Штамм amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini - продуцент антибиотика ристомицина

Авторы патента:

Пономаренко Валерий Иванович (RU)

Харитонова Лидия Александровна (RU)

Погожева Валерия Владимировна (RU)

Преображенская Мария Николаевна (RU)

Лаврова-Балашова Майя Федоровна (RU)

Федорова Галина Борисовна (RU)

Филичева Валентина Андреевна (RU)

Катруха Генрих Степанович (RU)

Лапчинская Ольда Анастасьевна (RU)

C12P1/06 - актиномицетов

C07K14/355 - из Nocardia (G)

Владельцы патента RU 2392325:

Государственное учреждение Научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков имени Г.Ф. Гаузе РАМН (ГУ НИИНА им. Г.Ф. Гаузе РАМН) (RU)

Штамм Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini 8765 получен в результате мутантного преобразования свойств штамма Proactinomyces fructiferi var. ristomycini 5339 в результате последовательного трехступенчатого воздействия метилнитрозогуанидина, ультрафиолетовых и гамма-лучей ⁶⁰Со на исходный штамм и отбора оригинального мутантного штамма с повышенной антибиотической активностью. Полученный штамм отличается от известного по характеру роста на диагностических агаровых средах, по степени усвоения источников углерода (сахароза, крахмал, рамноза, манноза) и по способности образования пигмента и антибиотической активности, которая в 5 раз превосходит активность штамма Proactinomyces fructiferi var. ristomycini 5339 и составляет 2000 мкг/мл. Штамм депонирован в ВКПМ под коллекционным номером ВКПМ - S1085. Изобретение может быть использовано в медицинской промышленности при производстве антибактериального антибиотика ристомицина, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми и некоторыми анаэробами. 3 табл.

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается нового штамма - продуцента антибактериального антибиотика ристомицина из группы полициклических гликопептидов (далбагептидов).

Структура антибиотика ристомицина

Благодаря уникальной способности подавлять биосинтез пептидогликана клеточной стенки антибиотики этой группы эффективны в отношении многих патогенных грамположительных бактерий. Подобно ванкомицину и тейкопланину, ристомицин обладает мощным бактерицидным действием на стафилококков, энтерококков и пневмококков, в том числе метициллинустойчивых и некоторых анаэробов, вызывающих тяжелые септические заболевания. Ристомицин используется в качестве диагностикума при некоторых заболеваниях кроветворения, а также входит в состав ветеринарных препаратов.

Известен штамм Proactinomyces fructiferi var. ristomycini 5339 - продуцент антибиотика ристомицина [1], принятый в качестве прототипа. Недостатком известного штамма является низкий уровень содержания антибиотика в культуральной жидкости (не более 400 мг ристомицина на 1 л культуральной жидкости).

Сущность изобретения состоит в том, что получен новый штамм - продуцент ристомицина - в результате многоступенчатого мутагенного воздействия метилнитрозогуанидина, ультрафиолетовых и гамма-лучей ⁶⁰Со на исходный штамм с последующим отбором мутантов на средах, содержащих стрептомицин и ванкомицин в качестве селективных агентов.

Полученный новый штамм депонирован в коллекции культур «ГосНИИгенетика» под номером штамм ВКПМ-S1085.

Штамм Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini ВКПМ-S1085 обладает повышенной продуктивностью ристомицина (2,0 г в 1 л культуральной жидкости) и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиологическими признаками.

Культурально-морфологические признаки штамма ВКПМ-S1085

Температура 37°С; длительность выращивания - (7-12) суток. Посев на агаровые среды споровым материалом с (8-10)-дневной культуры, выращенной на гороховом агаре. Цвет определен по таблице Бондарцева и Праузера (таблица 1).

Морфологические признаки. Спороносцы прямые, споры продолговатые, поверхность спор гладкая. Гифы вегетативного мицелия септированы. Распадаются на фрагменты (2-3 мкм длины).

Физиолого-биохимические свойства. Аэроб растет при (24-37)°С; оптимум роста 37°С, биосинтеза 28°С. Желатину разжижает, молоко пептонизирует. Сахарозу инвертирует. Крахмал не гидролизует. На клетчатке не растет. Восстанавливает нитраты до нитритов. Меланоидные пигменты не образует при росте на среде Треснера с лимоннокислым железом.

Использование источников углерода. Хорошо утилизирует глюкозу, глицерин, арабинозу, мальтозу; умеренно - сахарозу, крахмал, маннит, лактозу; слабо - рамнозу, не использует ксилозу.

Антагонистические свойства

При испытании методом штриха на глюкозо-нитратном агаре №2 Гаузе штамм подавляет рост грамположительных бактерий Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus mycoides, Micrococcus luteus, не действует на Escherichia coli и дрожжи Candida albicans. Специфических вирулентных фагов не выявлено, лизиса в процессе ферментации не происходит.

Штамм-продуцент ристомицина поясняется следующим примером.

Пример 1. Споровым материалом с мицелием культуры Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini ВКПМ-S1085, выращенной в течение (7-10) суток при 37°С на гороховом агаре, засевают питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера объемом 750 мл) и выращивают при 28°С в течение (18-24) ч на качалке при (220-240) об/мин.

Состав посевной среды, %:

Глюкоза	1,0
Пептон	0,5
Бульон Хоттингера	3,0
Натрий хлористый	0,5
Вода	Водопроводная
рН до стерилизации	6,8-7,0

Среду стерилизуют в течение 30 мин при давлении 0,6 атм при 120°С.

Выросшим мицелием в количестве (3-5) % от объема среды засевают питательную среду (100 мл в колбах Эрленмейера объемом 750 мл) следующего состава, %:

Глицерин	2,0
Соевая мука	0,5

Натрий хлористый	0,3
Мел	0,5
Вода	Водопроводная
рН до стерилизации	6,8

Ферментацию проводят при 28°С в течение (120-144) ч на качалке при (220-240) об/мин. Антибиотическую активность культуральной жидкости определяют методом диффузии в агар с использованием тест-культуры Bacillus subtilis ATCC 6633. Содержание ристомицина в культуральной жидкости к концу ферментации составляет 2000 мкг/мл.

Препарат, полученный на основе нового штамма-продуцента путем сорбции на ионно-обменных смолах и многоступенчатой химической очистки [2], по своим физико-химическим показателям, антибактериальной активности и токсичности полностью соответствует стандартному образцу ристомицина.

Преимуществом заявленного штамма по сравнению с прототипом является способность к биосинтезу с высокой продуктивностью гликопептидного антибиотика ристомицина.

Таким образом, создан новый мутантный штамм Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini BKПM-S1085, отличающийся от прототипа по характеру роста на диагностических агаровых средах, по степени усвоения иточников углерода (рамноза, сахароза, крахмал, манноза), по способности образования пигмента и антибиотической активности, которая в 5 раз превосходит активность штамма-прототипа и составляет 2000 мкг/мл (Таблицы №№2 и 3).

ЛИТЕРАТУРА

1. Гаврилина Г.В., Рохленко С.Г. Образование ристомицина на синтетических средах. В сб. «Ристомицин и его применение в клинике», Изд-во «Медицина», Москва, 1965, с.7-13.

2. Бражникова М.Г., Ломакина Н.Н., Лаврова М.Ф., Юрина М.С. и Клюева Л.М. Выделение и свойства ристомицина // Антибиотики, №5, с.392 (1963).

Таблица 1
Культурально-морфологические признаки штамма Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini ВКПМ-S1085
Агаровая среда	Рост воздушного мицелия*	Цвет мицелия	Растворимый пигмент
Воздушного	Субстратного
№1 Гаузе	+-	Желтовато-белый, Соо6а, скудный	Буроватый (Д-3)	Нет
Овсяная	+	Белый (Д-3) до светло-кремового (б6)	Бесцветный	Нет
Чапека	+	Белый (Д-3)	Светло-бурый (Д-4)	-
Глюкозо-аспарагиновая	+	Белый (Д-3)	Желтоватый (Соо4в)	-
Линденбайна (глицерин-нитратная)	+++	Белый (Д-3) до светло-песочного (Соо6а)	Светло-бурый (Д-4)
Глюкозо-нитратная №2 Гаузе	++	Белый (Д-3)	Желтоватый (Соо4в)	-
Треснера (с пептоном и лимоннокислым железом)	+-	Белый (Д-3)	Бесцветный	Нет
*/++ - умеренный; + - слабый.

Таблица 2
Сравнительные культурально-морфологические свойства нового штамма Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini BKПM-S1085 и штамма-прототипа 5339
Агаровая среда	Рост, мицелий и пигмент
Новый штамм	Штамм-прототип
№1 Гаузе	Скудный, субстратный мицелий буроватый б3	Умеренный, субстратный мицелий красноватый б1
№2 Гаузе	Скудный, субстратный мицелий белый Д3	Умеренный, субстратный мицелий буроватый б3, растворимый пигмент
Чапека с сахарозой	Хороший, воздушный мицелий белый Д3 до песочного Соо6а	Умеренный, воздушный мицелий розоватый 4б, субстратный мицелий оранжево-коричневый в1, пигмент сиреневого цвета

Таблица 3
Сравнительные культурально-морфологические свойства нового штамма Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini ВКПМ-S1085 и штамма-прототипа 5339
Агаровая среда	Рост, мицелий и пигмент
	Новый штамм	Штамм-прототип
Усвоение источников
углерода:
Сахароза	Умеренно	Хорошо
Крахмал	Умеренно	Хорошо
Рамноза	Слабо	Не утилизует
Маннит	Хорошо	Слабо
Водорастворимый пигмент	Нет	Образует
Антибиотическая активность,	2000	400
мкг/мл
Диапазон изменчивости	1000-3000	200-600
активности, мкг/мл

Заявитель-патентообладатель:

ГУ научно-исследовательский институт по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф.Гаузе Российской академии медицинских наук (ГУ НИИНА им. Г.Ф.Гаузе РАМН)

Штамм Amycolatopsis fructiferi subsp. ristomycini ВКПМ-S1085 - продуцент антибиотика ристомицина.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве апрамицина, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамотрицательными микроорганизмами.

Штамм streptomyces roseolus вкпм s-1082 - продуцент линкомицина и способ получения линкомицина // 2391396

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности при производстве антибактериального антибиотика линкомицина гидрохлорида, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми, и некоторыми анаэробами.

Штамм nonomuraea roseoviolacea subsp. carminata (actinomadura carminata) - продуцент антибиотика карминомицина и способ получения карминомицина // 2355757

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается нового штамма-продуцента противоопухолевого антибиотика карминомицина, применяемого в терапии сарком мягких тканей, лимфосаркомах, ретикулосаркомах, хорионэпителиомах, острых миелобластомах и лимфобластомах, хронических миелоидных лейкемиях, и способа получения антибиотика.

Штамм amycolatopsis orientalis вкпм-ас-807-продуцент эремомицина // 2352631

Изобретение относится к медицинской промышленности и касается нового штамма актиномицета, образующего антибактериальный антибиотик эремомицин. .

Хроматографический способ очистки эремомицина // 2333963

Изобретение относится к технологии очистки гликопептидов. .

Способ приготовления желейного мармелада // 2259120

Изобретение относится к кондитерской отрасли пищевой промышленности. .

Способ получения консервов "плоды протертые с сахаром" // 2255499

Изобретение относится к технологии консервной промышленности. .

Способ получения экзополисахаридов // 2246540

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в строительной, бумажной, текстильной, косметической, пищевой, нефтедобывающей промышленности и в сельском хозяйстве.

Мумбайстатин, способ его получения и его применение в качестве фармацевтического препарата // 2221870

Изобретение относится к области биотехнологии и касается нового соединения мумбайстатина, его фармацевтически приемлемых солей или сложных и простых эфиров. .

Способ интенсификации биосинтеза гелиомицина // 2157848

Изобретение относится к микробиологической промышленности, к производству антибиотиков. .

Соединение ws727713 // 2407785

Изобретение относится к биотехнологии

Штамм и способ получения антибиотика митомицина с путем биосинтеза // 2420568

Штамм streptoalloteichus cremeus subsp. tobramycini вкпм ас-1083 - продуцент тобрамицина и способ получения тобрамицина // 2433169

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству антибиотика, эффективного при лечении инфекционных заболеваний, вызываемых грамотрицательными и грамположительными микроорганизмами

Антибиотик ина 5812, штамм-продуцент streptomyces roseoflavus ина-ас-5812 и способ получения антибиотика // 2572341

Изобретение относится к области биохимии, в частности к биологически активным соединениям, проявляющим антибактериальную активность. Заявлен природный гликопептидный антибиотик ИНА 5812, который может быть применен в качестве лекарственного препарата в медицинской практике. Также изобретение относится к штамму-продуценту Streptomyces roseoflavus ИНА-Ас-5812, образующему антибиотик ИНА 5812, и способу получения антибиотика ИНА 5812. Изобретение позволяет получить новый антибактериальный препарат с высокими показателями антибактериальной и химиотерапевтической активности и низкими значениями острой токсичности. 3 н.п. ф-лы, 4 табл.

Способ комплексной экстракции биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья на клеточном уровне // 2589820

Изобретение относится к способу комплексной экстракции биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья. Указанный способ заключается в том, что воздушно-высушенное измельченное сырье предварительно подвергают микроволновому воздействию в среде Чапека при мощности 300-350 Вт и температуре 100-105°С, а затем засеивают культурой актиномицетов Streptomyces sp. K-7, выделяющей целлюлолитические ферменты, и выдерживают в течение 7-8 суток. Изобретение обеспечивает повышение выхода биологически активных веществ из лекарственного растительного сырья. 2 табл., 1 пр.

Штамм amycolatopsis orientalis - продуцент антибиотика эремомицина и способ получения эремомицина // 2621866

Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована для производства антибиотика эремомицина. Предложены штамм Amycolatopsis orientalis и способ получения антибиотика эремомицина. Штамм Amycolatopsis orientalis, обладающий высокой продуктивностью антибиотика эремомицина, депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером VKMAc-2717D. Способ получения антибиотика эремомицина включает сорбцию антибиотика из культуральной жидкости на карбоксильный катионит Пьюролайт С104 или С106 в Н+-форме, элюирирование антибиотика раствором аммиака, концентрирование элюата с последующей нейтрализацией и кристаллизацией в форме сульфата путем высаживания изопропанолом. Группа изобретений обеспечивает высокий выход целевого продукта. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 4 пр.

Штамм amycolatopsis orientalis - продуцент антибиотика диметилванкомицина и способ получения антибиотика // 2633511

Заявлена группа изобретений, которая может быть использована при производстве антибактериального антибиотика диметилванкомицина сульфата, эффективного при лечении инфекций, вызываемых грамположительными возбудителями, в том числе метициллинустойчивыми и анаэробами. Предлагается штамм Amycolatopsis orientalis – продуцент диметилванкомицина, депонированный в ВКПМ под регистрационным номером ВКПМ Ас-1984, и способ получения диметилванкомицина. Способ получения диметилванкомицина включает культивирование штамма Amycolatopsis orientalis ВКПМ-Ас-1984, сорбцию антибиотика из нативного раствора на катионите КБ-2 (Na+), десорбцию антибиотика, нейтрализацию элюата катионитом КУ-2-20 (Н+) и сорбцию (pH 6,8) антибиотика на Амберлит CG-25 (NH4+) с последующей элюцией диметилванкомицина (0,05-0,3) н. раствором аммиака. Водный раствор антибиотика концентрируют и осаждают ацетоном. Изобретение позволяет получить антибиотик 97,4% чистоты. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Штамм streptomyces virginiae - продуцент вирджиниамицина и способ получения вирджиниамицина // 2637857

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм микроорганизма Streptomyces virginiae - продуцент антибиотика вирджиниамицина, депонированный в ВКМ под регистрационным номером ВКМ Ac-2738D и способ получения антибиотика вирджиниамицина. Способ получения антибиотика вирджиниамицина предусматривает культивирование штамма микроорганизма Streptomyces virginiae ВКМ Ac-2738D, сорбцию антибиотика из культуральной жидкости во время биосинтеза на полимерные смолы DIAION™ НР20 или DIAION™ НР21 с последующим отделением смолы фильтрацией и элюированием антибиотика ацетоном, метиленхлоридом или спиртами и концентрацией элюата в вакууме до сухого вещества. Группа изобретений позволяет упростить выделение и очистку получаемого антибиотика. 2 н.п. ф-лы, 7 пр.