Питательная среда для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам

Авторы патента:

C12N1/10 - простейшие; питательные среды для них

Владельцы патента RU 2406756:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Астраханский государственный университет" (АГУ) (RU)

Питательная двухфазная среда для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам содержит твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой «косячком» в пробирке в количестве 5 мл. Жидкая фаза содержит среду RPMI-1640 в количестве 5 мл, раствор натриевой соли бензилпенициллина и растворы стрептомицина, амфоглюкамина и полимиксина М заданной концентрации. Это повышает точность определения чувствительности трихомонад при подборе лекарственных препаратов для лечения трихомоноза. 1 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно лабораторной диагностике, и может быть использовано, в частности, для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам с последующим подбором их концентраций, необходимых для уничтожения паразита.

После установления диагноза «трихомоноз» при назначении терапевтических воздействий необходима информация о чувствительности Trichomonas vaginalis к лекарственным препаратам. С этой целью проводят фармакокинетическое исследование. При трихомонозе они носят главным образом исследовательский статус и осуществляются в научно-исследовательских институтах и крупных лабораторных центрах. Как известно, рост трихомонад изучают, как правило, на жидких питательных средах, что осложняет проведение таких исследований: используется так называемый метод титрования, а кроме того, практически единственной группой протистоцидных препаратов являются нитроимидозолы. Вместе с тем появляются сведения о снижении чувствительности трихомонад - нарастании резистентности к протистоцидным средствам (Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогенитальных инфекций. - Москва: Медицинская книга, Н. Новгород: Издательство НГМА, 2003. С.64).

В связи с этим имеется настоятельная необходимость шире использовать культуральное исследование чувствительности трихомонад к воздействию применяемых лекарственных препаратов, особенно при хроническом рецидивирующем инфекционном процессе. Использование для этой цели питательной среды с высокими ростовыми показателями, стандартного состава и простотой приготовления, несомненно, приведет к адекватной терапии такого широко распространенного, отягощенного разнообразными осложнениями заболевания, как мочеполовой трихомоноз.

Наиболее близкой по составу к предлагаемой среде является питательная двухфазная среда для выделения трихомонад (патент 2272834 RU). Недостатком имеющейся среды является отсутствие в ее составе противогрибковых препаратов, в то время как грибки достаточно часто встречаются в материале, выделяемом из мочеполовой системы, кроме того, определение чувствительности трихомонад к лекарственным средствам является первоочередной задачей для практического здравоохранения, в то время как имеющаяся среда не предусматривает введение дополнительных компонентов в свой состав.

Технической задачей является определение чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам.

Она достигается тем, что на коагулированную сыворотку (твердая фаза) наносится жидкая фаза с лекарственным препаратом выбранной концентрации, воздействие которого на трихомонады планируется изучить.

Питательная двухфазная среда для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам, отличающаяся тем, что в качестве жидкой фазы используют среду RPMI-1640 (пр-во «БиолоТ», СПб) с пенициллином, стрептомицином, амфоглюкамином и полимексином М, при следующем соотношении компонентов:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640

10000-30000 ЕД /мл натриевой соли бензилпенициллина

1000-3000 мкг/мл стрептомицина

30-50 Ед/мл амфоглюкамина

3000-5000 Ед/мл полимиксина М

Предлагаемая питательная среда была апробирована на кафедре молекулярной биологии, генетики и биохимии Астраханского государственного университета на 40 образцах материала от больных в течение 2008 г.

Ниже приводятся результаты апробации.

Пример 1.

Для приготовления среды используют компоненты в следующих количествах:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640 (пр-во «БиолоТ», СПб)

10000 ЕД/мл натриевой соли бензилпенициллина

1000 мкг/мл стрептомицина

30 Ед/мл амфоглюкамина

3000 Ед/мл полимиксина М

Далее в среду вносится лекарственный препарат в исследуемой концентрации, чувствительность трихомонад к которому планируется изучить, например метронидазол 0,1 мг/мл.

