Способ оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов
Владельцы патента RU 2413945:
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГОУ ВПО НГСХА) (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования. Сущность способа оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов заключается в том, что эритроциты выделяют, помещают в кювету агрегометра, добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ. При этом об изменении состояния цитоскелета судят по снижению агрегационной способности эритроцитов. Использование способа позволяет быстро и просто определить состояние цитоскелета эритроцита. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследований.
Известен способ оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов, взятый за прототип (Mohandas N. et al., Blood. V.59. P.768-774), включающий выделение эритроцитов из крови, получение из них замкнутых теней и определение механической стабильности при высокой скорости сдвига. Однако способ трудоемок (получение замкнутых теней) и требует дорогого специального оборудования (эктацитометра).
Задача создания нового, несложного, высокочувствительного, не требующего специального оборудования, способа определения изменения состояния цитоскелета эритроцитов является актуальной.
Задача достигается способом, который заключается в том, что эритроциты выделяют из крови, помещают в кювету агрегометра, куда в качестве агента, вызывающего агрегацию эритроцитов, добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ. Процесс агрегации регистрируется фотоколориметрически с записью на самописце в виде агрегатограммы. Об изменении состояния цитоскелета эритроцитов судят по снижению агрегационной способности эритроцитов.
Способ упрощает процедуру оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов.
Способ осуществляется следующим образом. Эритроциты трижды отмывают от плазмы и белых клеток центрифугированием в 10-кратном объеме физиологического раствора. Отмытые эритроциты ресуспендируют в соотношении 1:200 в забуференном физиологического растворе (10 мМ трис-HCl, 146 мМ NaCl, pH 7.4), после чего суспензию клеток помещают в кювету для изучения агрегации и добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ. Регистрацию агрегационной способности эритроцитов осуществляют фотометрическим методом (Шереметьев Ю.А. и др. Биофизика. 2000. Т.45. №1. С.79-82).
Известно, что при pH среды выше 8,0 и при повышенном содержании внутриклеточного АТФ в эритроцитах происходит снижение стабильного состояния цитоскелета (Low P.S. et al., Blood 1991. Vol.7. P.1581-1586; Sheetz M.P., Casaly J.J. Biol. Chem. 1980. Vol.255. P.9955-9960).
Нами выяснено, что при высоких концентрациях хлористого лантана (400-600 мкМ) у эритроцитов с измененным состоянием цитоскелета происходит снижение агрегационной способности.
Пример 1. Оценка изменения состояния цитоскелета эритроцитов, инкубированных при pH 8,5. Из таблицы видно, что после инкубации суспензии эритроцитов при pH 8,5 в течение 10 мин происходит снижение их агрегационной способности после добавления 500 мкМ хлористого лантана.
Пример 2. Оценка изменения состояния цитоскелета эритроцитов, имеющих повышенный уровень АТФ. Эритроциты с повышенным уровнем АТФ (уровень АТФ повышался до 2,86±0,17 мкмоль/мл относительно 1,16±0,08 мкмоль/мл в контроле) получали после их инкубации в буферной среде (15 мМ трис-HCl, 146 мМ NaCl, pH 7,6), содержащей 2 мМ аденина, 10 мМ инозина, 10 мМ глюкозы и 150 мМ Na2HPO4 в течение 15 ч при 37°С.
Из таблицы видно, что при повышении АТФ в эритроцитах происходит снижение их агрегационной способности после добавления 500 мкМ хлористого лантана.
Приведенные примеры показывают возможности применения способа оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов.
| Концентрация лантана, мкМ | Максимальная амплитуда агрегатограммы, мм | ||
| Контроль | Эритроциты с повышенным уровнем АТФ | pH 8,5 | |
| 500 | 60,20±4,50 | 30,15±3,45 | 33,61±3,60 |
Способ оценки изменения состояния цитоскелета эритроцитов, включающий выделение эритроцитов из крови и регистрацию их агрегационной способности, отличающийся тем, что изменение состояния цитоскелета определяют по изменению агрегационной способности эритроцитов, при этом эритроциты помещают в кювету агрегометра, добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 400-600 мкМ, об изменении состояния цитоскелета судят по снижению агрегационной способности эритроцитов.
