гемореологическими и антирадикальными свойствами.

Известно, что при ишемии ограничивается поступление кислорода и запускается каскад метаболических процессов, в которые вовлечена генерация свободных радикалов кислорода и азота (S.Love. Oxidative stress in brain ischemia. // Brain Pathology. - 1999. - Vol.9. - P.119-131), играющих ключевую роль при ишемических и, в особенности, реперфузионных поражениях (M.Fujimura, T.Tominaga, P.H.Chan. Neuroprotective effect of antioxidant in ischemic brain injury. // Neurocritical Care. - 2005. - Vol.2, №1. - P.59-66).

Одним из наиболее перспективных направлений фармакологической коррекции поражений мозга является применение нейропротекторов с разными механизмами действия, таких как «ловушки» свободных радикалов (СР), ингибиторы NO-синтазы и селенорганичекие соединения (Е.И.Гусев, В.И.Скворцова. Ишемия головного мозга. // - М.: Медицина, 2001). При этом, помимо использования для монотерапии, препараты, элиминирующие свободные радикалы, могут быть полезны в комбинации с другими терапевтическими подходами, в особенности, со средствами, восстанавливающими нарушенный кровоток, когда реперфузия вызывает массированное увеличение продукции СР (I.Margaill, M.Plotkine, D.Lerrouet. Antioxidant strategies in the treatment of stroke. // Free Rad. Biol. Med. - 2005. - Vol.39, №4. - 429-443).

Как правило, в лечении ишемических поражений используется сочетание нескольких препаратов, влияющих на основные патогенетические звенья ишемии. Поэтому в качестве препаратов сравнения при изучении противоишемических свойств был выбран кавинтон, нейропротективное действие которого опосредовано его сосудистыми и гемореологическими эффектами (Г.Н.Авакян, А.А.Никонов, Е.И.Чуканова. Кавинтон в эксперименте и клинической практике: Методические рекомендации. - М.: Медицина, 1998. - 55 с.), при исследовании антирадикальных и мембранопротекторных свойств - препарат мексидол (соль эмоксипина и янтарной кислоты), для которого характерно антирадикальное и противогипоксическое действие и который эффективен при острых и хронических нарушениях мозгового кровообращения (Т.А.Воронина. Отечественный препарат нового поколения мексидол, основные эффекты, механизм действия, применение. Изд-во НИИ Фармакологии PAMH. - M. - 2003. - 20 c.), а при исследовании гемореологических свойств - препарат пентоксифиллин, оказывающий влияние на вязкостные характеристики крови (H.Flint, M.A.Cotter, N.E.Cameron. Pentoxifylline effects on nerve conduction velocity and blood flow in diabetic rats. // Int. J. Exp. Diabetes. Res. - 2000. - Vol., №1. - P.49-58) и эталонный антиагрегант - ацетилсалициловая кислота, широко используемая в клинической практике (В.А.Алмазов, B.C.Гуревич, Л.В.Шатилина и др. Роль гиперпероксидации липидов в нарушении структурой организации тромбоцитарных мембран. // Бюллетень эксперим. биологии и медицины. - 1992. - №9. - С.265-267).

Техническим результатом изобретения является создание средства, обладающего более высокой противоишемической, гемореологической и антирадикальной активностью.

Технический результат достигается дигидробромидом 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола формулы I

Известно, что дигидробромид 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтил-аминоэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола оказывает церебропротекторное действие при радиационных поражениях (Патент РФ №2238938, C07D 235/04, 2004 г.).

Способ получения дигидробромида 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола заключается в конденсации 1-диэтиламиноэтил-2-аминобензимидазола с 3,4-диметоксифенацилбромидом, последующей циклизации образующегося в результате конденсации бромида 1-диэтиламиноэтил-3-(3,4-диметоксифенацил)-2-аминобензимидазолия в 48%-ной бромистоводородной кислоте (т.кип. 127°С), сопровождающейся деметилированием метоксигрупп и образованием искомого дигидробромида 2-(3,4-дигидроксифенил)замещенного имидазо[1,2-а]бензимидазола (аналогию см. Хим.-фарм. журнал, 2006 г., т.40, №10, с.3-10).

Ниже приведен пример получения соединения I.

Пример. Дигидробромид 2-(3,4-диоксифенил)-9-этиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола (I).

В раствор 2,32 г (10 ммоль) 2-амино-1-диэтиламиноэтилбензимидазола в 25 мл ацетона вносят 2,6 г (10 ммоль) 3,4-диметоксифенацилбромида. Выпавший осадок бромида 2-амино-1-(2-диэтиламиноэтил)-3-(3,4-диметоксифенацил)бензимидазолия отфильтровывают, промывают ацетоном. Выход 4,6 г (93,5%). Т.пл. 182°С (разложение, из спирта). Найдено, %: C 56,2; H 6,4; Br 16,4; N 11,3. C₂₃H₃₀N₄O₃·HBr. Вычислено, %: C 56,2; H 6,4; Br 16,3; N 11,4. ИК-спектр (вазелиновое масло): 1685 см^-1 (C=O).

Кипятят 4 г (~8 ммоль) полученного бромида в 160 мл конц. HBr (т.кип.127°С) до полного протекания реакции (контроль - ТСХ: исчезновение пятна исходного имина и промежуточно образующегося 2-(3,4-диметоксифенил)замещенного имидазо[1,2-а]бензимидазола). По охлаждении осадок искомого дигидробромида отфильтровывают, промывают ацетоном. Выход 4,1 г (96%). Кристаллизуется соль из 80%-ного водного спирта в виде белоснежных волокнистых кристаллов, которые после высушивания при 110-120°С имеют т.пл. 289-290°С (разложение). Кристаллогидрат с 1 молекулой воды плавится при 180°С. В ИК-спектре полученного дигидробромида отсутствует полоса поглощения карбонильной группы, присутствующая в ИК-спектре четвертичной соли. Найдено, %: C 47,6; H 5,3; Br 30,0; N 10,7. C₂₁H₂₄N₄O₂·2HBr. Вычислено, %: C 47,9; H 5,0; Br 30,4; N 10,7.

Фармакологические свойства заявленного соединения I.

Данное соединение (I) проявляет противоишемические и гемореологические свойства, обладает широким спектром антирадикальной активности.

