Способ оценки сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте
Владельцы патента RU 2408082:
Федеральное государственное учреждение "Пятигорский государственный научно-исследовательский институт курортологии Федерального медико-биологического агентства" (ФГУ "Пятигорский ГНИИК ФМБА России") (RU)
Изобретение относится к области медицины, в частности к оценке сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте. Проводят однократно экспериментальным животным, например крысам, разовую внутрибрюшинную инъекцию цитостатика, циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. Затем с 5 дня после введения цитостатика начинают общее внешнее фракционированное гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв. Всего проводят 3 процедуры облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв. На 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), и по их значениям вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле
.
При величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза. Способ обеспечивает объективную оценку сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте. 1 табл.
Известен способ оценки постмедикаментозного иммунодефицита посредством разовой внутрибрюшинной инъекции 0,5 мл цитостатика циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного с последующим определением клеточности (КС) селезенки. При достоверном уровне этого показателя после введения циклофосфана констатируют наличие постмедикаментозного иммунодефицита (Н.И.Демешко, Ю.М.Гринзайд и др. Микроволны миллиметрового диапазона в профилактике экспериментального постмедикаментозного иммунодефицита цитостатического генеза. // Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии: Материалы международного симпозиума «Здравница-2006». Сочи, 30 мая - 2 июня 2006 г. - Сочи, 2006. - С.91-92).
Данный способ имеет ряд недостатков, связанных, в первую очередь, с неравномерностью распределения иммунного ответа на цитостатик по различным показателям в реальной ситуации (уровень одних показателей возрастает, других снижается, и наоборот, в связи с чем бывает трудно распознать истинную иммуносупрессию). Он также не предусматривает возможность оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения - ситуации, реальной для современной онкологической практики. Предлагаемый способ лишен указанных недостатков.
Технический результат предлагаемого способа заключается в возможности объективной оценки иммунодефицита сочетанного генеза - после воздействия цитостатика и гамма-облучения.
Технический результат достигается следующим образом: оценку сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения в эксперименте осуществляют путем однократного проведения экспериментальным животным, например крысам, разовой внутрибрюшинной инъекции цитостатика, например циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного, с 5 дня после введения цитостатика начинают общее внешнее фракционированное гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, всего 3 процедуры облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв, затем на 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле
и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза.
Способ выполняют следующим образом. Вначале животным проводят разовую внутрибрюшинную инъекцию раствор циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного. С 5 дня после введения циклофосфана начинают общее внешнее гамма-облучение животных - в разовой дозе 2 Зв, общим количеством 6 Зв (3 процедуры облучения через день). На 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки, количество лейкоцитов в крови, содержание в сыворотке крови тироксина и серотонина.
Вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле
и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного (цитостатик и внешнее гамма-облучение) генеза.
Данная формула индекса супрессии включает произведение показателей, характеризующих катаболические процессы, в числителе, и произведение количественных показателей иммунокомпетентных клеток в знаменателе, и поэтому величина ИС возрастает с нарастанием иммуносупрессии.
Способ был апробирован в условиях отдела изучения механизмов действия физических факторов Пятигорского государственного НИИ курортологии. Объектом исследования послужили 19 крыс линии Вистар, разделенные на 2 группы. Интактные крысы 1 группы (9) служили контролем для остальных групп. У 10 животных основной группы проводилось моделирование иммунодефицитных нарушений путем однократной инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения проводились забой животных и лабораторные анализы.
