Производные азолопиридин-2-она как ингибиторы липаз и фосфолипаз
Настоящее изобретение относится к соединениям общей формулы I и к их физиологически совместимым солям. В общей формуле I
Х обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)- или =N-, причем, по меньшей мере, одна =C(-R-)- замещена посредством =N-; Y обозначает -O-; R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, (С1-С6)-алкил; R1 обозначает (С4-С16)-алкил, (С1-С4)-алкилен-(С6-С10)-арил, (C1-С4)-алкилен-(С3-С12)-циклоалкил, (С9-С10)-бицикл, причем арил однократно или многократно может быть замещен (С1-С6)-алкилом; R2 обозначает водород; или R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную 6-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены -CHR4-; R4 обозначает (С1-С6)-алкил. Изобретение также относится к фармацевтической композиции, обладающей ингибирующим действием на эндотелиальные липазы (EL) и содержащей одно или несколько соединений формулы I, к применению соединений изобретения для получения лекарственного средства и к способам получения соединений формулы I. 5 н. и 6 з.п. ф-лы.
Данное изобретение касается производных азолопиридин-2-она общей формулы I, их фармацевтически совместимых солей и их применения в качестве лекарственных средств.
Похожие по структуре соединения описаны в европейском патенте EP 1275653. Однако их используют в качестве фунгицидов.
Соединения с ингибирующим действием на гормон-чувствительные липазы описаны, например, в уровне техники в заявках WO2004/035550, WO2005/073199 или WO03/051842.
Соединения с ингибирующим действием на эндотелиальные липазы описаны, например, в уровне техники в заявках WO2004/094394, WO2004/094393.
Задачей данного изобретения является получение соединений, вызывающих ингибирование гормон-чувствительных липаз или эндотелиальных липаз.
Объектом изобретения являются производные азолопиридин-2-она общей формулы I,
где:
X обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)- или =N-, причем, по меньшей мере, одна и максимально две группы =C(-R-)- замещены посредством =N-;
Y обозначает -O- или -S-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, (C1-C6)-алкил, (C1-C3)-алкилокси-(C1-C3)-алкилен, гидрокси-группу, (C1-C6)-алкилмеркапто-группу, амино-группу, (C1-C6)-алкиламино-группу, ди-(C2-C12)-алкиламино-группу, (C1-C6)-алкилкарбонил, COOR3, трифторметил, (C1-C6)-алкилсульфонил, (C1-C6)-алкилсульфинил, аминосульфонил, пентафторсульфанил, (C6-C10)-арил, (C5-C12)-гетероарил, CO-NR6R7, O-CO-NR6R7, O-CO-(C1-C6)-алкилен-CO-O-(C1-C6)-алкил, O-CO-(C1-C6)-алкилен-CO-OH, O-CO-(C1-C6)-алкилен-CO-NR6R7 или незамещенную, или одно- или многократно замещенную посредством F (C1-C6)-алкилокси-группу;
R1 обозначает (C4-C16)-алкил, (C1-C4)-алкилен-(C6-C10)-арил, (C1-C4)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C4)-алкилен-(C3-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл, причем арил, гетероарил, циклоалкил или бицикл однократно или многократно могут быть замещены галогеном, (C1-C6)-алкилом, (C1-C3)-алкилокси-группой, гидрокси-группой, (C1-C6)-алкилмеркапто-группой, амино-группой, (C1-C6)-алкиламино-группой, ди-(C2-C12)-алкиламино-группой, моно-(C1-C6)-алкиламинокарбонилом, ди-(C2-C8)-алкиламинокарбонилом, (C1-C6)-алкоксикарбонилом, (C1-C6)-алкилкарбонилом, циано-группой, трифторметилом, трифторметилокси-группой, (C1-C6)-алкилсульфонилом, аминосульфонилом;
R2 обозначает водород, (C1-C6)-алкил; или
R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную или частично ненасыщенную 4- 7-членную кольцевую систему или бициклическую насыщенную или частично ненасыщенную 8- 14-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены одним-тремя атомами или атомными группами из ряда: -CHR4-, -CR4R5-, -(C=R4)-, -NR6-, -C(=O)-, -O-, -S-, -SO-, -SO2-, при условии, что два элемента из ряда -O-, -S-, -SO-, -SO2- не могут быть расположены рядом;
R3 обозначает водород, (C1-C6)-алкил, бензил;
R4, R5 обозначают одинаковые или разные (C1-C6)-алкил, галоген, трифторметил, COOR3, циклопропил, циклопропилен;
R6, R7 обозначают одинаковые или разные водород, (C1-C6)-алкил, -(C6-C10)-арил, (C5-C12)-гетероарил, (C3-C12)-циклоалкил, (C1-C4)-алкилен-(C6-C10)-арил, (C1-C4)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C4)-алкилен-(C4-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл;
таутомерные формы соединений, и также их фармацевтически совместимые соли.
Предпочтительны соединения формулы I, где
R1 обозначает (C5-C16)-алкил, (C1-C4)-алкилен-(C6-C10)-арил, (C1-C4)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C4)-алкилен-(C3-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл, причем арил, гетероарил, циклоалкил или бицикл однократно или многократно могут быть замещены галогеном, (C1-C6)-алкилом, (C1-C3)-алкилокси-группой, гидрокси-группой, (C1-C6)-алкилмеркапто-группой, амино-группой, (C1-C6)-алкиламино-группой, ди-(C2-C12)-алкиламино-группой, моно-(C1-C6)-алкиламинокарбонилом, ди-(C2-C8)-алкиламинокарбонилом, (C1-C6)-алкоксикарбонилом, (C1-C6)-алкилкарбонилом, циано-группой, трифторметилом, трифторметилокси-группой, (C1-C6)-алкилсульфонилом, аминосульфонилом.
Особенно предпочтительны соединения формулы I, где
X обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)- или =N-, причем одна группа =C(-R-)- замещена посредством =N-;
Y обозначает -O-, -S-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, (C1-C6)-алкил, гидрокси-группу, трифторметил, моно-(C1-C6)-алкиламинокарбонил, ди-(C2-C8)-алкиламинокарбонил, COOR3, (C1-C6)-алкилсульфонил, аминосульфонил, (C6-C10)-арил, (C5-C12)-гетероарил, (C1-C6)-алкилкарбонил, CO-NR6R7, O-CO-NR6R7, O-CO-(C1-C6)-алкилен-CO-O-(C1-C6)-алкил, O-CO-(C1-C6)-алкилен-CO-NR6R7 или незамещенную, или одно- или многократно замещенную посредством F (C1-C6)-алкилокси-группу;
R1 обозначает (C6-C12)-алкил, (C1-C3)-алкилен-(C6-C10)-арил, (C1-C3)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C3)-алкилен-(C4-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл, причем арил, гетероарил, циклоалкил или бицикл однократно или многократно могут быть замещены галогеном, (C1-C6)-алкилом, (C1-C3)-алкилокси-группой, гидрокси-группой, амино-группой, (C1-C6)-алкиламино-группой, трифторметилом;
R2 обозначает водород, (C1-C6)-алкил; или
R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную 5- 6-членную кольцевую систему или бициклическую насыщенную или частично ненасыщенную 9- 10-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены одним-тремя атомами или атомными группами из ряда: -CHR4-, -CR4R5-, -(C=R4)-, -NR6-, -O-, -S-, при условии, что два элемента из ряда -O-, -S- не могут быть расположены рядом;
R3 обозначает водород, (C1-C6)-алкил, бензил;
R4, R5 обозначают одинаковые или разные (C1-C6)-алкил, галоген, трифторметил, COOR3, циклопропил, циклопропилен;
R6, R7 обозначают одинаковые или разные водород, (C1-C6)-алкил, (C6-C10)-арил, (C5-C12)-гетероарил, (C3-C12)-циклоалкил, (C1-C4)-алкилен-(C6-C10)-арил, (C1-C4)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C4)-алкилен-(C4-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл.
Особенно предпочтительны также соединения формулы I, где
X обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)- или =N-, причем одна группа =C(-R-)- замещена посредством =N-;
Y обозначает -O-, -S-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, (C1-C6)-алкил, гидрокси-группу, трифторметил, моно-(C1-C6)-алкиламинокарбонил, ди-(C2-C8)-алкиламинокарбонил, COOR3, (C1-C6)-алкилсульфонил, аминосульфонил, (C6-C10)-арил, (C5-C12)-гетероарил, (C1-C6)-алкилкарбонил, CO-NR6R7, O-CO-NR6R7, O-CO-(C1-C6)-алкилен-CO-O-(C1-C6)-алкил, O-CO-(C1-C6)-алкилен-CO-NR6R7 или незамещенную или одно- или многократно замещенную посредством F (C1-C6)-алкилокси-группу;
R1 обозначает (C6-C12)-алкил, (C1-C2)-алкилен-(C6-C10)-арил, (C1-C2)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C2)-алкилен-(C4-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл, причем арил, гетероарил, циклоалкил или бицикл одно- или многократно могут быть замещены галогеном, (C1-C6)-алкилом, (C1-C3)-алкилокси-группой, гидрокси-группой, амино-группой, (C1-C6)-алкиламино-группой, трифторметилом;
R2 обозначает водород; или
R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную 5- 6-членную кольцевую систему или бициклическую насыщенную или частично ненасыщенную 9- 10-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены одним-тремя атомами или атомными группами из ряда: -CHR4-, -CR4R5-, -(C=R4)-, -NR6-, -O-, -S-, при условии, что два элемента из ряда -O-, -S- не могут быть расположены рядом;
R3 обозначает водород, (C1-C6)-алкил, бензил;
R4, R5 обозначают одинаковые или разные (C1-C6)-алкил, галоген, трифторметил, COOR3, циклопропил, циклопропилен;
R6, R7 обозначают одинаковые или разные водород, (C1-C6)-алкил, -(C6-C10)-арил, (C3-C12)-циклоалкил, (C1-C4)-алкилен-(C6-C10)-арил.
В следующей особенно предпочтительной форме выполнения соединений формулы I
R6, R7 обозначают одинаковые или разные водород, (C1-C6)-алкил или (C3-C6)-циклоалкил.
Предпочтительны также соединения формулы I, где
X в положении 5, 6 и 7 обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)-, в положении 4 обозначает =N-.
Далее предпочтительны также соединения формулы I, где
X в случае необходимости в положении 4 или 7 обозначает =C(-R)- с R=водород, в положении 5 или 6 обозначает =C(-R)-, где R не является водородом.
Наиболее предпочтительны соединения формулы I, где
Y обозначает -O-, -S-;
R1 обозначает (C6-C12)-алкил, бензил, (C1-C3)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C3)-алкилен-(C4-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл, причем бензил, гетероарил, циклоалкил или бицикл могут быть замещены галогеном, (C1-C6)-алкилом, (C1-C3)-алкилокси-группой или трифторметилом;
R2 обозначает водород; или
R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную 5- 6-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены одним-двумя атомами или атомными группами из ряда: -CHR4-, -NR6, где R4 определен, как указано выше, и R6 обозначает (C1-C6)-алкил или циклопропил.
В форме выполнения соединений формулы I
X обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)- или =N-, причем одна группа =C(-R-)- замещена посредством =N-;
В форме выполнения соединений формулы I
Y обозначает -O-.
В другой форме выполнения соединений формулы I
Y обозначает -S-.
В особенной форме выполнения соединений формулы I
R2 обозначает водород.
Далее совсем особенно предпочтительны соединения формулы I, где
Y обозначает -O-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, гидрокси-группу или (C1-C6)-алкил;
R1 обозначает (C7-C12)-алкил, бензил, (C1-C3)-алкилен-(C5-C12)-гетероарил, (C1-C3)-алкилен-(C4-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл, причем бензил, гетероарил, циклоалкил или бицикл могут быть замещены галогеном, (C1-C6)-алкилом, (C1-C3)-алкилокси-группой или трифторметилом;
R2 обозначает водород.
Далее наиболее предпочтительны также соединения формулы I, где
Y обозначает -O-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген или (C1-C6)-алкил;
R1 обозначает (C6-C12)-алкил, бензил, -CH2-(C5-C12)-гетероарил, -CH2-(C4-C12)-циклоалкил, (C8-C14)-бицикл, причем бензил, гетероарил, циклоалкил или бицикл могут быть замещены галогеном, (C1-C6)-алкилом, (C1-C3)-алкилокси-группой или трифторметилом;
R2 обозначает водород.
Далее наиболее предпочтительны также соединения формулы I, где
Y обозначает -O-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген или (C1-C6)-алкил;
R1 обозначает (C6-C12)-алкил, бензил, -CH2-(C4-C12)-циклогексил, инданил, тетрагидронафтил, причем бензил, циклогексил, инданил или тетрагидронафтил могут быть замещены (C1-C6)-алкилом;
R2 обозначает водород.
Изобретение касается соединений формулы I, в форме их солей, рацематов, рацемических смесей и чистых энантиомеров, а также их диастереомеров и смесей.
Алкильные и алкиленовые остатки в заместителях R1, R2, R3, R4, R5, R6 и R7 могут быть как неразветвленными, так и разветвленными. Галоген обозначает фтор, хлор, бром или йод, в особенности фтор или хлор. Алкильные и алкиленовые остатки могут быть однократно- или многократно замещены подходящими группами.
Под арилом понимают ароматическую карбоциклическую моно- или бициклическую кольцевую систему, содержащую 6-10 атомов в кольце или в кольцах. Арильные остатки могут быть однократно или многократно замещены подходящими группами.
Гетероарил представляет собой моно- или бициклическую ароматическую кольцевую систему с 5-12 членами в кольце, где по меньшей мере один атом в кольцевой системе является гетероатомом из ряда N, O и S.
Подходящими «гетероарильными кольцами» или «гетероарильными остатками» являются, например, бензимидазолил, бензофуранил, бензотиофенил, бензоксазолил, бензтиазолил, бензтриазолил, бензтетразолил, бензизоксазолил, бензизотиазолил, хинолинил, фурил, фуразанил, имидазолил, 1H-индазолил, индолил, 1,2,3-оксадиазолил, 1,2,4-оксадиазолил, 1,2,5-оксадиазолил, 1,3,4-оксадиазолил, пиримидинил, пиразинил, пиразолил, пиридил, пирролил, тиазолил, 1,2,3-тиадиазолил, 1,2,4-тиадиазолил, 1,2,5-тиадиазолил, 1,3,4- тиадиазолил, тиофенил.
Предпочтительными гетероарильными остатками являются тиофенил, пиразолил и пиридил. Гетероарильные кольца или гетероарильные остатки могут быть однократно или многократно замещены подходящими группами.
Циклоалкильный остаток представляет собой циклическую систему, содержащую одно или несколько колец, которая является насыщенной или частично ненасыщенной (с одной или двумя двойными связями), которая построена исключительно из атомов углерода. Циклоалкильные остатки могут быть однократно или многократно замещены подходящими группами.
Под бициклом понимают бициклическую кольцевую систему, которая является насыщенной или частично ненасыщенной, которая кроме углерода может содержать еще один или несколько гетероатомов, как, например, азот, кислород или сера. Далее к этому определению относятся также кольцевые системы, содержащие конденсированные бензольные ядра. Например, могли бы быть названы тетрагидронафтильный, альфа- или бета-тетралоновый, инданильный или индан-1-он-ильный остаток. Предпочтительными бициклическими остатками являются остатки формулы Ic
Ic
с q=1 или 2. Бициклические остатки могут быть однократно или многократно замещены подходящими группами.
Фармацевтически совместимые соли, благодаря их более высокой растворимости в воде по отношению к исходным или основным соединениям, являются особенно предпочтительными для медицинского использования. Эти соли должны иметь фармацевтически совместимый анион или катион. Подходящими фармацевтически совместимыми кислотно-аддитивными солями соединений согласно изобретению являются соли неорганических кислот, как соляная кислота, бромистоводородная кислота, фосфорная кислота, метафосфорная кислота, азотная кислота и серная кислота, а также органических кислот, как, например, уксусная кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, этансульфоновая кислота, фумаровая кислота, глюконовая кислота, гликолевая кислота, изетионовая кислота, молочная кислота, лактобионовая кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, метансульфоновая кислота, янтарная кислота, п-толуолсульфоновая кислота и винная кислота. Подходящими фармацевтически совместимыми основными солями являются соли аммония, соли щелочных металлов (как соли натрия и калия), соли щелочноземельных металлов (как соли магния и кальция) и соли трометамола (2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиола), диэтаноламина, лизина или этилендиамина.
Соли с фармацевтически несовместимым анионом, как, например, трифторацетат, в рамках изобретения также подходят в качестве полезных промежуточных продуктов для получения или очистки фармацевтически совместимых солей и/или для использования в нетерапевтических, например, in vitro, применениях.
Используемое здесь понятие «физиологически функциональное производное» обозначает каждое физиологически совместимое производное соединения формулы I согласно изобретению, например сложный эфир, которое при введении млекопитающему, например человеку, в состоянии (прямо или косвенно) образовать соединение формулы I или его активный метаболит.
К физиологически функциональным производным относятся также пролекарства соединений согласно изобретению, как, например, описанные в публикации H. Okada et al., Chem. Pharm. Bull. 1994, 42, 57-61. Такие пролекарства могут in vivo подвергаться метаболизму с образованием соединения согласно изобретению. Эти пролекарства сами могут быть или не быть активными.
Соединения согласно изобретению также могут существовать в различных полиморфных формах, например в виде аморфных и кристаллических полиморфных форм. Все полиморфные формы соединений согласно изобретению входят в рамки изобретения и являются следующим аспектом изобретения.
В последующем все ссылки на «соединение(я) согласно формуле I» касаются соединения(й) формулы I, как описано выше, а также их солей, сольватов и физиологически функциональных производных, как здесь описано.
Применение
Соединения согласно изобретению общей формулы I обладают неожиданным ингибирующим действием на гормон-чувствительные липазы, HSL, аллостерический фермент в адипоцитах, который ингибируется инсулином и является ответственным за расщепление жиров в жировых клетках и тем самым за перевод компонентов жира в кровяное русло. Таким образом, ингибирование этого фермента соответствует инсулиноподобному действию соединений согласно изобретению, которое в конечном счете ведет к уменьшению свободных жирных кислот в крови и сахара в крови. Итак, они могут быть использованы при нарушениях обмена веществ, как, например, при неинсулинозависимом диабете (Diabetes Mellitus), при диабетическом синдроме и при прямом повреждении поджелудочной железы.
Соединения согласно изобретению общей формулы I, особенно такие, в которых R2 является водородом, могут проявлять ингибирующее действие на эндотелиальные липазы (EL). Антиатеросклеротически действующие HDL (ЛПВП) являются предпочтительным субстратом для EL. Снижение уровня ЛПВП ведет к прогрессии атеросклероза и его последствий, как коронарные заболевания сердца, и, кроме того, способствует возникновению метаболического синдрома и его последствию - диабету. Таким образом, ингибирование EL должно в целом вести к предотвращению атеросклеротических заболеваний и косвенно у персон с повышенным риском диабета снижать вероятность заболевания.
Далее было найдено, что ингибирующее действие соединений общей формулы I согласно изобретению селективно по отношению к другим липазам. Соединения формулы I согласно изобретению также могут характеризоваться ингибирующим действием на триглицеридлипазы.
Особенно пригодны такие соединения для лечения и/или профилактики следующих болезней.
1. Нарушения жирнокислотного обмена и нарушения усвоения глюкозы.
2. Нарушения чувствительности к инсулину мышечных клеток, жировых клеток и клеток печени (резистентность к инсулину) - метаболический синдром.
3. Сахарный диабет, в особенности диабет типа 2, включая предотвращение связанных с ним последствий заболеваний.
При этом особенными аспектами являются:
- гипергликемия,
- улучшение резистентности к инсулину,
- улучшение переносимости глюкозы,
- защита β-клеток поджелудочной железы,
- предотвращение макро- и микрососудистых заболеваний.
4. Дислипидемии и их следствия, как, например, атеросклероз, коронарные сердечные заболевания, цереброваскулярные заболевания и т.д., в особенности такие (но не ограничиваясь ими), которые характеризуются одним или несколькими следующими факторами:
- высокая концентрация триглицеридов в плазме, высокая концентрация триглицеридов в плазме после приема пищи,
- низкая концентрация HDL (ЛПВП)-холестерина,
- низкая концентрация ApoA-липопротеинов,
- высокая концентрация LDL (ЛПНП)-холестерина,
- мелкие плотные частицы LDL (ЛПНП)-холестерина,
- высокая концентрация ApoB-липопротеинов.
5. Различные другие состояния, которые могут быть ассоциированы с метаболическим синдромом, как:
- тучность (ожирение), включая абдоминальное ожирение,
- тромбозы, стадии повышенной свертываемости крови и склонность к тромбозам (артериальному и венозному),
- повышенное кровяное давление,
- сердечная недостаточность, как, например, (но не ограничиваясь этим) при состоянии после инфаркта миокарда, гипертонические болезни сердца или кардиомиопатия.
6. Другие заболевания или состояния, при которых, например, играют роль воспалительные реакции или видоизменение клеток:
- атеросклероз, как, например (но не ограничиваясь этим) коронарный склероз, включая стенокардию или инфаркт миокарда, кровоизлияние в мозг,
- сосудистый рестеноз или реокклюзия,
- хронические воспалительные заболевания кишечника, как, например, болезнь Крона и язвенный колит,
- панкреатит,
- другие воспалительные состояния,
- ретинопатия,
- опухоль жировых клеток (adipose cell tumors),
- карцинома жировых клеток, как, например, липосаркома,
- солидные опухоли и неоплазии, как, например (но не ограничиваясь этим) карцинома желудочно-кишечного тракта, печени, желчных путей и поджелудочной железы, эндокринные опухоли, карцинома легкого, почки и мочевыводящих органов, половых путей, карцинома простаты и т.д.,
- острые и хронические миелопролиферативные заболевания и лимфомы,
- ангиогенез,
- нейродегенеративные заболевания,
- болезнь Альцгеймера,
- рассеянный склероз,
- болезнь Паркинсона,
- эритематозно-сквамозные дерматозы как, например, псориаз (чешуйчатый лишай),
- обыкновенные угри,
- другие кожные заболевания и дерматологические состояния, которые модулируются посредством PPAR,
- экзема и нейродермит,
- дерматиты, как, например, себорейный дерматит или фотодерматоз,
- кератиты и кератозы, как, например, себорейные кератозы, старческие кератозы, актиничный кератоз, фотоиндуцированные кератозы, или фолликулярный кератоз
- келоиды и профилактика келоидов,
- бородавки, включая кондиломы или остроконечные кондиломы,
- инфекции вирусной папилломы человека (human papilloma viral (HPV)), как, например, венерический папилломоматоз, вирусные бородавки, как, например, заразительный [контагиозный] моллюск, лейкоплакия,
- папулезные дерматозы, как например, плоский лишай,
- рак кожи, как, например, базально-клеточная карцинома, меланома или кожная Т-клеточная лимфома,
- локализованные, доброкачественные эпидермальные опухоли, как, например, кератодермия, эпидермические родинки,
- ознобления,
- высокое кровяное давление,
- синдром X,
- синдром поликистоза яичника (PCOS),
- астма,
- остеоартрит,
- красная волчанка (LE) или воспалительные ревматические заболевания, как, например, прогрессирующий деформирующий артрит,
- васкулит,
- истощение (кахексия),
- подагра,
- синдром ишемии/реперфузии,
- синдром острого респираторного состояния (ARDS) («шоковое лёгкое»).
Галеновые средства
Количество соединения формулы (I), требуемое для достижения желаемого биологического эффекта, зависит от ряда факторов, например выбранного специфического соединения, предполагаемого применения, вида введения и клинического состояния пациента. В общем, дневная доза лежит в области от 0,3 мг до 100 мг (обычно от 3 мг до 50 мг) в день на килограмм веса тела, например 3-10 мг/кг/день. Внутривенная доза может лежать, например, в области от 0,3 мг до 1,0 мг/кг, пригодным образом в виде инъекции может быть введено от 10 нг до 100 нг на килограмм в минуту. Пригодные растворы для инъекций для этих целей могут содержать, например, от 0,1 нг до 10 мг, обычно от 1 нг до 10 мг, на миллилитр. Разовая доза может содержать, например, от 1 мг до 10 г биологически активного вещества. Таким образом, ампулы для инъекций могут содержать, например, от 1 мг до 100 мг, а орально принимаемые разовые дозы препаративных готовых форм, как, например, таблетки или капсулы, могут содержать, например, от 0,05 до 1000 мг, обычно от 0,5 до 600 мг. Для лечения выше названных состояний соединения формулы I могут сами использоваться как таковые, однако предпочтительно они существуют с приемлемым носителем в форме фармацевтических композиций. Носитель естественно должен быть приемлемым в том смысле, что он совместим с другими компонентами композиции и не вреден для здоровья пациента. Носитель может быть твердым веществом, или жидкостью, или обоими и предпочтительно составлять с соединением разовую дозу, например, в виде таблетки, которая может содержать от 0,05% до 95 вес.% биологически активного вещества. Другие фармацевтически активные вещества также могут присутствовать, включая другие соединения согласно изобретению. Фармацевтические композиции согласно изобретению могут быть получены одним из известных фармацевтических способов, которые по существу состоят в том, что компоненты смешивают с фармакологически приемлемыми носителями и/или вспомогательными веществами.