Исследование противоишемической активности соединения I in vivo (модель 4-сосудистой перевязки артерий мозга с реперфузией у крыс)

Материалы и методы

Опыты выполнены на 40 неинбредных крысах обоего пола массой 180-230 г, которых содержали в условиях вивария с естественным световым режимом на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТ Р50258-92) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997), а также правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ. Забой животных проводили согласно требованиям, изложенным в «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1989).

Соединение I (5 мг/кг) и препарат сравнения кавинтон (5 мг/кг) вводили однократно внутрибрюшинно за 10 мин перед окклюзией каротидных артерий. Для исследования было сформировано 3 группы: 1) контроль - ложнооперированные крысы; 2) ишемия; 3) животные с ишемией, которым за 10 мин до окклюзии вводили исследуемое вещество.

Тотальную ишемию головного мозга с последующей реперфузией моделировали по методу (C.Bromont, C.Marie, J.Bralet. Increased lipid peroxidation in vulnerable brain regions after transient forebrain ischaemia in rats. // Stroke. - 1989. - Vol.20, №7. - P.918-924). Первоначально производили термокоагуляцию вертебробазилярных артерий. Через 4 сут после восстановления животных на каротидные артерии накладывали окклюзоры без пережатия. Все этапы операции проводили под наркозом (калипсол 80-100 мг/кг, в/бр). На следующие сутки после второй операции моделировали тотальную ишемию головного мозга пережатием каротидных артерий окклюзорами в течение 30 мин. Реперфузия достигалась снятием окллюзоров, восстановление кровотока контролировали визуально.

В восстановительном периоде оценивали показатели двигательной активности (актометр Ugo Basile, Италия) в 1-е и 2-е сут реперфузии. В течение первых 7 сут оценивали неврологический статус животных и динамометрию передних лап, которую определяли по усилию удержания кольца динамометра при рефлексе хватания передними лапами, как описано (В.В.Дрозд, В.А.Косолапов, О.В.Островский, А.А.Спасов. Динамика восстановительного периода у крыс, перенесших тотальную ишемию головного мозга. // Бюлл. эксперим. биол. мед. - 2000. - Т.130, №10. - С.475-477.). Неврологический статус оценивали по 3-х балльной шкале с учетом нормальных (2 балла), сниженных (1 балл) или отсутствующих (0 баллов) рефлексов (роговичного, отдергивания хвоста, задней лапы, переворачивания, хватания передними лапами и вздрагивания на звуковой раздражитель). На 7-е сут реперфузии исследовали запоминание аверсивного стимула в тесте условной реакции пассивного избегания (УРПИ), обучение проводили предварительно за 1 час до начала ишемии. При наблюдении за животными позже 7 сут динамики отмечено не было.

Смертность в ходе эксперимента колебалась между 25 и 35%. Гибель после термокоагуляции вертебробазилярных артерий составляла не более 10%. После 2-го этапа - наложения окклюзора на каротидные артерии гибели животных не наблюдали.

Статистическую обработку данных проводили в пакете Statistica 6.0. па (StatSoft, США) с использованием дисперсионного анализа множественных сравнений и критерия Шеффе (p≤0,05 или p≤0,01).

Результаты.

При изучении влияния соединения I на восстановление крыс в реперфузионном периоде после ишемии было установлено, что соединение I превосходило препарат сравнения кавинтон по активности, более выражено восстанавливая нарушенную двигательную активность в 1-е и 2-е сут реперфузии (Таблица 1). Соединение I достоверно улучшало неврологический статус и вызывало его полную нормализацию на 7-е сут наблюдений (Таблица 2), а также практически полное восстановление мышечной силы (Таблица 3). Кавинтон не приводил к полной нормализации неврологического статуса и динамометрии - на 7-е сут дефицит составлял 34% и 23,5% соответственно. Соединение I нормализовало запоминание обучающего задания в тесте УРПИ у животных, перенесших тотальную ишемию мозга, сокращая дефицит памяти до 15,3% (p<0,01) (Таблица 4). Препарат сравнения также оказывал некоторое корректирующее влияние на памятный след, однако дефицит памяти под влиянием кавинтона составлял 50,3%.

Таким образом, соединение I превосходит препараты сравнения дибунол и кавинтон по противоишемической активности.

Исследование антирадикальной активности соединения I in vitro

Материалы и методы

В качестве препарата сравнения использовали мексидол (НИИ фармакологии РАМН, Россия). Исследование процессов хемилюминесценции проводили на хемилюминометре «Хемилюминомер-03» (Уфа, Россия), связанном интерфейсом с компьютером.

Способность веществ взаимодействовать с липидными радикалами LOO^• исследовали на модели Fe²⁺-индуцированной хемилюминесценции липидов (P.P.Фархутдинов, В.А.Лиховских. Хемилюминесцентные методы исследования свободно-радикального окисления в биологии и медицине. // - Уфа, 1995. - 110 с.). Реакционная смесь объемом 20 мл содержала липиды куриного желтка, содержащего липопротеиновые комплексы. Содержание белка определяли с помощью кумасси синего и доводили до 1 мг на мл дальнейшим разведением. Инициирование ПОЛ осуществляли FeSO₄ (чда, Украина) в конечной концентрации 2,5 мМ при интенсивном перемешивании и t 37°C, после чего в течение 10 мин измеряли кинетику хемилюминесценции.

Для измерения ХЛ, сопровождающей аутоокисление люминола с генерацией активных форм кислорода (АФК) (С.Г.Семешко, P.P.Фархутдинов. Общая антиоксидантная активность слезной жидкости. // Клин. лаб. диаг. - 2002. - №24. - С.33-34), в кювету хемилюминометра добавляли фосфатный буфер pH 7,45, содержащий 1 мкМ люминола (Serva, Германия) и 5 мМ цитрата натрия (ЧД, Россия) в конечном объеме 20 мл. Инициирование ХЛ осуществляли FeSO₄ в конечной концентрации 2,5 мМ при интенсивном перемешивании и в течение 5 мин измеряли кинетику ХЛ.

Для оценки способности веществ инактивировать супероксидный анион-радикал использовали непрямой метод (В.А.Костюк, А.И.Потапович, Ж.В.Ковалева. Простой и чувствительный метод определения активности супероксиддисмутазы, основанный на реакции окисления кверцитина. // Вопр. мед. химии. - 1990. - Т.36, №2. - С.88-91) с применением кверцетина (Sigma, США). Ингибиторную активность соединений регистрировал по торможению падения оптической плотности на спектрофотометре СФ-46 (Ломо, Россия) при λ 406 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм. Степень ингибирования реакции рассчитавали: % инг=100-(ΔDвещ/ΔDкверц×100), где ΔDвещ - изменение оптической плотности за 10 мин в опытной пробе, содержащей вещество; ΔDкверц - изменение оптической плотности за 10 мин в контрольной пробе, не содержащей вещества. Также применяли прямой хемилюминесцентный метод ксантин-ксантиноксидаза индуцированной люцигенин-зависимой ХЛ (B.Gunaydin, A.T.Demiryurek. Interaction of lidocaine with reactive oxygen and nitrogen species. // Eur. J. Anaesthesiol. - 2001. - Vol.18, №12 - P.816-822). Генерацию супероксидного радикала вызывали внесением 0,25 мл ксантиноксидазы (Sigma, США) (0,25 U/ml) в пробу, содержащую 10 мл фосфатного буфера pH 7,45, содержащего 5 мкМ люцигенина (Fluka, Швейцария) и 0,5 мл 1 мМ ксантина (Sigma, США). Кинетику хемилюминисценции оценивали в течение 5 мин при интенсивном перемешивании и t 37°C.

Способность веществ к перехвату и инактивации пероксильного радикала (ROO^•) оценивали по методу (Г.И.Клебанов, О.Б.Любицкий, О.В.Васильева и др. // Антиоксидантные свойства производных 3-оксипиридина: мексидола, эмоксипина и проксипина. // Вопр. мед. химии. - 2001. - Т.47. - С.288-300). Инициирование реакции осуществляли водорастворимым 2,2'-азобис(2-метилпропионамидин)дигидрохлоридом (АБАП) (Fluka, Швейцария), который при t 37°C разлагается, образуя пероксильные радикалы. В пробу, содержащую 2,5 мкМ люминола (Serva, Германия) в фосфатном буфере pH 7,4 при постоянном перемешивании и t 37°C, вносили 50 мМ АБАП и измеряли кинетику ХЛ в течение 30 мин.

Изучаемые вещества вводили в среду инкубации за 1 мин перед инициированием реакции в широком диапазоне концентраций.

Результаты оценивали статистически в программе Statistica 6.0 с использованием t-критерия Стьюдента с поправкой Бонферони (t). Отличия от контроля во всех группах считали статистически значимыми при Р≤0,05. Для сравнительной оценки эффективности веществ рассчитывали величины ИК₅₀ (концентрация вещества, ингибирующая реакцию на 50%). Расчет ИК₅₀ проводили с помощью простого линейного регрессионного анализа, реализованного во встроенном пакете анализа программы Microsoft Excel 2000 с расчетом парного коэффициента корреляции R². Достоверность регрессии оценивали с помощью двухфакторного дисперсионного анализа в программе «Statistica 6.0» (Stat Soft, США).

Результаты

Исследуемое вещество I дозозависимо подавляло образование липопероксильных радикалов (Таблица 5) и по величине ИК₅₀ почти на два порядка превосходило мексидол по активности. Соединение I почти в 15 раз превосходило мексидол по способности инактивировать активные формы кислорода в реакции Fe²⁺-индуцированной хемилюминесценции в присутствии люминола (Таблица 6). У соединения I отмечалась выраженная ингибирующая активность в отношении супероксидного радикала как в реакции с кверцетином (Таблица 7), так и при исследовании хемилюминесценции в системе ксантин-ксантиноксидаза в присутствии люцигенина (Таблица 8). Мексидол по способности к перехвату супероксида уступал соединению I более чем на порядок. Исследуемое соединение I дозозависимо угнетало образование пероксильных радикалов (Таблица 9), регистрируемых с помощью хемилюминесценции, сопровождающей термическое разложение АБАП, почти в десять раз превосходя мексидол по величине ИК₅₀.

Таким образом, соединение I превосходило мексидол более чем в десять раз по способности перехватывать липопероксильный, супероксидный и другие активные формы кислорода и АБАП-радикалы.

Исследование гемореологических свойств соединения I in vitro и in vivo

Материалы и методы

Антиагрегантную активность веществ исследовали на двухканальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов/счетчике (модель 220 LA) (НПФ "Биола", Москва) по методу (G.V.R.Born. Aggregation of blood platelets by adenosine diphosphate and its reversal. // Nature. - 1962. - Vol.194. - P.927-929) в модификации (З.А.Габбасов, Е.Г.Попов, И.Ю.Гаврилов и др. Новый высокочувствительный метод анализа агрегации тромбоцитов. // Лабораторное дело. - 1989. - №10. - С.15-18). Исследования "in vitro" проводили на богатой тромбоцитами плазме (В.А.Люсов, Ю.Б.Белоусов. Метод графической регистрации агрегации тромбоцитов и изменения ее при ишемической болезни сердца. // Кардиология. - 1971. - №8. - С.459-461). Количество тромбоцитов регистрировали с помощью счетчика тромбоцитов. В качестве индуктора использовали 5 мкМ динатриевую соль АДФ (Reanal, Венгрия). Антиагрегантную активность соединений изучали в диапазоне концентраций от 1×10^-4 до 1×10^-6 М. Уровень агрегации оценивали по величине максимальной амплитуды агрегатограммы. Расчет антиагрегационого действия изучаемых веществ проводили по формуле (А-В)×100/А, где А -уровень агрегации тромбоцитов нативной плазмы, В - уровень агрегации тромбоцитов плазмы после инкубации с исследуемым веществом. Препаратом сравнения служили мексидол и ацетилсалициловая кислота.

Исследование влияния соединения I и препарата сравнения мексидола на агрегацию тромбоцитов "in vivo" проводили в опытах на 30 интактных нелинейных крысах массой 220-260 г.

