Иммуногены для вакцин против менингита а

Изобретение относится к олигосахариду, пригодному для вакцины против менингита А, включающему первую маннозную единицу, имеющую спейсер в альфа-конфигурации в С-1, где указанный спейсер способен к конъюгации с белком, и соединенную со второй маннозной единицей посредством 1,6-связи, которая соединяет С-6 первой единицы с С-1 второй единицы, при этом 1,6-связь включает фосфонат. Изобретение также относится к способам получения олигосахарида и усовершенствованным способам получения производного маннозы, пригодного для получения иммуногенного олигосахарида. Также изобретение относится к фармацевтической композиции для индуцирования иммунной реакции, иммуногенной композиции, способной вызвать образование защитных антител против менингита А и вакцине против менингита А, которые включают олигосахарид. Полученные гликоконъюгаты имеют С-фосфонатную связь гораздо более стабильную, чем природные фосфодиэфирные связи, а также повышенную иммунологическую активность. 10 н. и 41 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Олигосахарид, включающий первую маннозную единицу и вторую маннозную единицу, где первая маннозная единица включает спейсерный компонент в альфа-конфигурации при С-1, где спейсерный компонент способен к конъюгации с белком,
где первая маннозная единица соединяется со второй маннозной единицей посредством 1,6-связи, которая соединяет С-6 первой единицы с С-1 второй единицы и где 1,6-связь включает фосфонат.

2. Олигосахарид по п.1, где 1,6-связь находится в альфа-конфигурации.

3. Олигосахарид по п.1 или 2, где первая маннозная единица является 2-дезокси-2-аза-замещенным производным маннозы.

4. Олигосахарид по п.1 или 2, где вторая маннозная единица является 2-дезокси-2-аза-замещенным производным маннозы.

5. Олигосахарид по п.1 или 2, включающий, по крайней мере, три маннозных единицы.

6. Олигосахарид по п.1 или 2, где 1,6-связь имеет вид [С-1 второй маннозной единицы]-СН₂-Р-О-[С-6 первой маннозной единицы].

7. Олигосахарид по п.1 или 2, где каждый присутствующий 2-аза заместитель выбран из NH₂, NHAc или N₃.

8. Олигосахарид по п.1, где третья маннозная единица соединяется со второй маннозной единицей связью, которая включает фосфор и где связь соединяет С-6 второй маннозной единицы с С-1 третьей маннозной единицы.

9. Олигосахарид по п.8, где связь, которая соединяет С-6 второй маннозной единицы с С-1 третьей маннозной единицы, включает фосфонат.

10. Олигосахарид по п.8 или 9, который представлен формулой:

где каждый Az независимо выбран из NH₂, NHAc и N₃;
Z представлен спейсерным компонентом, который способен к конъюгации с белком и который может быть в защищенной форме или в незащищенной форме, или может быть конъюгирован с белком;
каждый R¹ является независимо Н, необязательно замещенным С1-С6 алкилом или М, где М представлен катионом;
X является О или СН₂;
каждый R³ и R⁴ независимо выбраны из группы, состоящей из Н, Ас, Bn;
и R⁶ является Н или защитной группой, или фосфатом, или связью с дополнительной сахаридной единицей.

11. Олигосахарид по п.1 или 8, дополнительно включающий белок, который конъюгирован с олигосахаридом через спейсерный компонент, который находится в альфа-конфигурации при С-1 первой маннозной единицы.

12. Олигосахарид по п.11, где белок является инактивированным бактериальным токсином, выбранным из дифтерийного анатоксина, коклюшного анатоксина, E.coli LT, E.coli ST, эндотоксина Pseudomonas aeruginosa (rEPA) или столбнячного анатоксина, или где белок является CRM197.

13. Олигосахарид по п.1 или 8, где спейсерный компонент включает гидроксил или амин, каждый из которых необязательно защищен или необязательно конъюгирован с белком.

14. Олигосахарид по п.10, где R³ является ацильной группой, a R⁴ является Н.

15. Олигосахарид по п.1, который включает формулу:

где каждый Az представлен аза-заместителем;
каждый R³ и R⁴ независимо представлены Н или защитной группой; R⁶ представлен Н, защитной группой или линкером, присоединенным к другой сахаридной единице;
один из W и X является О, а другой из W и X является СН₂;
n равно 2;
один Y является =O, а другой Y является OR,
при этом R - Н, С1-С6алкил, или С6-С12арил, или С6-С12арилалкил, или R это М, где М является катионом; и
Z является OR′, SR′ или NR′₂, при этом каждый R′ является независимо Н или необязательно замещенной алкильной, ацильной, арильной, арилалкильной, гетероалкильной, гетероацильной, гетероарильной или гетероарилалкильной группой;
или Z представлен линкером, присоединенным к другой сахаридной единице, или спейсерным компонентом, конъюгированным с белком.

16. Олигосахарид по п.15, где белок конъюгирован с олигосахаридом через амидную или эфирную связь.

17. Олигосахарид по п.15, где W является СН₂, X является О, Az является NHAc, a n равен 2.

18. Олигосахарид по п.15 или 16, где R является М, a Z включает -О-(CH₂)_n-NH-, где n равен 2-6.

19. Олигосахарид по п.15 или 16, где каждый R³ и R⁴ независимо представлены Н или Ас.

20. Способ получения олигосахарида, включающий:
связывание первого компонента, который включает, по крайней мере, одну аза-замещенную маннозную единицу, посредством 1,6-связи, которая включает фосфонат, со вторым компонентом, который включает, по крайней мере, одну аза-замещенную маннозную единицу,
где первый компонент включает спейсерный компонент, при этом спейсерный компонент связан с С-1 маннозной единицы в альфа-конфигурации.

21. Способ по п.20, где применяют реакцию Мицунобу, чтобы связать С-6 маннозной единицы первого компонента с С-1 маннозной единицы второго компонента.

22. Способ по любому из пп.20 и 21, где 1,6-связь является 1,6-альфа-связью.

23. Способ по любому из пп.20 и 21, где связанные N-замещенные маннозные единицы включают формулу (1)

где каждый Az представлен аза-заместителем;
каждый R³ и R⁴ независимо представлен Н или защитной группой;
R⁶ представлен Н, защитной группой или линкером, прикрепленным к другой сахаридной единице;
один из W и X является О, а другой из W и X является СН₂;
n равно 2;
один Y является =O, а другой Y является OR;
где R - Н, С1-С6алкил или С6-С12арил, или С6-С12арилалкил, или R является М, где М - это катион; и
Z представлен компонентом, способным к конъюгации с белком, который может находиться в защищенной форме.

24. Способ по п.23, где X является СН₂, a W является О.

25. Способ по п.23, где, по крайней мере, один аза-заместитель в маннозной единице является амином или замещенным амином, который получен восстановлением азидного (N₃) заместителя.

26. Способ по п.25, где амин или замещенный амин находится в положении 2 маннозной единицы.

27. Способ по п.25, где Z или спейсерный компонент в аномерном центре включает амино-замещенную алкоксильную группу.

28. Способ по п.23, дополнительно включающий связывание второй маннозной единицы с дополнительным сахаридом путем образования связи между кислородом OR⁶ в формуле (1) и дополнительным сахаридом.

29. Способ по п.28, где дополнительный сахарид включает, по крайней мере, одну маннозную единицу.

30. Способ по п.29, где дополнительный сахарид связан со второй маннозной единицей 1,6-альфа-связью.

31. Способ по п.28, где R⁶ является Н или Ас, и аномерный центр каждой присутствующей маннозной единицы находится в альфа-конфигурации.

32. Способ синтеза олигосахарида из альфа-связанных маннозных единиц, включающий:
комбинирование маннозной единицы, включающей формулу (2), где R⁶ является С1-С6 ацилом или Н, и R¹, R³, R⁴, Az и Z являются такими, как определено в п.15;

с удлиняющим мономером формулы (3), где R^x представлен С1-С6 ацильной группой, а М представлен Н или катионом;

в условиях реакции Мицунобу, посредством чего получают олигосахарид, включающий, по крайней мере, две 2-аза-замещенных маннозных единицы, соединенные 1,6-альфа-связью.

33. Способ по п.32, где условия реакции Мицунобу поддерживают в течение длительного периода времени, посредством чего получают олигосахарид формулы (4)

где р является целым числом от 1 до 20.

34. Способ по п.32 или 33, где каждый Az представлен NHAc или N₃.

35. Способ по п.34, где р равно 1-5.

36. Способ по п.34, где р равно 2-10.

37. Способ по п.32, дополнительно включающий конъюгацию олигосахарида с белком.

38. Способ по п.37, где белок является инактивированным бактериальным токсином, выбранным из дифтерийного анатоксина, коклюшного анатоксина, E.coli LT, E.coli ST, эндотоксина Pseudomonas aeruginosa (rEPA) или столбнячного анатоксина.

39. Способ по п.37, где белок является CRM197.

40. Олигосахарид, приготовленный способом по п.32.

41. Иммуногенное соединение, приготовленное способом по п.32.

42. Фармацевтическая композиция для индуцирования иммунной реакции, включающая, по крайней мере, один олигосахарид по п.1, и, по крайней мере, один фармацевтически приемлемый наполнитель.

43. Иммуногенная композиция, способная вызвать образование защитных антител против менингита А, включающая, по крайней мере, одно соединение по п.1.

44. Вакцина против менингита А, включающая, по крайней мере, одно соединение по п.1.

45. Вакцина против менингита А по п.44, включающая олигосахарид, конъюгированный с белком.

46. Способ получения производного маннозы, пригодного для приготовления иммуногенного олигосахарида, включающий:
циклизацию соединения формулы (2) с электрофилом

с образованием соединения формулы (3)

где каждый из R², R³, R⁴ и R⁶ независимо является Н или защитной группой;
и Е1 представлен остатком, происходящим из электрофила.

47. Способ по п.46, дополнительно включающий стадию замещения Е1 фосфорной группой.

48. Способ по п.46, дополнительно включающий замещение OR² в формуле (2) или в формуле (3) азидом.

49. Способ по п.48, где стадия замещения включает реакцию Мицунобу.

50. Способ по п.49, где в реакции Мицунобу применяется фосфорил-азид в качестве источника азида.

51. Усовершенствованный способ получения 2-азидо-2-дезокси-D-маннопиранозы, включающий:
образование трифлата в положении 2 производного 1,3,4,6-тетра-О-ацил-глюкопиранозы и
замещение трифлата азидным нуклеофилом;
где усовершенствование включает минимизацию воздействия влаги на неочищенную реакционную смесь во время стадий выделения и очистки продукта.