Согласно изобретению фармацевтическими композициями являются такие, которые пригодны для орального, ректального, топического, перорального (например, подъязычного) и парентерального (например, подкожного, внутримышечного, внутрикожного или внутривенного) введения, хотя наиболее пригодный способ введения в каждом конкретном случае зависит от вида и тяжести состояния, подлежащего лечению, и вида соответственно используемого соединения формулы I. В рамки изобретения также входят препаративные готовые формы в виде драже и формы пролонгированного действия в виде драже. Предпочтительными являются устойчивые к кислоте и желудочному соку препаративные готовые формы. Пригодные устойчивые к желудочному соку покрытия (оболочки) включают ацетатфталат целлюлозы, поливинилацетатфталат, гидроксипропилметилцеллюлозы фталат и анионные полимеры метакриловой кислоты и метилового эфира метакриловой кислоты.
Пригодные фармацевтические композиции для орального введения могут существовать в отдельных единицах, как, например, капсулы, капсулы в облатке (капсулы с мягкой оболочкой), таблетки для сосания или таблетки, которые, смотря по обстоятельствам, содержат определенное количество соединения формулы I; в виде порошка или гранулята; в виде раствора или суспензии в водной или неводной жидкости; или в виде эмульсии масло-в-воде или вода-в-масле. Как уже упоминалось, эти композиции могут быть изготовлены любым пригодным фармацевтическим способом, включающим стадию, в которой биологически активное вещество и носитель (который может состоять из одного или нескольких дополнительных компонентов) приводят в контакт. В целом, композиции получают путем равномерного и гомогенного смешивания биологически активного вещества с жидким и/или тонко распределенным твердым носителем, после чего продукт, если требуется, формуют. Таким образом, например, могут быть получены таблетки, в которых порошок или гранулят соединения прессуют или формуют, в случае необходимости, с одним или несколькими дополнительными компонентами. Прессованные таблетки могут быть получены в пригодной машине посредством таблетирования соединения в свободной текучей форме, как, например, порошок или гранулят, в случае необходимости, смешанного со связующим, смазкой, инертным разбавителем и/или одним (несколькими) поверхностно-активным/диспергирующим средством. Отформованные таблетки могут быть получены в пригодной машине посредством формования порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем.
Фармацевтические композиции, пригодные для перорального (подъязычного) введения, включают таблетки для сосания, содержащие соединение формулы I со вкусовой добавкой, обычно сахарозой и гуммиарабиком или трагантом, и пастилки, содержащие соединение в инертной основе, как желатина и глицерин или сахароза и гуммиарабик.
Пригодные фармацевтические композиции для парентерального введения предпочтительно включают стерильные водные препаративные формы соединения формулы I, предпочтительно изотонические по отношению к крови предусмотренного реципиента. Эти препаративные формы предпочтительно вводят внутривенно, хотя введение также может происходить подкожно, внутримышечно или внутрикожно в виде инъекций. Эти препаративные формы также предпочтительно могут быть получены тем, что соединение смешивают с водой и полученный раствор стерилизуют и делают изотоническим по отношению к крови. Служащая инъекцией композиция согласно изобретению в целом содержит от 0,1 до 5 вес.% активного соединения.
Пригодные фармацевтические композиции для ректального введения предпочтительно существуют в виде свечек с разовой дозой. Они могут быть получены тем, что соединение формулы I смешивают с одним или несколькими традиционными твердыми носителями, например маслом какао, и получившуюся смесь доводят до формы.
Пригодные фармацевтические композиции для топического использования на коже предпочтительно существуют в виде мазей, кремов, лосьонов, паст, спреев, аэрозолей или масел. В качестве носителей могут быть использованы вазелин, ланолин, полиэтиленгликоль, спирты и комбинации из двух или нескольких этих веществ. Биологически активное вещество в общем присутствует в концентрации от 0,1 до 15 вес.% композиции, например от 0,5 до 2%.
Возможно также чрескожное введение. Пригодные фармацевтические композиции для чрескожного применения могут существовать в виде отдельных пластырей, которые пригодны для тесного длительного контакта с эпидермисом пациента. Такие пластыри пригодным образом содержат биологически активное вещество, в случае необходимости, в снабженном буфером водном растворе, растворенное и/или диспергированное в активаторе адгезии или диспергированное в полимере. Пригодная концентрация биологически активного вещества составляет около 1-35%, предпочтительно около 3-15%. В качестве особенной возможности биологически активное вещество может высвобождаться путем электротранспорта или электрофореза, как, например, описано в Pharmaceutical Research, 2(6):318 (1986).
Соединения формулы I с R2 в виде водорода характеризуются благоприятным действием на нарушения жирового обмена. Они оказывают положительное влияние на соотношение ЛПВП к ЛПНП, особенно повышают уровень ЛПВП, и пригодны для профилактики и лечения дислипидемии и метаболического синдрома, а также их разнообразных последствий, как атеросклероз, коронарные заболевания сердца, сердечная недостаточность, ожирение и диабет.
Соединения формулы I с R1 и R2, которые образуют циклическую систему, характеризуются благоприятным действием на нарушения жирового обмена. Они оказывают положительное влияние на жировой обмен и сахарный обмен, в особенности они снижают уровень триглицеридов и пригодны для профилактики и лечения диабета типа II и артериосклероза, а также их разнообразных последствий.
Комбинации с другими медикаментами
Соединения согласно изобретению могут использоваться самостоятельно или в комбинации с одним или несколькими другими фармакологически активными веществами, которые, например, характеризуются благоприятным действием на нарушения обмена веществ или часто связанные с этим заболевания. Такими медикаментами, например, являются:
1) медикаменты, снижающие сахар в крови, антидиабетики,
2) биологически активные вещества для лечения дислипидемии,
3) антиатеросклеротические медикаменты,
4) лекарства против ожирения,
5) противовоспалительные биологически активные вещества,
6) биологически активные вещества для лечения злокачественных опухолей,
7) антитромботические биологически активные вещества,
8) биологически активные вещества для лечения повышенного кровяного давления,
9) биологически активные вещества для лечения сердечной недостаточности, а также
10) биологически активные вещества для лечения и/или профилактики осложнений, вызванных диабетом или связанных с диабетом.
Они могут быть комбинированы с соединениями формулы I согласно изобретению в особенности для синергического улучшения действия. Введение комбинации биологически активных веществ может происходить или посредством раздельного приема активных веществ пациентами, или в форме комбинированных препаратов, где несколько биологически активных веществ существуют в одной фармацевтической препаративной готовой форме.
В качестве примеров могли бы быть названы следующие.
Антидиабетики
Подходящими антидиабетиками являются, например, те, которые названы в публикациях Roten Liste 2001, Kapitel 12 или в USP Dictionary of USAN and International Drug Names, US Pharmacopeia, Rockville 2003. Антидиабетики включают все инсулины и производные инсулина, как, например, Lantus® (см. www.lantus.com) или Apidra®, а также другие быстро действующие инсулины (смотри патент US 6221633), модуляторы рецептора GLP-1, как те, которые описаны в заявке WO 01/04146 или также, например, в заявке WO 98/08871 от Novo Nordisk A/S. Орально действующие гипогликемические биологически активные вещества предпочтительно включают сульфонилмочевины, действующие на ATP-(АТФ)-зависимый калиевый канал бета-клеток (например, те, которые описаны в заявках WO 97/26265 и WO 99/03861), бигуаниды, меглитиниды, антагонисты глюкагона, оральные агонисты GLP-1, ингибиторы DPP-IV, сенсибилизаторы инсулина, например модуляторы PPAR и PXR, и биологически активные вещества, как, например, оксадиазолидиндионы, тиазолидиндионы, ингибиторы ферментов печени, которые участвуют в стимуляции глюконеогенеза и/или гликогенолиза, модуляторы усвоения глюкозы, как, например, ингибиторы глюкозидазы, соединения, изменяющие жировой обмен, которые ведут к изменению состава липидов крови, соединения, уменьшающие прием пищи и/или усвоение пищи.