Антибиотики стерильно разводят каждый в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия их и метронидазол асептически вносят в среду RPMI-1640, конечная концентрация метронидазола составила 0,1 мг/мл.

Посев исследуемого материала осуществляют на поверхность коагулированной сыворотки штрихом бактериологической петлей. Затем на сыворотку наслаивают среду RPMI-1640 с антибиотиками и метронидазолом.

В связи с отсутствием чувствительности трихомонад к лекарственному веществу в исследуемой концентрации на границе раздела сред отмечается их обильный рост.

Пример 2.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640

20000 ЕД/мл натриевой соли бензилпенициллина

2000 мкг/мл стрептомицина

40 Ед/мл амфоглюкамина

4000 Ед/мл полимиксина М

Далее в среду вносится лекарственный препарат в исследуемой концентрации, чувствительность трихомонад к которому планируется изучить, например макмерур 0,1 мг/мл.

Антибиотики стерильно разводят каждый в 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия их и макмерур асептически вносят в среду RPMI-1640, конечная концентрация макмерура составила 0,1 мг/мл.

Инкубацию посевов осуществляют при 37°С 24 ч. Концентрацию макмерура нельзя считать достаточной, так как имеет место слабый рост трихомонад.

Пример 3.

Среду готовят в соответствии с примером 1, но компоненты берут в следующих количествах:

Твердая фаза:

5 мл коагулированной сыворотки «косячком» в пробирке

Жидкая фаза:

5 мл среды RPMI-1640

30000 ЕД/мл натриевой соли бензилпенициллина

3000 мкг/мл стрептомицина

50 Ед/мл амфоглюкамина

5000 Ед/мл полимиксина М

Далее в среду вносится лекарственный препарат в исследуемой концентрации, чувствительность трихомонад к которому планируется изучить, например тинидазол 0,1 мг/мл.

Инкубацию посевов осуществляют при 37°С 24 ч. Концентрация тинидазола достаточная, рост трихомонад отсутствует.

При посеве на предлагаемую среду материала от больных рост сопутствующей бактериальной флоры подавляется. В связи с дополнительным введением в среду противогрибковых антибиотиков амфоглюкамина и полимексина М также отсутствует рост грибковой флоры.

В таблице даны результаты испытания предлагаемой среды при различных видах протистоцидного лекарственного вещества в его составе.

Введение в жидкую фазу среды лекарственного препарата позволяет определить его влияние на рост трихомонад. Подбор оптимальной для лечения концентрации выбранного вещества также возможен при использовании предлагаемой среды. Кроме того, дополнительным преимуществом предлагаемой среды является подавление роста грибковой флоры в связи с дополнительным введением противогрибковых препаратов. Таким образом, использование новой среды при подборе лекарственных препаратов значительно повысит эффективность лечения такого широко распространенного и трудно поддающегося терапии заболевания, как трихомоноз.

Изобретение может быть рекомендовано к применению в практическом здравоохранении в венерологических, урологических и андрологических учреждениях, а также в научной работе лабораторий соответствующего профиля.


Подавление роста трихомонад различными лекарственными препаратами с использованием предлагаемой среды.
Лекарственный препарат	Наличие визуального роста
Метронидазол	Обильный рост трихомонал
Макмерур	Слабый рост трихомонал
Тинидазол	Отсутствие роста трихомонад

Питательная двухфазная среда для определения чувствительности трихомонад к лекарственным препаратам, характеризующаяся тем, что она содержит твердую фазу, представленную коагулированной сывороткой «косячком» в пробирке в количестве 5 мл, и жидкую фазу, содержащую среду RPMI-1640 в количестве 5 мл и раствор натриевой соли бензилпенициллина 10000-30000 ед./мл, раствор стрептомицина 1000-3000 мкг/мл, раствор амфоглюкамина 30-50 ед./мл, раствор полимиксина М 3000-5000 ед./мл соответственно.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при диагностике трихомонадной инфекции. .