Соединение I вводили в дозах 30 мг/кг внутрижелудочно в течение 3-х дней, мексидол вводили в эквимолярной дозе. Контрольные животные получали растворитель (дистиллированная вода). Забор крови из брюшной аорты осуществляли под нембуталовым (40 мг/кг) наркозом через 2 часа после введения соединений. Агрегацию тромбоцитов изучали по описанной выше методике с расчетом степени максимальной агрегации и степени дезагрегации (как разность между максимальной агрегацией тромбоцитов и агрегацией на 5-й мин), и скорость агрегации тромбоцитов (по величине максимального наклона кривой), выраженные в процентах к контролю, при этом степень агрегации тромбоцитов в контроле принимали за 100%. Подсчет количества тромбоцитов проводили на счетчике модели 220LA (НПФ "Биола", Москва) (З.А.Габбасов и др., 1989).

Измерение вязкости крови проводили на реологическом анализаторе крови АКР-2 (Россия) (Н.А.Добровольский, Ю.М.Лопухин, А.С.Парфенов и др. Анализатор вязкости крови. // Реологические исследования в медицине: Сб. науч. тр. / М.: НЦХ РАМН, 1998. - С.45-51) при нескольких скоростях сдвига (от 200 до 5 с^-1), моделирующих различную интенсивность кровотока в сосудах. При этом вязкость в области малых скоростей сдвига служит характеристикой агрегации эритроцитов, а в области более высоких скоростей сдвига - показателем их деформируемости. Все исследуемые образцы приводились к единому гематокриту 45 у.е., измеряемому на микрогемоцентрифуге МГЦ-8 (8000 об/мин, 2 мин). Исследования изучаемых соединений in vitro проводили в концентрациях от 1×10^-4 до 1×10^-6 М. Соединение I и препарат сравнения пентоксифиллин растворяли в физиологическом растворе, непосредственно перед исследованием, и 20 мкл раствора добавляли к исследуемой пробе перед термостатированием. В контрольные образцы вносили эквивалентное количество физиологического раствора (37°С). Кровь забирали из локтевой вены здоровых доноров и стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 1:9.

Изучение влияния соединения I на реологические свойства крови при реперфузионном поражении головного мозга проводили на 40 нелинейных крысах-самцах массой 240-280 г, наркотизированных хлоралгидратом в дозе 400 мг/кг. Измерение вязкости крови проводили как описано выше. Глобальную ишемию головного мозга воспроизводили билатеральной окклюзией общих сонной артерий в сочетании с контролируемой гипотензией (Методические указания по экспериментальному изучению перпаратов для лечения нарушений мозгового кровообращения и мигрени: Метод, рекомендации. / Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ; Сост.: Р.С.Мирзоян, А.С.Саратиков, М.Б.Плотников и др. - М., 2000. - 398 с.). Предварительно артериальное давление снижалось под влиянием забора крови из яремных вен до 50 мм рт.ст. (полученные образцы использовались для оценки исходных реологических показателей). Соединение I в дозе 10 мг/кг и пентоксифиллин в дозе 8 мг/кг вводили перорально за 30 мин до ишемии. Контрольным группам (ишемия - контроль и ложнооперированные животные) вводили физиологический раствор в аналогичном объеме. В качестве нормального контроля использовалась группа ложнооперированных животных. Через 1 час ишемии производили снятие лигатур с сонных артерий, что обеспечивало реперфузию головного мозга. Спустя час после реперфузии кровь забирали из нижней полой вены. Кровь стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 1:9.

Для изучения влияния веществ на оксидативный гемолиз эритроцитов забор крови производили из ушной вены кролика в пробирки с 3,8% раствором натрия цитрата в соотношении 1:9. Эритроциты трехкратно отмывали трис-NaCl-буфером pH 7,4, Суспензия эритроцитов в буфере приводилась к единому гематокриту 45 у.е. Соединение I и препарат сравнения мексидол вводили в эритроцитарную суспензию непосредственно перед термостатированием в дозах 10^-4, 10^-5 и 10^-6 М. За основу был выбран метод (M.Tsuchiya, A.Asada, E.Kasahara et al. Antioxidant protection of propofol and its recycling in erythrocyte membranes. // Am. J. Resp. Crit. Care Med. - 2002. - Vol.165. - P.54-60) в нашей модификации. Гемолиз эритроцитов индуцировали 50 мМ водорастворимым 2,2'-азобис(2-метилпропионамидин)дигидрохлоридом (АБАП) (Fluka, Швейцария), который при t 37°C разлагается, образуя пероксильные радикалы. После инкубирования с разными интервалами времени образы центрифугировали при 1000 об/мин на центрифуге ОПН-3 (Россия) 10 мин и в супернатанте измеряли поглощение при 540 нм на СФ-46 (Ломо, Россия). Уровень гемолиза оценивали в процентах по отношению к абсолютному гемолизу эритроцитов в дистиллированной воде.

Статистическую обработку результатов экспериментов производили в пакете прикладных программ «Statistika 6.0» с использованием парного критерия Стьюдента при предварительной проверке выборки на нормальность распределения или критерия Манна-Уитни.

Результаты.

При изучении влияния соединения I и препаратов сравнения мексидола и ацетилсалициловой кислоты на агрегацию тромбоцитов in vitro, индуцированную 5 мкМ АДФ, было установлено (Таблица 10), что соединение I, ЭК₅₀ которого составила 3,30×10^-4 М, превосходило препараты сравнения по активности.

Было установлено, что соединение I обладает способностью дозозависимо ингибировать АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов и в условиях целого организма (Таблица 11). Оно уменьшало как степень максимальной агрегации тромбоцитов, так и скорость образования агрегатов, а также проявляло дезагрегирующие свойства, практически не меняя количество тромбоцитов, что свидетельствует о том, что изменение способности тромбоцитов к агрегации связано не с изменением их числа, а с возникшей под действием соединения I гипореактивностью кровяных пластинок. Мексидол уступал соединению I как по влиянию на степень максимальной агрегации тромбоцитов и скорость образования агрегатов, так и по влиянию на дезагрегацию.

Соединение I дозозависимо снижало вязкость крови доноров при всех скоростях сдвига (Таблица 12). Так при скорости сдвига 200 сПз соединение I снижало вязкость крови на 4,24%, а пентоксифиллин - на 3,15%, что свидетельствует о влиянии соединений на пластичность мембраны эритроцитов. При снижении концентрации веществ в пробе при указанной скорости сдвига эффективность соединения I снижается и составляет 1,32%, а пентоксифиллин практически не оказывает влияния на вязкость крови. Со снижением скорости сдвига влияние соединения I на данный параметр увеличивается, являясь достоверным в концентрациях вещества 1×10^-4 и

1×10^-5 М. Препарат сравнения, в указанных концентрациях, оказывается практически не эффективным.

Таким образом, наибольший эффект соединения I на вязкость крови доноров проявляется при низких скоростях сдвига, что подтверждается статистически достоверными изменениями индекса агрегации.

Соединение I также достоверно снижало вязкость крови у крыс с экспериментальной ишемией головного мозга особенно при низких скоростях сдвига (Таблица 13) (на 30% по сравнению с ишемизированной группой животных), и его эффект был сравним с пентоксифиллином.

При инкубировании в течение 2 ч в присутствии гидрофильного радикального инициатора АБАП можно было наблюдать существенный гемолиз эритроцитов по сравнению с контролем, который составил 81% (Таблица 14) (p<0,05) по сравнению с 29% в контроле с буфером. Соединение I в максимальной дозе 100 мкМ в суспензию эритроцитов приводило к дозозависимому достоверному снижению гемолиза до 39,3%. Мексидол оказался менее эффективен, чем соединение I в соответствующих концентрациях.

Таблица 1
Влияние соединения I (5 мг/кг) и кавинтона (5 мг/кг) на спонтанную двигательную активность крыс в раннем восстановительном периоде после четырехсосудистой перевязки артерий мозга (M±m)
Группы животных	n	Первые сутки, у.е.	% от контроля	Вторые сутки, у.е.	% от контроля
Контроль (Ложнооперированные)	9	121,3±9,32	-	107,2±8,54	-
Ишемия	9	16,1±3,01*	-86,7	18,7±3,95*	-82,6
Ишемия + соединение I	9	75,8±7,72*+	-37,5	58,5±3,58*+	-45,4
Контроль (Ложнооперированные)	9	111,9±44,80	-	75,7±25,99	-
Ишемия	9	44,0±27,00	-60.7	25,2±13,63	-66,7
Ишемия + Кавинтон	9	45,6±13,00	-59,2	21,5±15,72	-71,6
n - число животных в эксперименте
* - данные статистически значимы по отношению к Контролю (p<0,01)
+ - данные статистически значимы по отношению к Ишемии (p<0,01)

Таблица 2
Влияние соединения I (5 мг/кг) и кавинтона (5 мг/кг) на неврологический статус (баллы) крыс в раннем восстановительном периоде после четырехсосудистой перевязки артерий мозга (М±m)
Группы	Сутки после ишемии
1	2	3	5	7
Контроль (Ложнооперированные)	12,0±0,00	12,0±0,00	12,0±0,00	12,0±0,00	12,0±0,00
Ишемия	5,3±0,37*	5,0±0,24*	4,6±0,48*	6,5±0,22*	7,4±0,24*
Ишемия + соединение I	9,5±0,22*+	10,0±0,37*+#	9,7±0,49*+	11,4±0,24+#	11,6±0,24+
Контроль (Ложнооперированные)	12,0±0,00	12,0±0,00	12,0±0,00	12,0±0,00	12,0±0,00
Ишемия	5,6±0,50*	5,8±0,40*	5,6±0,50*	5,8±1,33*	6,5±1,32*
Ишемия + Кавинтон	6,5±0,82*	6,5±0,52*	6,6±0,89*	6,8±0,83*	7,9±0,83*
* - данные статистически значимы по отношению к контролю при p≤0,01
+ - данные статистически значимы по отношению к ишемии при p≤0,01
# - данные статистически значимы по отношению к кавинтону при p≤0,05

Таблица 3
Влияние соединения I (5 мг/кг) и кавинтона (5 мг/кг) на мышечную силу передних лап (граммсилы) крыс в раннем восстановительном периоде после четырехсосудистой перевязки артерий мозга (М±m)
Группы	Сутки после ишемии
1	2	3	5	7
Контроль (Ложно-оперированные)	391,0±3,32	390,8±3,74	394,0±2,92	392,0±3,39	392,0±2,54
Ишемия	131,1±22,13*	117,7±16,81*	98,6±24,73*	193,3±8,03*	248,0±13,56*
Ишемия + соединение I	343,3±7,60*+#	337,5±8,70*+	344,1±9,86*+#	386,0±4,00+#	386,0±5,10+#
Контроль (Ложнооперированные)	392,5±4,23	393,5±8,34	391,2±6,42	390,4±14,2 3	392,5±9,52
Ишемия	218,2±20,88*	221,8±20,49*	170,1±33,32*	160,2±30,5*	211,7±44,23
Ишемия + Кавинтон	275,5±8,9+	279,1±11,4	250,3±12,25+	244,0±14,35	272,1±43,29
* - данные статистически значимы по отношению к контролю при p≤0,05
+ данные статистически значимы по отношению к ишемии при p≤0,05
# - данные статистически значимы по отношению к кавинтону при p≤0,05

Таблица 4
Влияние соединения I (5 мг/кг) и кавинтона (5 мг/кг) на запоминание аверсивного стимула крысами в условной реакции пассивного избегания на седьмой день после четырехсосудистой перевязки артерий мозга (М±m)
Группа животных	n	Латентное время, с	% от контроля
Контроль (Ложнооперированные)	5	176,0±4,00	-
Ишемия	5	15,6±5,08*	-91,1
Ишемия + соединение I	5	149,0±13,27+	-15,3
Контроль (Ложнооперированные)	9	180,0±0,00	-
Ишемия	9	19,1±5,48*	-89,44
Кавинтон	9	89,4±27,2*	-50,33
n - число животных в эксперименте
* - данные статистически значимы по отношению к контролю при p≤0,01
+ - данные статистически значимы по отношению к ишемии при p≤0,01

Таблица 6
Влияние соединения I и мексидола на образование активных форм кислорода при люминолзависимой хемилюминесценции (М±m)
Вещество	С, мкМ	n	S, отн.ед.	% ингибирования	ИК50, М
Контроль	0,0	4	76,83±1,21	-	-
Соединение I	1,0	3	62,93±2,12*	18,1	4,44×10-6
	5,0	3	37,03±0,77+	51,8	R2=0,99
	10,0	3	24,59±1,47+	67,9	(F=1503,3; P=0,0164)
Контроль	0,0	3	77,06±4,21	-	-
	10,0	3	76,70±0,00	0,5	1,70×10-4
Мексидол	50,0	3	61,52±0,87*	20,2	R2=0,93
	100,0	3	43,82±1,08+	43,1	(F=13,05; Р=0,1719)
Примечание: n - количество выполненных повторов на каждое исследование, С - концентрация веществ в мкМ, S - суммарная светимость; * - p≤0,05 по отношению к контролю, + - p≤0,001 по отношению к контролю.

Таблица 7
Влияние соединения I и мексидола веществ на генерацию супероксидного радикала в реакции окисления кверцетина
Вещество	С, мкМ	% ингибирования	ИК50, М
Соединение I	1,0	3,0	2,48×10-5
	5,0	34,2	R2=0,96
	10,0	72,1
Мексидол	1,0	25,8	6,91×10-4
	10,0	26,6	R2=0,96
	100,0	41,7

Таблица 8
Влияние соединения I и мексидола на генерацию супероксидного радикала в системе ксантин-ксантиноксидаза при люцигенин-зависимой хемилюминесценции (М±m)
Вещество	С, мкМ	S, отн.ед.	% инг.	ИК50, М
Контроль	0,0	61,62±3,80	-	-
Соединение I	0,5	42,15±9,20	31,6	9,60×10-7
	1,0	26,79±2,98+	56,5	R2=0,97
	5,0	8,44±0,40+	86,3	(F=32,13; P=0,1111)
Контроль	0,0	80,81±7,33	-	-
	10,0	93,32±0,00	-15,5	1,67×10-4
Мексидол	50,0	57,72±1,93	28,6	R2=0,99
	500,0	22,99±1,56*	71,5	(F=88,37; P=0,0694)
Примечание: С, мкМ - концентрация веществ, S - суммарная светимость, * - p<0,05 по отношениею к контролю, + - p<0,001 по отношению к контролю

Таблица 9
Влияние соединения I и мексидола на образование пероксильного радикала при АБАП-индуцированной хемилюминесценции (М±m)
Вещество	С, мкМ	n	S, отн.ед.	% ингибирования	ИК50, М
Контроль	0,0	4	612,09±23,96	-	-
	0,1	3	457,37±4,45*	25,2	2,00×10-7
Соединение I	0,25	3	295,02±2,39*	51,8	R2=0,96
	0,5	3	58,67±10,92	90,4	(F=28,04; Р=0,1188)
Контроль	0,0	3	698,28±42,64	-	-
	1,0	3	396,37±16,78*	43,2	1,38×10-6
Мексидол	5,0	3	158,64±68,18*	77,3	R2=0,98
	10,0	3	105,19±15,93*	84,9	(F=63,88; Р=0,0792)
Примечание: n - количество выполненных повторов на каждое исследование, С - концентрация веществ в мкМ, S - суммарная светимость; * - p≤0,05 по отношению к контролю.

Таблица 10
Влияние соединения I, мексидола и ацетилсалициловой кислоты на агрегацию тромбоцитов in vitro, индуцированную 5 мкМ АДФ
№	Вещества	Антиагрегантная активность, ЭК50 (М)
1.	Соединение I	3,30×10-4
2.	Мексидол	1,40×10-3
3.	Ацетилсалициловая кислота	7,27×10-4

Таблица 11
Влияние соединения I и мексидола (3-дневное пероральное введение в дозе 60 мМ) на агрегацию тромбоцитов (индуцированную 5 мкМ АДФ) и количество тромбоцитов (М±m)
№	Изучаемые вещества	Степень агрегации, отн.ед	Скорость агрегации, отн.ед.	Степень дезагрегации, %	Количество тромбоцитов, 109/л
1.	Контроль	84,05±8,14	67,25±11,00	0,95±0,95	359,0±26,70
2.	Соединение I	10,44±2,11*#	13,07±2,64*#	15,59±6,56*	342,5±17,50
3.	Мексидол	56,10±4,05*	28,65±3,06*	14,85±12,00	330,0±36,00
Примечание: n - количество исследований
* - данные статистически значимы по отношению к контролю (p<0,05)
# - данные статистически значимы по отношению к мексидолу (p<0,05)

Таблица 12
Влияние соединения I и пентоксифиллина (%) на вязкость крови доноров в экспериментах in vitro (M±m).
Соединение I	С, М	Скорость сдвига	Индекс агрегации
200 с-1	40 с-1	10 с-1
Соединение I	1×10-4	-4,24±1,53	-9,72±1,74*	-10,93±1,33*	-6,69±1,65*
	1×10-5	-1,32±0,62	-10,17±1,52*	-11,54±1,05*	-7,37±1,94*
1×10-6	0,00±0,00	-1,54±0,78	-1,75±0,74	-0,48±0,54
Пентоксифиллин	1×10-4	-3,15±0,92	-10,30±0,93*	-10,47±1,07*	-7,56±0,63*
	1×10-5	0,00±0,00	-0,01±1,17	-0,52±0,52	-0,46±1,32
1×10-6	0,00±0,00	-1,17±3,50	0,24±0,57	-0,24±0,57
* - данные статистически значимы (t) по отношению к контролю (p<0,05)

Таблица 13
Влияние соединения I (10 мг/кг)и пентоксифиллина (8 мг/кг) (при пероральном введении) на вязкость крови (сПз) крыс с ишемией головного мозга при различных скоростях сдвига (М±m)
Группы животных	Скорость сдвига
200 с-1	100 с-1	20 с-1	5 с-1
Контроль (Ложнооперированные)	3,44±0,09	3,62±0,09	4,72±0,15	6,62±0,4
Ишемия	4,09±0,22*	4,54±0,24*	6,31±0,33*	10,27±0,63*
Ишемия + соединение I	4,08±0,28	4,23±0,27	5,13±0,39♣	6,45±0,57♣
Ишемия + пентоксифиллин	3,76±0,14	3,96±0,17	4,84±0,28♣	6,28±0,62♣
* - данные статистически значимы (критерий Манна-Уитни) по отношению к контролю (p<0,05);
♣ - данные статистически значимы (критерий Манна-Уитни) по отношению к ишемии (p<0,05)

Таблица 14
Влияние соединения I и мексидола на АБАП-индуцированный окислительный гемолиз эритроцитов кролика in vitro (M±m).
Вещества	С, М	Гемолиз, %	Статистическая значимость, Р
Контроль (физ. раствор)	-	29,78±0,65	-
АБАП	-	81,87±5,70	0,01
АБАП + соединение I	1·10-4	39,29±4,03	0,01
	1·10-5	46,61±5,38	0,02
1·10-6	60,81±3,44	0,05
АБАП + Мексидол	1·10-4	55,28±0,60	0,04
	1·10-5	54,08±2,99	0,03
1·10-6	74,55±13,60	0,68

Создание фармацевтической композиции для получения таблеток

Разработана фармацевтическая композиция, содержащая в качестве действующего вещества - дигидробромид 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола и в качестве вспомогательных веществ коллидон, лактозу, поливинилпирролидон, тальк, кальция стеарат и натрия метабисульфит. Исследованы композиции при следующем соотношении ингредиентов, вес (г):

1. Дигидробромид 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо [1,2-а]бензимидазола	- или 0,05 г, или 0,20 г, или 1,0 г
2. Коллидона	- 0,05 г
3. Лактозы	- 0,062 г
4. Поливинилпирролидона	- 0,02 г
5. Талька	- 0,01 г
6. Кальция стеарата	- 0,004 г
7. Натрия метабисульфита	- 0,004 г

Для получения фармацевтической композиции используют метод прямого прессования смеси лекарственного вещества и вспомогательных веществ. Для этого отвешивают все ингредиенты из расчета на 100 кг таблеточной массы и просеивают через сито с диаметром отверстий 0,25 мм, после чего смешивают в смесителе в следующей последовательности: лактоза, натрия метабисульфит, соединение I, поливинилпирролидон низкомолекулярный медицинский, коллидон, тальк и кальция стеарат. Полученную смесь проверяют на однородность смешения: действующего вещества в таблеточной массе должно быть не менее 58,5% и не более 59,0%. При получении положительного результата таблеточную массу прессуют на таблеточном прессе типа РТМ-24М при давлении прессования 120 МПа.

С целью стандартизации таблеток согласно ОСТ 91500.05.001-00 выбраны следующие критерии: описание, подлинность, средняя масса и однородность по массе, тальк, распадаемость, посторонние примеси, микробиологическая чистота и количественное определение соединения I (Таблица 15).

Таблица 15
Результаты анализа таблеток на основе дигидробромида 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола
Описание	Подлинность	Средняя масса, г	Тальк, %	Распадаемость, мин	Посторонние примеси	Количественное определение, г
Таблетки белого цвета диаметром 10±0,3 мм и высотой 4±0,3 мм	УФ-спектр должен совпадать со спектром раствора РСО РУ-185, Х,=268 нм	0,35±5%	не более3%	не более 15 мин	не более 1%	отсутствуют	0,19-0,21

Был разработан состав защитного пленочного покрытия, обеспечивающего стабильность при хранении и растворимость в желудке. Из пленкообразователей, обеспечивающих желудочно-растворимые покрытия, нами апробированы следующие: коллидон-30, плаздон S-630, метилцеллюлоза МЦ-16, а также их комбинации. В качестве фотозащитных добавок использованы: тартразин, метиловый оранжевый, двуокись титана и их комбинации. Нанесение покрытия проводили в дражировочном котле путем распыления растворов пленкообразователей с последующей сушкой при t не больше 60°С до увеличения средней массы таблеток в сухом виде на 5%. Состав покрытий приведен ниже (Таблица 16).

Таблица 16
Состав покрытия таблеток на основе дигидробромида 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо [1,2-а] бензимидазола.
№	Компоненты	Кол.
1.	Коллидон-30	10,0
	Титана диоксид	5,0
	Краситель (тартразин)	0,1
Вода очищенная до	100,0
2.	Плаздон S-630	10,0
	Метилцеллюлоза МЦ-16	1,0
	Краситель (метиловый оранжевый)	0,1
Вода очищенная до	100,0
3.	Коллидон-30	5,0
	Метилцеллюлоза МЦ-16	2,0
	Титана диоксид	5,0
	Краситель (метиловый оранжевый)	0,05
Вода очищенная до	100,0
4.	Метилцеллюлоза МЦ-16	2,0
	Титана диоксид	5,0
	Краситель (метиловый оранжевый)	0,05
Вода очищенная до	100,0
5.	Плаздон S-630	10,0
	Титана диоксид	5,0
	Краситель (тартразин)	0,1
Вода очищенная до	100,0

Качество нанесенных покрытий оценивали по следующим показателям:

1. Внешний вид (равномерность покрытия, качество).

2. Распадаемость (мин, вода 37°С).

3. Фотозащитные свойства (отсутствие изменения цвета после снятия покрытия у таблеток, хранившихся при облучении лампой дневного света 10 Вт в течение 10 суток).

4. Отклонение от средней массы (не более 5%).

Таблица 17 содержит результаты оценки качества покрытий.

Таблица 17
Качество покрытий таблеток на основе дигидробромида 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола.
Наименование	Внешний вид	Распадаемость, мин	Фотозашитные свойства	Отклонение от средней массы
Состав №1	Не соотв.	18	+-	±12%
Состав №2	Не соотв.	15	+-	±9%
Состав №3	Соотв.	22	++	±5%
Состав №4	Соотв.	25	++	±3%
Состав №5	Не соотв.	20	--	±10%

Как следует из таблицы, оптимальными качествами обладает состав №4. Он экономически выгоден, прост в исполнении.

Предлагаемое соотношение действующих, вспомогательных веществ и покрытия является оптимальным, обеспечивает получение качественных таблетированных лекарственных препаратов соединения I и достижение необходимого терапевтического эффекта.

Создание фармацевтической композиции для получения лиофилизированного порошка для инъекций

Разработана фармацевтическая композиция, содержащая в качестве действующего вещества дигидробромида 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола и в качестве вспомогательных веществ поливинилпирролидон и лимонную кислоту. Исследованы композиции при следующем соотношении ингредиентов, вес (г):

1. Дигидробромида 2-(3,4-диоксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола	- или 0,01 г, или 0,1 г, или 2,0 г
2. Поливинилпирролидона	- 0,100 г
3. Лимонной кислоты	- 0,005 г

Изучение биодоступности фармацевтической композиции

Исследование биодоступности фармацевтической композиции соединения I проводили для таблеток с фотозащитным пленочным покрытием в соответствии с «Методическими рекомендациями по доклиническому изучению фармакокинетики лекарственных средств» (А.А.Фирсов, В.П.Жердев и др. Методические указания по проведению доклинических исследований фармакокинетики фармакологических веществ и лекарственных средств. // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ: под общ. ред. Р.У.Хабриева. - 2-изд., перераб. и доп.- М.: ОАО «Издательство «Медицина»», 2005. - С.217-229).

Эксперименты по изучению фармакокинетики субстанции соединения I и ее фармацевтической композиции проводилось на 10 кроликах-самцах породы шиншилла массой 2,7-3,7 кг, содержавшихся в условиях вивария на стандартной диете. Накануне эксперимента кролики голодали в течение 12 часов без ограничения доступа к воде. Таблетки и субстанцию вводили животным внутрижелудочно через резиновый зонд. Субстанцию вводили в аналогичной дозе, содержащейся в таблетированных лекарственных формах. Кровь забирали из ушной вены самотеком перед введением препарата и затем через определенные временные интервалы после введения. Между экспериментами делали двухнедельный перерыв. В качестве стандарта использовали субстанцию в дозе 54 мг/кг. Забор проб крови производили через 0,5; 1; 1,5; 3; 6; 9 и 12 часов после введения.

Содержание соединения I определяли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «Gilson» серии 6000 (Франция) с флуоресцентным детектором на колонке С18 4,6×250 мм, 5 µм. Подвижная фаза составляет смесь ацетонитрила (60%) и ацетатного буфера с pH 5,0 (40%). Длина волны возбуждения 270 нм, длина волны эмиссии 330 и 410 нм. Чувствительность метода составляет для эноксифола 1 µг/мл и для продуктов его окисления 100 nг/мл. Идентификацию исследуемых веществ и расчет их концентрации проводили по методу абсолютных стандартов. Время удерживания для соединения I составило 4,4-4,8 мин, для продукта окисления - 5,8-6,0 мин.

Фармакокинетические параметры рассчитывали методом статистических моментов (В.К.Пиотровский. Метод статистических моментов и интегральное модельнонезависимые параметры фармакокинетики. // Фармакология и токсикология. - 1986. - №5. - т.49. - c.118-127).

Содержание соединения I в крови кроликов при введении субстанции и таблетки с фотозащитным покрытием в дозе 50 мг приведены на чертеже, где по оси абсцисс приведено время (час), по оси ординат - концентрация мкг/мл. Как видно из чертежа, при введении таблетки с фотозащитным покрытием фармакокинетическая кривая практически не отличается от таковой при введении субстанции.

Фармакокинетические параметры субстанции и таблетированной лекарственной формы эноксифола представлены в Таблица 18.

Относительная биодоступность (f отн.) таблетки с фотозащитным покрытием составляет 95%.

Таблица 18
Фармакокинетические параметры субстанции Соединения I и таблеток с фотозащитным покрытием при пероральном введении кроликам
Параметр	Субстанция	Таблетка с фотозащитным покрытием
AUC, µg/ml/час	62,76	59,43
Cmax, ng/ml	14,5	13,9
Тmax, мин	180	180
f отн.		0,95

Таким образом, при проведении биофармацевтического анализа установлено, что таблетированная лекарственная форма является биоэквивалентной по отношению к субстанции и не препятствует высвобождению и всасыванию лекарственных веществ в желудочно-кишечном тракте. Таблетки соединения I с фотозащитным пленочным покрытием обладают высокой биологической доступностью (выше 90%). Фармакокинетические параметры при введении лекарственной формы практически не отличаются от таковых при введении субстанции.

1. Применение дигидробромида 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламино-этилимидазо[1,2-а]бензимидазола формулы

при производстве лекарственного средства, обладающего противоишемическими, гемореологическими и антирадикальными свойствами.

2. Фармацевтическая композиция, обладающая противоишемическими, гемореологическими и антирадикальными свойствами, содержащая дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Фармацевтическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что носитель представляет собой вещество, выбранное из группы коллидон, лактоза, поливинилпирролидон, тальк, кальция стеарат, натрия метабисульфит и их комбинации.

4. Фармацевтическая композиция по любому из пп.2 или 3, отличающаяся тем, что содержит дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола в количестве 0,05-1,0 г на единичную дозу.

5. Фармацевтическая композиция по п.3, отличающаяся тем, что содержит следующее количественное соотношение компонентов, г:

Дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-
9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола	0,20
Коллидон	0,05
Лактоза	0,062
Поливинилпирролидон	0,02
Тальк	0,01
Кальция стеарат	0,004
Натрия метабисульфит	0,004

6. Фармацевтическая композиция по п.2, отличающаяся тем, что она выполнена в виде лиофилизированного порошка для инъекций.

7. Фармацевтическая композиция по п.6, отличающаяся тем, что в качестве носителя она содержит поливинилпирролидон и лимонную кислоту.

8. Фармацевтическая композиция по любому из пп.6 или 7, отличающаяся тем, что содержит дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола в количестве 0,01-2,0 г на единичную дозу.

9. Фармацевтическая композиция по п.7, отличающаяся тем, что содержит следующее количественное соотношение компонентов, г:

Дигидробромид 2-(3,4-дигидроксифенил)-
9-диэтиламиноэтилимидазо[1,2-а]бензимидазола	0,100
Поливинилпирролидон	0,100
Лимонная кислота	0,005

10. Фармацевтическая композиция по п.5, отличающаяся тем, что она выполнена в виде твердой лекарственной формы и покрыта защитным пленочным покрытием, содержащим следующее количественное соотношение компонентов, г:

Метилцеллюлоза МЦ-16	2,0
Титана диоксид	5,0
Краситель (метиловый оранжевый)	0,05
Вода очищенная	до 100