Данные исследований представлены в нижеследующей таблице.
| Показатель | группа | N | М | m | σ | Интервал М±σ | ||
| Т4*Серотонин/ЛК*КС Ед. | интактная | 7 | 0,71 | 0,326 | 0,86 | -0,15 | - | 1,57 |
| Цф+обл | 8 | 17,4 | 4,24 | 12,0 | 5,0 | - | 29,4 | |
| Т4 нмоль/л | интактная | 7 | 11,6 | 1,6 | 4,23 | 7,37 | - | 15,83 |
| Цф+обл | 8 | 49,4 | 9,23 | 26,1 | 23,3 | - | 75,5 | |
| Серотонин нг/мл | интактная | 7 | 7,94 | 1,95 | 5,16 | 2.78 | - | 13,10 |
| Цф+обл | 8 | 5,20 | 0,91 | 2,57 | 2,63 | - | 7,77 | |
| ЛК·109 кл/л | интактная | 7 | 6,43 | 0,95 | 2,51 | 3,92 | - | 8,94 |
| Цф+обл | 8 | 0,35 | 0,07 | 0,200 | 0,15 | - | 0,55 | |
| КС мг | интактная | 7 | 92,2 | 37,7 | 99,72 | -7,52 | - | 191,9 |
| Цф+обл | 8 | 44,2 | 13,21 | 37,37 | 6,83 | - | 81,57 |
Нормальные значения ИС, исчисленные согласно методике Л.С.Каминского (1967) как М±σ, составили по максимуму 0,71+0,86=1,57. Меньшие значения ИС свидетельствовали об отсутствии иммуносупрессии (в частности, в интактной группе), большие, приближающиеся к значениям опытной группы, - ее наличие.
Способ может быть проиллюстрирован следующими примерами.
1. У интактной крысы №2 не производилось никаких воздействий. В сроки, соответствующие эксперименту в основной группе, проведены ее лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 8,89 нмоль/л, серотонина - 1,53 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 8,5·109 кл/л, количество лейкоцитов селезенки - клеточность селезенки (КС) 226,9·106 кл/100 мг массы органа. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 0,007.
2. У интактной крысы №4 также не производилось никаких воздействий. В соответствующие сроки проведены лабораторные исследования. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 1,67 нмоль/л, серотонина - 11,86 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 5,0·109 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 26,6·106 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 1,33.
3. У крысы №24 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 79,4 нмоль/л, серотонина - 2,27 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,5·109 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 12,7·106 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 28,39.
Результат расценен как иммуносупрессия.
4. У крысы №29 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее. Уровни в сыворотке крови Т4 составили - 36,1 нмоль/л, серотонина - 4,97 нг\мл, количество лейкоцитов крови (ЛК) - 0,7·10 кл/л, клеточность селезенки (КС) - 22,8·106 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = T4·Серотонин/ЛК·КС = 11,22.
Результат расценен как иммуносупрессия.
5. У крысы №27 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее: клеточность селезенки (КС) - 59,4·106 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 24,65. Результат расценен как иммуносупрессия.
6. У крысы №30 моделировались иммунодефицитные нарушения путем инъекции циклофосфана дозой 4 мг/100 г массы тела животного с последующим (на 5 день после инъекции циклофосфана) фракционированным облучением (3 раза по 2 Гр, через день, суммарная доза 6 Гр). На 4 сутки после последнего сеанса облучения при лабораторном исследовании животного обнаружено следующее, клеточность селезенки (КС) - 11,2·106 кл/100 мг. Индекс супрессии ИС = Т4·Серотонин/ЛК·КС = 33,60. Результаты расценены как иммуносупрессия.
Способ оценки иммунодефицита после сочетанного действия цитостатика и внешнего гамма-облучения путем однократного проведения экспериментальным животным разовой внутрибрюшинной инъекции цитостатика, циклофосфана в дозе 4 мг/100 г массы тела животного, с последующим проведением с 5 дня после введения цитостатика общего фракционированного гамма-облучения животных - в разовой дозе 2 Зв, в количестве 3 процедур облучения через день при общей эквивалентной дозе 6 Зв, затем на 4 день после последнего сеанса облучения животных забивают и исследуют у них клеточность селезенки (КС), количество лейкоцитов в крови (ЛК), содержание в сыворотке крови тироксина (Т4) и серотонина (СТ), вычисляют индекс супрессии (ИС) по формуле
и при величине ИС, превышающей 1,57 ед., констатируют наличие иммунодефицита сочетанного генеза.