Способ молекулярного типирования chlamydia trachomatis // 2378364

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой способ молекулярного типирования Chlamydia trachomatis путем секвенирования вариабельных участков трех генов Chlamydia trachomatis, таких как ompA, tsf, pmpF, полученных из бактериальной ДНК Chlamydia trachomatis, выделенной из клинического материала пациентов с урогенитальным хламидиозом, подвергнутых амплификации с последующим восстановлением последовательностей анализируемых генов, выравниванием и сравнительным анализом нуклеотидных последовательностей.

Vgc2 днк salmonella typhimurium, мутантная бактерия, обладающая пониженной способностью к адаптации к условиям окружающей среды, и способ ее получения // 2370541

Изобретение относится к генетической инженерии, в частности к идентификации генов, участвующих в адаптации организма в среде его обитания, и может быть использовано для создания рекомбинантной бактерии с пониженной адаптацией к конкретной окружающей среде.

Способ выделения галофильных и галотолерантных гетеротрофных жгутиконосцев // 2332449

Изобретение относится к биотехнологии. .

Штамм л-1-23 eimeria tenella (возбудителя кокцидиоза) для производства вакцин, диагностикумов и проведения научных исследований // 2312890

Изобретение относится к ветеринарной паразитологии и биотехнологии. .

Способ экспресс-определения нестерильности питательных сред для глубинного культивирования микроорганизмов, клеток животных и вирусов в биореакторах // 2307166

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в производстве биопрепаратов. .

Основа для выделения и культивирования микроорганизмов // 2279469

Изобретение относится к микробиологии. .

Питательная двухфазная среда для выделения трихомонад // 2272834

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к микробиологии, и может быть использовано для культуральной диагностики трихомоноза. .

Способ получения биомассы возбудителя малярии plasmodium falciparum // 2161650

Изобретение относится к медицинской паразитологии, к способам культивирования малярийного паразита. .

Питательная среда для культивирования лейшманий // 2086644

Изобретение относится к биотехнологии и касается рецептуры питательной среды для культивирования промастигот лейшманий при их вторичной идентификации. .

Питательная двухфазная среда для культивирования микроорганизмов // 2412991

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для культивирования микроорганизмов в искусственных питательных двухфазных средах

Питательная среда для выращивания микроорганизмов deinococcus radiodurans // 2418061

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения питательных сред для выращивания Deinococcus radiodurans

Вакцина для профилактики кокцидиоза (эймериоза) кур // 2465313

Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии и биотехнологии и касается вакцины для профилактики кокцидиоза

Стимулятор роста yersinia pseudotuberculosis // 2502796

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к применению экзометаболитов морской микроводоросли Phaeodactylum tricornutum. Экзометаболиты, выделенные из морской микроводоросли Phaeodactylum tricornutum путем экстракции этилацетатом культуральной жидкости, получаемой в процессе выращивания морской микроводоросли Phaeodactylum tricornutum с последующим удалением растворителя из этилацетатного экстракта и сушкой этилацетатного экстракта до постоянного веса, применяются в качестве стимулятора роста Yersinia pseudotuberculosis. При необходимости осуществляют дополнительную очистку этилацетатного экстракта. Изобретение позволяет расширить арсенал стимуляторов роста Yersinia pseudotuberculosis. 2 табл., 4 пр.

Вакцинная композиция для иммунизации животного против кокцидиоза и способ ее использования // 2525587

Настоящее изобретение относится к вакцинной композиции для иммунизации животного против кокцидиоза и способу иммунизации животного. Охарактеризованная вакцина содержит от приблизительно 10 до приблизительно 1000 ооцист из первого штамма Eimeria и от приблизительно 100 до приблизительно 10000 ооцист второго штамма указанного вида, причем первый и второй штаммы имеют асинхронные эндогенные периоды и первый штамм представляет собой неослабленный штамм Eimeria, а второй штамм представляет собой ранний штамм Eimeria. Представленные изобретения позволяют выработать у домашней птицы иммунитет к кокцидиозу. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 1 пр.