В форме выполнения изобретения соединения формулы I вводят в комбинации с инсулином.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с веществами, оказывающими влияние на выработку глюкозы печенью, как, например, ингибиторы гликоген-фосфорилазы (смотри: WO 01/94300, WO 02/096864, WO 03/084923, WO 03/084922, WO 03/104188).
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с биологически активным веществом, действующим на ATP-(АТФ)-зависимый калиевый канал бета-клеток, как, например, сульфонилмочевина (например, толбутамид, глибенкламид, глипизид, глимепирид) или глиниды (например, репаглинид).
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с бигуанидом, как, например, метформин.
В форме выполнения вводят соединения формулы I в комбинации с агонистом гамма PPAR или с тиазолидиндионом, как, например, киглитазон, пиоглитазон, росиглитазон или соединения, описанные в WO 97/41097 от Dr.Reddy's Research Foundation, в особенности 5[[4-[(3,4-дигидро-3-метил-4-оксо-2-хиназолинилметокси]фенил]-метил]-2,4-тиазолидиндион.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором DPPIV, как, например, описано в WO98/19998, WO99/61431, WO99/67278, WO99/67279, WO01/72290, WO02/38541, WO03/040174, в особенности P-93/01 (1-циклопентил-3-метил-1-оксо-2-пентанаммоний хлорид), P-31/98, LAF237 (1-[2-[3-гидроксиадамант-1-иламино)ацетил]пирролидин-2-(S)-карбонитрил), TS021 ((2S,4S)-4-фтор-1-[[(2-гидрокси-1,1-диметилэтил)амино]-ацетил]-пирролидин-2-карбонитрил монобензенсульфонат).
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с соединениями с ингибирующим действием на SGLT-1 и/или 2, как, например, прямо или косвенно показано в заявках WO2004/007517, WO2004/052902, WO2004/052903 и WO2005/121161.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором α-глюкозидазы, как, например, миглитол или акарбоза.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с более чем одним выше названным соединением, например, в комбинации с сульфонилмочевиной и метформином, сульфонилмочевиной и акарбозой, репаглинидом и метформином, инсулином и сульфонилмочевиной, инсулином и метформином, инсулином и троглитазоном, инсулином и ловастатином и т.д.
Модуляторы липидов
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором HМГCoA-редуктазы, как ловастатин, флувастатин, правастатин, симвастатин, ивастатин, итавастатин, аторвастатин, росувастатин.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором резорбции желчной кислоты (смотри, например, патенты US 6245744, US 6221897, US 6277831, EP 0683773, EP 0683774).
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с полимерным адсорбером желчной кислоты, как, например, холестирамин, колесевелам.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором резорбции холестерина, как, например, описанные в заявке WO 0250027, или эзетимибы, тиквесиды, памаквесиды.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с индуктором рецепторов LDL (ЛПНП) (смотри, например, патент US 6342512).
В форме выполнения изобретения используют соединения формулы I в комбинации с наполнителями, предпочтительно нерастворимыми наполнителями (смотри, например, Carob/Caromax® (Zunft H.J; et al., Carob pulp preparation for treatment of hypercholesterolemia, ADVANCES IN THERAPY (2001 Sep-Oct), 18(5), 230-6)); Caromax является продуктом, содержащим Carob, от фирмы Fa. Nutrinova, Nutrition Specialties & Food Ingredients GmbH, Industriepark Höchst, 65926 Franfurt/Main). Комбинация с Caromax® может осуществляться в препаративной готовой форме или посредством раздельного приема соединений формулы I и Caromax®. Caromax® может при этом также даваться в форме продукта питания, как, например, хлебобулочные изделия или мюсли (Müsliriegeln).
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с агонистом альфа PPAR.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации со смешанными агонистами альфа/гамма PPAR, как, например, AZ 242 (тесаглитазар, (S)-3-(4-[2-(4-метансульфонил-оксифенил)этокси]фенил)-2-этоксипропионовая кислота), BMS 298585 (N-[(4-метоксифенокси)карбонил]-N-[[4-[2-(5-метил-2-фенил-4-оксазолил)этокси]метил]глицин) или описанные в заявках WO99/62872, WO99/62871, WO01/40171, WO01/40169, WO96/38428, WO01/81327, WO01/21602, WO03/020269, WO00/64888 или WO00/64876.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с фибратом, как, например, фенофибрат, гемфиброзил, клофибрат, безафибрат.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с никотиновой кислотой или ниакином (Niacin).
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором CEPT, например, CP-529, 414 (торкетрапиб).
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором ACAT.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором MTP, как, например, имплитапид.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с антиоксидантом.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором липопротеин-липазы.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором ATP-цитрат-лиазы.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором сквален-синтетазы.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с антагонистом липопротеина(а).
Средства против ожирения
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с ингибитором липазы, как, например, орлистат.
В форме выполнения следующим биологически активным веществом является фенфлурамин или дексфенфлурамин.
В еще одной форме выполнения следующим биологически активным веществом является сибутрамин.
В следующей форме выполнения вводят соединения формулы I в комбинации с такими соединениями, как модуляторы CART (смотри “Cocaine-amphetamine-regulated transcript influences energy metabolism, anxiety and gastric emptying in mice” Asakawa, A, et al., M.: Hormone and Metabolic Research (2001), 33(9), 554-558), антагонисты NPY (например, нафталин-1-сульфоновой кислоты {4-[(4-амино-хиназолин-2-иламино)-метил]-циклогексилметил}-амид, гидрохлорид (CGP 71683A)), агонисты MC4 (например, 1-амино-1,2,3,4-тетрагидро-нафталин-2-карбоновой кислоты [2-(3а-бензил-2-метил-3-оксо-2,3,3а,4,6,7-гексагидро-пиразоло[4,3-c]пиридин-5-ил)-1-(4-хлор-фенил)-2-оксо-этил]-амид; (WO 01/91752)), антагонисты орексина (например, 1-(2-метил-бензоксазол-6-ил)-3-[1,5]нафтиридин-4-ил-мочевины гидрохлорид (SB-334867-A)), агонисты H3 (соль щавелевой кислоты и 3-циклогексил-1-(4,4-диметил-1,4,6,7-тетрагидро-имидазо[4,5-c]пиридин-5-ил)-пропан-1-она (WO 00/63208)); агонисты TNF, антагонисты CRF (например, [2-метил-9-(2,4,6-триметил-фенил)-9H-1,3,9-триаза-флуорен-4-ил]-дипропиламин (WO 00/66585)), антагонисты CRF BR (например, урокортин), агонисты урокортина, агонисты β3 (например 1-(4-хлор-3-метансульфонилметил-фенил)-2-[2-(2,3-диметил-1Н-индол-6-илокси)-этиламино]-этанол, гидрохлорид (WO 01/83451)), агонисты MSH (гормона, стимулирующего меланоцит), агонисты CCK-A (например, соль трифторуксусной кислоты и {2-[4-(4-хлор-2,5-диметоксифенил)-5-(2-циклогексил-этил)-тиазол-2-илкарбамоил]-5,7-диметил-индол-1-ил}-уксусной кислоты (WO 99/15525)); ингибиторы восстановления серотонина (например, дексфенфлурамины), смешанные серотонин- и норадренергические соединения (например, WO 00/71549), агонисты 5HT, например соль щавелевой кислоты и 1-(3-этил-бензофуран-7-ил)-пиперазина (WO 01/09111), агонисты бомбезина, антагонисты галанина, гормон роста (например, гормон роста человека), соединения, высвобождающие гормон роста (трет-бутиловый сложный эфир 6-бензилокси-1-(2-диизопропиламино-этилкарбамоил)-3,4-дигидро-1H-изохинолин-2-карбоновой кислоты (WO 01/85695)), агонисты TRH (смотри, например, EP 0462884), 2- или 3-модуляторы, разделяющие протеины, агонисты лептина (смотри, например: Lee, Daniel W.; Leinung, Matthew C.; Rozhavskaya-Arena, Marina: Grasso, Patricia. Leptin agonists as a potential approach to the treatment of obesity. Drugs of the Future (2001), 26 (9), 873-881), агонисты DA (бромокриптин, допрексин), ингибиторы липазы/амилазы (например, WO 00/40569), модуляторы PPAR (например, WO 00/78312), модуляторы RXR или агонисты TR-β.
В еще одной форме выполнения следующим биологически активным веществом является антагонист рецептора 1 каннабиноида (cannabinoid receptor 1) (как, например, римонабант, SR147778 или такие, которые описаны в EP 0656354, WO 00/15609, WO 02/076949, WO2005080345, WO2005080328, WO2005/080343, WO2005/075450, WO2005/080357, WO2001/70700, WO2003/026647-48, WO2003/02776, WO2003/040107, WO2003/007887, WO2003/027069, US6,509,367, WO2001/32663, WO2003/086288, WO2003/087037, WO2004/048317, WO2004/058145, WO2003/084930, WO2003/084943, WO2004/058744, WO2004/013120, WO2004/029204, WO2004/035566, WO2004/058249, WO2004/058255, WO2004/058727, WO2004/069838, US2004/0214837, US2004/0214855, US2004/0214856, WO2004/096209, WO2004/096763, WO2004/096794, WO2005/000809, WO2004/099157, US2004/0266845, WO2004/110453, WO2004/108728, WO2004/000817, WO2005/000820, US2005/0009870, WO2005/00974, WO2004/111033-34, WO2004/11038-39, WO2005/016286, WO2005/007111, WO2005/007628, US2005/0054679, WO2005/027837, WO2005/028456, WO2005/063761-62, WO2005/061509, WO2005/077897).
В форме выполнения изобретения следующим биологически активным веществом является лептин.
В форме выполнения изобретения следующим биологически активным веществом является дексамфетамин, амфетамин, мазиндол или фентермин.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с медикаментами с действием на сердечно-сосудистую систему и кровеносные сосуды, как, например, ингибиторы ACE (например, рамиприл), медикаменты, которые действуют на систему ангиотензин-ренин, антагонисты кальция, бета-блокаторы и т.д.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с противовоспалительно действующими медикаментами.
В форме выполнения изобретения вводят соединения формулы I в комбинации с медикаментами, которые используют для лечения и предупреждения рака.
Подразумевается, что каждая пригодная комбинация соединений согласно изобретению с одним или несколькими выше названными соединениями и, на выбор, одним или несколькими другими фармакологически действующими веществами рассматривается как объем притязаний данного изобретения.
Эффективность соединений формулы I согласно изобретению испытывали на следующих ферментативных тест-системах:
1. Тест на подавление HSL
1.1. Приготовление частично очищенной HSL:
Изолированные жировые клетки крыс получали из жировой ткани придатка яичка не подлежащих лечению мужских особей крыс (Wistar, 220-250 г) путем обработки коллагеназой согласно опубликованным способам (например, S. Nilsson et al., Anal. Biochem. 158, 1986, 399-407; G. Fredrikson et al., J. Biol. Chem. 256, 1981, 6311-6320; H. Tornquist et al., J. Biol. Chem. 251, 1976, 813-819). Жировые клетки от 10 крыс трижды промывали с помощью флотации соответственно с 50 мл гомогенизирующего буфера (25 мл Tris/HCl, pH 7,4, 0,25 М сахарозы, 1 мМ ETDA, 1 мM DTT, 10 мкг/мл лейпептина, 10 мкг/мл обезболивающего (antipain), 20 мкг/мл пепстатина) и в заключение вводили в 10 мл гомогенизирующего буфера. Жировые клетки гомогенизировали в гомогенизаторе тефлон-в-стекле (Braun-Melsungen) путем 10 циклов при 1500 об/мин и 15°C. Гомогенизат центрифугировали. (Sorvall SM24 с пробирками, 5000 об/мин, 10 мин, 4°C). Субнатант между сверху лежащими жировыми клетками и шариками отделяли и повторяли центрифугирование. Субнатант, полученный в результате этого, вновь центрифугировали (Sorvall SM24 с пробирками, 20000 об/мин, 45 мин, 4°C). Субнатант отделяли и смешивали с 1 г гепарин-сефарозы (Pharmacia-Biotech, CL-6B, 5 раз промыта по 25 мM Tris/HCl, pH 7.4, 150 мM NaCl). После инкубации в течение 60 мин при 4°C (встряхивали с интервалом 15 мин) смесь центрифугировали (Sorvall SM24 с пробирками, 3000 об/мин, 10 мин, 4°C). Надосадочную жидкость доводили до pH 5,2 посредством добавления ледяной уксусной кислоты и инкубировали 30 мин при 4°C. Осадки собирали с помощью центрифугирования (Sorvall SS34, 12000 об/мин, 10 мин, 4°C) и суспендировали в 2,5 мл 20 мM Tris/HCl, pH 7,0, 1 мM EDTA, 65 мM NaCl, 13% сахароза, 1 мM DTT, 10 мкг/мл лейпептин/пепстатин/antipain. Суспензию подвергали диализу в течение ночи при 4°C в отношении буфера 25 мM Tris/HCl, pH 7,4, 50% глицерин, 1 мM DTT, 10 мкг/мл лейпептин, пепстатин, antipain и затем наносили на гидроксиапатитовую колонку (0,1 г по 1 мл суспензии, уравновешенной 10 мM фосфата калия, pH 7,0, 30% глицерина, 1 мM DTT). Колонку промывали четырьмя объемами уравновешивающего буфера при скорости потока от 20 до 30 мл/ч. HSL элюировали одним объемом уравновешивающего буфера, содержащего 0,5 М фосфата калия, затем подвергали диализу (см. выше) и 5-10-кратно концентрировали посредством ультрафильтрации (фильтр Amicon Diaflo PM 10 Filter) при 4°C. Частично очищенная HSL могла храниться 4-6 недель при -70°C.
1.2 Анализ на активность HSL:
Для получения субстрата смешивали 25-50 мкCi [3H]триолеоилглицерина (в толуоле), 6,8 мкмоль непомеченного триолеоилглицерина и 0,6 мг фосфолипидов (фосфатидилхолин/фосфатидилиноситол 3:1 в/о), сушили N2 и затем вводили в 2 мл 0,1 М KPi (pH 7,0) с помощью ультразвуковой обработки (Branson 250, микроострие (microtip), регулировка 1-2, 2×1 мин с интервалом в 1 мин). После добавления 1 мл KPi и возобновленной ультразвуковой обработки (4×30 с на льду с интервалом в 30 с) добавляли 1 мл 20% BSA (в KPi) (конечная концентрация триолеоилглицерина 1,7 мM). Для реакции добавляли пипеткой 100 мкл раствора субстрата к 100 мкл раствора HSL (HSL получена, как указано выше, разбавлена буфером 20 мM KPi, pH 7,0, 1 мM EDTA, 1 мM DTT, 0,02% BSA, 20 мкг/мл перстатина, 10 мкг/мл лейпептина) и инкубировали 30 мин при 37°C. После добавления 3,25 мл смеси метанол/хлороформ/гептан (10:9:7) и 1,05 мл 0,1 М K2CO3, 0,1 M борной кислоты (pH 10,5) хорошо смешивали и в конце центрифугировали (800×g, 20 мин). После разделения фаз снимали один эквивалент верхней фазы (1 мл) и определяли радиоактивность с помощью измерений сцинцилляции в жидкости.
1.3 Оценка ингибирующего эффекта в отношении HSL:
Обычно вещества испытывают на четырех независимых смесях. Ингибирование ферментативной активности HSL с помощью тестируемого вещества определяли посредством сравнения с не ингибированной контрольной реакцией. Вычисление значения IC50 происходило с помощью кривой ингибирования с, по меньшей мере, 10 концентрациями тестируемого вещества. Для анализа данных использовали пакет программ GRAPHIT, Elsevier-BIOSOFT.
2. Тест на ингибирование EL
2.1. Получение EL
EL передавали в качестве секреторных протеинов рекомбинантных линий клеток (CHO, HEK293) в высокой концентрации в среде культуры клеток (кондиционная среда). Их использовали после концентрирования в качестве раствора фермента.
2.2. Анализ на активность EL
Для характеристики ферментативной активности эндотелиальных липаз и действия ингибиторов использовали специфический к фосфолипазе субстрат 1,2-бис(4,4-дифтор-5,7-диметил-4-бора-3a,4a-диаза-s-индацен-3-ундеканоил)-sn-глицеро-3-фосфохолин (изготовитель Molecular Probes). Посредством гидролиза сложноэфирной связи A1 этого фосфолипида с помощью фермента высвобождается флуоресцентный краситель Bodipy, который может быть обнаружен после разделения с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах HPTLC (кизельгель 60, Merck) или непосредственно в реакционном сосуде посредством измерения флуоресценции.
Для получения раствора субстрата 100 мкг 1,2-бис(4,4-дифтор-5,7-диметил-4-бора-3a,4a-диаза-s-индацен-3-ундеканоил)-sn-глицеро-3-фосфохолина (производитель Molecular Probes), 2,4 мг трипальмитина (Sigma) и 7,9 мг DOP - холина (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин) вводили в 393 мкл хлороформа и затем 157 мкл переносили в новый реакционный сосуд. После испарения растворителя смесь липидов растворяли в 4 мл 200 мМ TRIS-HCl, 150 мМ хлорида натрия, pH 7,4 с помощью двукратной обработки ультразвуком. Последующая ферментативная реакция происходила 60 минут при 37°C. Для этого 45 мкл раствора субстрата инкубировали с 1 мкл ингибитора соответствующей концентрации (растворенного в ДМСО, для контроля использовали чистый раствор ДМСО) и 5 мкл раствора фермента (кондиционная среда). Затем 3 мкл тестируемой смеси наносили на пластины HPTLC ((кизельгель 60, Merck) и для детекции отделяли высвобожденный флуоресцентный краситель растворителем (простой диэтиловый эфир:бензин:уксусная кислота [78:22:1]). После выпаривания растворителя снимали показания с пластин во флуоресцентном сканере. В качестве меры активности фермента можно наблюдать возрастающее высвобождение флуоресцентного красителя в неингибированной реакции.
2.3. Оценка ингибирующего эффекта в отношении EL:
В зависимости от используемых концентраций ингибиторов выявляется снижение ферментативной активности; концентрация ингибитора, при которой наблюдается полумаксимальная ферментативная активность, обозначается IC50.
2.4. Следующий тест на ингибирование EL:
Для характеристики ферментативной активности эндотелиальных липаз и действия ингибиторов использовали специфический к фосфолипазе субстрат 1,2-бис(4,4-дифтор-5,7-диметил-4-бора-3a,4a-диаза-s-индацен-3-ундеканоил)-sn-глицеро-3-фосфохолин (изготовитель Molecular Probes). Посредством гидролиза сложноэфирной связи A1 этого фосфолипида с помощью фермента высвобождается флуоресцентный краситель Bodipy, который может быть обнаружен после разделения с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах HPTLC (кизельгель 60, Merck) или непосредственно в реакционном сосуде посредством измерения флуоресценции.
Для получения раствора субстрата 100 мкг 1,2-бис(4,4-дифтор-5,7-диметил-4-бора-3a,4a-диаза-s-индацен-3-ундеканоил)-sn-глицеро-3-фосфохолина (производитель Molecular Probes) растворяли в 100 мкг ДМСО и вводили в 2,4 мг трипальмитина (Sigma) в 393 мкл хлороформа, который содержал 20 мг/мл DOP - холина (1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфохолин). 39,3 мкл этой смеси липидов переносили в новый реакционный сосуд и выпаривали растворитель. Смесь липидов растворяли в 4 мл 200 мМ TRIS-HCl, 150 мМ хлорида натрия, pH 7,4 с помощью двукратной обработки ультразвуком. Последующая ферментативная реакция происходила 90 минут при 37°C. Для этого 20 мкл раствора субстрата инкубировали с 2 мкл ингибитора соответствующей концентрации (растворенного в 10% ДМСО, для контроля использовали 10%-ный раствор ДМСО) и 2 мкл раствора фермента (кондиционированная среда). Затем 4 мкл тестируемой смеси наносили на пластины HPTLC (кизельгель 60, Merck) и для детекции отделяли высвобожденный флуоресцентный краситель растворителем (простой диэтиловый эфир:бензин:уксусная кислота [78:22:1]). После выпаривания растворителя снимали показания с пластин во флуоресцентном сканере. В качестве меры активности фермента можно наблюдать возрастающее высвобождение флуоресцентного красителя в неингибированной реакции.
В этом тесте соединения примеров показали следующие значения IC50:
| Пример | IC 50 [мкМ] EL |
| 1 | 0,05 |
| 2 | 0,01 |
| 3 | 0,069 |
| 4 | 0,39 |
| 5 | 0,01 |
| 9 | 0,011 |
| 11 | 0,354 |
| 13 | 0,0005 |
| 14 | 0,18 |
| 15 | 0,23 |
| 16 | 0,18 |
| 17 | 0,061 |
| 18 | 0,48 |
| 19 | 0,083 |
| 20 | 0,09 |
Способ получения
Получение соединений общей формулы I согласно изобретению может быть осуществлено известными методами, например посредством ацилирования замещенных или незамещенных производных азолопиридин-2-она II с карбамоилхлоридами III (метод A) или в две стадии посредством превращения производных азолопиридин-2-она II с фосгеном или эквивалентами, как сложный трихлорметиловый эфир хлоркарбоновой кислоты, сложный дитрихлорметиловый эфир карбоновой кислоты или сложный 4-нитрофениловый эфир хлормуравьиной кислоты, и последующим превращением полученного производного азолопиридин-2-он-карбоновой кислоты с аминами IV (метод B). Для соединений, у которых R2 является водородом, производные азолопиридин-2-она II могут быть подвергнуты превращению с изоцианатами V R1-N=C=O.
Так как при этих реакциях, как правило, выделяются кислоты, для ускорения рекомендуется добавлять основания, как пиридин, триэтиламин, гидроксид натрия или карбонаты щелочных металлов. Реакции могут проводиться в широкой температурной области. Как правило, в качестве предпочтительной температуры указывается рабочая температура от 0°C вплоть до температуры кипения используемого растворителя. В качестве растворителей используют, например, метиленхлорид, ТГФ, ДМФ, толуол, этилацетат, н-гептан, диоксан, диэтиловый эфир или пиридин. Если работают в безводных условиях, также оказываются подходящими сильные основания, как гидрид лития, гидрид натрия или трет.-бутилат калия в апротонных растворителях как ТГФ или ДМФ. Производные азолопиридин-2-она II или соответствующие аза-замещенные производные, используемые в качестве исходных соединений II, являются коммерчески доступными или могут быть получены известными из литературы способами (например, С. Flouzat, Y.Bresson, A. Mattio, J. Bonnet, G. Guillaumet J. Med.Chem 1993, 36, 497-503; F. Mutterer, C.D. Weis, J. Het. Chem. 1976, 13, 1103-1104; K. Bowden, G. Crank, W.J. Ross, J. Chem. Soc. 1968, 172-185).
Приведенные ниже примеры служат для пояснения изобретения, при этом не ограничивая его.
Примеры
Пример 1:
2-метил-бензиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она растворяли в 5 мл ТГФ. После добавления 129,8 мг (0,882 ммоль) 2-метил-бензилизоцианата перемешивали 5 часов при 70°C, еще раз добавляли равное количество 2-метил-бензилизоцианата и перемешивали 5 часов при 70°C. Реакционную смесь концентрировали и очищали посредством препаративной ВЭЖХ (PR18, ацетонитрил/вода 0,1% TFA). Выход: 55 мг (26%), M+H+: 284,1.
Пример 2:
2-метил-бензиламид 6-бром-2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,465 ммоль) 6-бром-3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 102,7 мг (0,698 ммоль) 2-метил-бензилизоцианата в ТГФ при 70°C. Выход: 13 мг (8%), M+H+: 362,05.
Пример 3:
Гексиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,74 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 102,8 мг (0,809 ммоль) 1-изоцианат-гексана в диоксане при 80°C. Выход: 77 мг (40%), M+H+: 264,12.
Пример 4:
3-метилбензиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 200 мг (1,47 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 324,3 мг (2,2 ммоль) 1-изоцианат-метил-3-метилбензола в диоксане при 80°C. Выход: 322 мг (77%), M+H+: 284,1.
Пример 5:
3,4-диметил-бензиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 200 мг (1,47 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 284 мг (1,76 ммоль) 3,4-диметил-бензилизоцианата в диоксане при 80°C. Выход: 110 мг (25%), M+H+: 298,1.
Пример 6:
3-(4-метил-пиперидин-1-карбонил)-3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-он
100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она, 235 мг (1,45 ммоль) 4-метил-пиперидин-1-карбонил хлорида и 101 мкл (2,18 ммоль) триэтиламина перемешивали в 5 мл пиридина 3 часа при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали, остаток растворяли в воде и экстрагировали этилацетатом. Органическую фазу концентрировали и очищали посредством препаративной ВЭЖХ (PR18, ацетонитрил/вода 0,1% TFA). Выход: 6 мг (3%), M+H+: 262,12.
Пример 7:
6-бром-3-(4-метил-пиперидин-1-карбонил)-3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-он
По аналогии с примером 6 подвергали превращению 100 мг (0,46 ммоль) 6-бром-3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 150 мг (0,93 ммоль) 4-метил-пиперидин-1-карбонил хлорида. Выход: 78 мг (50%), M+H+: 340,09.
Пример 8:
Фенэтил-амид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты по аналогии с примером 1 подвергали превращению 300 мг (2,2 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 389 мг (2,6 ммоль) (2-изоцианат-этил)-бензола в диоксане при 80°C. Выход: 436 мг (70%), M+H+: 284,07.
Пример 9:
Гептиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 200 мг (1,47 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 207 мг (1,47 ммоль) 1-изоцианат-гептана в диоксане при 80°C. Выход: 416 мг (10%), M+H+: 278,15.
Пример 10:
Бензиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 117 мг (0,88 ммоль) изоцианат-метил-бензола в диоксане при 80°C. Выход: 30 мг (15%), M+H+: 270,11.
Пример 11:
Бутиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 300 мг (2,2 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 262 мг (2,6 ммоль) 1-изоцианат-бутана в диоксане при 80°C. Выход: 91 мг (18%), M+H+: 236,15.
Пример 12:
Бензиламид 6-бром-2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,46 ммоль) 6-бром-3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 74,3 мг (0,56 ммоль) изоцианат-метил-бензола в диоксане при 80°C. Выход: 10 мг (6%), M+H+: 348,10.
Пример 13:
(1,2,3,4-тетрагидро-нафтален-1-ил)амид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 127 мг (0,735 ммоль) 1-изоцианат-1,2,3,4-тетрагидро-нафталена в диоксане при 80°C. Выход: 29 мг (13%), M+H+: 310,10.
Пример 14:
(R)-индан-1-иламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 140 мг (0,88 ммоль) (R)-1-изоцианат-индана в диоксане при 60°C. Выход: 22 мг (10%), M+H+: 296,14.
Пример 15:
(S)-индан-1-иламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 140 мг (0,88 ммоль) (S)-1-изоцианат-индана в диоксане при 60°C. Выход: 8 мг (40%), M+H+: 296,14.
Пример 16:
Додециламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 155,3 мг (0,735 ммоль) 1-изоцианат-додекана в диоксане при 80°C. Выход: 33 мг (13%), M+H+: 348,25.
Пример 17:
2-метилбензиламид 5-метил-2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 150 мг (1 ммоль) 5-метил-3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 176 мг (1,2 ммоль) 1-изоцианатметил-2-метил-бензола и 100 мкл пиридина в толуоле при 115°C. Выход: 3 мг (1%), M+H+: 298,13.
Пример 18:
Циклогексилметил-амид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 100 мг (0,735 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она со 102 мг (0,735 ммоль) изоцианат-метил-циклогексана в диоксане при 80°C. Выход: 43 мг (21%), M+H+: 276,13.
Пример 19:
Октиламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 200 мг (1,47 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 273,7 мг (1,76 ммоль) 1-изоцианат-октана в диоксане при 80°C. Выход: 40 мг (9%), M+H+: 292,10.
Пример 20:
Нониламид 2-оксо-оксазол[4,5-b]пиридин-3-карбоновой кислоты
По аналогии с примером 1 подвергали превращению 200 мг (1,47 ммоль) 3H-оксазол[4,5-b]пиридин-2-она с 298,4 мг (1,76 ммоль) 1-изоцианат-нонана в диоксане при 80°C. Выход: 40 мг (9%), M+H+: 306,20.
1. Соединение общей формулы I,
где X обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)- или =N-, причем по меньшей мере одна =C(-R-)- замещена посредством =N-;
Y обозначает -O-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, (С1-С6)-алкил;
R1 обозначает (С4-С16)-алкил, (С1-С4)-алкилен-(С6-С10)-арил, (С1-С4)-алкилен-(С3-С12)-циклоалкил, (С9-С10)-бицикл, причем арил однократно или многократно может быть замещен (С1-С6)-алкилом;
R2 обозначает водород; или
R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную 6-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены -CHR4-;
R4 обозначает (С1-С6)-алкил;
а также их физиологически совместимые соли.
2. Соединение формулы I по п.1, где
Х обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)- или =N-, причем одна группа =С(-R-)- замещена посредством =N-;
Y обозначает -O-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, (С1-С6)-алкил;
R1 обозначает (С6-С12)-алкил, (С1-С2)-алкилен-(С6-С10)-арил, (С1-С2)-алкилен-(С4-С12)-циклоалкил, (С9-С10)-бицикл, причем арил одно- или многократно может быть замещен (C1-С6)-алкилом;
R2 обозначает водород; или
R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную 6-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены -CHR4-;
R4 обозначает (С1-С6)-алкил.
3. Соединение формулы I по п.1 или 2, отличающееся тем, что Х в положении 5, 6 и 7 обозначает одинаковые или разные группы =C(-R)-, в положении 4 обозначает =N-.
4. Соединение формулы I по п.1, отличающееся тем, что Х в случае необходимости в положении 4 или 7 обозначает группу =C(-R)- с R= водород, в положении 5 или 6 обозначает группу =C(-R)-, где R не является водородом.
5. Соединение формулы I по п.1, где
Y обозначает -O-;
R1 обозначает (С6-С12)-алкил, бензил, (С1)-алкилен-(С4-С12)-циклоалкил, (С9-С10)-бицикл, причем бензил может быть замещен (С1-С6)-алкилом;
R2 обозначает водород; или
R1 и R2 образуют вместе с соединенным с ними атомом азота моноциклическую, насыщенную 6-членную кольцевую систему, в которой отдельные члены кольцевой системы могут быть замещены -CHR4-, где R4 определен как указано выше.
6. Соединение формулы I по п.1, отличающееся тем, что Y обозначает -O-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген, или (С1-С6)-алкил;
R1 обозначает (С6-С12)-алкил, бензил, -СН2-алкилен-(С4-С12)-циклоалкил, (С9-С10)-бицикл, причем бензил может быть замещен (С1-С6)-алкилом;
R2 обозначает водород.
7. Соединение формулы I по п.1, отличающееся тем, что Y обозначает -O-;
R обозначает одинаковые или разные водород, галоген или (С1-С6)-алкил;
R1 обозначает (С6-С12)-алкил, бензил, -СН2-циклогексил, инданил, тетрагидронафтил, причем бензил может быть замещен (С1-С6)-алкилом;
R2 обозначает водород.
8. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующим действием на эндотелиальные липазы (EL), содержащая одно или несколько соединений формулы I по пп.1-7.
9. Применение соединений формулы I по пп.1-7 для получения лекарственного средства для лечения и/или профилактики нарушений обмена жирных кислот и нарушений усвоения глюкозы.
10. Способ получения соединения формулы I по пп.1-7, отличающийся тем, что производные азолопиридин-2-она формулы II
ацилируют с карбамоилхлоридами формулы III:
11. Способ получения соединения общей формулы I с R2, являющимся водородом, по пп.1-7, отличающийся тем, что
производные азолопиридин-2-она формулы II подвергают превращению с изоцианатами формулы V:O=C=N-R1.
