Средство, обладающее иммунотропной активностью
Владельцы патента RU 2406524:
Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт фармакологии Сибирского отделения РАМН (RU)
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству, обладающему иммунотропной активностью. Средство, обладающее иммунотропным действием, представляющее собой экстракт суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле. Вышеописанное средство обладает эффективным иммунотропным действием, проявляет противовоспалительные свойства, мягко воздействует на организм, не вызывает привыкания и может применяться у лиц с дисбалансом иммунной системы. 5 табл.
Изобретение относится к медицине, конкретно, к фармакологии и касается средств, влияющих на иммунную систему.
Для профилактики и комплексного лечения хронических и вялотекущих заболеваний, превалирующих в последние десятилетия во многих странах, в том числе и в России, перспективными являются поиск и разработка новых эффективных и малотоксичных лечебных средств. Количество иммунокоррегирующих препаратов весьма велико на данный момент, однако широкое применение синтетических иммуномодуляторов ограничено ввиду наличия у них большого числа побочных эффектов [1]. В настоящее время все больше внимания исследователями уделяется иммунотропным препаратам растительного происхождения, которые благодаря наличию в них комплекса биологически активных веществ мягко воздействуют на организм, не вызывают привыкания и могут применяться у лиц с сочетанными патологиями [2-4].
Из растительных препаратов, стимулирующих реакции иммунитета, наиболее известны препараты на основе эхинацеи пурпурной (иммунал, иммунорм, доктор Тайсс - настойка эхинацеи) [5-7]. Препараты иммунал и иммунорм содержат сок, полученный из свежесобранной травы цветущей эхинацеи пурпурной. Доктор Тайсс - настойку листьев эхинацеи. Использование лекарственных растений представляется перспективным направлением дальнейшего развития, совершенствования методов иммунореабилитации, так как препараты природного происхождения не обладают токсическими свойствами, характерными для синтетических лекарственных средств, и не вызывают дисбаланса системы иммунитета [2, 4].
Задачей изобретения является расширение арсенала иммунотропных средств природного происхождения.
Поставленная задача достигается использованием в качестве иммуннотропного средства экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле. Основными биологически активными веществами княжика сибирского являются тритерпеновые сапонины, полисахариды, флавенолы, сердечные гликозиды, органические кислоты (кофейная и хинная) и микроэлементы. В современной медицинской практике княжик сибирский используют при сердечно-сосудистых, желудочно-кишечных, гинекологических и опухолевых заболеваниях, а также как ранозаживляющее, болеутоляющее, противоревматическое, мочегонное и общеукрепляющее средство [8, 9]. Ранее [10, 11] была выявлена противоишемическая и ноотропная активность экстракта надземной части княжика сибирского.
Новым в предлагаемом изобретении является то, что экстракт суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле впервые предложен для использования в качестве иммунотропного средства.
Использование экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле в качестве иммуннотропного средства в литературе не описано. Применение по новому назначению стало возможно благодаря обнаружению у него новых свойств, а именно стимуляции гуморального иммунного ответа и неспецифической резистентности. Кроме того, у исследуемого экстракта суспензионной культуры княжика сибирского выявлено противовоспалительное действие. Данные свойства явным образом не вытекают для специалиста из уровня техники. Экстракт суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле можно использовать у больных с иммунной недостаточностью, ассоциированной с острыми и хроническими инфекционными заболеваниями, на фоне лучевой терапии и лечения цитостатиками.
Таким образом, данное техническое решение соответствует критериям изобретения: "новизна", "изобретательский уровень", "промышленная применимость".
Новые свойства экстракта суспензионной культуры княжика сибирского были обнаружены благодаря экспериментальным исследованиям.
Для установления иммунотропных свойств экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле было изучено его влияние на клеточный иммунный ответ, гуморальный иммунный ответ, а также на неспецифическую резистентность организма. В качестве препарата сравнения использовали настойку эхинацеи пурпурной («ГаленоФарм», г.Санкт-Петербург, разрешена к применению на территории России, peг. №000167.01-2000). Экспериментальные исследования выполняли на мышах линии CBA/CaLac в возрасте 2-2,5 месяца массой 18-20 г. Все животные 1 категории (конвенциональные линейные мыши) получены из коллекционного фонда лаборатории экспериментального биологического моделирования НИИ фармакологии СО РАМН. Все работы проведены в осенне-зимний период. Животных содержали в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страсбург, 1986). Животных содержали в стандартных условиях вивария на обычном рационе кормления при свободном доступе к пище и воде. Умерщвление животных осуществляли передозировкой эфирного наркоза.
Средство, обладающее иммунотропным действием, получают следующим образом. Суспензионную культуру княжика сибирского, высушенную обычным способом, измельчали и просеивали через сито с диаметром отверстий 2 мм (влажность 13,3%). 50 г измельченного сырья помещали в стеклянную колбу, добавляли 500 мл 25% этанола и нагревали при температуре 80°С на водяной бане с обратным холодильником в течение 60 мин. Полученное извлечение фильтровали, сырье отжимали и упаривали экстракт под вакуумом при температуре не выше 60°С досуха.
Эксперименты по изучению влияния княжика сибирского на клеточный иммунный ответ были проведены на 18 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 6 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 6 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 6 мышей получали экстракт княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. Для оценки влияния препаратов на клеточный иммунный ответ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) [12]. Через 24 часа после последнего введения экстракта животных сенсибилизировали эритроцитами барана подкожно 1×107 в объеме 100 мкл. Разрешающую дозу антигена (1×108 в объеме 20 мкл) вводили на 5 день после сенсибилизации под апоневротическую пластинку одной из задних конечностей. В контралатеральную лапу в качестве контроля вводили физиологический раствор в равном объеме. Учет интенсивности воспалительной реакции осуществляли через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена. Индекс воспаления (ИВ) определяли по разнице масс опытной и контрольной лап.
Эксперименты по изучению влияния экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) на гуморальный иммунный ответ были проведены на 60 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 20 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 20 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 20 мышей получали экстракт княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. При изучении гуморального иммунного ответа мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×108/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭК, ЭП или дистиллированной воды. На 4-е и 7-е сутки после иммунизации определяли общепринятыми методами [13] общую клеточность селезенки (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×106) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей по методу Cunningham [14] и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови с помощью стандартной реакции гемагглютинации (РГА) [4].
В целях углубленного изучения иммунотропной активности экстракта суспензионной культуры княжика сибирского были проведены исследования на модели экспериментального иммунодефицитного состояния. Экспериментальное иммунодефицитное состояние моделировали путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Исследования влияния экстракта княжика сибирского (ЭК) на гуморальный иммунный ответ в условиях иммуносупрессии были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышей - контроль 1; 10 - контроль 2, получали в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно; 10 - опыт 1, получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - прототип; 10 - опыт 2, получали экстракт княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - предлагаемое средство. У животных 2 контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Для изучения гуморального иммунного ответа мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×108/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭК, ЭП или дистиллированной воды. На 4-е сутки после иммунизации (что соответствует 8 сут после введения цитостатика) определяли общепринятыми методами [13] общую клеточность селезенки (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×106) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей по методу Cunningham [14] и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови с помощью стандартной реакции гемагглютинации (РГА) [15].
Эксперименты по изучению влияния экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на неспецифическую резистентность организма в условиях иммуносупрессии были проведены на 40 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 4 группы: 10 мышей - контроль 1; 10 - контроль 2, получали в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно; 10 - опыт 1, получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - прототип; 10 - опыт 2, получали экстракт княжика сибирского, который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно - предлагаемое средство. У животных 2 контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг) в первый день введения препаратов. Оценку неспецифической резистентности проводили на фоне развития иммунного ответа. Для этого мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ) - 6×108/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл) в конце 5-дневного курса введения ЭК, ЭП или дистиллированной воды. Оценку неспецифической резистентности проводили путем изучения фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов в тесте поглощения частиц латекса [13].
Статистическая обработка результатов осуществлялась с применением пакета статистических программ Statistica for Windows (версия 5.0) с предварительной оценкой нормальности распределения и использованием t-критерия Стьюдента.
Результаты, подтверждающие иммунотропные свойства экстракта суспензионной культуры княжика сибирского.
Пример 1. Эксперименты по изучению влияния экстракта суспензионной культуры княжика сибирского на клеточный иммунный ответ были проведены на 18 мышах-самцах линии CBA/CaLac массой 18-20 г. Животные были разделены на 3 группы: 6 мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (контроль); 6 мышей получали деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП), которую вводили животным в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 1) - прототип; 6 мышей получали экстракт суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК), который вводили животным в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно (опыт 2) - предлагаемое средство. Для оценки влияния препаратов на клеточный иммунный ответ использовали реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) [16]. Через 24 часа после последнего введения экстрактов животных сенсибилизировали эритроцитами барана подкожно 1×107 в объеме 100 мкл. Разрешающую дозу антигена (1×108 в объеме 20 мкл) вводили на 5 день после сенсибилизации под апоневротическую пластинку одной из задних конечностей. Через 24 часа после последнего введения экстракта животных сенсибилизировали эритроцитами барана подкожно 1×107 в объеме 100 мкл. Разрешающую дозу антигена (1×108 в объеме 20 мкл) вводили на 5 день после сенсибилизации под апоневротическую пластинку одной из задних конечностей. В контралатеральную лапу в качестве контроля вводили физиологический раствор в равном объеме. Учет интенсивности воспалительной реакции осуществляли через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена. Индекс воспаления (ИВ) определяли по разнице масс опытной и контрольной лап. Приведенные в таблице 1 результаты эксперимента свидетельствуют о существенном противовоспалительном действии экстракта суспензионной культуры княжика сибирского.
| Таблица 1 | |||
| Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского и настойки эхинацеи пурпурной на клеточный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac, (X±m) | |||
| Группы мышей | Контроль | Опыт 1 (ЭП) | Опыт 2 (ЭК) |
| Индекс воспаления | 13,20±0,96 | 18,53±1,96* | 7,70±1,76*# |
| Примечания: здесь и в табл.2: * - различия с соответствующими значениями контроля достоверны; # - различия с соответствующими значениями группы «опыт 1» достоверны. |
Пример 2. Контрольным мышам вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×108/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е и 7-е сутки после иммунизации определяли общее количество спленоцитов (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×106) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови. Курсовое введение настойки эхинацеи пурпурной приводило к достоверному увеличению относительного количества антителообразующих клеток на 4 и 7 сут после иммунизации и абсолютного числа антителопродуцентов на 4 сут эксперимента по сравнению с контролем (таблица 2). Кроме того, отмечалось повышение титра иммуноглобулинов класса G на 4 сут. Анализ результатов, представленных в таблице 2, показывает, что курсовое 5-дневное введение экстракта суспензионной культуры княжика сибирского приводило к увеличению относительного и абсолютного числа антителообразующих клеток, а также титра иммуноглобулинов класса G относительно животных контрольной группы на 4 сут эксперимента. К 7 сут исследования наблюдалось увеличение общей клеточности лимфоидного органа, относительного и абсолютного количества антителопродуцентов, а также титра иммуноглобулинов класса G относительно животных контрольной группы. По сравнению с мышами, получавшими настойку эхинацеи, возросло относительное и абсолютное число АОК на 7 сут эксперимента.
| Таблица 2 | |||
| Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на гуморальный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac, (X±m) | |||
| Группа мышей | Показатели | Сроки исследования | |
| 4 сут | 7 сут | ||
| Контроль (ЭБ) | ОКС, 106/орган | 159,20±16,50 | 149,8±7,71 |
| АОК, % | 7,36±0,10 | 7±0,21 | |
| АОК, 106/орган | 11,72±1,23 | 10,47±0,57 | |
| IgM, log2T | 2±0,32 | 2,2±0,32 | |
| IgG, log2T | 8,4±0,75 | 7,30±0,50 | |
| Опыт 1 (ЭП+ЭБ) | ОКС, 106/орган | 190,00±22,67 | 163,00±10,85 |
| АОК, % | 11,44±0,49* | 5,64±0,19* | |
| АОК, 106/орган | 21,89±3,20* | 9,22±0,77 | |
| IgM, log2T | 2±0,32 | 1,2±0,49 | |
| IgG, log2T | 10,4±0,25* | 10±0,32* | |
| Опыт 2 (ЭК+ЭБ) | ОКС, 106/орган | 151,00±5,81# | 164,33±4,57* |
| АОК, % | 12,81±0,91* | 11,27±0,37*# | |
| АОК, 106/орган | 19,63±1,11* | 18,52±0,80*# | |
| IgM, log2T | 0±0 | 2,20±0,37 | |
| IgG, log2T | 10,20±0,58* | 11,00±0,45* |
Пример 3. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6х108/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации определяли общее количество спленоцитов (ОКС), а также относительное (%) и абсолютное (×106) количество антителообразующих клеток (АОК) в селезенке мышей и титр антител IgM и IgG в сыворотке крови.
| Таблица 3 | ||
| Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на гуморальный иммунный ответ мышей линии СВА/CaLac на фоне введения циклофосфана, (Х±m) | ||
| Группа мышей | Показатели | 4 сут |
| Контроль 1 (ЭБ) | ОКС, 106/орган | 159,20±16,50 |
| АОК, % | 7,36±0,10 | |
| АОК, 106/орган | 11,72±1,23 | |
| IgM, log2T | 2±0,32 | |
| IgG, log2T | 8,4±0,75 | |
| Контроль 2 (ЦФ+ЭБ) | ОКС, 106/орган | 94,6±16,44 |
| АОК, % | 10,16±0,70 | |
| АОК, 106/орган | 9,67±1,75 | |
| IgM, log2T | 0,0±0,0 | |
| IgG, log2T | 3,0±0,0 | |
| Опыт 1 (ЦФ+ЭП+ЭБ) | ОКС, 106/орган | 154±19,71* |
| АОК, % | 8,8±0,32 | |
| АОК, 106/орган | 13,63±1,84* | |
| IgM, log2T | 1,02±0,56 | |
| IgG, log2T | 5,2±1,12* | |
| Опыт 2 (ЦФ+ЭК+ЭБ) | ОКС, 106/орган | 134,17±18,21* |
| АОК, % | 8,23±0,96 | |
| АОК, 106/орган | 14,02±1,20* | |
| IgM, log2T | 0,70±0,34* | |
| IgG, log2T | 3,00±0,00 | |
| Примечания: здесь и в табл.4, 5 * - различия с соответствующими значениями контроля 2 достоверны; # - различия с соответствующими значениями группы «опыт 1» достоверны. |
Введение линейным животным циклофосфана в дозе 250 мг/кг приводило к подавлению гуморального иммунного ответа, проявляющемуся в снижении общей клеточности селезенки и функциональной активности клеток-антителопродуцентов, что выражалось в уменьшении титра специфических иммунноглобулинов в сыворотке крови по сравнению с 1-й контрольной группой. У мышей опытных групп наблюдалось увеличение общего числа спленоцитов и абсолютного количества антителообразующих клеток относительно группы контроля 2 и повышение титра гемагглютининов IgG.
Пример 4. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×108/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации оценивали фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей всех групп по способности этих клеток поглощать частицы латекса (концентрация взвеси частиц - 60 млн/мл); учитывали процент фагоцитов, поглотивших латекс (фагоцитарный индекс - ФИ), и среднее число частиц, поглощенное одной клеткой (фагоцитарное число - ФЧ).
Анализ результатов, представленных в таблице 4, показывает, что инъекция животным цитостатика вызывала угнетение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови по сравнению с только иммунизированными мышами. Введение животным экстракта суспензионной культуры княжика сибирского существенно стимулировало поглотительную активность нейтрофилов периферической крови (по сравнению с 2-й контрольной группой) на 4 сут эксперимента как за счет повышения доли нейтрофилов, способных поглощать латекс (ФИ), так и за счет увеличения количества поглощенных каждой клеткой частиц (ФЧ), при этом выявленный уровень стимуляции фагоцитоза сопоставим по выраженности с действием фармакопейной настойки эхинацеи пурпурной.
| Таблица 4 | ||
| Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови мышей линии СВА/CaLac (X±m) на фоне введения циклофосфана | ||
| Группа мышей | 4 сут | |
| ФИ (%) | ФЧ | |
| Контроль 1 (ЭБ) | 22±1,22 | 2,06±0,23 |
| Контроль 2 (ЭБ+ЦФ) | 3,00±0,32 | 1,30±0,18 |
| Опыт 1 (ЭБ+ЦФ+ЭП) | 11,8±1,56* | 4,36±0,69* |
| Опыт 2 (ЭБ+ЦФ+ЭК) | 11,60±4,32* | 4,46±0,49* |
Пример 5. У животных 2-й контрольной и обеих опытных групп моделировали экспериментальное иммунодефицитное состояние путем введения циклофосфана однократно внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (250 мг/кг). Далее животным 2-й контрольной группы вводили в течение 5 дней по 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 1-й опытной группы вводили деалкоголизированную настойку эхинацеи пурпурной (ЭП) в течение 5 дней в дозе 50 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Мышам 2-й опытной группы вводили деалкоголизированный экстракт суспензионной культуры княжика сибирского в течение 5 дней в дозе 100 мг/кг в объеме 0,2 мл дистиллированной воды внутрижелудочно. Затем мышей всех групп иммунизировали эритроцитами барана - 6×108/мышь (однократно внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл). На 4-е сутки после иммунизации оценивали фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей всех групп по способности этих клеток поглощать частицы латекса (концентрация взвеси частиц - 60 млн/мл); учитывали процент макрофагов, поглотивших частицы (фагоцитарный индекс - ФИ), и среднее число частиц, поглощенное одной клеткой (фагоцитарное число - ФЧ).
Приведенные в таблице 5 результаты этих опытов показывают, что циклофосфан вызывал снижение фагоцитарного индекса макрофагов, не оказывая существенного влияния на фагоцитарное число (по сравнению с 1-й контрольной группой). Введение животным настойки эхинацеи приводило к увеличению процента активных фагоцитов, а в группе мышей, получавших экстракт суспензионной культуры княжика сибирского, наблюдалась преимущественно стимуляция поглотительной активности.
| Таблица 5 | ||
| Влияние экстракта суспензионной культуры княжика сибирского (ЭК) и настойки эхинацеи пурпурной (ЭП) на фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов мышей линии СВА/Са Lac (X±m) на фоне введения циклофосфана | ||
| Группа мышей | 4 сут | |
| ФИ (%) | ФЧ | |
| Контроль 1 (ЭБ) | 33,12±1,98 | 2,89±0,34 |
| Контроль 2 (ЭБ+ЦФ) | 15,80±2,96 | 1,90±0,96 |
| Опыт 1 (ЭБ+ЦФ+ЭП) | 32,8±0,48* | 2,02±0,16 |
| Опыт 2 (ЭБ+ЦФ+ЭК) | 20,00±2,35# | 3,40±0,39*# |
Таким образом, экстракт суспензионной культуры княжика сибирского проявляет иммунотропные свойства, что выражается в усилении гуморального иммунного ответа (повышение общей клеточности лимфоидного органа, относительного и абсолютного количества антителообразующих клеток и титра специфических гемагглютининов G), снижении индекса воспаления в реакции ГЗТ, коррекции иммунодефицитного состояния, вызванного введением цитостатика (увеличение общего числа спленоцитов и абсолютного количества антителообразующих клеток и повышение титра гемагглютининов IgG, a также повышении фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови и перитонеальных макрофагов), сравнимые по выраженности, а по отдельным показателям превосходящие настойку эхинацеи пурпурной.
Литература
1. Лесков В.П. Иммуностимуляторы // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 1999. - №4. - С.12-25.
2. Амосова Е.Н., Зуева Е.П., Разина Т.Г., Крылова С.Г. Лекарственные растения как средства дополнительной терапии для лечения опухолей // Бюл. экспер. биол. - 2003. - Прил. 2. - С.24-34.
3. Блинова К.Ф., Куваев В.Б. Лекарственные растения тибетской медицины и Забайкалья // Вопросы фармакогнозии. - 1965. - Вып.3. - С.52-56.
4. Вершинина С.Ф., Потявина Е.В. Применение природных биорегуляторов в онкологии // Вопросы онкологии. - 2003. - Т. 49. - №2. - С.145-151.
5. Самородов В.Н., Поспелов С.В., Моисеева Г.Ф. и др. Фитохимический состав представителей рода эхинацеа (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. - 1996. - №4. - С.32-37.
6. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения // Клиническая медицина. - 1996. - Т.74. - №8. - С.7-12.
7. Percival S.S. Use of echinacea in medicine // Biochem. Pharmacol. - 2000. - Vol.60. - №2. - Р.155-158.
8. Крылов Г.В., Казакова Н.Ф., Степанов Э.В. Зеленая аптека. - Кемерово: Современная отечественная книга, 1993. - С.116.
9. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. - Новосибирск: Наука, 1991. - С.271-273.
10. Патент РФ на изобретение №2104018 «Способ получения экстракта, обладающего противоишемической и ноотропной активностью» от 10 февраля 1998 г. Бюл. №4 от 10.02.1998 / Е.А.Краснов, Т.И.Андреева, Н.И.Суслов, А.А.Блинникова.
11. Патент РФ на изобретение №2276992 «Фармацевтический состав, обладающий ноотропной активностью» от 27 мая 2006 г. Бюл. №15 от 27.05.2006 / Е.А.Краснов, И.В.Шилова, Т.Г.Хоружая, Н.И.Суслов, В.В.Вандышев.
12. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У.Хабриева. - 2 изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2005. - С.501-514.
13. Иммунология: Практикум / Е.У.Пастер, В.В.Овод, В.К.Позур, Н.Е.Вихоть. - К.: Выща шк. Изд-во при Киев. ун-те, 1989. - С.202-204.
14. Cunningham A.J. A method of increased sensitivity for detecting single antibodyforming cells // Nature. - 1965. - V.207, №5001. - P.1106-1107.
15. Иммунологические методы / Под ред. Г.Фримеля. - М.: Медицина, 1987. - С.211-218.
16. Линов Б.М., Барнаулов О.Д., Крылов В.А. и др. Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. - Томск, 1986. - С.89-90.
Средство, обладающее иммунотропным действием, характеризующееся тем, что представляет собой экстракт суспензионной культуры княжика сибирского на 25% этаноле.