Способ определения мембранной активности веществ на живых клетках // 2545712

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам определения активности веществ, обладающих способностью встраиваться в биологические мембраны клеточных стенок с нарушением функционирования клеток. В измерительные ячейки прибора для автоматизированного подсчета числа живых инфузорий вносят суспензию клеток Tetrahymena pyriformis и испытуемое вещество с последующим определением числа живых клеток в каждую минуту, при этом совпадение динамики изменения числа живых клеток во времени для сравниваемых веществ делают заключение о равенстве их активностей. Методы расчета основаны либо на определении времени инкубации инфузорий с испытуемым веществом, необходимого для гибели половины инфузорий, либо на определении константы скорости гибели клеток, которую удобно рассчитывать по тангенсу угла наклона прямой, характеризующей зависимость логарифма числа подвижных клеток от времени в период наблюдаемого падения числа живых клеток. Обе величины, зависящие от мембранной активности, характеризуют мембранную активность изучаемых веществ и пригодны для сравнения активностей. Способ позволяет определять мембранную активность веществ, обеспечивая возможность стандартизации процесса. 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 3 пр.

Способ извлечения липидов из биомассы // 2555554

Изобретение относится к области переработки биомассы. Предложен способ извлечения липидов из биомассы. Способ включает разрушение клеточных оболочек микроводорослей Chlorella в вихревом электромагнитном поле ферромагнитными частицами с последующей экстракцией липидной фракции. Экстрагирование липидной фракции осуществляют в многоступенчатом экстракционном аппарате с закрученным потоком инертных тел, с использованием органического растворителя. Изобретение позволяет сократить время экстракции и увеличить выход липидной фракции из биомассы микроводорослей. 2 табл.

Способ выделения смеси днк и белков из эпимастиготных форм trypanosoma cruzi // 2558235

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выделения смеси ДНК и белков из эпимастиготных форм штамма TPAP/MX/2002/Albarrada культуры Trypanosoma cruzi. Охарактеризованный способ включает получение биомассы культуры указанного штамма. Далее отмывку полученной биомассы, концентрирование ее до содержания не менее 6×108 клеток в 1 мл, введение в полученную концентрированную биомассу синтетического препарата дефензина α-1 человека с молекулярной массой 3,4 кДа в количестве 20 мкг/мл до конечной его концентрации 3,97 мкМ и выдержку до образования пор в дилипидных мембранах. Далее встряхивают полученную взвесь на шейкере с последующей выдержкой при комнатной температуре в течение не менее 24 часов, затем проводят центрифугирование полученной среды с выделением смеси ДНК и белков в жидкой фазе. Изобретение позволяет получить продукт с пониженным содержанием белковых компонентов и может быть использовано при дальнейшем получении препаратов. 1 з.п. ф-лы, 2 пр.

Способ получения гидролизата для приготовления питательной среды для выращивания микроорганизмов // 2569155

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения гидролизата для приготовления питательной среды для выращивания микроорганизмов. Способ включает гидролиз измельченной соломы фосфорной кислотой при температуре 180-190°С в течение 20 минут и при концентрации фосфорной кислоты в гидролизуемой массе 1 мас.%. Затем проводят отделение твердой фазы. Преимуществом изобретения является снижение расхода гидролизующего агента и сокращение продолжительности процесса гидролиза при увеличении выхода редуцирующих веществ. 1 табл., 5 пр.

Способ биологического контроля листерий // 2575998

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ борьбы с размножением Listeria monocytogenes, а также применение дезинфицирующего средства. Способ включает добавление штамма Willaertia magna, депонированного под номером РТА 7824 в АТСС, или штамма Willaertia magna, депонированного под номером РТА 7825 в АТСС, к потоку газа, потоку жидкости или твердой поверхности. Дезинфицирующее средство содержит штамм Willaertia magna, депонированный под номером РТА 7824 в АТСС, или штамм Willaertia magna, депонированный под номером РТА 7825 в АТСС, применяемого в качестве биоцида к Listeria для обработки потока газа, потока жидкости или твердой поверхности. Изобретения обеспечивают эффективную борьбу с размножением и контаминацией листериоза. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл.