Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота
Владельцы патента RU 2406533:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет (RU)
Изобретение относится к ветеринарной медицине. Вакцина в качестве антигенов содержит суспензию клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus bovis и стафилококкоза Staphylococcus aureus, выделенных из местного эпизоотического очага, глюкозу, формалин и гидроокись алюминия при следующем соотношении компонентов, мас.%: суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus bovis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 - 38,0-41,5, суспензия клеток чистой культуры возбудителя стафилококкоза Staphylococcus aureus, выделенного из местного эпизоотического очага, в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 - 38,0-41,5 глюкоза - 2,0-1,0, формалин - 2,0-1,5, гидроокись алюминия - остальное. Вакцина обладает высокой иммуногенной активностью, формирует выраженный наряженный иммунитет. 1 табл.
Изобретение относится к ветеринарной медицине, в частности к вакцинам, и может быть использовано в учреждениях, занимающихся конструированием биологических препаратов, а также на предприятиях биологической промышленности.
Известна ассоциированная вакцина против диареи телят, содержащая бактериальные клетки эшерихий, штаммы: 0138 К88,09К99, 200; сальмонелл, штаммы: ГИСК №195, ГИСК №196, ГИСК №197; протеи, штаммы: ГИСК №198, ГИСК №199; клебсиелл, штаммы: ГИСК №201, ГИСК №202 (патент на изобретение РФ №2035916 от 17.06.93, МКИ А61К 39/125, 39/135). Данная вакцина предназначена для профилактики инфекционных заболеваний у телят, вызываемых эшерихиями, сальмонеллами, протеями и клебсиеллами.
Известна инактивированная эмульсин-вакцина против сальмонеллеза телят (патент РФ на изобретение №2154495 от 15.10.97, МКИ А61К 39/112, C12N 1/20, А61К 39/39). Данная вакцина содержит в качестве антигенов смесь инактивированных формалином вирулентных штаммов рода Salmonella (S. dublin №1449, S. typhimurium №159) в качестве иммуномодулятора взвесь клеток Rodococcus equi №2 в маслоланолиновой смеси, при этом компоненты, входящие в состав вакцины, берут в следующем соотношении из расчета на литр: антигены на физиологическом растворе с добавлением 0,4-0,5% формалина и концентрацией микробных клеток в 1 мл - 90 млрд (S. dublin №1449) 285-315 мл, антиген S. typhimurium №159 95-105 мл, взвесь клеток Rodococcus equi №2 на физиологическом растворе, содержащая 200 млрд микробных клеток; адъювант - маслоланолиновая смесь в соотношении 83-87:17-13 остальное. Технология изготовления сложная. Данная вакцина применяется для профилактики сальмонеллеза телят. Использование масло-ланолиновой смеси в вакцине может вызывать у привитых животных различные поствакцинальные осложнения (воспалительные процессы, абсцессы на месте введения, хромоту и др.).
Техническим решением задачи изобретения является устранение перечисленных недостатков, в частности, повышение специфичности, эффективности вакцины для профилактики стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота, путем введения новых чистых культур возбудителей, компонентов, исключая отрицательного и побочного влияния.
Решение задачи достигается тем, что вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота, содержащая суспензию инактивированных антигенов Streptococcus bovis и Staphylococcus aureus, полученных путем отбора пораженных органов от павших животных из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см3, формалина и гидроокиси алюминия, согласно изобретению используют возбудителей стрептококкоза Streptococcus bovis и стафилококкоза Staphylococcus aureus, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Streptococcus bovis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стафилококкоза Staphylococcus aureus, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| глюкоза | 2,0-1,0 |
| формалин | 2,0-1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное. |
Новизна заявляемого технического решения обусловлена тем, что в отличие от известных вакцин для получения сырья проводят отбор пораженных органов от павших нутрий из местного эпизоотического очага, приготовление суспензии, посев на дифференциально-диагностические среды, выделение чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus bovis и стафилококкоза Staphylococcus aureus, выращивание чистых культур возбудителей проводят раздельно на мясо-пептонном бульоне, что позволяет повысить специфичность и иммуногенность вакцины.
При раздельном культивировании чистых культур возбудителей и добавление в питательную среду глюкозы до 0,2%-ной концентрации позволяет получать концентрацию микробных клеток не менее 4-5 млрд. в 1 мл в течение 14-24 часов инкубирования. Инактивирование культур возбудителей формалином в 0,4-0,5%-ной конечной концентрации при температуре 37°С в течение 72-96 часов позволяет подавить патогенность возбудителей и сохранить их иммуногенные свойства в течение 12 месяцев. Смешивание инактивированных антигенов стрептококков и стафилококков и в равных соотношениях, внесение гидроокиси алюминия и тщательное перемешивание не вызывает у привитых животных поствакцинальных осложнений, позволяет обеспечить формирование напряженного иммунитета через 12-15 суток после внутримышечно или подкожно двукратного введения с интервалом 7-14 дней в дозе коровам по 5,0 см3, телятам в возрасте 1,0-1,5 месяца - в дозе 1,5-2,0 см3 у привитых животных обеспечивает формирование напряженного иммунитета против двух инфекционных болезней продолжительностью не менее 9 месяцев (срок наблюдения). Использование чистых культур возбудителей Str. bovis и Staph. aureus, выделенных из местного эпизоотического очага от больных и павших животных позволяет значительно повысить специфичность вакцины, обеспечивает защиту животных сразу о двух опасных инфекционных болезней стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота.
По данным патентной и научно-технической литературы не обнаружена аналогичная совокупность признаков, компонентов, что позволяет судить об изобретательском уровне заявленного технического решения.
Что касается критерия «промышленная применимость», то компоненты входящие в состав вакцины известны и широко применяются в ветеринарной практике при изготовлении инактивированных вакцин: ассоциированная вакцина против сальмонеллеза, пастереллеза и энтерококковой инфекции поросят ТУ 10.09-62-90, утверждено 01.08.90 г., инструкция по изготовлению и контролю данной вакцины утверждена Главным управлением ветеринарии 16.07.90 г.; вакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят и поросят ТУ 10.09-91-90, утверждено 15.12.90 г.
Методы выделения и характеристика стрептококков и стафилококков описаны в справочнике «Определитель зоопатогенных микроорганизмов» под редакцией профессора Сидорова М.А., Москва. - Колос, 1995, стр.90-95; в «Практикуме по ветеринарной микробиологии и иммунологии» авторы: Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., М.: «Колос», 2001, на стр.165-171; в справочнике «Микробиологическая диагностика бактериальных болезней животных» авторы: Скородумов Д.И., Субботин В.В., Сидоров М.А., Костенко Т.С., М.: «ИзограФъ», 2005, на стр.246-257; в «Методических указаниях по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г., Главным управлением ветеринарии с государственной инспекцией при Государственной комиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам.
Предложенная вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота проста в исполнении, доступна и является промышленно применимой.
Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота содержит инактивированные формалином чистые культуры возбудителей Str. bovis и Staph. aureus, адсорбированные на гидрате окиси алюминия. По внешнему виду вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком, который при встряхивании легко разбивается в гомогенную взвесь. Срок хранения в сухом, темном месте при температуре от 2 до 10°С 1 год. Вакцина предназначена для профилактики опасных инфекционных заболеваний нутрий против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота. Она вызывает образование специфического иммунитета против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота. Вакцина безвредна и ареактогенна. Вакцину применяют в неблагополучных и угрожаемых по стрептококкозу и стафилококкозу крупного рогатого скота хозяйствах. Продукты убоя вакцинированных нутрий используют без ограничений независимо от сроков вакцинации.
К факторам, обуславливающим получение вакцины заданного свойства, относятся последовательность изготовления и процентное соотношение между компонентами, входящими в препарат.
Приведено пять примеров содержащих компоненты в различных соотношениях на 100 мл вакцины.
Пример 1.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. bovis и стафилококкоза Staph. aureus, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 75,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 0,5, инактивируют внесением формалина 1,0, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. bovis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 37,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стафилококкоза Staph. aureus, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 37,5 |
| глюкоза | 0,5 |
| формалин | 1,0 |
| гидроокись алюминия | остальное. |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота обладает слабой иммуногенной активностью.
Пример 2.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. bovis и стафилококкоза Staph. aureus, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 78,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0 инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. bovis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 39,0 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стафилококкоза Staph. aureus, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 39,0 |
| глюкоза | 1,0 |
| формалин | 1,0 |
| гидроокись алюминия | остальное. |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота обладает иммуногенной активностью.
Пример 3.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. bovis и стафилококкоза Staph. aureus, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 80,0 с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,7, инактивируют внесением формалина 1,3, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. bovis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 40,0 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стафилококкоза Staph. aureus, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 40,0 |
| глюкоза | 1,7 |
| формалин | 1,3 |
| гидроокись алюминия | остальное. |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота обладает иммуногенной эффективностью.
Пример 4.
Берут пораженные органы от павших нутрий из местного эпизоотического очага, из которых приготавливают суспензию, делают посев на дифференциально-диагностические среды, выделяют чистые культуры возбудителей стрептококкоза Str. bovis и стафилококкоза Stapn. aureus, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 83,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 1,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. bovis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 41,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стафилококкоза Staph. aureus, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 41,5 |
| глюкоза | 1,0 |
| формалин | 1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное. |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота обладает иммуногенной активностью, формирует после вакцинации выраженный напряженный иммунитет, не вызывает поствакцинальных осложнений, стабильна при хранении в течение 12 месяцев (таблица).
Пример 5.
Берут возбудитель стрептококкоза Str. bovis и стафилококкоза Staph. aureus, выделенные из местного эпизоотического очага, раздельно культивируют, получают, инактивируют и смешивают (мас.%) суспензию микробных клеток 85,0, с титром 4-5 млрд., и содержанием глюкозы 2,0, инактивируют внесением формалина 1,5, затем добавляют гидроокись алюминия - остальное, тщательно смешивают и получают вакцину следующего состава при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стрептококкоза Str. bovis, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 42,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя стафилококкоза Staph. aureus, выделенного из местного эпизоотического очага в питательной среде с титром 4-5 млрд. микробных клеток в 1 см3 | 42,5 |
| глюкоза | 2,0 |
| формалин | 1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное. |
При данном соотношении компонентов вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота обладает слабой иммуногенной активностью, формирует напряженный иммунитет, у отдельных животных на месте введение препарата вызывает слабое раздражение.
| Таблица | ||||||
| Сравнительная оценка эффективности вакцины | ||||||
| Вакцина | Доза вакцины в см3 | Метод введения | Иммунобиологические свойства | |||
| Кол-во жив-х в опыте (гол) | Наличие поствакцинальных осложнений | Длительность иммунитета (мес.) | Защита в (%) | |||
| По прототипу | Двукратно 1-ая доза 3,0 см3
2-ая доза 3,0 см3 |
Внутримышечно | 50 | Угнетение, хромата, отказ от корма в течение 2-3 суток | 6 | 60-70 |
| По предлагаемому способу | 5,0 | Внутримышечно | 50 | нет | 12 | 90-100 |
Из данных таблицы видно, что предлагаемая вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота имеет значительные преимущества в сравнении с вакциной по прототипу.
Вакцина ассоциированная против стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота, включающая суспензию инактивированных антигенов Streptococcus bovis и Staphylococcus aureus, полученных путем отбора пораженных органов от павшего крупного рогатого скота из местного эпизоотического очага, приготовления суспензии, посева на дифференциально-диагностические среды, выделения чистых культур возбудителей, их раздельного выращивания в мясо-пептонном бульоне с глюкозой до концентрации микробных клеток 4-5 млрд в 1 см3, формалина и гидроокиси алюминия, отличающаяся тем, что в качестве антигенов используют суспензию клеток чистых культур возбудителей стрептококкоза Streptococcus bovis и стафилококкоза Staphylococcus aureus при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| стрептококкоза Streptococcus bovis, | |
| выделенного из местного эпизоотического | |
| очага в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| суспензия клеток чистой культуры возбудителя | |
| стафилококкоза Staphylococcus aureus, | |
| выделенного из местного эпизоотического | |
| очага, в питательной среде с титром | |
| 4-5 млрд микробных клеток в 1 см3 | 38,0-41,5 |
| глюкоза | 2,0-1,0 |
| формалин | 2,0-1,5 |
| гидроокись алюминия | остальное |
